PROYECTO DE INVESTIGACIN

I. GENERALIDADES
I.1. Ttulo:
INMOVILIZACION DE ENZIMAS PARA PRODUCCION DE
BIODIESEL A PARTIR DE ACEITES RECICLADOS.
I.2.

Autor (es) :
- MORILLO PALLARA, Jhonatan
- PATIO CASTAEDA, Melisa
- URIARTE RODRGUEZ, Junior
- VALDERA RAMIREZ, Catheryn
- ZUIGA LECCA, Tsuyoshi

I.3.

Asesor:
- VELASQUEZ GUARNIZ, Miriam

I.4.

Tipo de investigacin
I.4.1. De acuerdo al fin
: Aplicada
I.4.2. De acuerdo a su naturalidad: Experimental

I.5.

Localidad e Institucin donde se desarrolla el

Proyecto:
I.5.1. Localidad : Nuevo Chimbote
I.5.2. Institucin : Laboratorios de la Universidad Nacional
Del Santa

I.6.

Duracin de la Investigacin
I.6.1. Duracin total del Proyecto
I.6.2. Fecha de Inicio
I.6.3. Fecha de trmino

: 5 semanas
:
:

I.7.

Recursos
I.7.1. Social
I.7.2. Bienes: De consumo

I.8.

Financiamiento
I.8.1. Con recursos compartidos con de la UNS

II. EL PROBLEMA DE LA INVESTIGACIN:

2.1. Planteamiento del problema:

En la actualidad, en nuestra ciudad, como en muchos otros

lugares, se vive un arraigado problema desde hace mucho
tiempo relacionado con los daos ocasionados por la constante
formas de contaminacin medioambiental, principalmente por
parte de los ciudadanos que no muestran una adecuada
preocupacin por la conservacin de nuestro medio al arrojar
todo tipo de desechos por los lavaderos de cocinas y desages.
Estas acciones provocan la contaminacin de aguas
residuales y en otros casos atascos de tuberas, perjudicndose
as, de forma indirecta, la poblacin misma que no tiene
conciencia de lo que causa al desechar los aceites de esta
manera.
Ante esto hecho se hace inevitable buscar una solucin que
ayude a revertir el dao ocasionado al medio ambiente. Es
preciso eliminar los aceites y grasas que se acumulan en las
tuberas y que con el tiempo llegan a contaminar aguas de ros y
mares;

cuando

menos

reducir

al

mnimo

posible

la

contaminacin que causa el arrojar los aceites por las tuberas.

Ante este hecho, el uso de enzimas se presenta como una
excelente solucin, ya que se sabe que existen; conocidas como
lipasas capaces de degradar aceites, que resultan nocivos para
nuestro medio ambiente.
Se pretende por lo tanto disear un sistema de enzimas
inmovilizadas que ayuden a degradar los aceites presentes en
las tuberas de los hogares que son el principal medio de
contaminacin, a fin de reducir la contaminacin y con ello
producir nuevos productos como el Biodiesel.

2.2. Formulacin del problema:

Cmo reducir los niveles de contaminacin causados por

aceites reciclados, a partir de la extraccin e inmovilizacin de
lipasas, para una posterior produccin de biodiesel, y as una
adecuada conservacin del medio ambiente,

a partir de los

residuos obtenidos?
2.3. Objetivos de la investigacin:
2.3.1. Objetivos Generales:
- Obtener enzimas que degraden lipasas a partir de
un hongo (Geotrichum sp.), para la elaboracin de
-

Biodiesel.
Afianzar las destrezas en el trabajo de laboratorio
en cuanto a aislamiento, cultivo y ensayo de la
actividad de microbiana.

2.3.2.

Objetivos Especficos:
- Determinar el uso de enzimas inmovilizadas de la
cepa

seleccionada

produccin
-

de

reciclados.
Realizar
la

(Geotrichum

biodiesel

inmovilizacin

sp.),

partir
con

para

de

la

aceites

diferentes

procedimientos, ya sea con dicha solucin (CaCl2)

con aceite.
2.4. Justificacin del estudio:
En el Per, existe una estudio acerca de la gestin de los
aceites de desecho realizado por el Instituto de Promocin del
Desarrollo Sostenible (IPES), el cual revel que el 25% del aceite
usado comestible procedente de restaurantes de comida rpida
y procesados de pollo (pollerias) del distrito de Villa El
Salvador (Lima) venda los aceites a lugares de crianza informal
de cerdos, y el restante 75% lo arrojaban por el desage y/o al
suelo (IPES, 2002).

