RECUENTO DE MESFILOS AEROBIOS

NOMBRE DEL ALUMNO (A):

Recuento de Microorganismos
El anlisis de los alimentos nos ayuda a determinar la existencia, tipo y nmero
de

microorganismos.

Sin

embargo

ninguno

de

los

mtodos

utilizados

habitualmente permite determinar el nmero exacto de microorganismos que

existe en un determinado alimento. Ms que recuentos, estas tcnicas proveen
medios para estimar contenidos microbianos.En la conformacin del grupo
demesfilos Aerobios encontrarnos un grupo heterogneo, teniendo en comn el
carcter aerobio y proliferacin entre 20 y 37C. Encontramos a Bacilos, cocos,
formas intermedias, Gram positivos y Gram negativos.

Estos recuentos no pueden considerarse como recuentos totales ya que solo son
susceptibles del contaje aquellos microorganismos capaces de crecer en las
condiciones establecidas. El recuento en placa es el mtodo ms utilizado para
la determinacin del nmero de clulas viables o unidades formadoras de
colonias (UFC) en un alimento. Se basa en el nmero de colonias que se
desarrollan en placas previamente inoculadas con una cantidad conocida de
alimento e incubadas en unas condiciones ambientales determinadas.
Para obtener resultados reproducibles y por lo tanto significativos, es de suma
importancia seguir fielmente el procedimiento y controlar cuidadosamente las
condiciones.
Esta tcnica puede aplicarse para la estimacin de microorganismos viables en
una amplia variedad de alimentos. El aspecto de las colonias sirve para
diferenciar distintas especies microbianas.
Se realiza a 35C en lcteos para evaluar la calidad microbiolgica o diferentes
alimentos. Esto con el fin de obtener cifras mximas en los recuentos. No olvidar

que el nmero de colonias finalmente contadas en las placas es el resultado del

crecimiento de las bacterias afectado por diversos factores.

Significado de su presencia

Indicador de presencia de grmenes patgenos

Indicador del valor comercial de un alimento
Indicador de las condiciones higinicas en que ha sido manejado un

producto
Como un indicador de la idoneidad de un ingrediente crudo que se va a

incorporar a un alimento
Para verificar la eficiencia de un proceso germicida o de preservacin

Un recuento elevado puede significar:

Excesiva contaminacin de la materia prima

Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin
La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son Mesfilos
La inmediata alteracin del producto
El recuento de Mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de

algunos alimentos.
Un recuento bajo de aerobios Mesfilos no implica o no asegura la
ausencia de patgenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento
elevado no significa presencia de flora patgena.
OBJETIVOS
Realizar adecuadamente la tcnica de cuenta en placa para diversos grupos
microbianos de importancia en alimentos.
Interpretar adecuadamente los resultados de la cuenta en placa y sus
implicaciones en la calidad del alimento.

MATERIAL
Matraz Erlenmeyer con 90 ml de solucin
Cajas de Petri con medio de cultivoagar.

salina 0.85% estril.

Balanza

Tubos de ensayo con tapn de rosca con 9

Muestra de leche o agua o cualquier

ml de solucin salina 0.85% estril.

otra muestra de alimento.
Pipetas de 1 ml estriles o pipetas
Varilla de vidrio.

automticas.
Pipeta de 10 ml estril

Frasco Schot

Vrtex.

Incubadora.
Parrilla de agitacin y calentamiento
Esptulas.
Campana de flujo laminar
Varilla acodada
Vaso de precipitado 500 ml
Probeta de 250 ml
Bao mara con termmetro, que mantenga

la temperatura a 45 1.0 C
Medio de cultivo: Agar para cuenta estndar
Solucin salina 0.85% estril. Adicionar 8.5

Etanol (CH3-CH2-OH).
Pizeta
Material necesario como

algodn,

gasas, papel alumnio..

g de cloruro de sodio (NaCl) en 1 L de agua

destilada.
PROCEDIMIENTO
Tcnica de inoculacin en superficie
1) En condiciones estriles (trabajar en campana de flujo laminar), adicionar 10
ml de la muestra a un matraz de 250 ml con 90 ml de solucin salina isotnica o
agua destilada estril (dilucin 10-1). Homogeneizar con agitacin vigorosa en
vrtex.
2) Tomar 1 ml y transferirlo a un tubo con 9 ml de solucin salina o agua
destilada estril (Dilucin 10-2). De ah se hacen diluciones sucesivas hasta
completar diluciones decimales hasta 10-4 o las adecuadas, asegurndose de
utilizar una punta o pipeta estril diferente en cada paso. Agitar de forma
constante con vrtex en cada paso.
3) Tomar 0.1 ml de la dilucin seleccionada y colocarla en el centro de la
superficie del medio de cultivo seleccionado para el crecimiento. Realizar esto por
triplicado y con tres diluciones prximas (ej. 10 -2, 10-3 y 10-4) para asegurar la
cuenta.

4) Extender la alcuota en la superficie de la placa con una varilla de vidrio

previamente esterilizada (inmersa en alcohol y pasndola por la flama delmechero
permitiendo su enfriamiento). Asegurar una distribucin homognea por toda la
superficie del medio.
5) Incubar las placas de forma invertida a 35C en ausencia de luz.
6) Despus de un periodo de incubacin (de 24 a 48horas, dependiendo del tipo
de microorganismo), contar el nmero de colonias y reportar como unidades
formadoras de colonias (UFC)/ ml de leche.

Tcnica de vaciado en placa

1). Transferir 1 ml, de la (dilucin 10-1) a cada una de tres cajas de petri estriles.
2). Inocular 1 ml de la suspensin del segundo tubo (dilucin 10 -2) a otras tres
cajas de petri estriles.
3). 1 ml a tres cajas
depetri (dilucin 10-3) en el caso de que la muestra est muy contaminada.
4). Verter de 15 a 20 ml de medio de cultivo cuenta estndar, fundido y enfriado a
45C.
5). Mezclar cuidadosamente el medio con seis movimientos de derecha a
izquierda, seis en el sentido de las manecillas del reloj, seis en sentido contrario y
seis de atrs hacia adelante, sobre una superficie lisa, teniendo cuidado de no
humedecer con el medio la tapa de la caja de Petri. Permitir que la mezcla en las
cajas Petri solidifique, dejndolas reposar sobre una superficie horizontal fra.
6). Incubar las placas de forma invertida a 35C. Ver esquema.
NOTAS
El medio de cultivo no debe fundirse ms de una vez, y debe mantenerse enbao de
agua regulado a 45 C, durante el tiempo suficiente para que alcanceesta temperatura, y
hasta su utilizacin. El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se
incorpora aldiluyente, hasta que finalmente se adiciona el medio de cultivo a las cajas, o
Debe exceder de 20 min.

Resultado de las cuenta de Mesfilos aerobios realizado a diferentes muestras de

alimento (UFC/ml).
MUESTRA
VACIADO EN
INOCULACIN EN
LIMITE MXIMO
PLACA

SUPERFICIE

PERMISIBLE

CUESTIONARIO
1. Por qu crees que es importante cuantificar el nmero de bacterias viables en
unamuestra?

2. D un ejemplo de un entorno industrial donde cuantificar bacterias viables

sera una herramienta til.

Bibliografa
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B.Serrano y O.Velzquez. 2009.
Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de
Qumica, UNAM. Mxico.
Cano, S. (2006). Mtodos de Anlisis Microbiolgicos, Normas Iso, etc. Consultora
Analiza Calidad.
Flores Martha Recuento de Mesfilos Aerobios.