.

VIRUS DE LA RABIA

HISTORIA DE LA RABIA

Su conocimiento se remonta 4 mil aos a. c.

Tres mil aos a.c. origen de palabra rabia donde
rhabbas es agredir.
En Amrica.
Per 1803, mueren 42 personas en Ica.
1804 G. Zinke.
1885, Louis Pasteur (Preparacin de la vacuna
antirrbica).
1903, Negri.
1905, Per, se descubre que el coyote transmite
el virus.
Per, 1968, brote de rabia bovina, logrndose
comprobar por primera vez la presencia de rabia
en murcilagos no hematfagos.

RABIA HUMANA

DESCRIPCIN DE LA ENFERMEDAD
EN EL HOMBRE
1. Fase prodrmica
Malestar general.
Insomnio.
Dolor de cabeza.
Fiebre.
Intranquilidad.
Sensacin de angustia.

Alteraciones sensoriales imprecisas.

2. Fase de excitacin

3. Fase paraltica

DESCRIPCIN DE LA ENFERMEDAD
EN EL GANADO BOVINO.
1.Fase Prodrmica

2. Fase de Excitacin

3. Fase Paraltica

La duracin de la enfermedad en el ganado

bovino es de 3 a 8 das.

DESCRIPCIN DE LA ENFERMEDAD
EN MURCILAGOS
1. Fase de excitacin:

Duracin 1 a 5 das.

2. Fase paraltica

3. En cueva

Muerte

aprox. 48 horas de iniciados los

sntomas
Periodo de incubacin.- 09 - 38 das

DESCRIPCIN DE LA ENFERMEDAD EN
OTROS ANIMALES DOMSTICOS.
La sintomatologa de la rabia en ovinos,
porcinos, caprinos y
equinos es similar a la
de los bovinos.

DESCRIPCIN DE LA
ENFERMEDAD EN ANIMALES
SILVESTRES

El perodo de incubacin es variable y

raramente menor de 10 das o mayor de seis
meses.
La duracin de la enfermedad es de 2 a 4
das en zorros y de 4 a 9 das en mofetas.

FUENTE DE INFECCIN Y CICLO

DE TRANSMISIN
1.
2.
3.

4.
5.

Transcutanea
Epidrmica
Area
Digestiva
Accidentes (persona a persona)
La principal fuente de infeccin es la saliva
de los animales enfermos con rabia, y La
transmisin se puede dar:

TRANSMISIN DE LA RABIA
RABIA
ANIMAL

1. RABIA
SILVESTRE

2. RABIA
URBANA

Carnvoros
Silvestres

Quirpteros
Vampiros
Murcilagos
Frugvoros
Murcilagos
Insectvoros

Zorros
Lobos
Coyotes

Carnvoros
Domsticos

Herbvoros
Domsticos
Bovinos
Ovinos
Cabras

Perros
Gatos

RABIA
HUMANA

Hombre
Hombre

PERIODO DE INCUBACIN Y
TRANSMISIBILIDAD

De 6 das a 6 meses en el ser humano y el

ganado bovino.
De 9 a 106 das en murcilagos
(condiciones experimentales)
El periodo en que el murcilago puede ser
infectante es de 10 a 15 das antes de
presentar los primeros sntomas.

SUSCEPTIBILIDAD
MUY
BAJA

Aves

MODERADA ALTA

Hombre
Perro
Oveja
Cabra
Caballo
Primates

Mofeta
Mapache
Gato
Murcilagos
Lince
Cobaya
Otros
roedores
Bovinos

MUY ALTA

Zorro
Coyote
Chacal
Lobo
Rata de
campo

VIRUS DE LA RABIA
Clasificacin:
El virus de la rabia es un virus ARN
monocatenario, de cadena sencilla y
polaridad negativa; envuelto por una
bicapa lipdica. El virus de la rabia
pertenece al Orden Mononegavirales,
Familia Rhabdoviridae, Gnero Lyssavirus,

genotipo serotipo 1.

Clasificacin de los Lyssavirus

Serotipo

Cepa Prototipo
(Abreviatura)

Distribucin
Geogrfica

Hospederos donde se
aisl

Cepas de la calle o
virus salvaje
(RAB)

Mayor parte del

mundo

Humanos, murcilagos,
bovinos

Lagos bat (LB)

Nigeria, Sudfrica.

Murcilagos frugvoros, gatos,

pero no humanos

Mokola (MOK)

Nigeria,
Centroafricana.