La mayora de hogares y restaurantes, presentan serios

problemas de contaminacin de las tuberas que afectan a la
obstruccin de las mismas, as como

a la contaminacin

posterior de ros y mares; sin embargo estos retos residuos

(aceites) son de gran importancia, en el campo de estudio de la
biotecnologa.
En los hogares de nuestra ciudad como en muchas otras, se
hace uso de los aceites de oliva, girasol
preparado de

y otros para el

nuestros alimentos, que luego de ser usados,

normalmente son desechados de manera desprevenida por las

tuberas.
Haciendo que la depuracin de las aguas residuales resulte
ms costosa y difcil, por producir una gran contaminacin, ya
que cada litro de aceite contamina 100.000 litros de agua,
haciendo que enfrentemos a uno de los problemas ms grandes
de contaminacin ambiental, reduciendo cada vez nuestras
condiciones de vida en este planeta; sin embargo el reciclaje del
aceite usado tiene la ventaja de que se puede usar para la
obtencin de biodiesel (cada litro de aceite reciclado produce otro
litro biodiesel, que adems emite menos emisiones de CO2).
Los aceites son trminos que describen a numerosos lquidos
grasos de diversos orgenes que no se disuelven en el agua y que
tienen menor densidad que esta; por lo que, es el objetivo de
estudio en este proyecto, la determinacin de enzimas con la
capacidad de descomponer la estructura de lipasas.
En este proyecto, se estudiar uno de los muchos usos que
se le puede atribuir a los aceites reciclados, para el cual se har
uso de enzimas con capacidades lipolticas y un posterior uso de
los aceites reciclados como la produccin de biodiesel.

2.5. Limitaciones de la investigacin:

Es posible que los reactivos a emplear no se encuentren en
las mejores condiciones, debido a que las condiciones del
laboratorio no garantizan un almacenamiento adecuado, y por lo
tanto no se garantiza un buen estado de los materiales y
reactivos a emplear en el presente estudio.
III.

MARCO TEORICO:
III.1. Antecedentes del estudio:
Garc (2013), inmoviliz la lipasa sobre el quitosano por
medio de un enlace covalente haciendo uso de la base de Schif
como unin entre la enzima, glutaraldehdo y quitosano. El
quitosano es un derivado de la quitina y ambos presentan
mltiples reas de aplicacin. Este es obtenido a base de la
cubierta de

cangrejo (cncer setosus) mediante el

mtodo

qumico, siendo modificado en el proceso de desacetilacin

usando la autoclave.
El

quitosano

obtenido

presenta

un

alto

grado

de

desacetilacin 67,06 % determinado por espectroscopa infrarroja

y bajo porcentaje de protena 0,5445 % determinado por el
mtodo de Bradford, siendo el soporte para la inmovilizacin de
la lipasa con un rendimiento del proceso de inmovilizacin de
49,55 % y el rendimiento de reciclado de la enzima inmovilizada
fue de 79,40 %, segn el modelo basado en la generacin de
cido oleico a partir de la hidrlisis del aceite de oliva.
III.2. Bases tericas:
La palabra enzima se deriva del griego que dignifica en las
levaduras y fue usada primero por kuhne en 1878. Sin embargo, el

primer informe publicado acerca de la capacidad de los extractos

celulares (malta) para llevar a cabo una reaccin caracterstica de las
clulas vivas (loa hidrolisis del almidn a glucosa) fue escrito
inicialmente en 1833 por Payen y Persoz. Ms tarde, Buchner (1897)
demostr la capacidad e los extractos de levadura para catalizar la
conversin de azcar a alcohol, mientras

que Emil Fischer (1894)

demostr la especificidad de las enzimas para su substrato.

Subsecuentemente, Summer (1926) cristalizo la primera enzima,
la ureasa, la cual hidroliza la urea a CO2

y NH3 y mostro que las

enzimas eran protenas.

Fue hasta la dcada de los aos sesenta que se conoci la
composicin qumica precisa de las enzimas mediante la secuencia de
la ribunucleasa, junto con los estudios de conformacin tridimensional
por cristalografa de rayos X. estos trabajos permitieron que se
postulara

el

mecanismo

de

accin

enzimtica,

junto

con

las

proposiciones para formar en que esta se regula.

