Actinomycetes

Dr K. Sivakumar
Pusat Studi Advanced di Biologi Laut
Annamalai Universitas
actinomycetes yang paling dikenal karena kemampuan mereka untuk menghasilkan antibiotik
dan bakteri gram positif yang terdiri dari sekelompok percabangan mikroorganisme
uniseluler. Mereka menghasilkan percabangan miselium yang mungkin dari dua yaitu jenis.,
miselium substrat dan miselium udara. Di antara actinomycetes, yang streptomycetes adalah
dominan. Non-streptomycetes disebut actinomycetes langka, terdiri dari sekitar 100 genera.
Anggota actinomycetes, yang hidup di laut lingkungan, yang kurang dipahami dan hanya
beberapa laporan yang tersedia berkaitan dengan actinomycetes dari mangrove (Siva Kumar,
2001; Vikineswari et al. 1997; Rathana Kala & Chandrika, 1993; Lakshmanaperumalsamy,
1978). Isolasi Actinomycetes dari Sedimen Untuk actinomycetes, sampel yang dapat
dikumpulkan dengan menyisipkan sebuah polivinil alat untuk mengeluarkan biji (diameter 10
cm.) (sebelumnya disterilkan dengan alkohol) ke dalam sedimen. alat untuk mengeluarkan
biji tersebut disterilkan dengan alkohol sebelum pengambilan sampel di setiap stasiun. The
bagian tengah dari sampel sedimen 2 cm atas dapat diambil dengan bantuan spatula steril.
Sampel ini dapat ditransfer ke steril kantung plastik dan diangkut segera ke laboratorium. The
sampel sedimen sehingga dikumpulkan ber-kering aseptik. Setelah seminggu, sampel
sedimen harus diinkubasi pada 550 C selama 5 menit (Balagurunathan, 1992). Kemudian,
serial pengenceran 10 kali lipat dari sedimen sampel harus disiapkan, dengan menggunakan
disaring dan disterilkan air laut 50%. Salah ml sampel diencerkan serial harus berlapis di
Kuster's Agar (Siva Kumar, 2001) di petriplates rangkap tiga. Untuk meminimalkan jamur
kontaminasi, semua piring agar-agar harus dilengkapi dengan 50 ug / ml nistatin. Koloni
actinomycete yang muncul di petriplates dapat dihitung dari hari ke-5 dan seterusnya, upto
hari ke 28. Semua koloni yang tumbuh di petriplates dapat secara terpisah bergaris di
petriplates, subkultur, memastikan untuk axenicity mereka dan dipelihara miring.
A
198 Actinomycetes
Identifikasi
Berbagai pendekatan untuk identifikasi actinomycets diberikan singkat di bawah ini:
Pendekatan)
molekuler
Pendekatan yang paling ampuh untuk taksonomi adalah melalui studi asam nukleat. Karena
baik merupakan produk gen langsung atau gen sendiri dan perbandingan alat bantu nukleat
hasil yang cukup informasi tentang keterkaitan benar. Molekul sistematika, yang meliputi
klasifikasi
baik
dan
identifikasi, memiliki asal dalam hibridisasi asam nukleat awal studi, tetapi telah mencapai
status baru setelah pengenalan teknik sekuensing asam nukleat (O'Donnell et al, 1993.). Arti
studi filogenetik berdasarkan urutan 16S rDNA meningkat di sistematika bakteri dan
actinomycetes (Yokota, 1997). Urutan 16S ribosomal DNA telah memberikan
actinomycetologists dengan filogenetik pohon yang memungkinkan penyelidikan evolusi

