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BENEFICIARIO:
FECHA DE PREPARACiN:
Enero 2010
Enero 2010
/ND/CE
A. RESUMEN EJECUTIVO ............
6
B. EXPOSICIN DEL PROBLEMA ..
PERSEGUIDOS
12
OBJETIVO GENERAL
12
OBJETIVOS ESPECIFICOS
13
C. METODOLOGA,
......................................................................................
15
20
Y CULTIVO DE BACTERIAS
22
26
27
27
II Etapa: Biorremediacin
28
1.2.3. RESULTADOS
1.2.3.1.- Concentracin celular
1.2.3.2.- Temperatura
1.2.3.3.- Evolucin pH de los ensayos
1.2.3.4.- Oxgeno disuelto
1.2.3.5.- Potencial Redox
1.2.3.6.- Evolucin concentracin especies contaminantes
AMONIO
NITRITO
NITRATO
1.2.4. CONSTRASTACION
31
31
33
34
36
37
38
38
39
MEDICIONES LABORATORIO
EXTERNO
40
.41
-Pgina 2 de 130-
Enero 2010
.49
50
ACTIVIDAD
ACTIVIDAD
1.5. CARACTERIZACiN
DE SEDIMENTOS .....................................................
52
52
54
1.5.3. RESULTADOS
54
58
.... 59
60
60
61
62
63
64
65
65
Sistemas de refrigeracin
65
Sistema de esterilizacin
65
66
Sistema de aireacin
66
67
2.1.6. ADQUIS/CION
69
ACTIVIDAD
68
DE LA PLANTA PILOTO
72
75
PROTOTIPO
2.2.3.1. PRODUCCiN
77
DE UNIDADES BIORREMEDIADORAS
PARA SEDIMENTOS
LACUSTRES
.............................................................................................................................................................................
2.2.3.2. PRODUCCiN
DE UNIDADES BIORREMEDIADORAS
72
PARA SEDIMENTOS
DE PESCA
77
MARINOS ..78
79
80
80
80
81
-Pgina 3 de 130-
Enero 2010
82
Muestreo de sedimento
84
2.3.1.2. Resultados
87
87
89
9O
91
91
93
NITRATO, N03
94
........................................................................................................................
SULFUROS, S04
96
2.3.1.3. Conclusiones
97
99
99
rea de estudio
100
Diseo Muestreal
100
Muestreo de sedimento
y agua
103
2.3.2.2. Resultados
Caracterizacin
107
del sedimento
107
108
Caracterizacin
112
Macrofauna bentnica
113
2.3.2.3. Conclusiones
114
115
115
116
117
DESARROLLO
DEL
118
119
..............................................................
122
122
124
-Pgina 4 de 130-
125
Enero 2010
E. BIBLIOGRAFA ...................................................................................................................
127
F. ANEXOS
129
129
129
129
130
-Pgina 5 de 130-
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A. RESUMEN EJECUTIVO
En el marco del proyecto Innova Chile W 206-5467 de Titulo: Desarrollo de un producto Biorremediador
para ser aplicado en los Fondos Acuicolas en las etapas productivas del salmn, la Corporacin
Farmacutica Recalcine, empresa dedicada a la produccin de productos farmacuticos humanos y
veterinarios, mediante el presente informe tiene como objetivo la presentacin del proyecto de Innovacin
empresarial llevado a cabo durante 2 aos y 3 meses (Septiembre 2007-Enero 2010).
Recalcine, ha sido pionero entre los laboratorios farmacuticos nacionales, en la creacin de un
departamento de 1&0 propio y en la introduccin de nuevas formas farmacuticas, cuya formulacin
garantiza una mejor farmacocintica y una mejor seguridad en el cumplimiento del tratamiento del paciente.
Sus especialidades mdicas las ha agrupado en divisiones que constituyen la Corporacin farmacutica
Recalcine. Asimismo, a travs de su linea veterinaria FAV, la Corporacin entrega productos veterinarios
desde 1.994. En 1.997 da comienzo a la investigacin y desarrollo de productos biolgicos, que le permiti
entregar la primera vacuna contra la pisclrickettsia salmones, una de las principales enfermedades que
causa prdidas en esta industria y la vacuna contra el virus ISA en 2009.
Recalcine inici sus exportaciones en el ao 1.994 desarrollando mercado en Bolivia, Colombia, Ecuador,
Paraguay, Per, Venezuela y Centro Amrica. Posee una dotacin de 1.013 trabajadores.
Actualmente, desarrolla en U.S.A. proyectos en el campo de la biotecnologia
asociada con prestigiosas compaas norteamericanas.
y de la ingeniera gentica,
El objetivo general consisti en desarrollar un nuevo producto biorremediador que fuera capaz de reducir la
materia orgnica de los fondos acucolas (mares y lagos), dejndola en condiciones adecuadas y que
cumplan con la normativa vigente. Los objetivos especlficos se orientaron al diseno del producto, diseo del
proceso de fabricacin del producto, produccin de prototipos, evaluacin de una produccin piloto, difusin,
capacitacin y el sondeo de mercado, todo junto la proteccin intelectual del producto.
El proceso consisti en el aislamiento de bacterias nitrificantes y denitrificantes de los sedimentos bajo las
balsas-jaulas donde se desarrolla la produccin aculcola, multiplicacin de dichas bacterias en condiciones
controladas de laboratorio, su incorporacin a un excipiente y su aplicacin a los fondos acu!colas bajo
condiciones controladas. Se procedi a observar su evolucin en terreno y luego a medir los resultados de
la aplicacin.
El resultado final del proyecto fue la obtencin de un nuevo producto biorremediador especfico para los
fondos aculcolas de lago y mar, cuya principal caracterstica es que est formulado a base de bacterias
autctonas de los propios fondos donde se desarrolla el cultivo del salmn en Chile.
Los resultados parciales son los que a continuacin se mencionan y que se explican detalladamente
punto C del presente informe:
~
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en el
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Produccin prototipo
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Patentamiento y certificaciones
Enero 2010
Tras el anlisis de parmetros ambientales monitoreados bajo las balsas-jaulas posterior a la siembra de
unidades biorremediadoras, el bentos experiment cambios atribuidos al efecto biorremediador. Variables
utilizadas por la autoridad para Gestin Ambiental, y que en la actualidad son exigidas por las normas de
acuicultura nacional, tales como oxigeno disuelto, potencial redox, materia orgnica y Macrofauna
bentnica, experimentaron una respuesta positiva y beneficiosa desde la perspectiva ecolgica, lo cual
permite la recuperacin del sedimento bajo las balsas-jaula de un centro de cultivo aculcola.
El nuevo producto desarrollado tendr gran impacto econmico y medioambiental
para la industria
salmonera, ya que aporta una solucin al problema ambiental ligado al cultivo del salmn, otorgando la
posibilidad de lograr una armonla entre el crecimiento econmico de la industria y el mantenimiento del
equilibrio del medio ambiente.
-Pgina 7 de 130
B. EXPOSICiN
Enero 2010
DEL PROBLEMA
B.1. PROBLEMA
DEL PROYECTO
La salmonicultura es una de las actividades productivas ms relevantes en Chile. Las prcticas actuales
de cultivo pueden impactar el medio ambiente a travs de varias formas. Una de ellas es la alimentacin
de los peces, la que interviene, tanto en la columna de agua como en el fondo acutico, a travs del
alimento no consumido que es altamente proteico, y a travs de los desechos eliminados por los peces. Lo
anterior genera un aumento en la cantidad de nitrgeno y fsforo del sistema, lo que disminuye el oxigeno
disponible, genera eutrofizacin, estimula la aparicin de algunos organismos y la ausencia de otros y
adems, altera gravemente el medio por la acumulacin de materia orgnica compuesta por los restos de
alimento y las mismas materias fecales de los organismos en cultivo (ver Figura N 1).
'''''.1110
An~DIOl:co,
Pa:gcno,
E.c~
NitrOgono
Pillgono.
Antlbltlcos
Alimcnto
NoCOMUmlo
.---.------Figura N 1: representacin
Las jaulas de salmn llegan a unos 15 m de profundidad (12-20 m). Existe un aumento drstico en las
tasas de sedimentacin a partir de la salmonicultura en jaulas luego de alimentar a los peces. Los restos
de alimentos y las fecas se depositan relativamente rpido y afectan el lugar inmediato a la zona, pero las
partculas formadas por la produccin primaria se depositan ms lejos del lugar ya que entre la liberacin
del nutriente inorgnico y la captacin y aumento de la biomasa fitoplanctnica transcurren entre 3 y 7
das. Una gran cantidad de sedimentacin de produccin primaria es un indicador que el ecosistema
planctnico marino ya no es capaz de asimilar los aportes mejorados de nutrientes del cultivo de salmn
en jaulas.
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Enero 2010
Se produce as una serie de efectos ambientales en la columna de agua. Esto se debe, principalmente, a
que un 70%- 80% del nitrgeno liberado por los peces queda disuelto en ella, adems del fsforo que se
deposita en los fondos. La presencia de estos nutrientes genera eutrofizacin, lo que quiere decir que la
productividad primaria aumenta como consecuencia de una mayor disponibilidad de alimento para otros
organismos como invertebrados y peces, pero tambin con la posibilidad de disminuciones estacionales
de los niveles de oxgeno y de la biodiversidad propia del lugar (Beveridge, 1996).
Los principales tres factores que determinan el impacto de la salmonicultura
columna de agua, en la calidad del agua y en los ecosistemas pelgicos son:
en los nutrientes
de la
1. Tasa de carga de nutrientes inorgnicos, especialmente el nitrgeno en el caso de los sistemas marinos
y el fsforo en sistemas de agua dulce, la hidrodinmica y la profundidad de los lugares donde se instalan
las jaulas.
2. Morfometrra y topografa (grado de "exposicin") de las bahas y de zonas costeras.
3. Densidad del stock de peces.
A su vez, la acumulacin de materia orgnica depende de varios factores, entre otros de la especie en
cultivo, la calidad del alimento, el tipo de manejo, las corrientes y la profundidad (hidrodinamia). Las heces
y restos de alimento tienen mayores contenidos de carbono (C), nitrgeno (N) y fsforo (P) que los
sedimentos naturales, ello produce que los fondos, bajo los sistemas de cultivo, puedan tener muy alto
contenido de materia orgnica y nutrientes. La materia orgnica acumulada estimula la produccin
bacteriana, cambiando la composicin qulmica, la estructura y funciones de los sedimentos. Ello puede
explicar la disminucin significativa de la biodiversidad en las zonas utilizadas por la acuicultura. La
abundancia de fitoplancton disminuye, as como el nmero de especies en sitios de cultivo pese a existir
ms nutrientes.
La importancia y distribucin del nitrgeno en el mar es muy similar a la del fsforo y, dentro de las
diferentes concentraciones en que aparecen en las aguas marinas, existe un gran paralelismo entre dichas
concentraciones y sus variaciones. El nitrgeno aparece en el mar, bsicamente, en forma de nitratos,
nitritos y amoniaco (N03-N02-NH3), aunque suelen aparecer en mayor cantidad los nitratos.
En cultivos de salmones, cuando se registra un aumento de las concentraciones
de amonio y
disminuciones de las concentraciones de oxigeno, se pueden alterar los ciclos normales de nutrientes,
afectando la abundancia del fitoplancton, zooplancton y peces, fenmenos que han sido detectados en
diferentes cuerpos de agua utilizados por prcticas de acuicultura.
De aqu la importancia en el manejo de los ecosistemas y los nutrientes presentes en los cuerpos de agua,
ya que con la implementacin de buenas prcticas, adicionado a la aplicacin de tcnicas nuevas
utilizando bioproductos que no alteren el ecosistema, se podr alcanzar un desarrollo sustentable de
industria acufcola en Chile.
As nace el proyecto de BIORREMEDIACIN
DE FONDOS,
basado en el fundamento
de
nitrificacin/denitrificacin,
reacciones de oxido-reduccin biolgicas necesarias para descomponer los
compuestos contaminantes, mediante la intervencin de bacterias autctonas del ecosistema acutico. La
tcnica considera el suministro de microorganismos remediadores nativos para ser utilizados en procesos
de remediacin in situ. En este caso, tiene por objetivo reactivar el proceso de biodegradacin natural de
la materia orgnica acumulada, transformndola en elementos no contaminantes e inocuos para el medio
ambiente.
-Pgina 9 de 130-
Enero 2010
Para lograr el objetivo descrito se elabor6 un producto biorremediador compuesto por bacterias liofilizadas
nitrificantes y denitrificantes,
denominado UNIDAD BIORREMEDIADORA
que est diseado para
regenerar los equilibrios disminuyendo la materia orgnica de los fondos acuicolas (lagos y mar), a niveles
aceptados por la normativa vigente.
Producto de la contaminaci6n por compuestos nitrogenados, existe una serie de alteraciones que se
generan en paralelo: fisicas (apariencia, olor), quimicas (variaci6n de niveles de compuesto nitrogenados
inorgnicos), fisicoquimicas (variaciones del pH, potencial redox), y biol6gicas (alteraci6n de las cadenas
tr6ficas, aparici6n de microorganismos patgenos, algas, parsitos etc.).
El fundamento biol6gico de la tecnologia desarrollada es el llamado CICLO DEL NITRGENO,
la eliminaci6n del N se lleva a cabo por el proceso de nitrificaci6n-denitrificaci6n.
en el que
oxidado a nitrato.
Nitrobacter
Nitrosomonas
NH4----------------~
N02
Amonio
--------------~
nitrito
N03
nitrato
Nitrato
--.
N02
nitrito
ocurre as:
__
--.
NO
xido nftrico
N20
xido nitroso
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......N2 gas
nitrgeno
Enero 2010
RJACllC BfClRMUfllllCA
(tormentas)
L,LUVIA
ACIDA
FIJACUl
IIDISTRIAI.
(amorrieco. 8b0n08)
I Productares
fllEllTO
Consumidores
RESTOS HANICOS
ABSIRUl
EXCRECION
NR"RIFlCACIN
CICLO
DEL
NITRGENO
El N2 atmosfrico, gas que forma el 78% del aire, no puede ser usado en forma normal por los seres vivos,
sino que tiene que ser transformado en compuestos absorbibles. El N2 del aire slo puede ser usado
directamente a travs de bacterias que viven en el suelo.