Las enzimas son catalizadores de los organismos vivos. Sin ellos
no existira la vida tal y como la conocemos. Las enzimas son
protenas, productos directos de la expresin gentica, las cual, en
forma altamente integrada, regula e incluso dinmica, canaliza,
modula y hace posible el vasto arreglo de vas metablicas que yacen
en el centro de la biotecnologa. Las enzimas tambin son productos
de la biotecnologa. Estas se pueden separar en estado activo a partir
de una clula viva y usarse luego para llevar a cabo transformaciones
qumicas, o ms extractivamente, bioqumicas, de una u otra clase.
La tecnologa enzimtica es una de las reas de la biotecnologa
de ms rpido avance, que interacta con muchos otros aspectos de
la misma. Dada la estrecha relacin entre las enzimas, las sntesis de
protenas y la expresin gentica, es posible esperar que en el futuro
estas reas se desarrollen juntas.
Aceites de desecho:

Segn el Grupo Tcnico de Trabajo de la Convencin de Basel

del Programa Ambiental de Naciones Unidas (UNEP), identifica a los
residuos de aceites y grasas comestibles de origen vegetal o animal
(ejemplo; aceites de frer) como aquel desperdicio que es generado
por fritura de alimentos, principalmente en servicios proveedores
de stos, pero adems en casas de familia y la industria de
alimentos. Siendo su constitucin fsica: lquida, semislida o slida.
Los mayores constituyentes de estos desechos son: triglicridos y
cidos grasos libres (de aceites y grasas domsticos de ambos
orgenes vegetal y animal), agua y residuos de alimentos (1,5%)
(UNEP, 2001).
El aceite al ser empleado en frituras cumple una doble funcin,
pues acta como medio de transmisin de calor y como ingrediente
del producto frito al ser absorbido por ste (De La Cruz y Huamn,
2002).
Los

aceites

vegetales

residuales

provienen

en

mayor

proporcin de este proceso de fritura, ya que incluso en el caso de

las papas fritas tipo chips; que son el alimento que mayor
cantidad de aceite absorbe durante su fritura, se desecha alrededor
de un 65% de la cantidad inicial de aceite utilizado (Fedeli, 1998)
Ms de 400 000 toneladas de aguas residuales conteniendo
lpidos es descargado cada ao en Japn, y cerca del 75 % de estas
aguas residuales provienen de la industria de alimentos y de
restaurantes (Yada et al., 2001)
En Per, el consumo de aceites vegetales se realiza a nivel
industrial, comercial y domstico. En la ciudad de Lima existen
diversos establecimientos como polleras, restaurantes de frituras
de carne de cerdos (chicharronerias), restaurantes de comida
china (chifas), etc.; en donde se usan aceites vegetales para
frituras de alimentos.
En la mayora de estos lugares, dichos aceites son reutilizados
una y otra vez hasta

llegar a generar benzopirenos y otros

hidrocarburos aromticos (De La Cruz y Huamn, 2002), reportados

como cancergenos.

LIPASAS
Las lipasas (E.C. 3.1.1.3) son enzimas que catalizan in vivo la
hidrlisis de triacilglicridos. In vitro las lipasas pueden catalizar la
hidrlisis o sntesis de una gran variedad de steres, y la resolucin
de mezclas racmicas con una alta enantio- y regioselectividad.
Sin embargo la baja estabilidad de muchas lipasas a altas
temperaturas y pHs extremos limita su aplicacin a nivel industrial,
ya que los procesos pueden requerir el uso de temperaturas
elevadas o la utilizacin de solventes para disolver los sustratos.
Esta

limitacin

se

puede

resolver

usando

lipasas

de

microorganismos termoflicos. Actualmente la mayora de las

lipasas termoflicas que han sido purificadas y caracterizadas han
sido obtenidas de especies del gnero Bacillus.
Aun as el desempeo de una enzima en una reaccin dada no
es suficiente para su aplicacin en procesos industriales. Las lipasas
solubles (y todas las enzimas) presentan ciertos problemas para su
utilizacin: tienen baja estabilidad, su separacin es difcil y su
reutilizacin es muy limitada. Existen estrategias para mejorar el
desempeo