actinomycetes dan juga memberikan dasar untuk identifikasi. Analisis rDNA 16S dimulai
dengan mengisolasi DNA (Hapwood, 1985) dan memperkuat gen penyandi 16S rRNA
menggunakan polymerase chain reaction (misalnya Siva Kumar, 2001). DNA dimurnikan
fragmen secara langsung diurutkan. Reaksi sekuensing dilakukan menggunakan DNA
sequencer dalam rangka untuk menentukan urutan di mana basis diatur dalam panjang sampel
(Xu Li-Hua, et al, 1999.) dan komputer kemudian digunakan untuk belajar tahapan untuk
identifikasi menggunakan prosedur analisis filogenetik. Namun, analisis 16S rDNA
umumnya memungkinkan kita untuk mengidentifikasi organisme upto tingkat genus saja.
b)
Pendekatan
Chemotaxonomical
Chemotaxonomy adalah studi tentang variasi kimia dalam organisme dan penggunaan
karakter kimia dalam klasifikasi dan identifikasi. Hal ini salah satu metode berharga untuk
mengidentifikasi genera aktinomisetes. Studi Cummins dan Harris (1956) ditetapkan bahwa
actinomycetes memiliki komposisi dinding sel mirip dengan yang gram-positif bakteri, dan
juga menunjukkan bahwa komposisi kimia sel dinding mungkin memberikan metode praktis
membedakan berbagai jenis actinomycetes. Hal ini karena kenyataan bahwa komponen kimia
organisme yang memenuhi kondisi berikut, telah signifikan makna dalam sistematika. K.
Sivakumar 199 i. Mereka harus didistribusikan universal antara mikroorganisme dipelajari;
dan, ii. Komponen harus homolog antara strain dalam takson, sementara perbedaan yang
signifikan antara taksa harus dibedakan. Kehadiran Diaminopimelic Asam (DAP) isomer
adalah salah satu yang paling penting sifat sel-dinding bakteri gram positif dan
actinomycetes. Kebanyakan bakteri memiliki karakteristik amplop dinding, terdiri dari
peptidoglikan. 2, 6 - Asam Diaminopimelic (DAP) adalah didistribusikan secara luas sebagai
asam amino kunci dan memiliki isomer optik. The sistematis signifikansi terletak terutama di
asam amino kunci dengan dua amino dasar, dan penentuan asam amino kunci biasanya cukup
untuk karakterisasi. Jika DAP hadir, bakteri umumnya mengandung salah satu isomer, LLbentuk atau meso-bentuk, sebagian besar berada di peptidoglikan. Mayor konstituen dari
dinding sel aktinomisetes (Lechevalier dan Lechevalier, 1970) adalah sebagai berikut:
Dinding
sel
glisin
meso-DAP-DAP
LL
I
+
+
II
+
+
**
III
+
**
Hidroksi
DAP
(mungkin
juga
sekarang)
Komposisi gula sering memberikan informasi yang berharga pada klasifikasi dan identifikasi
aktinomisetes. Actinomycete sel mengandung beberapa jenis gula, di samping glukosamin
dan
muramic asam peptidoglikan. Pola gula memainkan peran kunci dalam identifikasi
bersporulasi aktinomisetes yang meso-DAP di dinding sel mereka. Namun, aktinomisetes
yang memiliki LL-DAP bersama dengan glisin (tipe dinding kemo-I) tidak memiliki pola
karakteristik gula (Lechevalier dan Lechevalier, 1970) dan karenanya seluruh sel uji gula
belum
mendapat
perhatian
banyak
di
sini.
c)
Pendekatan
Klasik
pendekatan klasik untuk klasifikasi menggunakan morfologi, fisiologis, dan biokimia
karakter.
Metode
klasik
200
Actinomycetes