Humanos, gatos, perros,

musaraa, roedores

Duvenhage (DUV)

Sudfrica, Zimbabwe.

Humanos, murcilagos
insectvoros.

EBL subtipo 1 (EBL-1)

Europa

Humanos y murcilagos
insectvoros:

EBL subtipo 2 (EBL-2)

Europa

Humanos y murcilagos
insectvoros Myotissp.

Australia

Murcilagos frugvoros
Pteropus spp. (Zorras
voladoras) y murcilagos
Saccolaimus flaviventrus.

Genotipo

Lyssavirus de murc. de
Australia

TIPOS DE VIRUS RABICO

Virus calle

Virus silvestre.
De menor virulencia.
Ms patgeno.
Invade glndulas
salivales.
Patgeno para animales
de sangre caliente y el
ser humano.
Perodo de incubacin
variable.
Antignicamente poco
activo
Produce corpsculos de
Negri.

Virus fijo
Virus adaptado en
laboratorio.
De mayor virulencia
Menos patgeno.
No invade glndulas
salivales .
Puede ser patgeno
para el humano.
Perodo de incubacin
corto.
Antignicamente muy
activo.
Incapacidad de producir
corpsculos de Negri.

ESTRUCTURA DEL VIRUS DE LA RABIA

Estructura del virus de la rabia
Envoltura
Glicoproteina

Protena matriz

Protenas

Ribonucleocpside
Nucleoprotenas

Fosfoprotenas

Protena

Genoma

La informacin gentica del virus

contenida en 11,932 nucletidos.

esta

Representacin esquemtica del virus de la rabia.( Modificado de Matthias, 2010)

Se muestra la ribonucleoprotena interna (RNP), el ncleo esta formado por el genoma RNA de
cadena sencilla en sentido negativo encapsulado con la protena de la nucleocpside (N), la
polimerasa asociada al RNA del virin (L) y la fosfoprotena (P)., El ncleo de RNP en sociacin
con la protena matriz (M) se condensa en la tpica forma de partculas bala que es caracterstico
de rabdovirus, sobre la bicapa lipdica (o membrana) la glicoprotena de superficie trimrica en
forma de picos (G) se encuentra anclada de manera circundante a la estructura de RNP-M

CICLO DE REPLICACIN DEL

VIRUS DE LA RABIA
ARN
Adsorcin y adherencia

transcripcin

Penetracin y desnudamiento

Transcripcin
Ensamblaje

Traduccin

ARN Vrico de
Sentido (-)

traduccin

ARNm de
Sentido (+)

Protenas

transcripcin

polimerasas
ARN de
Sentido (+)
replicacin

Replicacin

ARN de Sentido (-)

de la progenie
Ensamblaje de nuevos virus

ARN

Componentes
estructurales

FISIOPATOGENIA

RESPUESTA INMUNOLOGICA
1.Respuesta inmunolgica inespecfica o innata

INTERFERONES

Clulas NK (Natural Kyller).

Leucocito

Clulas NK (Natural Kyller).

1. En rabia, la deteccin de anticuerpos protectores, se inicia hasta los

10 a 11 das de la presentacin de los sntomas. es decir, la formacin
de anticuerpos protectores requerira ms de siete das de los que
generalmente dura el perodo de estado de la enfermedad, por el que
la inmunidad adquirida en una infeccin con rabia no es til.

MAPA N 02: ZONAS DEL PER CON POBLACIN

DE MURCILAGOS HEMATFAGOS.
134-182 m.s.n.m (Loreto)
504 m.s.n.m
Amazonas

233-333 m.s.n.m (San Martn)

134 m.s.n.m (Ucayali)
1894 m.s.n.m (Hunuco)
450-2068 m.s.n.m (Pasco)

186-365 m.s.n.m
(M.D.D)

3-75 m.s.n.m (Lima)

632-751 m.s.n.m (Junn)

2772 m.s.n.m (Ayacucho)

Fuente: INS. 2003.

2661 m.s.n.m ( Apurimac)

2178 m.s.n.m
(Puno)

IMPORTANCIA DE LOS MURCILAGOS COMO

TRANSMISORES DE LA RABIA

Importantes para la Epizootia de la

rabia.
El
murcilago
vampiro
comn
responsable de apreciables prdidas
en la ganadera.
En Per de 1992 al 2002 se estima
una mortalidad anual de 150 cabezas
de ganado.