Los compuestos nitrogenados que se acumulan en mares y ros procedentes de la descomposicin, as
como de los restos de alimentos y desechos de los peces de cultivo, slo pueden ser descompuestos con
la intervencin de bacterias hasta N2 gas, que retornar a la atmsfera para reiniciar el ciclo o lo usarn
las propias bacterias para su metabolismo.
-Pgina 11 de 130-
B.2. OBJETIVOS
Y LOS RESULTADOS
Enero 2010
PERSEGUIDOS
OBJETIVO GENERAL
El objetivo general del proyecto consisti en desarrollar un nuevo producto biorremediador, para reducir
la materia orgnica de los fondos acuicolas (lagos y mar), dejndola a niveles aceptados por las
normativas vigentes, a partir de microorganismos autctonos del ecosistema acutico donde se
desarrolla la produccin de salmn.
Para ello se desarroll un producto consistente en una tableta a base de microorganismos liofilizados
que se deposita en el medio acuicola y empieza a reaccionar bacteriolgicamente actuando sobre los
residuos no deseados y transformndolos en elementos no contaminantes. El mecanismo de accin
bsico est basado en la actividad metablica de los microorganismos, que se adaptan al medio y
comienzan el restablecimiento de microorganismos nativos o autctonos del medio y descomponen la
materia orgnica.
As mismo, se desarrollaron los procesos de fabricacin necesarios para escalar una produccin
prototipo y los protocolos para validar la efectividad del nuevo producto como biorremediador.
-Pgina 12 de 130-
Enero 2010
OBJETIVOS ESPECFICOS
Para conseguir el objetivo general se plantearon los siguientes
siguientes resultados esperados de cada uno de ellos:
OBJETIVO
objetivos
especficos
con los
RESULTADO
PERSEGUIDO
DESCRIPCiN
Obtencin de consorcios
nitrificantes
y
las bacterias
Aislamiento
de
aislados activos de
medio
ambiente
natural
desde
denitrificantes
nitrificantes y
(fondos acucolas). Se obtendrn consorcios DN y N
denitrificantes para lagos y
de fondos marinos y lacustres
mar.
Diseo de las
caractersticas
del
nuevo producto
biorremediador
Determinar la eficiencia de
degradacin de materia
orgnica de los
sedimentos
Caracterizacin
del
medio ambiente
donde se va a
aplicar el producto
Diseo e ingeniera
del proceso para la
adquisicin de
equipos y
produccin
prototipo
Puesta en marcha
de la linea y
Produccin
prototipo
Evaluacin
produccin
Disponer de las
Ingeniera bsica, planos y establecimiento de los capacidades instaladas de
requerimientos
de servicio e ingenierra para el los servicios como agua,
montaje.
gas, energa elctrica y
otros
Determinacin de las etapas de produccin
producto y de los equipos para su adquisicin
funcionamiento
la
Poner
en
satisfaciendo las normas vigentes.
planta
del
piloto,
de la
Pruebas en condiciones reales en centros de cultivo
piloto en de salmn: agua dulce y mar.
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condiciones reales
in-situ
Enero 2010
Establecimiento de la vida
til de los componentes
del producto para su uso y
almacenamiento correcto
Certificacin del
nuevo producto
En fase de obtencin de la
Autorizacin para su uso
masivo (comercial) por
para de la Subsecretara
de Pesca.
Plan de negocio
Proteccin
intelectual del nuevo
producto
-Pgina 14 de 130-
Plan diseado
Presentacin de patente
Enero 2010
A travs del proyecto que se describe en el presente informe se ha desarrollado un nuevo producto que es
un elemento slido conformado por microorganismos liofilizados nitrificantes (N) y denitrificantes (DN)
capaces de descomponer los compuestos nitrogenados as como de modificar beneficiosamente otros
parmetros ambientales.
Los requerimientos
Debe poseer una forma tal que evite su ingestin por parte de los peces u otra biota presente
en la zona de aplicacin de la forma farmacutica.
Debe ser capaz de viajar al fondo marino o lacustre sin romperse o desintegrarse
trayecto ni en el momento de contacto con el fondo.
-Pgina 15 de 130-
durante su
manipulacin
APLICACiN
DEL
Enero 2010
SUPERFICIE lAGO/MAR
TRATAMIENTO
BAlSAJAUlACOH
PECESENCUlnvO
MATERIA
Fig. N 3: representacin
DESPUS DEL
SUPERFIOE
TRATAMIENTO
lAGO/MAR
MATERIA
ORGANICA
/
Fig. ND 4: representacin
Obsrvese
ACUMUlADA
En base a los requerimientos planteados se defini que la fonna fannacutica ms adecuada para cumplir
con los objetivos esperados era un elemento comprimido del tipo tableta que deberla ser capaz de
transportar al fondo el principio activo que se encargar de realizar la biorremediacin requerida, ya que as
se pueden lograr densidades adecuadas y tiempos esperados de desintegracin.
-Pgina 16 de 130-
Enero 2010
Otra para agua salada (mar), que contiene como principio activo consorcios
nitrificantes y denitrificantes aisladas de los sedimentos marinos.
y denitrificantes
de bacterias
UNIDAD BIORREMEDIADORA
cuyas
12 toneladas
-Pagina
17 de 130
y denitrificantes);
50%
C. METODOLOGA,
PLAN DE TRABAJO
Enero 2010
Y RESULTADOS
OBTENIDOS
A raiz del transcurrir del proyecto, se hicieron algunos ajustes de la carta Gantt y que representan la realidad
del proyecto. La Carta Gantt original fue levemente modificada por necesidad durante el desarrollo del mismo,
puesto que actividades que inicialmente se suponfan que iban a llevar ms tiempo, llevaron menos tiempo y
viceversa. Asf como otras que se han ido haciendo simultneamente para poder lograr los hitos de cada
actividad.
Previamente, se solicit a Corfo la Modificacin de la Carta Gantt para ajustarla a la realidad de cada actividad
programada. Dichos cambios fueron aprobados por Corfo mediante la Resolucin N 1160 con fecha
17/11/2008.
Como anexo nO 1 se encuentra la Carta Gantt del proyecto completo, mientras que a continuacin
representan las Cartas Gantt por etapas 1, 2 Y 3 Y las actividades realizadas durante las mismas.
se
Todas las actividades del proyecto se han ceido al mximo posible a la Carta Gantt. No obstante, se puede
observar alguna desviacin en cuanto a la duracin de las actividades as como de las fechas de inicio/fin de
las mismas respecto de la Carta Gantt, puesto que se adaptaron al dia a dla del proyecto.
C.1. ETAPA 1, DISEO DEL PRODUCTO
A continuacin la Carta Gantt correspondiente a esta primera etapa. Las actividades contempladas
esta primera fase, correspondieron casi en su totalidad a trabajo de laboratorio.
oct-07 nov-07
dic-07
tES1 tES2
tES3
tES4
tES5 tES6
Etapa 1.1hctm:ia11e1llO
Disear 1-----+---+---+el
producto IcoOanillldos
-Pgina 18 de 130-
tES7
tES8
jul-08
en
nov-08
Enero 2010
ACTIVIDAD
1.1: AISLAMIENTO,
IDENTIFICACiN
Y CULTIVO
DENITRIFICANTES DESDE SEDIMENTOS MARINOS Y LACUSTRES
Fecha de Ejecucin:
DE BACTERIAS
NITRIFICANTES
DE CONSORCIOS
Objetivo:
Obtener muestras representativas
Descripcin
y desarrollo
de salmn.
del muestreo:
El muestreo se realiz mediante la extraccin de sedimento con draga. Las muestras se colocaron en
envases preparados adecuadamente para ello y se dispusieron al destino
final (laboratorio) mediante
vla area, con el fin de hacerlo de la forma ms rpida y
asegurar que las muestras sufrieran el
menor cambio en su traslado.
Dicho proceso se hizo asegurando en todo momento la trazabilidad de las muestras desde
muestreo, hasta la recepcin de las mismas en laboratorio.
el minuto del
Los centros de cultivo de los que se obtuvieron las muestras (tabla N' 6) de sedimento pertenecen a la
empresa Marine Harvest Chile S.A.
Tabla N 6: Caracterlsticas
MUESTRA
PROFUNDIDAD
TEMPERATURA
(OC)
pH
OXIGENO
DISUELTO
(mg OiL)
LLC
32
12
7,8-8,0
LLP
32
12
7,8-
LMC
15
11,9
7,23
33
11,5
7,23
LMP
-Pgina 19 de 130-
8,0
1.1.2.
AISLAMIENTO,
DENITRIFICA N TES
IDENTIFICACiN
Enero 2010
CULTIVO
DE
BACTERIAS
NITRIFICA N TES
Objetivo:
Obtener y aislar consorcios bacterianos aerbicos
marinos con actividad nitrificante V denitrificante.
y cepas bacterianas
aerbicas
desde sedimentos
Descripcin:
- Obtencin de muestras: Las muestras extra idas (actividad 1.1) fueron recepcionadas y analizadas
inmediatamente. Para pruebas posteriores las muestras fueron conservadas a 5C.
- Preparacin de medios de cultivo: los medios de cultivo que se usaron en el aislamiento de consorcios
bacterianos con potencial nitrificante v denitrificante fueron:
KN03
Fuente de Carbono
(NH4)2S04
K2HP04 x 3H20
KH2P04
Solucin B: (gil)
1
MgS04 x 7 H20
12,
O9
Solucin C: (gil)
CaCI2 x2 H20
FeS04x7
H20
MnS04xH20
CuS04x 5 H20
NaMo04 x 2 H20
HCI (0,1 N solucin)
Winogradsky's
0,29
0,1 g
0,05 g
0,01 9
0,01 9
100 mi
-Pgina 20 de 130-
5,0
1,0
1,0
1.0
0,5
0,4
9
9
9
9
9
9
Enero 2010
- Cultivo de consorcios:
El aislamiento de consorcios bacterianos con posible actividad nitrificante se llev a cabo en
matraces de 100 mi de capacidad con 50 mi de medio de cultivo. Se agreg a cada matraz un
inculo de la muestra original de 1 g de sedimento en condiciones aspticas. Cada muestra se
incub a las mismas condiciones de temperatura y salinidad en las que se tomaron las muestras
originales.
Para la mantencin de los consorcios bacterianos se ajust pH peridicamente, y se agreg medio
de cultivo nuevo para asegurar el ingreso de fuentes de enerqa.
- Determinacin de actividad Nitrificante:
Se realiz mediante la utilizacin de indicadores de viraje de pH, en este caso se utiliz el
indicador rojo de metilo, ya que este vira de rojo a amarillo cuando el medio se hace cido
(indicando presencia de N02 y N03).
- Determinacin de la actividad Denitrificante:
Se realiz mediante la utilizacin de indicadores de viraje de pH, en este caso se utiliz el
indicador azul de bromotimol, ya que este vira de amarillo a azul cuando el pH del medio se hace
bsico( indicando la presencia de NH3).
- Liofilizacin de cepas con actividad:
Se us crioprotector (skim milk), se esteriliz mediante autoclave a 121C por 15 min; ste fue
dispensado en volmenes de 3 mi en viales de capacidad 5 mI.
Desde placas de cultivo crecidas con las cepas de inters, se colect en condiciones estriles bajo
campana de flujo laminar, con un asa de cultivo las colonias de las cepas de inters, las cuales
fueron disgregadas en el crioprotector.
Los viales conteniendo las cepas con actividad fueron congelados a -20 o C durante 24 horas, y
posteriormente sometidos a proceso de liofilizacin.
-Pgina 21 de 130-
1.1.3. RESULTADOS
DEL AISLAMIENTO
Enero 2010
Y CULTIVO DE BACTERIAS
INCUBACION
1'" 5
TaAMBIENTE
MEDIO DE
CULTIVO
MUESTRA
LAGO 1
(-)
LAGO 2
M.MAR 1
(-)
M.MAR2
LAGO 1
DN
DN
N
No
No
No
No
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
No
No
No
No
No
(+0-)
LAGO 2
M.MAR 1
No
No
No
No
No
(-)
(+)
(+)
M.MAR2
LAGO 1
LAGO 2
No
No
No
M.MAR 1
M.MAR2
(-)
No
(-)
(-)
No
No
(+0-)
(-)
(+)
(+)
No
No
(-)
(-)
No
No
(-)
(-)
FECHA
CONTROL
SEMANA 1
SEMANA 2
SEMANA 3
Inicialmente los cultivos fueron incubados a temperatura ambiente (18 C) Y luego almacenados
frta a 5 e, donde se observ actividad.
en cmara
-Pgina 22 de 130-
antes
Tabla
Enero 2010
N' 8: Test de actividad para cepas y consorcios aislados desde muestras Lago y
Mar. Se realiz test ON para cepas denitrificantes y test N para cepas
nitrificantes.
MUESTRA ORIGEN
ROTULO
TEST
ACTIVIDAD
ON LAGO 1
ONl1-OO1
(-)
ON LAGO 1
ONl1-OO2
(+)
ON LAGO 1
ONl1-OO3
(-)
NOVIAL
ON LAGO 1
ONl1-004
(-)
ON LAGO 1
ONl1-OO5
(-)
ON LAGO 2
ONL2-OO1
(+)
ON LAGO 2
ONL2-OO2
(+)
ON MAR 1
ON M 1-001
(-)
ON MAR 1
ON M 1-002
(-)
ON MAR 1
ON M 1-003
(-)
10
ON MAR 2
ONM2-OO1
(-)
11
ON MAR 2
ONM2-OO2
(+)
12
ON MAR 2
DNM2-OO3
(-)
13
N LAGO 1
Nl1-OO1
(+)
14
N LAGO 2
NL2-OO1
(+)
15
NMAR2
NM2-OO1
(+)
16
ON LAGO 1
(-ON LAGO 1
(+)
17
ON LAGO 2
(-ON LAGO 2
(+)
18
ON MAR 1
(-ON MAR 1
(+)
19
DN MAR2
(-ON MAR 2
(+)
20
N LAGO 1
(-N LAGO 1
(+)
21
N LAGO 2
(-N LAGO 2
(+)
22
NMAR2
(-N MAR 2
(+)
23
-Pgina 23 de 130-
-Pgina 24 de 130-
Enero 2010
Enero 2010
-Pgina 25 de 130-
ACTIVIDAD
1.