dijelaskan dalam kunci identifikasi oleh Nonomura (1974) dan Bergey's Manual of
Bacteriology menentukan (Buchanan & Gibbons, 1974) adalah sangat berguna dalam
identifikasi streptomycetes. Ini karakteristik telah umum digunakan dalam taksonomi
streptomycetes selama bertahun-tahun. Mereka cukup berguna dalam rutin identifikasi.
Mereka
adalah
sebagai
berikut.
1.
Aerial
Massa
Warna
Warna miselium udara matang bersporulasi dicatat dalam cara sederhana (Putih, abu-abu,
merah, hijau, biru dan ungu). Ketika udara warna massa jatuh antara dua seri warna, baik
warna direkam. Jika warna massa udara strain yang akan dipelajari menunjukkan tints
menengah,
kemudian
juga,
kedua
seri
warna
yang
dicatat.
2.
Melanoid
Pigmen
pengelompokan ini dibuat pada produksi pigmen melanoid (yaitu coklat kehijauan,
kecoklatan hitam atau cokelat berbeda, pigmen dimodifikasi oleh lain warna) pada medium.
Strain dikelompokkan sebagai melanoid pigmen yang dihasilkan (+) dan tidak diproduksi (-).
3.
Pigmen
Reverse
Side
Strain dibagi menjadi dua kelompok, menurut kemampuan mereka untuk menghasilkan
pigmen karakteristik pada bagian belakang koloni, yaitu, khusus (+) dan tidak khas atau tidak
ada (-). Dalam kasus, warna dengan chroma rendah seperti kuning pucat, zaitun atau coklat
kekuningan
terjadi,
itu
termasuk
dalam
kelompok
terakhir
(-).
4.
Larut
Pigmen
Strain dibagi menjadi dua kelompok dengan kemampuan mereka untuk menghasilkan pigmen
larut selain melanin: yaitu, diproduksi (+) dan tidak diproduksi (-). Warna dicatat (merah,
oranye,
hijau,
kuning,
biru
dan
ungu).
5.
Spore
Rantai
Morfologi
Berkenaan dengan spora rantai, strain dapat dikelompokkan menjadi 'bagian'. Spesies yang
termasuk ke dalam genus Streptomyces dibagi menjadi tiga bagian (Shirling & Gottlieb,
1966), yaitu rectiflexibiles (RF), retinaculiaperti (RA) dan Spirales (S). Ketika strain bentuk
dua jenis rantai spora, keduanya dicatat (misalnya SRA). K. Sivakumar 201 Karakteristik hifa
spora-bantalan
dan
rantai
spora
harus ditentukan dengan menggunakan pemeriksaan mikroskopis langsung budaya
permukaan. Memadai pembesaran (400x) dapat digunakan untuk menetapkan ada atau tidak
adanya rantai spora dan mengamati sifat sporophores. Spora karakter morfologi dari jenis
dapat
dipelajari
oleh
inokulasi sebuah loopful satu budaya minggu lama menjadi media agar 1,5% terkandung
dalam tabung reaksi pada 370C. actinomycete harus ditunda dan dicampur menyeluruh dalam
medium agar semipadat dan 1 atau 2 tetes medium bisa aseptik pipetted pada slide kaca steril.
A setetes agar-agar harus tersebar baik di slide dan diizinkan untuk memperkuat menjadi film
tipis sehingga memudahkan pengamatan langsung di bawah mikroskop. Budaya sebaiknya
diinkubasi pada 28 + 20C dan diperiksa secara berkala untuk pembentukan miselium udara,
struktur
sporophore
dan
spora
morfologi.
6.
Spore
Permukaan
Spore morfologi dan fitur permukaan harus diamati di bawah mikroskop elektron. Menetas
silang budaya dipersiapkan untuk pengamatan di bawah mikroskop cahaya dapat digunakan