CONTROL DE LA RABIA TRANSMITIDA

POR MURCILAGOS HEMATFAGOS

DIAGNOSTICO DE LA RABIA EN EL
LABORATORIO
1.

2.
3.
4.

5.
6.

Tcnica de Inmunofluorescencia Directa.

Prueba biolgica de inoculacin en ratones.

Tcnica de Sellers.
ELISA para la Bsqueda de Anticuerpos
Neutralizantes antivirus rbico.
Reaccin en Cadena de la Polimerasa (RT-PCR).
Caracterizacin Antignica del virus rbico con
Anticuerpos
Monoclonales (AM).

MATERIALES

Material Biolgico: CEREBRO

Materiales de campo

Materiales de Laboratorio

Cloroformo.
Glicerina al 50% con agua
destilada.
Conjugado antirrbico 1/50
dil.
Solucin salina tamponada,
PBS pH 7.2-7.4.
Acetona Q.P.
Aceite de inmersin (Merk)
Agua destilada

Lminas porta-objetos
pavonadas en un extremo.
Placas petri.
Copplin.
Beaker de 1000 ml.
Tubos de ensayo 12x75.
Cmara hmeda.
Pipetas de transferencia o
gotero.
Mortero y piln (fros).
Jeringa (tuberculina)
Aguja 27x1/2.
Recipiente para descartar
agujas.

Algodn.
Equipo de diseccin.
Bisturs.
Frascos de plstico de boca
ancha y tapa rosca.
Lpiz marcador.
Coladores pequeos.
Tiras de papel secante.
Corrector lquido (Liquit
paper).

el propsito de conservar la muestra por varios das y transportarla al Laboratorio Referencial de la DIRESA APURIMAC se procedi a depositar e
el propsito de conservar la muestra por varios das y transportarla al Laboratorio Referencial de la DIRESA APURIMAC se procedi a deposita
el propsito de conservar la muestra por varios das y transportarla al Laboratorio Referencial de la DIRESA APURIMAC se procedi a depos
el propsito de conservar la muestra por varios das y transportarla al Laboratorio Referencial de la DIRESA APURIMAC se procedi a dep
el propsito de conservar la muestra por varios das y transportarla al Laboratorio Referencial de la DIRESA APURIMAC se procedi a d

Obtencin, conservacin y transporte

de las muestras.

Se sujeta con una pinza

de dientes el animal por
la parte posterior,
aperturando la piel, para
luego extender el corte
longitudinalmente hasta
la altura de las rbitas de
los ojos
tomndolo por las rbitas
y penetrando por la parte
posterior del crneo con
la punta de la tijera,
cortando alrededor del
crneo.

Con la tijera a medio abrir, se

levant el cerebro cortando la
base, teniendo la seguridad
de que se incluy todo el
cerebro.

El propsito de conservar la
muestra por varios das y
transportarla al Laboratorio
Referencial, se procede a
depositar el cerebro y cerebelo
del murcilago en un recipiente
de plstico resistente, hermtico
y de boca ancha, conteniendo
50% de glicerina y 50% de
solucin fisiolgica estril.

Fundamento de la Tcnica de
Inmunofluorescencia Directa
Si las improntas de cerebro y cerebelo contienen virus rbico, el resultado de la prueba ser
positivo.
Control positivo

Control negativo

El antgeno est fijado y permeabilizado. Se aade una gota de conjugado antirrbico a

ambos controles, luego se incuba los porta objetos a 37 C por 30 minutos. El conjugado
antirrbico se unir al control positivo, ya que ste tiene al antgeno rbico formndose
el complejo antgeno-anticuerpo, mientras que en el control negativo no se unirn los
anticuerpos a la impronta, por que no poseen al antgeno rbico.
Reaccin antgeno anticuerpo

No hay reaccin antgeno anticuerpo

La unin del conjugado antirrbico al antgeno rbico es detectada mediante la

excitacin de la luz ultravioleta, que se observa por la fluorescencia de color verde
limn emitida por el fluorocromo (FITC).
LMPARA DE MERCURIO
Luz ultravioleta

Conjugado + antgeno

Fluorescencia

Conjugado + antgeno

PROCEDIMIENTO PARA IFD

Como la muestra se
encuentra en glicerina al 50%
se procede a realizar un
lavado utilizando solucin
fisiolgica

Se coloca el cerebro y cerebelo

en una placa petri y se llev a
una mesa de trabajo.