DENI TRIFI CANTE
2:
EVALUACIN
DE
LA
Enero 2010
ACTIVIDAD
BACTERIANA
NITRIFICANTE
Reactivos:
Instrumentacin
y Equipos:
Termmetro digital
Bafio termorregulado a 12 C
Autoclave
Soplador 50 Umin
Microscopio ptico
pH metro
Medidor de 02 disuelto
MedidorORP
Conductivlmetro
Medidor Salinidad
Kit medicin Amonio, nitrito, nitrato
-Pgina 26 de 130-
Enero 2010
Material Biolgico:
Las muestras de sedimentos lacustres y marinos, tanto controles (de zonas limpias) como problemas (de
zonas acuicolas) que fueron tomadas de los centros de cultivo de la empresa Marine Harvest.
1.2.2. PROCEDIMIENTO
Las pruebas han sido ejecutadas en dos etapas, las que se describen a continuacin:
Para el caso de las cepas Nitrificantes (N) se trabaja en condiciones aerobias, en cambio, en el caso de
las cepas Denitrificantes (DN), se opera en condiciones anxicas, debido a sus caractersticas
anaerobias.
El plan de adaptacin, aplicable en todos los casos, se presenta a continuacin en la tabla N 17.
----_.-
ora
Lodo (%v/v)
In6culo (%vlv)
60
40
70
30
13
80
20
N1LL:
N2LM:
DN1LL:
DN2LM:
Cepa
Cepa
Cepa
Cepa
En esta etapa se observa que la adaptacin de las cepas a los lodos fue bastante fcil. Lo cual nos lleva
a pensar que esta fase puede eliminarse y que es posible agregar microorganismos cultivados en
laboratorio directamente al sistema a remediar; ya sea un batch o lodo contaminado en el proceso de
remediacin in situ.
-Pgina
27 de 130-
Enero 2010
11 Etapa: Biorremediaein
Para la etapa de biorremediacin propiamente tal, se trabaj en biorreactores
mantuvieron a una temperatura constante de 12C.
La blorremediacin se realiza en tres etapas consecutivas:
de 2 L, los cuales se
ON
10
11 12 13
14 15 16
ON
17
ra
19
20
post
ciclos
I
d) La siguiente etapa, escapa a la etapa de biorremediaei6n
propiamente tal. Se realiz un seguimiento
posterior del ensayo durante 3 das, de modo de tener una visin ms acabada de la remediacin
completa, puesto que en un pre-ensayo realizado con anterioridad a esta prueba,
se encontr un
desfase en los ciclos de reduccin de los contaminantes, en relacin a lo esperado, pensndose en la
necesidad de esperar un periodo superior a un dla para observar los efectos del ciclo completo .
-Pgina 28 de 130
Enero 2010
Diseo Pruebas
El sistema consiste en cuatro biorreactores, con un sistema de recirculacin de agua por donde circula
agua a temperatura 12C, temperatura ptima para el crecimiento de las clulas. Para las pruebas se
homogeniz el lodo y se prepar con una densidad 1.08gr/ml, de modo de lograr condiciones
estandarizadas y de que en cada prueba particular se utilice la misma preparacin base tanto en el
control como en la prueba de biorremediacin. Los microorganismos del sistema, son fotosensibles, por
lo cual se debe cubrir cada uno de los reactores, para protegerlos de la luz.
A continuacin se puede observar fotograffas de cada una de las pruebas y el sistema de reaccin de
cada una de las etapas.
a) Prueba control, la cual solo contiene sedimento lacustre o Marino contaminado el que a su vez aporta
los microorganismos
propios de ste.
b) Prueba W1 : Esta prueba contiene 2 L de sedimento lacustre, preparado con una densidad 1.08, el
cual es inoculado segn la frecuencia descrita en la tabla N 18, con clulas adaptadas, de modo de
llegar a una concentracin de 1.6 x 10 6 clulas/mL.
Figura
-Pgina 29 de 130-
FIgura
Enero 2010
Figura
-Pglna 30 de 130-
Enero 2010
1.2.3. RESULTADOS
microorganismos
lodo
inoculados en relacin
1
inoculacin
a microorganismos
% total
del Iodo.
% total
inoculaciones
Ensayo
Lacustre
5,OOE+08
1,60E+06
0,320/.
1.44E+07
2,88%
Ensayo
Marino
1,70E+07
1,60E+06
9,41%
1.44E+07
84,71%
-Pgina 31 de 130-
1----9.00E+08 .
8.00E+08
7.00E+08
_ 6.00E+08
E 5.00E+08
4.00E+08
3.00E+08
2.00E+08
1.00E+08
O.OOE+OO
Enero 2010
10
12
cellml
Control
.~lmlEl'ISay
14
16
18
20
22
tlempo(."
En los ensayos Marinos (ver grfica N 26), observamos la misma tendencia que la observada en el
ensayo lacustre donde solo los dlas 1, 3 Y 10 se marcan las excepciones en que los conteos en el
control son superiores a los conteos en el biorreactor prueba. Tenemos asi el dia 14 una diferencia
de 1,1 *108 bacterias.
Observamos en los ltimos das de anlisis de los resultados, que se observa una predominancia en
el nmero celular en las pruebas de remediacin (inoculadas). Si observamos la tendencia los dias
15, 16 Y 17 se observa siempre un mayor conteo para el caso de las pruebas de remediacin.
-~--
T-
024
ro
...
cellml
ffl
[ .cellmlE~o
ffl
20
Control
22
tiempo (di .,
-Pgina
32 de 130-
Enero 2010
1.2.3.2.- Temperatura
La temperatura en las pruebas, fue controlada con el sistema de chaquetas de agua recirculada.
Esto permiti mantener la temperatura alrededor de la temperatura operacional ptima de 12C.
T" ensayo remadlacln lago
15
14
12
10
8
...
4
2
O
10
20
15
25
&
10
15
&
20
25
-Pgina 33 de 130
Enero 2010
Tabla
pH
MUESTRA
7.2
6.66
7.52
7.43
6.2
-..
.
-.-.
.
-
10
.
20
15
25
7.6
7.4
7.2
7
6.8
6.6
6.4
6.2
6
.~
8
7.8
lO
10
...
--]
pH Control
~ pHE",,!y'o
15
-Pgina 34 de 130-
20
25
Enero 2010
H+
+
+ 2e-
+ O2
H20~
Y:z O2 + 2 H+
N02+ 2e ~
oao ~
+ 5H+
H20
+ 4 e- + biomasa
H20
N03- + biomasa
N02- + 0,5 O2 ~
2 N03- +
NH20H
-Pgina 35 de 130-
Enero 2010
pruebas
0.4~-------------------------------------
t--"-'------------------------------------
~.3
ti s.a.2
Lago
0.5
e
-e
remedlaci6n
0.1
. ..,
~-----------------------
:!---,---------~.------------
I '1, -
O~----~~----~------~------~----~
10
25
20
15
tiempo (dla"
[02J disuelto
pruebas
remediaci6n
Mar
02 Dis. Control
~_[)s'
0.7
0.6
-!--*------------------------------
~
u_ Q5+--~------------------------
i 'i 1-------------------------------ti
+-------------------------------8 Q2+--------------------------0.4
..0.3
0.1
Ensayo
+---1---.....,.......!(--c--;;--;;-.,....-::---.....,-------::------------
O~----~----~----~~--~--~------~
."..
.".
10
15
20
25
tlempoldla"
La observacin de los peacks de concentracin de oxigeno en las etapas Oenitrificantes (ON) son
interesantes, aunque no existe ninguna base dentro del estado del arte que apoye alguna teone de la
formacin de oxigeno molecular a partir de las especies nitrogenadas oxidadas, nitrato o nitrito.
-Pgina
36 de 130-
1.2.3.5.- Potencial
Enero 2010
Redox
Las variaciones de potencial Redox deben ser compatibles a los ciclos de remediacin. El ciclo
denitrificante es un ciclo reductor, donde a partir de especies nitrogenadas oxidadas (Nitritos y Nitratos)
se llega a nitrgeno molecular gaseoso: especie nitrogenada reducida (Kishida, 2003). El ciclo nitrificante
en cambio es un ciclo oxidante, donde a partir de una especie nitrogenada reducida (amonio), se
producen nitratos y nitritos, especies nitrogenadas oxidadas.
En las grficas siguientes, se expresa las variaciones en ORP (Oxido reduction Potencial).
ORP pruebas
remedlacin
lago
200
- ::~!-.-.------------'---------------
i
E
50 .!-------.---
ORP Control
-.--~5
----,~O----~,5~
-
o r'
.:
-1
I~E~ayo
--------------20
25
lIempoldl ,
ORP ensayllll
",mediacin
mar
200
100 j------------------------------
>"
I
o
-100
f----
__--- 5
1:o
__----~--~--~
10
-.c
,15
20 25l;::;~
-200 +--------~~-.-.-----------------
tiempo tela
En ninguno de los dos casos se observa que al trmino de la experiencia se tengan valores ms bajos
de potencial en los ensayos inoculados con bacterias en comparacin a los controles. Sin embargo si
comparamos punto a punto, de los 13 puntos mostrados para el experimento remediaci6n Lago, ocho
son ms bajos para el ensayo inoculado que para el control; del mismo modo para el ensayo marino seis
de los trece puntos estn ms abajo.
-Pgina 37 de 130-
Enero 2010
AMONIO
Grfica N 37: Grfica porcentajes de remediaci6n de Amonio durante el ensayo,
Remediaci6n-Lago
I AmoniO rilQIL
REIIEDlAClN AMONO CNitI
'lft relativo movll
-2
Columna
15O%------------------------l
100%
+---------
-150%
En el ensayo lacustre, como observamos en las figuras, y a pesar de lo previsto se observa una deriva
de la concentraci6n de Amonio coherente a lo esperado: disminuci6n-aumento-disminuci6n.
Se observan
los efectos claros de remediaci6n el dla 12, luego de un ciclo DN y un ciclo N. La disminucin de los
niveles de amonio el dfa 11 antes de la nueva inoculaci6n de bacterias DN, se puede entender como la
reacci6n de las bacterias que an estn en el sistema.
25
En el ensayo Marino, como observamos en las figuras, al igual que en el Lacustre, se observa una
deriva de la concentraci6n de Amonio coherente a lo esperado: leve disminuci6n-aumento-disminuci6n.
Se observan los efectos claros de remediaci6n el dla 14, luego de un ciclo DN y un ciclo N. Notar que
este efecto en el caso lacustre se observ6 dos dfas antes. Los controles se mantienen cercanos al valor
inicial durante toda la prueba.
-Pgina 38 de 130-
NITRITO
Grfica N 39: Grfica porcentajes
Remediacin-Lago
Enero 2010
de remediacin
1 __
""(
Columna
..
(Nitrito mg/L)
100%
~+---~~~
-100%
.J--
5__~-.-aH
11
13
~~~~l
--'~L.-I!!~~~L.__1L
1920
__18----~
.....
-150%
l2OO%--,-..;;...._=-__.Al comienzo del ensayo, se observ un aumento drstico de la cantidad de nitrito en la fase inicial de
remediacin -coherente a la accin de las bacterias denitrificantes- la tendencia general en el ensayo
fue la disminucin de los valores de concentracin de nitrito, sin embargo las medidas son slo
referenciales por encontrarse en el limite de deteccin de la tcnica.
Grfica N 40: Grfica porcentajes
Remediacin-Mar
[REMEDlAClN NTRlTO (H02)
% ral.tlvo mOYiI
I ::
de remediacin
de Nitrito durante
el ensayo,
Columna
NitrIto mg/L
+--------
400
200
o
-200
-Pgina 39 de 130-
Enero 2010
'" relativo
I~
:-2
150%
100%
50%
0%
-50%
+-------------
Io8riaci6n
movll
108Iiaci6n)
----------1
I :::
1-------
=------;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;,...;;;;,...~
I
I
'"
_Nitrato
relativo movll
200
-2
--------------------1
---------------------..--...----
150
100+-----------------~~~--50
O -I--~~_._~~~_
..
-50O 1 2
--------------
-----~
Del mismo modo que para el caso que para el ensayo Lacustre y concordante a lo esperado, se
observa una variacin de los niveles de Nitrato acorde a la actividad de los ciclos DN: aumento al
inicial y al final, y concordante a los ciclos N: con la disminucin en los niveles al medio del
experimento.
-Pgina 40 de 130-
1.2.4. CONSTRASTACION
MEDICIONES LABORATORIO
Enero 2010
EXTERNO
en los ensayos
de
y sus controles
Tabla N 43: Mediciones laboratorio externo, ensayo Remediacin Lago y Control Lago
Parmetro
Nitrato
Nitrito
Amonio
Unidad
mglL
mglL
mg/L
lago
da O
< 0,10
< 0,05
9,71
control
da 20
<1
<0,05
12,3
lago
da 20
<1
<0,05
9,5
% remediaci6n
control dla 20
YS
-22,8
Tabla N 44: Mediciones laboratorio externo, ensayo Remediacin Mar y Control Mar
Parmetro
Nitrato
Nitrito
Amonio
Unidad
mg/L N-N03
mg/L N-N02
mgJL N-NH3
mar
da O
< 0,10
< 0,05
29,4
control
da 20
<0,1
<0,05
18,8
mar
da 20
0,2
<0,05
11,9
% remediaci6n
vs control da 20
-36,7
De los analitos observados solo se pudO tener valores del Amonio. Encontrndose una disminucin
en un 22% para el caso del ensayo Lacustre y de 37% en el caso del ensayo Marino.
-Pgina 41 de 130-
Enero 2010
ACTIVIDAD
Objetivo
Desarrollar una formulacin farmacutica para uso industrial, que permita la aplicacin de un nuevo
principio activo bacterial en el tratamiento de los fondos marinos y lacustres, afectados por la actividad
acucola.