untuk
tujuanini.
RF
Spore
rantai
(400x)
RA
Spore
rantai
(400x)
Spiral
Spore
rantai
(400x)
202 Actinomycetes Grid elektron harus dibersihkan dan pita perekat harus ditempatkan pada
permukaan grid. Spora dewasa strain harus hati-hati diletakkan pada permukaan pita perekat
dan lapisan emas harus diterapkan selama setengah jam dan spesimen dapat diperiksa bawah
mikroskop elektron pada perbesaran yang berbeda. spora yang siluet dapat dicirikan sebagai
halus,
berduri,
berbulu
dan
kutil.
7.
Asimilasi
Sumber
Karbon
Kemampuan strain actinomycete berbeda dalam memanfaatkan berbagai karbon senyawa
sebagai sumber energi harus dipelajari berikut metode direkomendasikan oleh International
Streptomyces Project (Shirling dan Gottlieb, 1966). Kimia, sumber karbon murni,
bersertifikat
untuk
bebas
dari
campuran dengan karbohidrat lainnya atau bahan mengkontaminasi, harus digunakan untuk
tujuan ini. sumber Karbon untuk tes ini bisa arabinosa, xilosa, inositol, manitol, fruktosa,
rhamnosa, sukrosa dan raffinose. Sumber-sumber karbon harus disterilkan dengan sterilisasi
eter
tanpa
pemanasan.
Membandingkan sifat strain terisolasi dengan perwakilan spesies yang ditemukan dalam
kunci Nonomura (1974) dan Bergey's Manual of Bacteriology menentukan (Buchanan dan
Gibbons, 1974) dapat membantu dalam identifikasi tingkat spesies. Jika strain terisolasi tidak
dapat ditugaskan ke salah satu perwakilan sah yang tercantum dalam kunci dari Nonomura
(1974) dan Manual Bergey's of Bacteriology menentukan (Buchanan & Gibbons, 1974),
maka
dapat
diidentifikasi
berdasarkan
taksonomi
numerik
studi.
d)
Pendekatan
taksonomi
Numerik
taksonomi
numerik
melibatkan
banyak
strain
memeriksa
besar
jumlah
karakter
sebelum
menugaskan
organisme
uji
dengan
cluster
berdasarkan
fitur
bersama.
Taksa
numerik
pasti
polythetic;
begitu, tidak ada properti tunggal baik sangat diperlukan atau cukup untuk berhak sebuah
organisme
untuk
keanggotaan
kelompok.
Setelah
klasifikasi
telah
karakter tercapai, cluster tertentu atau prediktif dapat dipilih untuk
identifikasi
(Williams
et
al,
1983).
Taksonomi numerik pertama kali diterapkan untuk Streptomyces oleh
Silvestri
et
al.
(1962).
Studi
taksonomi
numerik
dari
genus
Streptomyces oleh Williams et al. (1983) melibatkan unit penentuan 139
karakter
untuk
394
jenis
budaya
Streptomyces;
cluster
pasti
pada
77,5% atau 81% dan 63% SSM Sj tingkat kesamaan, dan mantan co-effieient
K.
Sivakumar
203
sedang digunakan untuk mendefinisikan cluster. Studi-Nya meliputi 23 besar, 20
ringan
dan
25
anggota
cluster
tunggal.
Klasifikasi
numerik
dari
genus
Streptomyces
oleh
Kampfer
et
al.
(1991)
melibatkan
penentuan
329
tes
psikologis.
Studi-Nya meliputi 15 kelompok utama, 34 kelompok minor dan 40 tunggal

anggota kelompok yang didefinisikan di SSM kesamaan tingkat 81,5% menggunakan

pencocokan sederhana koefisien (Sokal dan Michener, 1958) dan 59,6 untuk
64,6% kesamaan tingkat Sj menggunakan Jaccard koefisien (Sneath, 1957). Dengan
demikian,
taksonomi numerik memberi kita kerangka kerja yang sangat berharga bagi
Streptomyces
taksonomi,
termasuk
identifikasi
spesies.
Pengawetan
Metode
pengawetan
yang
mirip
dengan
bakteri
seperti
subkultur,
pembekuan
terutama
dalam
nitrogen
cair,
beku-kering
dan
pemeliharaan
strain
dalam
minyak
mineral.
Kesimpulan
Studi
actinomycetes
sangat
terbatas
dan
actinomycetes
memiliki
disebutkan
kebetulan,
pada
masyarakat
mikroba
laut
habitat.
Lebih
lanjut,
hanya
sedikit
informasi
yang
tersedia
pada
actinomycetes lingkungan mangrove (yang merupakan salah satu di antara
ekosistem pesisir yang paling produktif) sehubungan dengan kejadian mereka dan
distribusi (Vikineswari et al, 1997;. Rathna Kala dan Chandrika, 1993;
Lakshmanaperumalsamy,
1978).
Referensi
Balagurunathan, R. (1992). Antagonis actinomycetes dari laut dangkal India
sedimen dengan mengacu pada , - tak jenuh - tipe lakton dari
antibiotik dari Streptomyces griseobrunneus. Ph D. Skripsi, Annamalai
Universitas,
India,
88
hlm
Buchanan, R.E. dan Gibbons, timur laut (1974). Bergey's manual menentukan
bakteriologi. (Kedelapan edisi), The Williams dan Wilkins Co, Baltimore,
pp.747
842.
Cummins, C.S. dan Harris, H. (1956). Sebuah Perbandingan komposisi dinding sel di
Nocardia, Actinomyces, Mycobacterium dan Propionbacterium. J. Gen.
Microbiol,
15:.
IX.
Hapwood, DA, Bill, MJ, Piagam, KF, Kieser, T., Bruton, CJ, Kieser, HM,
Lydiate, DJ, Smith, CP, Ward, JM dan Schrempf, H. (1985). Genetik
manipulasi
Streptomycetes:
A
manual
laboratorium,
John
Innes
Yayasan,
Norwich,
Inggris,
71
80pp.
204
Actinomycetes
Kampfer, P., Kroppenstedt, R.M. dan Dott, W. (1991). Sebuah klasifikasi numerik
dari Streptomyces marga dan Streptoverticillium menggunakan miniatur
fisiologis
tes.
J.
Gen
Microbiol,
137:
1831-1891...
Lakshmanaperumalsamy, P. (1978). Studi actinomycetes dengan khusus
referensi untuk streptomycetes antagonis dari sedimen dari Porto Novo
zona
pesisir.
Ph.D.
tesis,
Annamalai
University,
India,
192pp.
Lechevalier, M.P. dan Lechevalier, H. (1970). Komposisi kimia sebagai
kriteria
dalam
klasifikasi
aktinomisetes
aerobik.
Int.
J.
Syst.
Bacteriol,
20:
435-443..
Nonomura, H. (1974). Kunci untuk klasifikasi dan identifikasi spesies 458