Se realiza con la tijera dos

cortes, uno al nivel del cerebro
y otro al nivel del cerebelo con
un espesor de 3 a 4 mm.

 Se coloca en una lmina el cerebro y el

cerebelo, aparte de los controles positivos
y negativos que se usan.
Los cortes de cada una de las estructuras
se colocaron sobre una tira de papel
secante y ste sobre un porta-objetos
limpio, y se coloc con el papel formando
una cruz.
Se realizaron dos impresiones en cada
lmina, procurando que la impronta no sea
muy gruesa. Si la impronta sala muy
gruesa, se adelgaz presionando la
impronta sobre el papel filtro.

Se coloc las lminas secas en un

copplin con acetona fra (0 C) por
un mnimo de 30 minutos.

Una vez seca la

impronta, se procede a
delinear los bordes de
ambas improntas con
un corrector lquido
(liquit paper).

Se le agreg una gota del conjugado antirrbico

a ambas improntas.
Se llev a una estufa a 37 C por 30 minutos en
cmara hmeda.
Luego se procedi a realizar lavados con
solucin salina tamponada, PBS pH 7.2-7.4 y se
dej reposar por 10 minutos.

 Luego se procedi a realizar

lavados con solucin salina
tamponada, PBS pH 7.2-7.4 y se
dej reposar por 10 minutos
Se lav con agua destilada y se
dej reposar por 5 minutos

La observacin de las lminas al

microscopio de
Inmunofluorescencia se inici en
el extremo superior izquierdo y se
prosigui hacia la derecha y luego
hacia abajo, asegurando la
observacin ordenada de toda la
impronta.

Lamina control positivo de

IFD

Lamina control negativo de

IFD

Titulacin del conjugado antirrbico

Las condiciones a evaluar en la titulacin del

conjugado son:
Intensidad especfica: Es la intensidad del brillo
fluorescente.
Cantidad de inclusiones: Es la capacidad de
detectar la cantidad de inclusiones o pequeas
partculas de virus rbico fluorescente.
Coloracin de fondo: Es la capacidad de mantener
una imagen en la que exista un buen contraste.

Titulacin del conjugado antirrbico

0.2 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.2 ml

0.1 ml
0.9 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.2 ml

++

1/10

1/20

1/30

1/40

1/50

1/10

1/20

1/30

1/40

1/50

_
-

_
-

_-

_
-

0.2 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.2 ml

0.2 ml

-_

0.1 ml
0.9 ml

0.2 ml

0.1 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.2 ml

++

++

1/60

1/70

1/80

1/160

1/60

1/70

1/80

1/160

_
-

_
-

_
-

0.1 ml

0.1 ml

0.1 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.2 ml

0.2 ml

_
-

Mtodo para realizar la Prueba Biolgica

de Inoculacin en ratones (IR)

Inoculacin al Ratn, sencilla

y
rigurosa,
permite
la
replicacin del virus en clulas
altamente especificas.
Seleccin del ratn, albinos
suizos cepa BALB/C, no se
debe emplear ratn gris
salvaje.
Edad y peso, ratones de 21
das y 11- 14 gr. de peso.
Sexo, de preferencia de un
mismo sexo por jaula.
Estado general, animales en
buen estado.

Inoculacin en ratones
1er paso,
seleccionar 6
ratones de 3
semanas y entre
11 a 14 gr.

Procedimiento de la inoculacin

Mtodo para hallar el ndice de rabia

en murcilagos capturados: (IR)
El ndice de rabia para murcilagos
hematfagos se calcul por la siguiente
frmula:

Murcilagos hematfagos positivos

IR =

---------------------------------X 100
Murcilagos hematfagos capturados

DEPARTAMENTO DEL PERU

504
m.s.n.m
Amazonas

134-182 m.s.n.m
(Loreto)

233-333 m.s.n.m (San

Martn)
134 m.s.n.m (Ucayali)
1894 m.s.n.m (Hunuco)
450-2068 m.s.n.m
(Pasco)

186-365
m.s.n.m
(M.D.D)

3-75 m.s.n.m (Lima)

LEYENDA
D. rotundus:

632-751 m.s.n.m (Junn)

2178 m.s.n.m
(Puno)

2772 m.s.n.m (Ayacucho)

2661 m.s.n.m ( Apurimac)

RESULTADO DE LA TECNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA

DIRECTA (IFD)
Dr046 Positivo a IFD

Dr202 Positivo a IFD

Dr204 Positivo a IFD.