En base a los requerimientos planteados, se defini que la forma farmacutica ms adecuada
para
cumplir con los objetivos esperados es un elemento comprimido del tipo tableta, que tras su desarrollo,
deber ser capaz de transportar al fondo marino el principio activo que realiza la biorremediacin
requerida.
Descripcin de metodologa empleada para el desarrollo
Para realizar el estudio requerido, se completaron un conjunto de tareas (o etapas) siguiendo
metodologa lgica indicada en el diagrama N 45.
la
ResII1ce,ones
FIsoeo-Oufmoeas
!lel PnnclptO
Actovo
El desarrollo fue de naturaleza recursiva en algunas de las tareas realizadas en las cuales
no
se
alcanzaron los resultados esperados, hasta obtener mediante ensayos sucesivos la mejor aproximacin
a las caractersticas establecidas en las condiciones de diseo. La descripcin de las condiciones
establecidas ylo actividades desarrolladas en cada una de las etapas indicadas es la siguiente:
-Pgina 42 de 130-
Enero 2010
DE DISEO
En esta etapa preliminar del desarrollo se tuvieron en cuenta el siguiente conjunto de requerimientos
especificos (o resultados esperados) a ser cumplidos por la nueva forma farmacutica:
o
Debe servir como transporte del principio activo hacia el fondo marino o lacustre que se
requiere remediar. Esto significa que la forma farmacutica a desarrollar debe poseer una
densidad final mayor a la del agua, de manera de permitir su hundimiento directo, una vez
aplicada en la superficie del lugar que se espera tratar.
Debe poseer una forma tal que evite su ingestin por parte de los peces u otra biota presente
en la zona de aplicacin de la forma farmacutica.
Debe ser capaz de viajar al fondo marino o lacustre sin romperse o desintegrarse
trayecto ni en el momento de contacto con el fondo.
durante su
manipulacin
}oo
}oo
En base a los requerimientos anteriores, se estableci que la forma farmacutica ms adecuada para
cumplir con los objetivos planteados seria un comprimido de forma cilndrica, con un dimetro de 8 cm.
1.3.2. DETERMINACiN
DE LAS CONDICIONES
FSICO-QuMICAS
un
conjunto
de
muestras, el que fue
}oo
}oo
}oo
}oo
}oo
-Pgina 43 de 130-
1.3.3. SELECCIN
PRELIMINAR
Enero 2010
DE EXCIPIENTES
Diluyentes (fillers):
o
Carbonato de Calcio
Carbonato de magnesio
Sulfato de Calcio
Lactosa Anhidra
Almidn de malz
Aglutinantes
o
Glucosa Microcristalina
Sorbitol
Sacarosa
Lubricantes
o
Estearato de Magnesio
Talco
Desintegrantes
o
Carboximetilcelulosa
Hidroximetilcelulosa
-Pgina 44 de 130-
1.3.4. FORMULACIN
PRELIMINAR
Enero 2010
DE LOS COMPRIMIDOS
"
10
11
12
13
14
15
16
17
70
70
70
40
70
50
60
40
50
60
40
50
21
22
23
60
40
50
19
49
50
55
50
44
39
100
100
4
4
Total
100
200
2
72
70
70
70
70
28
2B
28
28
28
28
29
29
29
29
29
29
29
29
29
40
28
49
28
28
30
20
10
100
100
4
100
100
4
100
100
4
30
20
10
100
100
4
100
100
4
100
100
4
30
20
10
100
100
4
100
100
4
100
100
D In~lIrlnte.
Carboximetilcelulcsl
Hidroximetilcalulosa
Lactosa AnhIdra
Total o,;, I
TOlal/or91
N" Mueslras Ensa -adas
20
10
lubricante.
Ellearato de rAsan.sio
Talco
19
10
AglutJnlnte.
Glucosa Anhidra
Sorbrtal
Almidn de maz
Sacarosa
18
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
2
100
100
4
100
100
100
100
Una vez preparadas las formulaciones preliminares, se las someti a un exhaustivo mezclado manual de
manera de lograr una distribucin homognea de los componentes antes del proceso de confeccin de
prototipos mediante compresin .
-Pgina 45 de 130-
Enero 2010
La prensa utilizada en conjunto con el molde, es de accionamiento hidrulico manual, para uso industrial,
con capacidad mxima de cierre de 15 toneladas, y se encuentra provista de indicador manomtrico.
Figura N 48: Prensa hidrulica para confeccin de prototipos de comprimidos para ensayo.
Manmetro
Accionamiento
Manual
Pistn
Hidrulico
-Pglna 46 de 130-
Enero 2010
del molde.
-Pgina 47 de 130-
Enero 2010
-Pgina 48 de 130-
1.3.6. PRUEBAS
Enero 2010
A LOS PROTOTIPOS
Los comprimidos prototipos obtenidos mediante compresin directa con el molde y la prensa
laboratorio, fueron sometidos a las siguientes mediciones y ensayos:
de
Densidad Compactada
3
La densidad compactada en todos los casos ensayados, se mantuvo en rangos entre 1,78 grs/cm y
2,28 grslcm3, con lo cual se asegura que ninguna de las formulaciones alternativas tendra riesgo de
flotar.
No se aprecio un cambio significativo, en trminos de, variaciones observadas en la densidad
compactada, entre aquellos prototipos compactados entre 8 toneladas y el mximo de 15 toneladas.
Friabilidad
La capacidad del comprimido para resistir al desmoronamiento
producto de su manipulacin.
en los siguientes
trminos
Clasificacin de
Friabilidad
NO Formulacin
Muy Buena
-Pgina 49 de 130-
Buena
1,2,4,5,6,12,15,18,20,22,23
Regular
3,7,9,10,11,13,14,
16,17,19,21.
Mala
Tiempo de desintegracin
Enero 2010
en agua
Para asegurar que el comprimido no se rompa antes de alcanzar los fondos marinos o lacustres, y
por otro lado asegurar que el comprimido si se desintegre en un periodo prudente de tiempo y libere
as el principio activo motivo de su objeto.
Se realizaron ensayos de desintegracin en agua para todos los comprimidos prototipos formulados.
Los resultados de los ensayos se clasificaron en categoras, de acuerdo al tiempo requerido por el
prototipo para lograr su desintegracin total y permitir asl la liberacin del comprimido. Los
resultados obtenidos se resumen en la Tabla N 57.
Tabla N
Comportamiento
El comprimido no se desintegra
Clasificacin de
desintegracin
NO Fonnulacin
Malo
Bueno
1,2.4,5,6,22,23
Regular
3,6,7,8,9,10,11,12,13,
14,15,16,17,18,19,20,
21
1.3.7. RESULTADOS
Las principales conclusiones obtenidas en el desarrollo de este estudio son las siguientes:
o
La formulacin final r.o 23 parece alcanzar los estndares planteados al inicio del desarrollo y
debe por tanto ser probada en condiciones de uso industrial para validar lo obtenido en
condiciones de laboratorio.
-Pgina 50 de 130-
a partir
Enero 2010
1.2. "Degradacin
de sedimentos
con
En estas pruebas se defini una dosis en base a ensayos de laboratorio y que tuvo como
base
de
clculo una concentracin celular de 10 6 cel/ml en un reactor de volumen de 250 mi, con ello se
obtuvieron los mejores resultados de biorremediacin a esta
escala.
Esta concentracin celular, respecto al volumen y rea de las columnas de prueba, fue definida la dosis
de producto, como "nmero de clulas por rea de sedimento biorremediado", cel/Ha. De acuerdo a ello
se determin que para una Ha de suelo aculcola contaminado se requiero 30 gr de biomasa.
Considerando
para esta misma superficie una distribucin espacial que cumpla con los aspectos de:
a)
b)
En caso de requerir remediar un rea ms impactada esta dosis aumentar a 60 o 90 tabletas /Ha.
De acuerdo a lo descrito anteriormente, se defini que el contenido celular en cada tableta es de un 10 %
para tabletas de 100 gr c/u. El % restante corresponde a los excipientes que permiten que la tableta
recorra el trayecto deseado sin desintegrarse, hasta llegar a los fondos marinos o lacustres segn
corresponda, y ahr liberar el principio activo durante 30 das al entrar en contacto con los sedimentos
(medios naturales de las bacterias que constituyen el principio activo del biorremediador).
La dosis fue proyectada con el fin de abarcar de manera lo ms uniforme posible la hectrea tratada,
dado que un menor nmero de tabletas significa la posibilidad de dejar zonas sin tratar y, por el contrario,
un mayor nmero de tabletas, significa mayor dificultad operacional, lo que no hara atractivo
comercialmente el producto en una faena productiva.
A continuacin la malla de distribucin pensada para el tratamiento de 1 Ha de superficie. La idea es
concentrar las tabletas en 15 puntos, que permitan cubrir de la mejor manera el rea deseada, sin que
esto constituya un problema operacional para el cliente.
La distribucin considera por tanto, 1,2 o 3 tabletas por punto, es decir, 30, 60 o 90 tabletas/Ha
funcin del grado de impacto.
e:
o
>
o
I
,J.
-Pgina 51 de 130-
en
ACTIVIDAD
1.5. CARACTERIZACIN
Fecha de ejecucin:
Enero 2010
DE SEDIMENTOS
Objetivo:
Realizar un monitoreo tipo INFA para identificar cualitativamente y cuantitativamente cual es el impacto
ambiental generado por el centro de cultivo en su entorno. Dicho monitoreo fue realizado por la empresa
Consultora en Control de Calidad y Medio Ambiente Geeaa Ltda.
El monitoreo se realiz en el centro de salmones
Marine Harvest y emplazado en la X Regin.
a la empresa
Descripcin:
Las actividades realizadas fueron:
1.5.1. MUESTREO EN TERRENO
Para la realizacin del anlisis del sedimento que se solicit, fue necesario la extraccin del mismo y que
al igual que en la actividad W 1 sta se llev a cabo mediante draga, la cual est confeccionada
completamente
en acero inoxidable, posee diseflo de gatillo que asegura que las rnandlbulas
permanezcan abiertas durante el descenso. El volumen del muestreo es de 1800 cm" 'dragado
(aproximadamente).
~.
\
.........
Figura
para el muestreo
Se us una embarcacin con las siguientes caracterfsticas: 6,30 m de largo, 1,9 m de ancho de fibra de
vidrio (lancha inscrita para actividades oceanogrficas y otros). Figura N 60
-Pgina 52 de 130
Enero 2010
Huelmo, X Regin
Figura
Figura
de sedimento
de Temperatura
-Pgina 53 de 130-
Figura N
sedimento
Figura
Figura
de parmetros in situ
Enero 2010
y determinacin
Fecha
HonI:Mlnuto
UTlI_E
urll_N
Longitud
Latitud
Geoar6llc:a Geoar.nc.
11:30
12:20
663163
663279
5383136
4141'12.61"
5383517
4141'00.18"
13:10
662884
73"02'22.12"
73002'17.48"
44
4140'53.86"
4141'02;19"
73002'34.76"
55
73002'42.42"
38
5383690
5383409
4140'55.02"
73002'43:85"
4141'04.10"
663130
5383318
39
39
52
663035
5383422
4141'06.74"
4141'03.44"
73002'41.97"
73002'23.73"
73002'27.94"
50
663520
663317
5382556
5382548
73002'06.12"
73002'14,89"
38
27
21-01-2008
2
3
4
21-01-2008
21-01-2008
21-01-2008
14:00
862701
5383721
5383468
21-01-2008
8
7
21-01-2008
21-01-2008
14:50
15:40
862673
662710
16:30
8
Ret,1
Ret,2
21-01-2008
21-01-2008
17:20
18:10
19:00
21-01-2008
Profundidad
audelml
4141'31.14"
4141'31.55"
65
1.5.3. RESULTADOS
;..
;..
Rplica 1
Rplica 2
Rplica 3
Estacin 1
0,76
0,84
0,84
0,81
Estacin 2
1,09
1,20
1,04
1,11
Estacin 3
1,22
1,29
1,14
1,22
Estacin 4
1,01
0,98
0,96
0,98
Estacin 5
1,01
1,13
1,10
1,08
Estacin 6
1,28
1,40
1,50
1,39
-Pgina 54 de 130-
Promedio
los de
Estacin 7
Enero 2010
1,83
1,14
1,02
1,33
Estacin 8
1,03
0,94
1,00
0,99
Referencia 1
0,77
0,91
0,93
0,87
Referencia 2
0,97
0,93
1,02
0,98
ESTACION
REDOX(mV
Ag/AgCI)
pH
7,1
7,8
-48
7,6
19
7,9
7,9
-34
-8
-124
13,7
133
7,2
Referencia 1
173
7,6
Referencia 2
223
7,4
7,9
Profundidad
(m)
Oxgeno
disuelto
(mglL)
Temperatura
(OC)
Salinidad
(PSU)
15,3
30,0
Porcentaje
de
saturacin
(%)
8,6
-5
8,7
15,1
30,0
100
30,7
100
100
3
4
-11
8,9
14,0
-16
8,9
12,9
31,3
98
-20
8,9
11,6
32,2
96
-25
8,5
11,2
32,3
95
-30
7,8
10,8
32,6
86
-40
7,1
10,7
32,6
79
-42
6,3
10,6
32,7
70
-Pgina SS de 130-
Enero 2010
Macrofauna bentnica
Tabla N 71: Macrofauna bentnica para la estacin N 1
Phytlum
Cirratulidae
Glvceridae
Glycera sp.
Lumbrineridae
Lumbrineris sp.
Nephtvidae
Nephtys sp.
Phyllodocidae
Eteooe sp.
Prionospio sp.
Nereidae
Nereidae
Polvnoidae
PoIynoidae
Ampharetidae
Ampharetidae
Terebellidae
Terebellidae
Syllidae
Syllidae
Flabelligeridae
Flabelligeridae
Paraonidae
Polygordiidae
Phoxocephalidae
Cumacea
Aoridae
Diastylidae
Mollusca
Nemertina
Echinodermata
Nassaridae
Rplica 2
RpDca3
40
10
30
50
10
70
30
10
10
20
280
10
10
Aoridae
Mytilus chilens;s
Aul8comya Btra
Nsssarius
Nuculidae
NucuJa pisum
Tindariidae
Tndaria striBta
Verenidae
T8Weragayi
Nemertina
Nemertina n d.