yang Streptomycetes termasuk dalam ISP. J. Fermentasi. Technol, 52 (2):. 78-92.

O'Donnell, A.G., Embley, T.M. dan Goodfellow, M. (1993). Masa Depan Bakteri
Sistematika. Dalam: Buku Panduan Sistematika Bakteri Baru, London:
Academic
Press,
pp.513
524.
Rathna Kala, R. dan Chandrika, V. 1993. Pengaruh media yang berbeda untuk isolasi,
pertumbuhan
dan
pemeliharaan
aktinomisetes
dari
sedimen
mangrove.
Indian
J.
Maret
sci,
22:
297-299..
Shirling,
E.B.
dan
Gottlieb,
D.
1966.
Metode
Karakterisasi
Streptomycetes
spesies.
Int.
J.
Syst.
Bacteriol,
16:
313
340..
Silvestri, L.G., Turri, M., Hill, L.R. dan Gilardi, E. (1962). Sebuah kuantitatif
pendekatan
terhadap
sistematika
aktinomisetes
berdasarkan
keseluruhan
kesamaan. Proc. Simposium Masyarakat untuk Mikrobiologi Umum, 12: 333
360.
Siva Kumar, K. (2001). Actinomycetes dari Mangrove India (Pichavaram)
lingkungan: Inventarisasi An. Ph.D. tesis, Annamalai University, India,
91
hlm
Sneath, P.H.A. (1957). Aplikasi komputer untuk taksonomi. J. Gen.
Microbiol,
17:
201
226..
Sokal, R. dan Michener, C.D. (1958). Sebuah metode statistik untuk mengevaluasi
hubungan sistematis. Universitas Kanas Ilmu Bulletion, 38: 1409 1438.
Vikineswary, S., Nadaraj, P., Wong, W.H. dan Balabaskaran, S. (1997).
Actinomycetes
dari
ekosistem
mangrove
tropis
Antifungal
aktivitas jenis yang dipilih. Asia Pasifik J. Mol. Biol. Boitec, 5 (2):. 81 - 86.
Williams, ST, Goodfellow, M., Alderson, G., Wellington, EMH, Sneath, ID
dan
Sakin,
M.J.
(1983).
Klasifikasi
numerik
dan
Streptomyces
terkait
genera.
J.
Gen
Microbiol,
129:
1743-1813...
Xu L.H., Jin, X., Mao, kepala kantor pos, Lu, Z.F., Cui, X.L. dan Jiang, C.L. (1999). Tiga
baru
spesies
dari
genus
Actinobispora
keluarga
Pseudonocardiaceae,
Actinobispora alaniniphila sp. November, Actinobispora aurantiaca sp. November dan
Actinobispora
xinjiangensis
sp.
November
Yokota,
A.
(1997).
Hubungan
filogenetik
aktinomisetes.
Atlas
actinomycetes, Asakura Publishing Co Ltd, Jepang, pp.194 - 197.