de

las

lipasas

entre

las

que

se

encuentra

la

inmovilizacin.
APLICACIONES DE LAS LIPASAS

Obtencin de productos crnicos con bajo contenido de

grasas

Ayuda a la digestin aerbica en agua de varios compuestos

INMOVILIZACIN
La inmovilizacin de una enzima es un proceso en el que se
confina o localiza en un soporte para dar lugar a formas insolubles
que retienen su actividad cataltica y pueden ser reutilizadas

repetidamente, con la ventaja de facilitar su separacin, aumentar

su estabilidad y la posibilidad de reutilizarla.
Tambin existen inconvenientes en el proceso de inmovilizacin:
la conformacin de la enzima puede resultar alterada, el sistema
enzima-soporte

puede

contener

fracciones

de

protenas

inmovilizadas con un diferente nmero de uniones al soporte, y

puede haber prdida de la actividad durante el proceso.
Los mtodos de inmovilizacin se pueden dividir en dos grandes
grupos: atrapamiento y unin a superficie, este ltimo incluye los
mtodos por unin covalente, entrecruzamiento y adsorcin. En la
literatura existen trabajos de inmovilizacin de lipasas termfilas y
mesfilas por medio de la adsorcin, en los que se reportan altos
porcentajes de actividad residual con respecto a la enzima soluble y
un aumento en la termoestabilidad.
En el Instituto Tecnolgico de Veracruz se purific y caracteriz la
lipasa producida por la bacteria termfila Bacillus thermoleovorans
CCR11, que fue aislada de las aguas termales El Carrizal, Veracruz.
Esta bacteria produce una lipasa termoalcalfila, ya que su
temperatura ptima es 60C, y su pH ptimo es 9.
Tiene un peso molecular de 11 kDa, por lo que es la lipasa de
menor peso molecular reportada en la literatura. Presenta estabilidad
al pH y la temperatura, y adems es resistente a la presencia de
solventes orgnicos, detergentes, y algunos iones metlicos. Por lo
tanto, esta lipasa resulta muy atractiva para su aplicacin en
procesos industriales, y en biocatlisis en disolventes orgnicos.
VENTAJAS DEL EMPLEO DE ENZIMAS INMOVILIZADAS:

El aumento de la estabilidad de la enzima

La posible reutilizacin del derivado, por lo que disminuyen los

costes del proceso.

La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo
y control, adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada.
Los diferentes tipos de reactores enzimticos.

Estos reactores con enzimas inmovilizadas permiten el empleo

de cargas elevadas de enzima, la cual mantendr su actividad
durante ms tiempo. Estos sistemas pueden incluir el
reciclado, lo que permite la obtencin de productos con mayor
pureza.

INCONVENIENTES DEL PROCESO DE INMOVILIZACIN SON:

La alteracin de la conformacin de la enzima respecto de su

estado nativo.
La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde
pueden existir distintas fracciones de protenas inmovilizadas

con un diferente nmero de uniones al soporte.

Siempre suele haber una prdida de actividad de la enzima

durante la movilizacin.
El biocatalizador es ms caro que la enzima nativa.

En general, los mtodos de inmovilizacin se suelen clasificar en

dos grandes categoras: 1) Retencin fsica y 2) Unin qumica.
MTODOS DE INMOVILIZACIN
Enzimas Inmovilizadas Por Encapsulacin
La inmovilizacin de enzimas es un proceso en el que se
confina o localiza a la enzima en una regin definida del espacio,
para dar lugar a formas insolubles que retienen su actividad
cataltica y que pueden ser reutilizadas repetidamente.
Posteriormente esta definicin se ha ampliado a aquel proceso
por el cual se restringen, completa o parcialmente, los grados de
libertad de movimiento de enzimas, orgnulos, clulas, etc. por
su unin a un soporte.

Enzimas Inmovilizadas Por Retencin Fsica

1.