Ophiuroidea
Ophiuroidea n.d.
Echinidae
LDxechinus a/bus
Schizasteridae
Schizasteridae
-Pgina 56 de 130
60
10
10
10
10
30
is
10
240
10
10
10
30
40
30
10
10
10
190
19
N detaxa
20
10
Paraonidae
Schistomeringos
PoIygord;us sp.
Phoxocephalidae
Mytilidae
Rplica 1
10
s soederstroemi
Spionidae
Dorvilleidae
Arthropoda
c:IenIifIco
Cirratulidae
Spionidae
Annelida
Nombnt
Familia
10
20
80
10
11
10
10
280
20
20
10
10
10
10
40
240
10
20
Enero 2010
Phyllum
Annelida
Arthropoda
Mollusca
Nemer1ina
Echinoderrnata
Familia
Nombre cientifico
Cirratulidae
Cirratulidae 2
Glycendae
Glycera sp.
20
Nephlyidae
Nephtys sp.
Prionospio sp.
40
Amphinomidae
Amphinomidae
Goniadidae
Goniadidae
Paraonidae
Paguridae
Paraonidae
Pagurus sp.
Lysianassidae
Lysianassidae
Phoxocephalidae
Phoxocephalidae
Diastylidae
Nuculidae
Nucula pisum
Nemer1ina
Nemertina n d.
Ophiuroidea
Ophiuroidea n.d.
Echinidae
Schizasteridae
Loxechinus albus
Schizasteridae
N" de taxa
Rplica 1
Rplica 2
Rplica 3
10
10
20
50
10
10
10
10
20
10
10
20
20
10
10
10
80
180
10
9
Estos valores obtenidos se tomarn como referencia a la hora de valorar el efecto del
bioproducto. La valoracin de la eficacia del producto se har mediante comparacin de
resultados de los diferentes parmetros monitoreados, verificando asf la eficacia o no del
producto en desenouo.
-Pgina 57 de 130
40
10
PRODUCTIVO,
Enero 2010
PRODUCCIN
PROTOTIPO
Y EVALUACIN
-Pgina 58 de 130-
ACTIVIDAD
Enero 2010
Valor solicitado
ESR!cificacin
1.000 L
0,95 m
25 o C
Para el diseo del sistema se entregaron 105 siguientes parmetros cinticos de la suspensin
microbiana nitrificante y desnitrificante. Se seleccionaron 105 valores
mximos para cada una de
las suspensiones.
Tabla
entregadas.
SusR!nsin nitrificante
SusR!nsin desnitrificante
-Pgina 59 de 130-
2.1.1. CALCULaS
Enero 2010
DE DISEO
Especificacin
Valor
1.5 m3
1.0 m3
0.85 m
Restriccin impuesta o
Recomendacin
considerada
<=0.95 m
4
2.80 m
1.82 m
~ ,
t '
..
te
+----T-------a.
Las dimensiones del sistema de agitacin y los deflectores con que contar la unidad se presentan en la
Tabla N 77. Se seleccion un rotor de turbina de disco, turbina de Rhunston, que es el clsicamente
usado en fermentaciones aerobias, por su alta eficiencia en la dispersin de gases en medios liquidos y
adems de que resulta adecuado segn los valores de la viscosidad de la suspensin. Se usaran 3
rotores de modo de satisfacer los requerimientos de agitacin dado el volumen y las dimensiones de la
unidad.
-Pgina 60 de 130-
Tabla
tr 77:
Enero 2010
0,38 m
6
0,3m
0,9m
1,5 m
0,08 m
0.32 m
2.1.1.2. Aireacin
Para estimar el flujo de aire requerido a suministrar se deben calcular previamente las demandas en
oxigeno de los cultivos microbianos. En este caso la demanda de las suspensiones microbianas
nitrificantes. Estos valores sern tambin usados para estimar la generacin de calor metablico de los
cultivos microbianos.
81) DEMANDA DE OXIGENO PROCESO DE NITRIFICACION
En la Tabla N 78 se aprecia la demanda de oxigeno del cultivo nitrificante. La concentracin
celular fue fijada de modo de obtener una demanda en oxigeno posible de ser satisfecha
por
el
sistema de aireacin, as como tambin una generacin de calor factible de ser retirada por el
sistema de refrigeracin. Se fij una concentracin celular mxima, obtenida al final de la fase
exponencial de crecimiento. igual a 4.5 g biomasaL-1.
Parmetro
Velocidad especifica de
crecimiento (IJ)
Concentracin celular
mxima (XfNIT)
Rendimiento oxigeno en
clulas (V02)
Velocidad de consumo de
oxigeno (NA)
Velocidad de consumo de
oxigeno (NA)
en su determinacin.
Valor
considerado
Unidades
0,013
h-1
4,5
0,018
3,3
102
gSSV.L-1
gSSV.g02-1
g02.L-1.h-1
rnrnoles02.L-1.h-
-Pgina 61 de 130-
Consideracin o
Referencia
Laboratorio
Impuesta
Ruiz, (2000)
Enero 2010
En la Tabla N 79 se aprecia la demanda de nitrgeno del cultivo desnitrificante, obtenida segn los
valores incluidos en la misma Tabla ND 79. Esta demanda fue usada para estimar la generacin de calor
metablico del cultivo desnitrificante. La concentracin celular mxima qued fijada en 5.0 g blomasa-L1, para que la generacin de calor del cultivo pueda ser retirada por el sistema de refrigeracin.
Valor
considerado
Parmetro
Velocidad especifica de crecimiento (IJ)
Concentracin celular mxima (XfDES)
Rendimiento nitrgeno en clulas (YN)
Velocidad de consumo de nitrgeno (NAN)
Velocidad de consumo de nitrgeno (NAN)
0,28
5
1,2
1,2
83
Unidades
Consideracin
o Referencia
Laboratorio
h-1
gSSV.L-1
Impuesta
Ruiz, (2000)
gSSV.gN-1
gN.L-1.h-1
mmolesN.L-1.h-1
Unidades
Parmetro
Valor
102
298
Atm absolutas
0,15
0,66
657
Consideracin o
Referencia
Temperatura
fermentacin
Presin de
trabajo
< 0.7
tairemin-t
-Pgina
62 de 130-
2.1.1.4. Transferencia
Enero 2010
de calor
Se calcul el calor metablico generado por los procesos de nitrificacin y desnitrificacin y se evalu el
calor transferido entre el biorreactor y el medio ambiente producto de las diferencias de temperatura
entre ambos.
El metabolismo celular es una reaccin global exotrmica. Por lo tanto si se desea operar una
fennentacin a una temperatura constante prefijada (25 "C para las fennentaciones consideradas), ser
necesario remover ese calor de fermentacin (OF).
En la Tabla N 81 se presentan los valores respectivos de las distintas formas de calor y las
consideraciones efectuadas para su estimacin.
Parmetro
Calor
Calor
Calor
Calor
Calor
Calor
Calor
2188
10000
1219
1000
-1177
14583
12177
Unidades
Kcalh-t
Kcal h-1
Kcalh-t
Kcalh-t
Kcal'h-1
Kcal-h-t
Kcalh-t
Consideracin
Referencia
T ambiente 35D
Como se aprecia en la tabla los procesos de nitrificacin requieren de un intercambio de calor superior al
de los procesos de desnitrificacin.
Equipo de enfriamiento
El sistema de enfriamiento fue diseado para satisfacer la condicin de intercambio de calor ms
exigente de los procesos de nitrificacin con un margen de seguridad de 10%.
Como sistema de enfriamiento se selecciono un serpentin sumergido en el caldo de cultivo, dado su bajo
costo y la alta rea de transferencia de calor que permite. Como fluido refrigerante se utilizara agua.
En la Tabla Ir 82 se presentan los distintos valores de diseo del sistema de enfriamiento y las
consideraciones efectuadas:
-Pgina 63 de 130-
Enero 2010
Valor
Parmetro
Unidades
Consideracin o
Referencia
m
m
2.1.1.5. Esterilizacin
Se estimaron los flujos de vapor necesarios para esterilizar el biorreactor y el medio de cultivo. De ellos
podr ser seleccionado el equipo de suministro de vapor adecuado.
Se estimo la cantidad de energia necesaria, calor, para efectuar el proceso de esterilizacin,
0
considerando que se desea obtener una temperatura en la superficie de la unidad de 121 C. la
superficie de esterilizacin corresponder a la suma del rea de manto y las reas de las tapas de alto y
fondo de la unidad. los resultados obtenidos y las consideraciones efectuadas se presentan en la Tabla
N 78.
Tabla N' 83: Flujo de vapor requerido para esterilizar el biorreactor y consideraciones
efectuadas.
Parmetro
Valor
Unidades
Coeficiente de conveccin
Superficie de esterilizacin manto
Superficie de esterilizacin tapas
Calor requerido
Calor de condensacin del vapor
Flujo de vapor
25
6.7
2.27
30000
538.9
60
-Pgina 64 de 130-
Consideracin
o Referencia
121
121
-c,
-c,
1 atm
1 atm
Enero 2010
Figura N' 84: Lay-out del fermentador y de los sistemas auxiliares del proceso.
AIre
s: PM
M.~-up
~":J
C~
Gv
-H
W
,t,'re
<.
. Cdtvc
Lazo Control Temperatura Fermentador. este lazo de control obtiene la temperatura del fermentador
y acta sobre la bomba de recirculacin, que inyecta agua fria al serpentln del fermentador.
Lazo Control Nivel agua en enfriador. este lazo mantiene el nivel dentro de un rango que permita a
la bomba de recirculacin operar en forma correcta. El lazo de control verifica el nivel de agua y
acta sobre una vlvula de "make-up" que rellena el sistema con agua fresca.
Sistema de esterilizacin
Permite controlar el proceso de esterilizacin mediante inyeccin de vapor directo al fermentador.
proceso de esterilizacin se ha diseado para la esterilizacin del fermentador vaclo.
-Pgina 65 de 130-
El
);>
Enero 2010
Lazo de control esterilizacin: un sensor de presin verifica que la presin dentro del fermentador es
de 1 atm manomtrica durante el proceso de esterilizacin, actuando sobre la vlvula de ingreso de
vapor.
-Pgina 66 de 130-
Enero 2010
MOTOR
seu.oACEPTICO
ROUPEDOR ESPUI
E..E AGITADOI1
SOPaITE
SERPEN1
SERPENT1N
_ AGITADOR
AIREADOR
-Pgina 67 de 130-
2.1.5. INSTRUMENTACIN
Y CONTROL
A continuacin se indican los parmetros
controladores en los lazos de control.
1.
Enero 2010
de seleccin
requeridos
y para los
TEMPERATURA (P)
En este caso, corresponde a la temperatura del fermentador.
2.
pH
PT100
Acero inoxidable
%"NPT
Esterilizable
La requerida por el controlador
Tipo
Carcasa
Unin de montaje
Otros
Conexin a controlador
3.
Carcasa
Unin de montaje
Otros
Conexin a controlador
-Pgina 68 de 130-
2.1.6. ADQUISICION
Enero 2010
.:.
BIORREACTOR:
Proveedor: Gacsinox
SISTEMA DE ENFRIAMIENTO
Enfriador (chiller)
.:.
Proveedor:
Anwo
SISTEMA DE ESTERILIZACiN
Generador de Vapor (caldera)
Proveedor: Gacsinox
-Pgina 69 de 130-
.:.
Enero 2010
SISTEMA DE FILTRACiN
Filtros
Proveedor: Filterpore
Bomba Filtracin
.:.
SISTEMA DE AIREACiN
Filtro de aire
Proveedor: Filterpore
.:.
SISTEMA DE LIOFILIZACiN
Liofilizador
.:.
Proveedor: Ivens
INSTRUMENTACiN
y CONTROL
Controlador de pH
Electrodo de pH
-Pgina 70 de 130-
Enero 2010
Bomba control pH
Accesorios controlador pH
pH 7.01,pH
4.01,
pH 10.01,
.:.
OTROS ACCESORIOS
Motor variador de frecuencia
Medidor de Flujo
Vlvulas
-Pgina 71 de 130-
ACTIVIDAD
Enero 2010
Fecha de ejecucin:
Objetivo
El objetivo de esta etapa fue hacer una produccin prototipo de tabletas biorremediadoras
la evaluacin in situ del producto.
para realizar
Descripcin:
Esta actividad implica:
DE LA PLANTA PILOTO
Cabe decir que inicialmente en el proyecto se consider el montaje de la planta piloto para la produccin
prototipo en las instalaciones de la empresa de Biotecnologias Antofagasta S.A. en Antofagasta, pero
dicha empresa se traslad a Santiago (Comuna de !\Iunoa), donde no disponian de los espacios fisicos
para la instalacin de los equipos lo cual dificultaba su operacin y cumplir con las normas de seguridad.
Por lo tanto, previo acuerdo entre la empresa subcontratada Biotecnologia Antofagasta y Laboratorios
Recalcine, se decidi subcontratar otras instalaciones como Laboratorios Dukay S.A., empresa que es
de confianza de Recalcine y asl poder disponer del espacio adecuado para la instalacin de los equipos
y cumplir con los requerimientos de seguridad en su operacin.
Dicho cambio de ubicacin fue informado a la Subdireccin de Innova Chile mediante Oficina de Partes y
aprobado mediante pronunciamiento nO299 de fecha 25/0212009, ya que la ubicacin de la planta fue
constatada en terreno por la ejecutiva tcnica, corroborando que cumplla los requisitos tcnicos para una
adecuada ejecucin del proyecto.
Una vez habilitado el nuevo espacio para la instalacin de la planta piloto y teniendo todos los servicios
de agua, gas y electricidad operativos, se comenz con el montaje de la planta, es decir, la integracin
de todos los equipos en unea para la fabricacin de biomasa. Para ello, se elabor un instructivo para su
montaje (anexo N' 2).