actinomycete, Bakteri Streptomyces griseus adalah contoh dari sebuah actinomycete. [Kredit:
A.W. Rakosy / EB Inc] setiap anggota kelompok heterogen gram positif, bakteri anaerob
umumnya terkenal karena pola pertumbuhan filamen dan bercabang yang menghasilkan,
dalam bentuk yang paling, dalam sebuah koloni yang luas, atau miselium. The miselium pada
beberapa spesies bisa pecah terpisah untuk membentuk bentuk-bentuk batang-atau coccoid
berbentuk. genera Banyak juga membentuk spora, sedangkan sporangia, atau kasus spora,
dapat ditemukan pada hifa udara, pada permukaan koloni, atau gratis di dalam lingkungan.

Motilitas, saat ini, adalah yang diberikan oleh flagela. Banyak jenis actinomycetes terjadi di
dalam tanah dan tidak berbahaya bagi hewan dan tumbuhan tingkat tinggi, sementara
beberapa yang patogen penting, dan banyak lainnya adalah sumber manfaat dari antibiotik.
Banyak otoritas mengenali delapan kelompok yang berbeda actinomycetes, meskipun
kelompok-kelompok ini sendiri heterogen dan akan memerlukan penelitian lebih lanjut untuk
mengklasifikasikan sepenuhnya. Dari jenis-jenis actinomycetes, asteroides Nocardia jaringan
menyebabkan infeksi pada manusia, dan congolensis dermatophilosis menyebabkan
Dermatophilus, dermatitis berat sapi, domba, kuda, dan kadang-kadang manusia. Beberapa
spesies Streptomyces actinomycosis menyebabkan penyakit pada manusia dan ternak.
Banyak aktinomisetes adalah sumber antibiotik seperti streptomisin

Sebuah METODE UNTUK STUDI mikroskopis aktinomisetes

GIOVANNI Giolitti DAN MARIANGELA Bertani Departemen of Bacteriology, Sekolah
Kedokteran Hewan, Universitas Milan, Milan, Italia Diterima untuk publikasi, 25 Juli 1952
Studi morfologi aktinomisetes hadiah berbagai kesulitan, terutama disebabkan oleh
kekurangan
metode sederhana dan cepat untuk mendapatkan yang baik pertumbuhan persiapan.
Dalam proses investigasi yang dilakukan dengan spesies Streptomyces, kami telah
mengembangkan suatu baru teknik, yang memberi kami hasil yang lebih baik daripada yang
sebelumnya dijelaskan oleh Henrici (Skinner et al, 1948.), Drechsler (1919), KlienebergerNobel (1947), dan Baldacci (1952). Metode ini dapat digunakan untuk penelitian tidak hanya
dari Streptomyces tetapi juga dari marga lain dari actinomycetes. Metode ini terdiri dalam
kultur aktinomisetes pada empat persegi panjang kecil diletakkan pada kertas kaca steril agaragar lembab dalam piring petri disusun biasa cara. Ketika budaya telah dikembangkan, kertas
kaca di mana sel-sel tumbuh akan dihapus dari permukaan agar-agar dengan steril tang,
ditempatkan pada slide, tetap, dan bernoda. The rincian pokok metode kami adalah sebagai
berikut: Persiapan persegi panjang dari ceUophane. Cakram kertas saring halus ditempatkan
dalam piring petri. Kecil empat persegi panjang dari kertas kaca bersih (sekitar 22 oleh 18
dengan 0,02 mm) diletakkan pada setiap disk kertas sedemikian rupa sehingga persegi
panjang tidak ditumpangkan dan setiap kelompok persegi panjang terletak di antara dua lapis
kertas saring. Beberapa lapisan kertas dan bagian kertas kaca dengan demikian dapat
ditempatkan secara bergantian di setiap cawan petri. Kemudian isi piring yang dibasahi
dengan air suling. Setelah beberapa menit kelebihan air dibuang, dan cawan petri dibungkus
dalam kertas dan disterilkan pada 120 C selama 20 menit. Penempatan dan pembenihan
bagian kertas kaca pada budaya media. Empat persegi panjang yang membasahi steril kertas
kaca dikeluarkan dengan tang steril dan ditempatkan dalam cawan petri yang berisi sekitar 15
ml agar. Czapek's agar, natrium agar-agar asparaginate, pati agar, dan nutrien yang biasa
dapat digunakan. Perawatan harus diambil untuk mencegah pembentukan gelembung udara
antara plastik dan agar-agar.Kemudian persegi panjang plastik yang diunggulkan olehberarti
dari sebuah loop platinum diisi dengan suspensi spora. Persiapan pada slide. Ketika budaya
telah mencapai tahap perkembangan yang tepat, salah satu bagian kertas kaca akan dihapus