ATRAPAMIENTO

Consiste en la retencin fsica de la enzima en las

cavidades interiores de una matriz slida porosa constituida
generalmente por prepolmeros fotoentrucruzables o
polmeros del tipo poliacrilamida, colgeno, alginato,
carraginato o resinas de poliuretano. El proceso de
inmovilizacin se lleva a cabo mediante la suspensin de la
enzima en una solucin del monmero. Seguidamente se inicia
la polimerizacin por un cambio de temperatura o mediante la
adicin de un reactivo qumico. El atrapamiento puede ser en
geles o en fibras, que suelen ser ms resistentes que los geles.
En el primer caso, la enzima queda atrapada en el interior de
un gel, mientras que en el segundo caso la enzima se
encuentra ocluida dentro de las microcavidades de una fibra
sinttica. El atrapamiento, de gran sencillez desde el punto de
vista experimental, requiere poca cantidad de enzima para
obtener derivados activos. Como ventaja adicional, la enzima
no sufre ninguna alteracin en su estructura. De todas formas,
el atrapamiento requiere un control riguroso de las
condiciones de polimerizacin, as como la comprobacin de
que la naturaleza qumica del proceso no altera los grupos
reactivos de la protena.

2.

INCLUSIN EN MEMBRANAS: DIVIDIDA EN DOS TIPOS:

2.1. Microencapsulacin: En esta tcnica, las enzimas estn
rodeadas de membranas semipermeables que permiten el
paso de molculas de sustrato y producto, pero no de
enzima. Estas membranas semipermeables pueden ser
permanentes (originadas por polimerizacin interfacial) o no
permanentes (generadas por surfactantes, tambin
llamadas micelas reversas). Las microcpsulas obtenidas
son de forma esfrica, con tamaos comprendidos entre 1 y

100 mm de dimetro. Mediante este mtodo se pueden

encapsular simultneamente una gran variedad de enzimas,
clulas o biomolculas, permitiendo que se lleven a cabo
determinadas reacciones que suceden en mltiples pasos.
2.2. Reactores de membrana: El desarrollo de reactores o
sistemas que contengan enzimas atrapadas ha despertado
gran inters en la industria. Estos reactores emplean
membranas permeables al producto final, permeables o no
al sustrato inicial y obviamente impermeables a la enzima.
Mediante una bomba se establece un flujo lquido de
sustrato que atraviesa el reactor.

En general, en esta metodologa, se procede inicialmente a

la adsorcin de la enzima sobre la membrana que formar
el reactor. Esta adsorcin se puede realizar de dos formas:
Mediante el paso de una solucin tamponada de
enzima a travs de la membrana;
Por contacto continuo de una solucin de enzima con
la membrana.

Enzimas Inmovilizadas Por Unin Qumica

1. Unin A Soportes
Son los mtodos de inmovilizacin ms utilizados y de los
que se dispone de una mayor informacin.
La eleccin del soporte y del tipo de enlace resultan
determinantes en el comportamiento posterior del
biocatalizador. Se debe procurar que la inmovilizacin
incremente la afinidad por el sustrato, disminuya la inhibicin,

ampli el intervalo de pH ptimo y reduzca las posibles

contaminaciones microbianas. Adems el soporte debe tener
resistencia mecnica adecuada a las condiciones de operacin
del reactor y ser fcilmente separable del medio lquido para
que pueda ser reutilizado. Se han utilizado una gran variedad
de materiales como soportes para la inmovilizacin de
numerosas enzimas.
Estos materiales difieren en tamao, densidad, porosidad y
forma, aunque generalmente nos los encontramos en forma de
cilindro, hojas, fibras y ms corrientemente en forma de
esferas.
2. Adsorcin
En la adsorcin, la enzima se une a un soporte sin
funcionalizar mediante interacciones inicas, fuerzas de Van der
Waals y por puentes de hidrgeno. Los principales factores que
influyen en la adsorcin, son:
a.

El pH del medio: controla el nmero y la naturaleza

de las cargas que presenta la superficie de la protena y del

slido.
b. La fuerza inica: al aumentar la fuerza inica se produce la
desorcin de la enzima, ya que los iones inorgnicos se
unen con ms fuerza al soporte que la protena.
c. El dimetro de poro: debe ser aproximadamente dos veces
el tamao del eje mayor de la enzima.
d. La presencia de iones: que acten como cofactores de la
enzima, ya que pueden incrementar la carga enzimtica del
derivado.
Como principales ventajas de este mtodo destacan:

Su preparacin sencilla
Su bajo coste
No hay cambios de especificidad enzimtica

Los derivados son estables en medios de trabajo con bajo

contenido en agua

Los inconvenientes de la adsorcin son principalmente:

La optimizacin de las variables que controlan la

adsorcin
Los derivados obtenidos son poco estables desde el

punto de vista mecnico

La unin al soporte es dbil.

