Centro de Desenvolvimento Sustentvel do Semirido-CDSA

Unidade Acadmica de Tecnologia do Desenvolvimento-UATEC

Graduao em Engenharia de Biotecnologia e Bioprocessos
Componente curricular: Laboratrio de Bioqumica e Biologia Molecular-LBBM
Prof. Franklin de Farias Nbrega

AULA PRTICA N 01: PROPRIEDADES ACIDOBSICAS DOS AMINOCIDOS

1. OBJETIVOS:

Determinar os valores de pK de solues de aminocidos (Glicina e/ou cido glutmico) atravs de

titulao;

Construir as curvas de titulao para os aminocidos;

Manusear e compreender o funcionamento de um medidor de pH;

Estudar o efeito tamponante de misturas contendo propores e concentraes diferentes de um cido

fraco e sua base conjugada.

2. FUNDAMENTAO TERICA:

2.1. PROPRIEDADES ACIDOBSICAS DOS AMINOCIDOS:

Em soluo aquosa, os aminocidos contm grupos -carboxila fracamente cidos e grupos amino fracamente bsicos. A presena dos grupos amina e carboxila propicia aos -aminocidos um carter
anfotrico em soluo aquosa, ou seja, um comportamento tanto de cido como de base. Alm disso, cada
aminocido cido e cada aminocido bsico contm um grupo ionizvel na cadeia lateral.
Em valores de pH 6,0 7,0, os aminocidos existem predominantemente na forma dipolar inica
(on hbrido), cuja representao mostrada na Figura 1A. Em faixas extremas de pH, por outro lado, eles
se apresentaro como espcies inicas diferentes (Figura 1B e 1C):

Figura 1: Frmula geral dos aminocidos (A) e espcies inicas dos

aminocidos em valores extremos de pH (B e C)

Assim, tanto os aminocidos livres como alguns aminocidos combinados por meio de ligaes
peptdicas podem atuar como tampes.
Lembre-se que os cidos podem ser definidos como doadores de prtons e as bases como
aceptoras de prtons. cidos (ou bases) so descritos como fracos quando ionizam em proporo
limitada. A concentrao de prtons em soluo aquosa expressa como pH, onde pH = Log 1/ [H+] ou -Log
[H+].
Considere a liberao de um prton por um cido fraco, representado por HA:
HA
cido fraco

H+

A-

Prton

Forma salina ou base conjugada

O Sal ou base conjugada, A-, a forma ionizada de um cido fraco. Por definio , a constante de
dissociao do cido, Ka, :
Ka = [H+] [ A-]
[HA]
Quanto maior o Ka, mais forte o cido, pois indica que a maior parte de H, dissociou-se em H+ e A-.
Por sua vez, quanto menor o Ka, menos cido foi dissociado e, portanto, mais fraco o cido.

A relao quantitativa entre o pH da soluo e a concentrao de um cido fraco (HA) e a sua base
conjugada (A-) descrita ela equao de Handerson-Hasselbalch:
pH = pKa + Log [A-]
[HA]
2.2. OS TAMPES:

As substncias consideradas cidos ou bases fortes so aquelas que tendem a se dissociar

totalmente quando em soluo, diminuindo ou aumentando o pH do meio, respectivamente. Assim, o pH
de uma soluo 0,1 M de HCl praticamente 1,0 (pH = -log [0,1]), enquanto o pH de uma soluo 0,1 N de
NaOH praticamente 13,0 (pOH = -log [0,1] e pH = 14 - 1). O pH dos fluidos biolgicos mantm-se mais ou
menos constantes em valores prximos de 7,0 devido presena de um grande nmero de substncias
capazes de captar ou liberar prtons. Nas clulas e nos fluidos biolgicos predominam cidos e bases
fracos, que no so completamente ionizveis em soluo (alguns dissociam-se menos que 1 %). Sendo
assim, a relao entre pH e o grau de dissociao de um cido fraco no direta como nos cidos fortes. No
entanto, ela pode ser analisada atravs da equao de Henderson-Hasselbach.
Esta equao mostra que o pH de qualquer soluo aquosa que contenha uma quantidade
significativa de um cido fraco depender da proporo (E NO DA QUANTIDADE ABSOLUTA) das formas

dissociadas e no dissociadas do cido e do pKa deste mesmo cido. Se H+ ou OH- forem adicionados a
uma soluo contendo uma proporo adequada destas formas, a razo [base]/[cido] ser alterada ao
consumir esses [H+] ou [OH-], sem variar o pH do meio e, claro, mantendo-se inalterada a constante