dari agar-agar dengan tang steril dan meletakkan dengan hati-hati pada slide diolesi dengan
lapisan tipis gliserol dan albumin. Kaca dan kertas kaca harus mematuhi sempurna.slide ini
dibiarkan kering di inkubator pada 37 C dan adalah tetap kemudian di asam trichloracetic, 4
persen di 80 per alkohol persen selama 10 sampai 15 menit. Dengan demikian, fiksasi dari
cultureandirreversible koagulasi albumin yang diperoleh, kertas kaca sehingga mencegah dari
memisahkannya sendiri selama operasi berikut. Setelah proses fiksasi, persiapan adalah
dicuci selama 3 sampai 5 menit dalam air suling sebelum diwarnai dengan hematoxylin atau
lainnya noda. Jika pewarnaan memutuskan lebih dengan hematoxylin diinginkan, kontak
dengan dye bisa diperpanjang selama 12 sampai 24 jam untuk mendapatkan yang lebih baik
diferensiasi dari miselium udara. slide ini kering, dan tepi kertas kaca adalah dilapisi dengan
cat kuku (Dura-Gloss berwarna, Lorr Laboratorium, Paterson, N. J.). Hanya beberapa noda
bakteriologis dapat digunakan. Banyak, seperti fuchsin, metilen biru, safranin, gentian violet,
dan perunggu hijau, warna kertas kaca terlalu dalam dan harus sesuai dibuang. Delafield's
hematoxylin dan asetat metil biru memberikan hasil yang terbaik, yang pertama noda
mewarnai kertas kaca yang sangat sedikit dan kedua tidak sama sekali. Dengan metode
sederhana, adalah mungkin untuk mengikuti pertumbuhan aktinomisetes dalam setiap tahap
pembangunan mereka. Sebaliknya, metode lain, terutama bila sangat budaya remaja harus
diperiksa, ini merugikan bahwa medium kultur mengikuti slide mengganggu observasi.
Persiapan dibuat dengan biakan pada kertas kaca memungkinkan pengamatan kedua udara
dan vegetatif miselium. Kemungkinan menempatkan beberapa persegi panjang dari plastik di
setiap petri hidangan ijin mengikuti pertumbuhan budaya dalam kondisi yang sama
kelembaban dan aerasi; kemungkinan kontaminasi sangat berkurang, dan perbedaan
pertumbuhan antara yang berbeda spesies selalu terlihat jelas.
281
G. Giolitti DAN M. Bertani
PENGAKUAN
Para penulis ingin ungkapan terima kasih mereka kepada
Dr S. A. Waksman untuk sarannya dan untuk
revisi dari makalah ini.
DAFTAR PUSTAKA
BALDACCI, E. 1952 komunikasi pribadi.
DRECHSLER, C. 1919 Morfologi genus
Actinomyces. Botan. Gaz, 67., 65.
KLIENEBERGER-Nobel, E. 1947 Siklus hidup
dari sporing Actinomyces seperti diungkapkan oleh studi
struktur dan pembentukan sekat. J. Gen.
Microbiol, 1., 22.
Skinner, C., Emmons, C. W., DAN Tsuchiya,
H. M. 1948 Henrici's ragi, jamur dan
actinomycetes. 2nd ed. John Wiley and Sons,
New York, hal 69.
282 [VOL. 65