Una variante dentro de la tcnica de la adsorcin consiste

en emplear resinas de intercambio inico, las cuales contienen
grupos funcionales y contra iones mviles. Estos contra iones se
pueden intercambiar reversiblemente por otros iones de la
misma carga, sin que se produzcan cambios en la matriz
insoluble.
3. Unin Covalente
La unin covalente de una enzima a un soporte es quiz
el mtodo de inmovilizacin ms interesante desde el punto
de vista industrial. La metodologa de la unin covalente se
basa en la activacin de grupos qumicos del soporte para que
reaccionen con nuclefilos de las protenas. De entre los 20
aminocidos diferentes que se encuentran en la estructura de
las enzimas, los ms empleados para la formacin de enlaces
con el soporte son principalmente la lisina, la cistena, la
tirosina y la histidina, y en menor medida la metionina, el
triptfano, la arginina y el cido asprtico y glutmico. El resto
de aminocidos, debido a su carcter hidrfobo, no se
encuentran expuestos hacia el exterior de la superficie
proteica, y no pueden intervenir en la unin covalente.
Este mtodo presenta las siguientes ventajas:

La manipulacin de los derivados inmovilizados es

sencilla.
La carga de enzima permanece constante despus de la

inmovilizacin.
Los derivados pueden utilizarse en reactores en
continuo, empaquetados, de lecho fluidizado o tanque

agitado.
Una mayor resistencia a la desactivacin por el efecto
de la temperatura, de los disolventes orgnicos o del
pH, al tener estabilizada su estructura terciaria.
En cambio la inmovilizacin por enlace covalente tambin

presenta una serie de inconvenientes:

Es necesario conocer la densidad de grupos activos por

unidad de superficie, ya que condiciona el nmero de
uniones enzima-soporte y su geometra, que puede ser

distorsionante y conducir a derivados inactivos.

El proceso de inmovilizacin puede alterar la estructura
del centro activo. Para evitar esta posible alteracin, se
realiza la inmovilizacin en presencia de un inhibidor

que bloquee el centro activo.

La inmovilizacin covalente no es aconsejable en
aquellas enzimas muy sensibles a cambios de pH,
fuerza inica, etc.

4. Reticulado
Tambin denominado entrecruzamiento o cross-linking, es
una tcnica que ha sido ampliamente utilizada en la
estabilizacin de muchas enzimas (7). El mtodo del reticulado
consiste en uso de reactivos bifuncionales que originan
uniones intermoleculares entre las molculas de enzima.
Como reactivos bifuncionales se pueden emplear
dialdehdos, diiminosteres, diisocianatos, sales de bisdiazonio
e, incluso, diaminas si estn activadas con carbodiimida. El

resultado del reticulado son enzimas con enlaces

intermoleculares irreversibles capaces de resistir condiciones
extremas de pH y temperatura.
El co-reticulado, permite eliminar las prdidas de actividad
enzimtica debidas a efectos difusionales, mediante el
entrecruzamiento de las enzimas con una protena sin
actividad enzimtica y rica en residuos de lisina (por ejemplo,
la albmina bovina). Un procedimiento mixto de inmovilizacin
muy comn consiste en inmovilizar la enzima por adsorcin
sobre una resina de intercambio inico o un soporte polimrico
(con lo que se consigue una elevada carga enzimtica) y
posteriormente aadir el reactivo bifuncional.
Actualmente el mtodo ms novedoso de cross-linking
consiste en la cristalizacin de enzimas y su posterior
reticulado con glutaraldehdo (Cross-Linked Enzyme Crystals o
CLECs). El aumento de estabilidad se basa en la obtencin de
un entramado cristalino, donde las molculas de enzima estn
rodeadas exclusivamente por otras molculas de protena. De
esta manera la propia enzima acta como soporte, y su
estructura terciaria est estabilizada por las uniones
covalentes intermoleculares. La estructura cristalina posee
canales microscpicos (20-50) que permiten el paso de
sustratos hasta el centro activo de la enzima donde se cataliza
la reaccin. Estos cristales pueden soportar temperaturas
elevadas y pH extremos, as como la accin de las proteasas.
Esta tecnologa se ha aplicado a enzimas muy diferentes, las
cuales se han utilizado en la obtencin de compuestos
enatiomricamente puros y en la sntesis de pptidos.