Una vez armada la planta y con las conexiones de los equipos finalizadas se llev a cabo la puesta en
marcha de la planta, para lo cual fue necesario hacer una baterla de pruebas previas tales como:
-Pgina 72 de 130-
--------------~
Enero 2010
y de planta piloto:
Figura ~
cultivo.
-Pgina 73 de 130-
Figura
Ir
-Pgina 74 de 130-
Enero 2010
2.2.2. OPERACIN
Enero 2010
DE LA PLANTA BIOMASA
Para la operacin de la planta biomasa se elabor un protocolo para estandarizar el proceso, el cual se
encuentra inserto como anexo N' 3 (slo en formato OVO).
En el siguiente diagrama N' 94 se muestra un esquema del flujo del proceso de la planta biomasa.
LABORATORIO
MICROBIOLOGICO
INOCULO
Nubientes
Biorreactor
Aireacin
Centrifugacin
Presin
-1
I
]-V810cidad.
rpm
SOLUCION DESCARTE
1-
Liofilizacin
Biomasa en POlVO)
D
Detonante--
( Mezclado
y Tableteado]-
Excipientes
Envasado Final)
TABLETA
BIORREMEDIADORA
-Pgina 75 de 130-
Enero 2010
ceoa
3.
4.
-Pgina 76 de 130-
producto
2.2.3. PRODUCCiN
Enero 2010
PROTOTIPO
Objetivo
Fabricacin
reales.
de tabletas
necesarias
para
evaluar
la eficiencia
del
producto
en condiciones
Descripcin
La produccin se dividi en dos lineas productivas:
1.
2.
Fase microorganismos
2.2.3.1. PRODUCCiN
desnitrificantes
DE UNIDADES BIORREMEDIADORAS
PARA SEDIMENTOS
mencionado
-Pgina 77 de 130-
LACUSTRES
en el punto
Enero 2010
En las grficas N 96 Y N 97 se pueden observar las curvas cinticas obtenidas en estos ciclos de
produccin de lago:
Concentracin Celular vis Tiempo
DN Lago
J-'OE-n?
,---
1I.(lE"OO
L)
-
--- ----
i(''''F-''~
r--
.f.lIIl-:-+-I)H
~.'-hIF
(2000
~
BoOE+r:,:?
j.(IOE.08
f-
_
/1 ___
/1
---
..nrl
./
.-A'
t->
-"
30
20
TlelTllpo
Cdios,
::::i
E
I.40E"'9
1.20E+09
.!:!.
:v
..
!
4.00E08
O.OOE-+-Ol)
./
./
2.00E08
~
<..>
Grfica
2_2_3.2_PRODUCCiN
------
"IR
-lS
, .00'::+09
8.00E*08
t";.(U)E"
L)
1.00E*09
~'"
(1000
1.3QE+Utl
---
12
14
".;--
./
8
lO
10
18
Tiempo (dias)
DE UNIDADES BIORREMEDIADORAS
PARA SEDIMENTOS
MARINOS
-Pgina 78 de 130-
Enero 2010
*..
./
ll.00E+09
!
~
.1
8.00E+08
6.00E+08
4.00E+08
2.00E+08
1.20E+09
O.OOE+OO
~
5
7
/
./
1,.-'"
Ir 98: concentracin
I
I
25
20
Tiempo
Grfica
~
15
10
35
30
(dlas)
1.40E+09
1.20E+09
1.00E+09
. 8.00E+08
6.00E+08
lo:!!
4.00E+08
2.00E+08
Grfica
I
I
-- -----;-----iI
...,/'
8
10
T1empo (dles)
Ir 99: concentracin
l.-----
-4
O.OOE+OO
l
I
12
14
16
Como resultado de esta etapa se obtuvieron las tabletas biorremediadoras necesarias para llevar a cabo
las pruebas de eficacia en condiciones reales en los centros de cultivo de mar y centro de cultivo de lago.
2.2.4. OBTENCiN
DE PERMISOS DE LA SUBSECRETARA
DE PESCA
Para poder llevar a cabo las pruebas en terreno cumpliendo con lo establecido en el Reglamento
ambiental para la Acuicultura (RAMA), fue necesaria una Autorizacin por parte de la Subsecretaria de
Pesca. Para la obtencin de dicha Autorizacin se present una solicitud que incluy:
Detalle de los centros de cultivo asignados por la empresa Marine Harvest para el desarrollo
de las pruebas
Tras largos meses de espera, la Subsecretaria de Pesca otorg ambas Autorizaciones:
.:. Res. Ex. N 2683 de fecha 15 Octubre 2008 para el centro de Mar .
:. Res. Ex. N 718 de fecha 24 Febrero 2009 para el centro de Lago.
-Pgina 79 de 130-
ACTIVIDAD
Enero 2010
Fecha de ejecucin:
El trabajo incluy por parte de la empresa Geeaa Ltda. la elaboracin de los servicios de muestreo, parte
de 105 ensayos de Laboratorio y su anlisis, de manera de evaluar, entre otros, los resultados desde un
punto de vista ambiental y el cumplimiento normativo atingente a la acuicultura vigente (OS 320/00 Y
Resolucin N 3.411/06).
Para lograr el objetivo planteado se destac:
a.
b.
c.
d.
-Pgina 80 de 130-
Enero 2010
118m
Instalacin de Unidades de
Bacterias mediante Buzo y
filmacin del proceso
Informe Inicial
TRES (3)
muestreos
intermedios
Muestreo Final
Informe FINAL
Muestreo Inicial
El estudio se efectu en el centro de cultivo perteneciente a Marine Harvest, localizado en Chilo, Regin
de Los Lagos (ver Figura N 101). El centro de cultivo, durante el tiempo que dur el seguimiento
ambiental no estuvo en funcionamiento y no se encontraba instalado ningn artefacto naval, jaulas de
cultivo, etc.
rea de estudio
Figura ND 101: Sitio de estudio (Referencia de Imgenes; Google Earth V. 4.3.7284.3916 (beta).
-Pgina 81 de 130-
Enero 2010
C.C".M.
I
I
ControI1
AREADE
,/
ESlUDIO
i'-::'
Control 2
TIerra
Om
200m
-Pgina 82 de l30-
Enero 2010
Adicionalmente, tal como aparece en la Figura N 102, se utilizaron dos estaciones Control ubicadas en
los 2 vrtices de la CCMM ms cercanos a la costa. Estas estaciones, son las estaciones que en un
INFA (documento exigido por Subsecretaria de Pesca), serian
las estaciones con las cuales se
contrastarfan los resultados obtenidos en la periferia de cada uno de 105 mdulos de cultivo, metodologa
que no ser utilizada en este estudio por estar fuera del alcance del mismo.
La profundidad media del sector fue de 40 m, razn por la cual se utiliz buzos especialistas de la
Empresa Ecosub (Figura Ir 107 Y 108) para la filmacin del proceso de siembra de las unidades
biorremediadoras.
om
--
50 m
-Pgina 83 de 130-
--------------------
---
Figura
Enero 2010
N' 105 Y 106: Pesos (muertos) utilizados para individualizar y georreferenciar cada
punto de tratamiento
Figura N' 107 Y 108: Preparacin de los buzos encargados de sembrar las unidades biorremediadoras
durante la campana en tiempo TO.
Muestreo de sedimento
Las muestras de sedimento se tomaron en estaciones georreferenciadas mediante un GPS Garmin Map
75 (+/5 m), utilizado unidades planas UTM (Universal Transverse Mercator).
Las muestras se obtuvieron desde una embarcacin mediante draga Ponnar de 0,1 m2 de rea. Se
intent la colecta mediante OTICORER, pero las caracter!sticas del sedimento (poco fango) impidieron
un resultado efectivo. En el monitoreo Tiempo 0, las muestras las tomaron los buzos, llenando ellos
2
mismos los corer. De ah! en adelante, se muestre usando una draga de 0,1 m , y submuestreando
-Pgina 84 de 130-
Enero 2010
mediante el uso de los corer de dimetro interno de 90 mm, de manera de asegurarse que en cada uno
de los monitoreos se colectara slo los 3 primeros cm superficiales del sedimento (Figura N 109 a 112).
Las muestras de agua fueron colectadas del agua superficial del contenido en el corer (Figura N' 115).
Las muestras para los anlisis de fauna fueron fijadas "in situ" mediante una solucin de formalina-agua
de mar al 10%. Todo el material recolectado, debidamente depositado y rotulado en bolsas de polietileno
con cierre hermtico, fue almacenado y transportado al laboratorio a baja temperatura utilizando bolsas
de hielo.
,.,....
_.
-c
~'
'a.Q'h20D9
. l)3.O2~ 1,
-
11eQaao3
1().()2..;20Q9
19-02-2009
pH
In situ
REDOX
In situ
M.O.T.
Laboratorio
GRANULOMETRIA
Laboratorio
FAUNA
Laboratorio
NOTA: Todos los muestreos, ensayos de variables ambientales y anlisis in situ fueron realizados
por personal de Geeaa Ltda.
Figura N 109
-Pgina 85 de 130-
Figura N 113 Y
Enero 2010
-Pgina 86 de 130-
Enero 2010
2.3.1.2. Resultados
Contenido
de Materia Orgnica
La materia orgnica en el sector analizado es baja. No obstante, como lo demuestra la Figura N 116, se
aprecia claramente que el sector Nor-Oeste del rea monitoreado es el que contiene mayor contenido
porcentual de materia orgnica (2,4 %). Tal como se aprecia, esta regin, est asociada con la zona
donde estuvieron ubicadas las balsas jaulas del centro de cultivo. Se aprecia tambin que los controles
presentaron un bajo contenido de materia orgnica 1%).
C.C.M.M.
ConIroI1
/~~~
AREADE
- ESTUDIO
~1IO*I6n
--J8u''<,
T~
2,4 %
'I,_---~
2.1 %
1.8%
CooIroI2
Dm
200m
-Pgina 87 de 130-
["~O"~
Enero 2010
Figura N 117: Reagrupacin de las estaciones en niveles. Ntese, que las corrientes provienen desde
el Noroeste y esto genera un arrastre de sedimento y material biorremediador en direccin Sureste,
generando un efecto acumulativo en las estaciones del Nivel 3 y 4.
Los resultados indican que las variaciones observadas en el contenido de MOT a travs
del
tiempo
en la estaciones de muestreo es bastante heterognea. Las corrientes del sector tienen el potencial de
generar un arrastre o transporte efectivo de partculas en direccin Sureste. En este caso particular, tal
transporte se habra verificado desde el Noroeste hacia el Sureste (Figura N 117), Y claramente las
estaciones de muestreo situadas en la cuarta columna (Nivel 4, estaciones 12, 13, 14 Y 15, son las que
tienen la mejor oportunidad de ser beneficiadas por la actividad biorremediadora de las unidades
implantadas, pues adems se generara un efecto acumulativo de la actividad biorremediadora producto
de material activo proveniente de las unidades biorremediadoras sembradas en el Noroeste. Esto ltimo,
durante el anlisis de la informacin, sugiri la agrupacin de las estaciones de monitoreo en 4 niveles,
tal como se observa en la Figura N 117. De esta manera, se encontr que los mayores cambios
ocurrieron en los niveles 3 y 4. Estos resultados se encuentran en la tabla N 118.
Los resultados indican que en las estaciones de Tratamiento los mayores cambios porcentuales en el
contenido de MOT se detectan en los niveles 3 y 4, Y a los 20 dias de iniciado la experiencia. Al da 29
se aprecia que la tasa de degradacin de MOT disminuye notablemente. Los cambios en el promedio de
MOT es significativo (p < 0,05) al dia 20 del nivel 4. Los porcentajes de disminucin al dfa 13, son
significativos en el nivel 2, 3 Y 4. Al dia 20 y 2 9 no existen diferencias significativas.
Sector
Nivel
N01
de dlas transcurridos
1.113
1.120
1.28
39,65
47,63
27,63
-15,91
9,58
-1,58
N02
-6,63
-28,88
-13,7
N03
-11,74
-30,79
N04
-11,51
Tabla N 118: Porcentaje de cambiO en el contenido de MOTentre la primera y las
sucesivas campaas, ordenadas por sector y nivel analizado.
Tratamiento
-Pgina 88 de 130-
Enero 2010
TrlllllmienlD
ND4
N03
N02
N01
3,0
2,5
1,5
! !
1
1
1,0
!
1
13
20
29
13
20
29
13
20
!
"1"
29
13
20
29
IflDa
Cambios
La Tabla ND 120 Y la Figura N 121, muestran los cambios promedios que experimenta el potencial de
xido reduccin en el sedimento sometido al tratamiento con las pastillas biorremediadoras.
Los
resultados indican que existe un aumento en el valor de Eh en el nivel 3 y en el nivel 4. En el nivel 4, los
cambios se hacen significativos hacia el final de la experiencia.
NIvel
Dlllde
20
29
76
58
147
144
N01
1
144
N02
81
13
142
122
N03
N04
123
116
125
196
91
136
167
264
-Pgina 89 de 130-
----------------------------------------------~-
..,1
350
250
150
100
50
..,3
..,2
300
200
Enero 2010
t-tI
Iv'
o
1
NO DiII
Cambios
en el pH del sedimento
Tal como lo muestra la Figura N 122, los cambios que experimenta el pH son errticos, no presentan un
patrn definido y no exhiben cambios significativos. Esto no es algo nuevo, puesto que existe consenso
que el pH no es un buen indicador de los cambios que experimenta el sedimento producto del
enriquecimiento orgnico, conclusiones derivadas de un taller organizado por Subsecretaria de Pesca en
diciembre del 2008.
..,1
II1II2
fII4
II1II3
8,0
7,8
7,6
z:
Q.
7,4
7,2
t f 11
T
6,8
1
13
20
29
13
-r-
T
I
J...
1 -
7,0
I
f 1 !1
, ,
t
20
1
29
NO D!
13
20
29
13
20
29
-Pgina 90 de 130-
Cambios
en la macrofauna
Enero 2010
bentnica
Los resultados indican que en sector sometido al tratamiento con las pastillas biorremediadoras,
un incremento en el nmero de especies posterior al implante (Tabla Ir' 123).