de dissociao, Ka.
Assim, o TAMPONAMENTO DE UMA SOLUO a capacidade desta em resistir a variaes
de pH. Substncias cuja presena na soluo so responsveis por este efeito so conhecidas
como TAMPES. O fenmeno do tamponamento um dos fatores que possibilitou o surgimento
da vida. Em organismos vivos o pH dos diferentes ambientes mantido estvel, mesmo aps a
adio de cidos ou bases. Em laboratrios pode-se preparar uma soluo tampo utilizando-se
uma base fraca ou um cido fraco (ex.: cido actico) e sua base conjugada na forma de um sal
(ex.: acetato de sdio). Em pesquisa cientfica os tampes so essenciais para a manuteno do pH
em uma grande variedade de procedimentos, por exemplo, cultura de clulas e tecidos, medida de
atividade enzimtica, purificao de protenas, etc... Normalmente utiliza-se um tampo para
manuteno de um valor de pH que se encontre uma unidade acima ou abaixo de seu valor de pK,
pois dentro desta faixa o seu efeito tamponante muito mais eficiente.

2.3. TITULAO DE UM AMINOCIDO:

Pode-se estudar a dissociao dos prtons de um aminocido em soluo realizando-se uma curva
de titulao e observando-se a variao do pH do meio com o auxlio de um medidor de pH (ou pHmetro).
A titulao de um aminocido consiste na remoo gradual de prtons atravs da adio de uma base
(como NaOH) e a curva de titulao corresponde ao grfico dos valores de pH da soluo em funo do
volume de base adicionado. Essa curva revela os pKas (que so formas de expresso das constantes de
dissociao Ka) dos grupos ionizveis do aminocido (lembre-se que pKa = -log Ka). medida que a base
adicionada, a curva passa apresentar estgios distintos, que dependem da concentrao de cada uma das
formas doadoras de prtons, como mostra a Figura 2.
Assim, para um -aminocido simples monocarboxlico, observaremos trs pontos de inflexo na
curva: A) um ponto no qual o pH igual ao valor do pK do grupo carboxlico, onde esto presentes
quantidades equimolares das formas A (carga lquida = +1) e B (carga lquida = 0); B) um ponto no qual o
valor de pH corresponde ao ponto isoeltrico (pI) do aminocido, onde a forma B est principalmente
presente; e C) um ponto no qual o pH igual ao valor do pK do grupo amino, onde esto presentes
quantidades equimolares das formas B e C (carga lquida = -1). Portanto, cada aminocido apresentar uma
curva especfica, j que esta depende das interaes intramoleculares que o compem. Alm disso, alguns
aminocidos apresentaro mais de 2 valores de pK, uma vez que possuem mais um grupo ionizvel no seu
grupamento R.

Figura 2: Reaes de dissociao de prtons de um -aminocido simples monocarboxlico

3.

PROCEDIMENTO PRTICO:

3.1.

Reagentes:

Solues de Glicina e cido Glutmico 0,02 M (pH 1);

Soluo de NaOH 0,5 N.

Soluo de HCl 1 M.

Solues-padro para calibrao do medidor de pH.

Soluo de cido actico 0,2 M

Soluo de acetato de sdio 0,2 M.

3.2.

Procedimentos gerais de ajuste do medidor de pH:

Ligar o aparelho;

Retirar o eletrodo do recipiente contendo soluo de KCl 3M e lav-lo com gua destilada.

Imergir o eletrodo na soluo-padro de pH 7 e calibrar o aparelho no boto adequado.

Retirar o eletrodo da soluo e repetir o procedimento de ajuste, agora para a soluo-padro de

pH 4,0, no boto adequado.

Lembrar-se de sempre colocar o aparelho em stand by quando eletrodo no estiver imerso em

uma soluo.

3.3.

Procedimentos para titulao dos aminocidos:

Em um bcher colocar 40 mL de glicina ou cido glutmico.

Mergulhar uma barra magntica na soluo e posicionar o bcher sobre a placa agitadora.

Inserir o eletrodo limpo e calibrado na soluo, de modo que a juno cermica fique submersa
(cuidado para o bulbo no esbarrar na barra magntica).

Sob agitao, titular com NaOH 0,5 N, adicionando 0,2 mL por vez e anotando o pH aps cada
adio

(adicionar o NaOH diretamente soluo, sem esbarrar no eletrodo ou na parede interna do

bcher).

3.4.

Construir o grfico de pH da soluo versus volume de NaOH adicionado.

Procedimentos gerais para estudo da capacidade tamponante:

Em quatro bcheres, adicionar os volumes indicados das solues de cido actico, acetato de
sdio e gua:

Bquer

cido Actico

Acetato de Sdio

H2O

20 mL

20 mL

10 mL

10 mL

20 mL

25 mL

15 mL

15 mL

25 mL

Repetir os procedimentos descritos acima para titulao de cada uma das solues, mas desta vez
adicionar 5 x 0,5 mL de NaOH 0,5 N. Anotar o valor de pH a cada adio.

Construir o grfico de pH das solues versus volume de NaOH adicionado.