III.3. Hiptesis:
La actividad lipoltica adsorbida a menor temperatura, y la
actividad lipoltica de los inmovilizados obtenidos a diferentes
temperaturas es mayor conforme disminuye la temperatura del
proceso. Encuentra una mayor cantidad de protena adsorbida a pH
6.0 con respecto a los dems pH, igualmente la actividad lipoltica en
el inmovilizado preparado en pH6.0 fue mayor que en las dems
corridas experimentales
Entre las ventajas podemos destacar que la inmovilizacin de
enzimas permite la reutilizacin de las mismas, a la vez que aumenta
su estabilidad frente a un abanico ms amplio de valores de
IV.

temperatura y pH.
METODOLOGIA
IV.1. Tipo y nivel de investigacin:
Descriptiva y experimental.

IV.2. Descripcin del mbito de la investigacin

Nuestro grupo de investigacin desea estudiar el tipo de enzimas

que se va a utilizar para degradar aceite, este tipo de enzimas
lipolticas (lipasas), puesto que utilizaremos aceites reciclables de una
pollera (Al Carbn) del distrito de Nuevo Chimbote. Para realizar la
investigacin se pone en prctica un estudio experimental con los
aceites reciclables. Sern procesadas y analizadas en los laboratorios
de microbiologa y laboratorios de bioqumica de la Universidad
Nacional del Santa.
Las enzimas lipolticas constituyen un importante grupo de
enzimas con el metabolismo y degradacin de grasa. Por otra parte,
las lipasas son esenciales para la produccin de sabores y aromas
caractersticos en ciertos alimentos (1994, Illanes A.).
IV.3. Poblacin y muestra
Aceite reciclado de pollera (Al Carbn) de Nuevo Chimbote.
IV.4. Tcnicas e instrumentos para la recoleccin de datos
El muestreo del aceite reciclado se realizara cada cuatro das en
tres semanas, los que luego de ser extrados (20ml), sern
analizados en el laboratorio con esto lograr que las enzima puedan
ser inmovilizadas; para que no haya alteracin de la conformacin de
la enzima respecto de su estado nativo.
En general, los materiales para inmovilizar enzimas deben cumplir
importantes requisitos como: costo, disponibilidad, no degradables y
aptos para condiciones de pH y temperatura bajas (Bakoyianis et al.,
1992 & 1996; Bardi y Koutinas, 1994; Fumi et al., 1987).
Primero ser atrapada con alginato de sodio para detener su
actividad cataltica; luego ser microencapsulada para detener el
paso de sustratos y productos pero no de enzima y finalmente el
reactor de membrana que evitara la permeabilidad de la enzima
retenindola e inmovilizndola.

IV.5. Validez y confiabilidad del instrumento:

En

la

actualidad,

la

produccin

de

biodiesel

se

realiza

principalmente a partir de aceites usados y de aceites de girasol y

colza sin usar. Los aceites y grasas, estn compuestos de esteres:
monoglicridos, diglicridos y triglicridos y de cidos grasos libres.
Las lipasas especficas, pueden seleccionar los cidos grasos de
algunas posiciones del triglicrido, para incorporar determinados
cidos grasos, sin cambiar los de otras posiciones. De tal manera que
es posible modificar por interesterificacion el contenido de cidos
grasos, o por transesterificacion lograr el rearreglo de algunos de
ellos. (2,3)
Entre las ventajas se destaca, las ambientales donde se encuentra
relacionada con la emisin neta del CO 2 en donde el empleo de
biodiesel juega un papel muy importante en este aspecto, puesto que
cuando se emplea como combustible (1).
Otra ventaja destacable es la socioeconmica con el ahorro de
combustibles agotables, en la medida que se sustituye el empleo de
derivados del petrleo por biogs de origen renovable (3).
IV.6. Plan de recoleccin y procesamiento de datos
En el estudio de la produccin de biodiesel a partir de aceites
reciclados obtenidos de una pollera del distrito de Nuevo Chimbote,
previamente tratadas con enzimas inmovilizadas; para dar lugar a

formas insolubles que retienen su actividad cataltica y que pueden

ser reutilizadas repetidamente. En este caso, sern utilizadas para la
degradacin de los aceites reciclados y obtencin final de biodiesel
(1,2).