Tratamientll
.,"'.,
I
Ola 21
11
18
,...2
12
,.."I
di 1
19
1lIa:2I
14
existe
NIvel 4
Dlli29
Ola 1
21
17
Tabla Ir' 123: Variaciones en el nmero de especies, por nivel y dfa de monitoreo
La diversidad del sector es baja, lo cual es normal considerando la existencia por aos de una actividad
acurcola. No existen diferencias significativas entre la diversidad de Tratamiento (donde se implantaron
las unidades) respecto del sector de Referencia (cuadrantes sin tratamiento).
Un anlisis rpido de los resultados, muestra como la mayor diversidad (H) de especies se sita en los
sectores donde ms tarde se detect las mayores bajas en el contenido de MOT.
Cambios
en parmetros
fsico-qumicos
Los resultados que a continuacin se presentan muestran los valores obtenidos en los muestreos de la
prueba de biorremediacin de mar de ciertos parmetros que se consideraron clave para evaluar la
eficacia del producto biorremediador.
Dichos anlisis fueron realizados por la empresa Labs&Testing, a la cual, semanalmente
muestras de sedimento y de agua obtenidas en los muestreos.
se le hizo llegar
En la tabla Ir' 124 se muestran los parmetros analizados y la metodologfa empleada para su anlisis
-Pgina 91 de 130-
Enero 2010
El estudio de estos parmetros se hizo en funcin del ciclo natural del nitrgeno (ver figura N 125), el
cual es intervenido por el efecto del producto biorremediador. Este ciclo se inicia cuando la materia
orgnica compleja se transforma en amonio al reaccionar con el oxigeno disponible en el medio.
Luego de ello se activan dos etapas:
Una de desnitrificaci6n (DN), donde se transforma progresivamente
nitroso a nitrgeno molecular. Lo anterior en condiciones anxicas y
y oxido
Una de nitrificaci6n (N), la cual ocurre en condiciones aerobias, para metabolizar (descomponer)
materia orgnica. En esta etapa el amonio se transforma en nitrato, con un paso intermedio, en que
el amonio es oxidado a nitrito y ste es luego transformado en nitrato.
El nitrato no es toxico para las especies acuticas que podrian estar presentes en el medio.
'C7
Peces
Algas y
plantas
Desechos
,400'
Amoniaco
Nitratos
~,
Nitritos
T'
-Pgina 92 de 130-
Enero 2010
AMONIO, NH4
Los datos medidos de amonio nos muestran un aumento del orden del 72% (tabla Ir 126) entre
el tiempo inicial y 1 (dfa 13), del 54% entre el tiempo 1 y 2 (29 dfas) para luego disminuir del orden
del 70% entre los tiempos 2 y 3 (29 dfas), ellos es explicado por esta transformacin de la materia
orgnica en amonio.
Con estos resultados se puede apreciar que el sector en prueba ha experimentado los cambios
esperados segn los equilibrios reestablecidos, ya que al inicio hay formacin de especies (aumento
amonio) y transformacin a otras en tiempos posteriores (disminucin del amonio).
Es importante, tambin, apreciar la directa relacin que han tenido las transformaciones
de
amonio
con las de Nitrato, son directamente proporcionales, tal como deberla ser al existir un equilibrio.
AM ONIO mglKg
MUESTRAS
TIEM PO 2- di.
20
TIEMPO 3-dl.
29
TIEMPO O
TIEMPO 1-dla
13
E-1
6,45
11\3
205,1l3
81,26
E-2
33,35
87,81
83,6
88,07
E-3
73,94
f17,46
6145
51
E-4
38,93
70,8
tl6,33
92,26
E-5
30,55
88,26
7148
65,17
E-a
34,51
56,93
117,15
78,54
E-7
50,72
44,16
117.93
89,89
E-a
12,55
28,26
54,75
37,62
E-9
35,52
30,2
24,58
45,78
E-1O
55,09
26,05
93,31
65,15
E-H
26,01
60,71
69,44
-50,39
E-12
14,24
30,23
93,98
32,75
E-13
24,99
40,23
55,67
39,8
E-M
1'.t1
31,59
50,58
38,1
E-15
22,87
43,61
48,11
39,16
Medi.
3t73
54,51
84,1
59,52
-Pgina 93 de 130-
Enero 2010
NITRATO, N03
Como era de esperarse este parmetro debe comportarse en forma equivalente a lo medido para el
amonio, dado que este es el compuesto que lo origina producto de las reacciones involucradas.
Se observa ello en los resultados (tabla N' 127), en donde se aprecia que existe un aumento en
promedio del orden del 54% entre la campaa inicial (O) y la 1, del 62% entre las campaas 1 y 2, Y
luego una posterior disminucin del 68% entre las campaas 2 y 3.
NITRATO mglKg
MUESTRAS TIEMPO TIEMPO TIEMPO TIEMPO
2-dIa
3-dia 29
1-dia 13
O
20
E-1
33,65
151,89
153,65
146,94
E-2
48,15
94,97
94,72
91,91
E-3
84,21
122,55
122,19
103,85
E-4
66,43
80,14
132,26
101,59
E-5
36,26
52,36
192,59
79,9
E-6
50,49
54,38
107,79
45,66
E-7
63,06
64,69
86,62
87
E-8
31,9
28,06
96,65
55,79
E-9
39,45
37,63
81,01
127,48
E-10
30,8
78,03
104,43
91,7
E-11
48,6
52,97
75,53
37,3
E-12
40,79
82,79
62,85
23,45
E-13
36,81
55,41
88,41
46,6
E-14
29,64
37,04
132,66
50,02
E-15
34,91
46,68
154,71
65,74
Media
45,01
69,31
112,4
77
-Pgina 94 de 130-
Enero 2010
FOSFATO. P03
El fosfato es parte de la materia orgnica presente en los sedimentos marinos, si bien no est
directamente relacionado con el ciclo del nitrgeno, su aumento o disminucin, demuestra
restablecimiento de los equilibrios del sistema.
Las mediciones realizadas del fosfato en el sedimento, van en directa concordancia con lo
observado en los parmetros anteriores, aumento en los tres primeros tiempos y una fuerte
disminucin en el ltimo tiempo medido, del orden del 300% (vase tabla N 128).
FOSFATOS mgIKg
MU3STRAS
11EMPOO
nEMP01-
nEMP01-
nEMP03-
dla13
cla20
dia29
6-1
2045
3437
9649
453,9
6-2
2402
3154
7007
440,3
6-3
6615
5589
8191
1130,2
E-4
1503
5537
6409
1482,7
6-5
1737
3599
4906
497,8
E-6
2797
3460
5739
352,5
6-7
2516
4244
4560
808,5
E-8
185
2717
6212
1173,5
6-9
1274
2636
5411
487
6-10
4363
2889
3606
382
6-11
1132
3456
4544
319,1
6-12
1502
2638
3957
1790,7
6-13
896
7850
3437
542,6
6-14
1166
4018
4487
407,8
6-15
1916
2440
3671
365,5
Media
2.137
3.844
5.452
709
-Pgina 95 de 130-
Enero 2010
SULFUROS, S04
El sulfuro de hidrogeno o cido sulfhdrico es un parmetro que mide las condiciones de anoxia
de
un medio, mientras ms alto, ms an6xico se encuentra el medio. Ello implica que su aumento nos
indicara que estn ocurriendo reacciones que usan oxigeno, es decir, disminuye la cantidad de
oxigeno disponible en el sistema.
Esto es as y se puede correlacionar en forma clara, al observar que en los periodos en que
este
parmetro aumenta en promedio entre un 13 a un 63% (vase tabla Ir 129), el contenido de amonio
tambin aumenta, provocndose tal como ya fue explicado reacciones que consumen oxigeno.
SULFURO mglKg
MUESTRAS
TIEMPO I
TIEMPO J- dla
20
TIEM PO S-di.
ZI
E-1
1,04
1,49
E-2
\09
1,68
E-3
1,1
1,58
E-4
2,03
1,37
E-6
1,06
1,79
E-6
1,04
1,83
E-7
1,07
1,95
E-a
1,02
1,64
E-9
1,03
1,49
E-1O
1,05
\7
E-11
1,06
1,73
E-12
1,09
1,46
E-13
1,09
1,86
E-M
1,09
1,46
E-U
1,08
1,4
1,-0
1,63
Media
Tabla
TEMPOWIa
-Pgina 96 de 130-
Enero 2010
2.3.1.3. Conclusiones
El anlisis de los parmetros ambientales monitoreados, ha detectado cambios, atribuibles a las
unidades biorremediadoras depositadas sobre el piso marino de un centro de cultivo sometido a la
actividad acurcola intensiva, lo que permite sugerir el uso de las unidades biorremediadoras para lograr
una disminucin significativa del enriquecimiento orgnico del piso marino y las consecuencias
ambientales que suelen derivarse de la actividad acucola.
Los resultados obtenidos en el presente estudio muestran que posterior al implante de las unidades
biorremediadoras, se detectan cambios importantes en variables ambientales de inters ecolgico,
medioambiental y de gestin ambiental. Los resultados indican que existe un efecto en la disminucin de
la materia orgnica y un incremento en el potencial redox. Los resultados, sugieren la posibilidad de un
aumento en la dosis inicial y/o efectuar una re-implantacin de pastillas cerca del dia 20, de manera de
regular el efecto. Se prev, que estos resultados sern an ms eficaces en sedimentos con valores ms
altos de contenido orgnico (ejemplo> 10%).
Se sugiere que las corrientes del sector juegan un rol preponderante en el transporte del material
biorremediador, generando un efecto acumulativo en los sectores de mayor depositacin. Cada centro
de cultivo posee caracteristicas oceanogrficas propias. Por esta razn, se recomienda previo a la
implantacin de las unidades bioremediadoras, modelar el rea de depositacin del material orgnico
generado por la actividad acuicola, puesto que el rea de depositacin de residuos orgnicos dista de la
forma de las estructura de cultivo, es decir, no necesariamente la depositacin ocurre inmediatamente
bajo las jaulas. La modelacin del rea de depositacin, permitir adems, cuantificar espacialmente la
cantidad de material orgnico depositado en cada caso, pudiendo de esta manera establecerse una
dosis diferencial para el rea a tratar.
El contenido de materia orgnica es una de las variables que experimentaron los cambios ms
favorables. Para el caso de la materia orgnica la mayor disminucin promedio ocurri en la
medicin del dia 20 y en el nivel 4, con un promedio 30,8% de disminucin. En los dias 13 y 29,
existe disminucin de la materia orgnica pero sus promedios oscilan entre un 6 y un 13 %. Esto
permite argumentar, que el mayor efecto de las pastillas biorremediadoras se genera entre los
primeros 20 das de iniciada su siembra. Este resultado, permite argumentar que el efecto de las
pastillas biorremediadoras en el medio marino, presenta un rea de influencia mucho mayor a 15
metros y con dosis adecuadas, el promedio de disminucin de MOT bordearla un 30%, proceso que
no afecta los ensambles bentnicos, lo que adems predice una recuperacin del piso marino en
menor tiempo, comparado con los 2 a 8 aos que en forma natural puede demorarse en recuperar
un centro de cultivo sometido a la actividad aculcola
El potencial de xido reduccin, es otra variable ambiental que experimenta cambios sustanciales. A
diferencia de lo que ocurre con la materia orgnica, el patrn de incremento de los valores promedio
de Eh se mantiene en incremento hasta el dia 29. Si bien en este periodo de tiempo, la materia
orgnica ha demostrado que inicia nuevamente a incrementarse (tal vez para llegar a un punto de
equilibrio) los mecanismo por los cuales se verifican los procesos biogeoqumicos en el sedimento
han cambiado sustancialmente y el sedimento presenta caracterlsticas que permiten concluir que
predominan los procesos aerbicos u oxidativos. Este aspecto es muy novedoso, y abre la
posibilidad de observar el problema del impacto antrpico de la acuicultura (entre otros) desde otra
perspectiva (la biogeoqulmica).
-Pgina 97 de 130-
Enero 2010
Los resultados indican que no existen cambios significativos en la estructura comunitaria de los
macroinvertebrados
del sector. Ms bien, pareciera que en el sector de tratamiento se han
producido cambios favorables desde el punto de vista de la riqueza de especies, aunque
prevalezcan grupos de baja biomasa y elevada abundancia, lo que probablemente sea un aspecto
positivo si se trata de el inicio de un proceso de sucesin ecolgica encaminada a la recuperacin
del bentos.
Las variaciones medidas en el tiempo para los compuestos amonio y nitrato son los esperados en el
reestablecimiento del equilibrio del nitrgeno presente en el sistema.
Lo anterior, se complementa en una fuerte disminucin del los fosfatos, compuestos presentes en la
materia orgnica, el cual si bien no est directamente involucrado en el ciclo del nitrgeno, resulta
ser, una medida indirecta de los resultados de biorremediacin
observados, extendiendo la
biorremediacin ms all de los compuestos nitrogenados a los fosfatados.
-Pgina 98 de 130-
Enero 2010
Diseo del rea de estudio, nmero de estaciones, disposicin espacial y eleccin de variables a
monitorear.
Monitoreo de las condiciones ambientales a un tiempo "cero" (TO), momento previo a la instalacin
de las unidades biorremediadoras.
Filmacin del proceso de instalacin en el sedimento de las unidades biorremediadoras entregadas
por Recalcine.
Monitoreo de seguimiento ambiental semanal del sector en estudio (T1 a T3).
Monitoreo de las condiciones ambientales a un tiempo "finar (T4).
ContenIdo
ftam
Monitoreo Ambiental de
Sedimento
fsico-
Instalacin de Unidades de
Bacterias mediante sistema
mecnico y filmacin del proceso
Monitoreos
intermedios
Monitoreo Ambiental de
Sedimento
Monitoreo Ambiental de
Sedimento
-Pgina 99 de 130-
Enero 2010
Area de estudio
El estudio se efectu en el centro de cultivo perteneciente a Marine Harvest Chile, (ver Figura N
131). El centro de cultivo, dejo de funcionar slo una par de semanas previo al inicio del monitoreo y
se encontraban presentes las jaulas de cultivo, las cuales sirvieron de referencia para el estudio. Para
la realizacin de este estudio, Marine Harvest, por intermedio de Recalcine, solicitaron un permiso
especial a Subsecretaria de Pesca, permiso que est estipulado en la actual resolucin acompai'lante
del RAMA, Resolucin N 3411 del 2006.
Enero 2010
e
a
T15
TOI
ROl
e o
ROl
0-
e_ o
e- o-
e- o
PUNlOSCENTRAlB
TOO
1011
RG5
DE JAUlAS
T1Ir
.-
Ono
e
e- oo- e_
Figura
T13
e
eR10
0-
Om
e a
R11
Figura
R12
RU
T12
R15
T~
e~
de estudio
en e/ sedimento de/lago.
Enero 2010
Enero 2010
AttItipst8lTl
Oxgeno
Disuelto
trico
OxyGuanJ
...-
TIeMpo'
10
1IeMpo1
Tt
TIHIpoZ
12
1I8111J103
1S
TIempo 4
T4
1HtI
MlJJtj~
PoIencial
meo
Hanna HI
Redox
991003;
SondaHl
1297
Labolatorio
M.O.T.
Resolucin
ti' 3411
Labolatorio
Granulomelrfl
Resolucin
ti'
3411
Labolatorio
Fauna
Resolucin
N" 3411
Tabla ND 136: Parmetros analizados, fecha de monitoreo y entidad que realiz los ensayos.
Figura
Enero 2010
en el tubo de muestreo.
Enero 2010
Figura N' 139: Procedimiento para la toma de agua para anlisis qulmico.
Figura N' 140: Procedimiento para la medicin de oxigeno disuelto en los primeros centfmetros del
sedimento.
Enero 2010
Y Temperatura en el sedimento.
Enero 2010
2.3.2.2. Resultados
Caracterizacin del sedimento
El sedimento se caracteriz por ser extremadamente fangoso (Figura N 144a), con una capa superficial
oscura que indica probablemente un sedimento reducido. Esta caracterlstica fangosa es normal en un
lago. En el corer (Figura N 144b), se puede apreciar con ms detalle la naturaleza fangosa del
sedimento, donde adems se aprecia al menos tres niveles diferenciados por color (nmeros 1, 2 Y 3),
originado por la composicin del sedimento y asociado a distinto origen geolgico o a distintos estados
de descomposicin producto de alimento y fecas depositados en el fondo, asociado a estados de
oxidacin diferentes .
. '. b)
.a)
. : : .
Como se puede apreciar el tamao medio de las partlculas del sedimento corresponde a la fraccin de
fango. No se encuentran diferencias entre los resultados de los estadlsticos sedimentarios en el tiempo
TO y el T4, lo que indica que la composicin del sedimento es constante en el tiempo, al menos en el
periodo que dur el estudio.
Enero 2010
61.1
Tabla
,.........
l'
TO
9,07
2,32
T1
8,06
245
T2
8,14
+2,46
T3
8,14
2,76
T4
7,38
1,81
En las estaciones sometidas al tratamiento con las unidades biorremediadoras, el sedimento disminuye
la MOT a una tasa que oscila entre un 5,81 % Y un 14,29. Las mayores tasas se detectan en las
primeras dos semanas de seguimiento (T1 y T2). Entre el monitoreo inicial y el primer monitoreo de
Enero 2010
seguimiento, la tasa de disminucin promedio es de un 7,36 %, tasa que es mejorada hacia el ltimo
seguimiento (T4), donde luego de casi un mes de tratamiento, llega a un 14,29 %. El sector de
tratamiento disminuye en promedio la MOT en un 8,48% y el sector de referencia lo hace en un 6,93%.
En los siguientes diagramas fIO 148 Y 149 se observa la diferencia en la distribucin espacial de la
materia orgnica entre la campana a tiempo O (antes de la implantacin del producto) y la ltima
campana (despus de un mes de tratamiento).
12~
11~
10~
Dlagtama fr 148:
distribucin
espacial MOr
tiempo O.
9%
8%
7~
8'110
T1a
R.5
-l
12~
11~
10~
T14
9%
8%
11M
7%
8~
5~
4~
Caracterizacin
del potencial
Enero 2010
redox (Eh)
La Tabla N o 150 y la Figura N 151 presentan los resultados de los valores promedio de Eh para cada
uno de los monitoreos entre el tiempo TO y el T4.
Los resultados indican que posterior a la instalacin de las unidades biorremediadoras, en las estaciones
de tratamiento el valor promedio de Eh se incrementa desde 100 46 mV (tiempo TO) hasta 166 84
mV (tiempo T1). A partir del tiempo T1 hasta el tiempo T3, el incremento del valor promedio de Eh es
menor, incrementndose de 166 84 mV (tiempo 1) hasta 178 34 mV (tiempo T3). Del tiempo T3 hasta
el tiempo T4, existe un descenso importante del valor promedio de EH, desde un valor de 178 34 mV
(tiempo T3) hasta 122 29 mV (tiempo T4).
Tabla NO 150: Promedios de Eh
Figura N
a travs
Referencia (nM
22
47
59
57
17
100
166
170
178
122
130
143
148
146
112
Referencia
46
84
59
34
29
---Tratamiento
178
170
166
170
~
o.u
ntoTrlM
190
:;..
del tiempo
148
lijO
130
110
90
70
50
TO
T2
T1
Perodo
T3
T4
Enero 2010
Los resultados indican que el sector noreste del modulo de cultivo es el que mayor cantidad de cambio
experiment. Esta rea, conforme avanza el seguimiento, restringe slo al sector ms noreste de las
jaulas.
Caracterizacin
Enero 2010
Los resultados del cambio promedio que experimenta el oxigeno disuelto (00) en los primeros
centrmetros de la columna de agua se presentan en la Tabla N 152 yen la Figura nO 153.
Los resultados indican que al inicio de la experiencia (tiempo TO), no existen diferencias significativas
entre el contenido de 00 en los primeros centlmetros de la columna de agua del sector de referencia y el
que seria sometido al tratamiento. Al tiempo TO, el promedio de 00 en el sector referencia es de 5,97
0,63 mg/L, mientras que el sector tratamiento el promedio es levemente inferior de 5,91 1,52 mglL
Al tiempo T4, se observan cambios sustanciales en el contenido de 00 en los primeros declmetros de la
columna de agua. En el sector de referencia se obtiene un promedio de 7,04 0,78 mg/L, mientras que
en el sector de tratamiento se obtiene un promedio de 7,38 0,80 mglL, experimentndose
una
diferencia significativa entre el incremento de las estaciones de referencias y las de tratamiento.
Tabla N 152: Promedios de OD entre el tiempo TOy el T4.
Re"fttncla (mmIL)
Periodo de Tiempo
TO
T4
Tratamiento (qIL)
5,97
O,63
5,91
1,52
7,04
O,78
7,38
O,80
---+--- Relerene"
-e__ Tr~
',5
8.0
7,5
7,38
~
!. 7.0
o
o
6,5
6,0
'.o'
',5
10
Figura
Como en ambos sectores existen cambios, estos pudiesen responder a un proceso naturales o bien a
un efecto ampliado de las unidades biorremediadoras, es decir, presentarlan un rea de accin mayor a
la prevista (15 m). Considerando a las corrientes como variables, es probable que esta ltima hiptesis
sea la ms acertada.
Enero 2010
Macrofauna bentnica
En el sector de tratamiento, se colectaron 4 especies, de las cuales Oligochaeta n.d. fue dominante en
el tiempo TO y T4 tanto para la abundancia como para la biomasa. En cuanto a los promedios de
abundancia y biomasa del sector tratamiento (Figura NO 154) la mayor abundancia promedio
corresponde a Oligochaeta n.d., pero la biomasa promedio se atribuye a Pisidium sp.
250
1,20
-Biomasa
-o- Abundancia
200
203
1,008
0,975
1,00
0,90
'":"
"C
e
;:.
0,60
ni
u
e
ni
100
3
1
U!
liQ
....
0,40
"C
::1
oC
oC(
o
Gl
134
150
50
0,20
Pisidium sp.
n.d.
ro
H;rUdinea n.d.
20
-1
Oligochaeta
n.d.
0,00
Pisidium sp.
T1
A pesar de las diferencias detectadas entre el monitoreo del tiempo TO y T4, el anlisis estadlstico de los
resultados de macrofauna indica que no existen cambios significativos en la estructura comunitaria entre
antes (TO) y despuS (T4) de aplicar las unidades biorremediadoras.
Enero 2010
2.3.2.3. Conclusiones
El anlisis de los parmetros ambientales monitoreados bajo las jaulas del centro en lago, ha detectado
que posterior a la siembra de unidades biorremediadoras, el bentos experimenta cambios atribuidos al
efecto biorremediador. Los resultados obtenidos sugieren que desde un punto de vista ambiental y
normativo, es favorable el uso de unidades biorremediadoras para ser aplicadas a fondos blandos de
lagos sometidos a la presin del enriquecimiento orgnico producto de la actividad aculcola, puesto que
variables utilizadas por la autoridad para la Gestin Ambiental, y que en la actualidad son exigidas por
las normas de acuicultura nacional, tales como oxigeno disuelto, potencial redox, materia orgnica y
macrofauna bentnica, experimentan una respuesta positiva y beneficiosa desde perspectiva ecolgica,
lo cual permite la recuperacin del sedimento bajo las jaulas de un centro de cultivo aculcola.
Los resultados indican que en lago, la respuesta del bentos a las unidades biorremediadoras es rpida
y significativa, generando cambios en variables ambientales como redox, oxigeno, materia orgnica y
macrofauna, cuyo efecto tiende a perderse con
el tiempo. Esta corta respuesta probablemente sea
consecuencia del alto contenido de material orgnico presente en el sedimento, caracteristica propia de
los lagos. Este tipo de ambiente, se caracterizan por ser reas de depositacin, ricas en materia orgnica
en los primeros centmetros del sedimento, variable directamente relacionada con el consumo de
oxigeno, proceso que modifica el potencial redox y genera cambios sustanciales en la estructura
comunitaria de macroinvertebrados. En un lago, el porcentaje de materia orgnica suele alcanzar y
superar el 15% del sedimento superficial y estas caractersticas pueden ser la causa del corto efecto de
las unidades biorremediadoras. Esto sugiere que la concentracin de unidades biorremediadoras a
utilizar en el futuro pueda ser mayor.
Se sugiere que el uso de las unidades biorremediadoras en una dosis ms alta que el usado en el
presente estudio o bien, de manera dosificada por un perodo de tiempo mayor, cuya duracin
depender de caractersticas propias de cada lugar. De acuerdo a los resultados, esta ltima opcin
podrla ser la mejor, puesto que los resultados indican que pasado una par de semanas el efecto de
las unidades biorremediadoras tiende a perder el efecto sobre algunas variables. Dada la gran
carga orgnica de origen antrpico que suele existir bajo las balsas jaulas, es importante lograr una
disminucin significativa del enriquecimiento orgnico y que perdure en el tiempo, y se acople y
coayude a los procesos biogeoqulmicos naturalmente en el sedimento de cada centro de cultivo.
ACTIVIDAD
Enero 2010
Objetivo
Establecer la vida til de las tabletas prototipo fabricadas.
Descripcin
Se sometieron a pruebas de vida til para determinar su resistencia a:
2.4.1. PRUEBAS A
Temperatura
Humedad
Tiempo
ra VARIABLE
Para estas pruebas se someti una tableta a cuatro temperaturas diferentes (4 e, 15 e, 30 e y 40 C).
Para ello, sta fue dividida en cuatro porciones, las cuales se sometieron a distintas condiciones y se
registr el comportamiento.
El parmetro de control, es el nmero de clulas por mL al resuspender
estril.
Se mide estabilidad del comprimido, cualitativamente, describiendo el nmero de partes en que pudo
fragmentarse por efecto de la temperatura y cuantitativamente, pesando cada una de las partes.
Los resultados obtenidos
siguiente tabla N' 155.
en la
Temperatura
C
Masa
fragmento
(g)
Conc.celular
cellmL Ola 1
(tableta
completa)
26,2
4,51 x 109
Fragmento
2
3
4
15
30
40
225
24,7
26,6
451 x 10
4,51 x 10
4,51 x 10
N" de
fragmentos
despus
prueba
Conc.
Cellular
ora 7
4,34
3,5
2,5
9,2
X
X
X
109
9
Masa (g)
26,2
22,4
24,7
26,5
10
10
10
Los resultados indican que bajo ninguna de las condiciones de temperatura estudiadas, el producto
presenta mayores alteraciones. Sin embargo, se observa una diferencia relevante respecto a la
concentracin de clulas, en la muestra sometida a mayor temperatura.
Enero 2010
VARIABLE
Para estas pruebas se someti una tableta a cuatro rangos de humedad distintas. Para ello se dividi la
tableta en cuatro porciones, las cuales fueron sometidas a estas humedades.
El parmetro de control es el nmero de clulas por mL que se obtiene al resuspender una porcin en
agua destilada estril y la estabilidad del comprimido de manera cualitativa, describiendo el nmero de
partes en que pudo fragmentarse por efecto de la humedad y cuantitativamente, pesando cada una de
las partes.
Las muestras son sometidas durante 7 dlas a las siguientes humedades:
20 %
40%
60%
80%
definidas,
Humedad
20
40
para pruebas de
en
la
Fragmento
en una cmara
Masa
fragmento
(g)
Conc.celul
ar cellmL
Da 1
(tableta
completa)
Conc.
Cellular
Dia7
109
28,1
3,80 x 109
25,2
3,80
8,5
6,5 x 1(f
109
60
22,4
3,80 x 10S
80
24,3
3,80 x 109
3,6
2,8 x 10S
x 10S
N de
fragmento
s despus
Masa (g)
prueba
1
28,0
2
6
24,8
20,4
Indetenn inado
18,3
De acuerdo a los resultados puede concluirse, que las mejores condiciones de mantencin son a
humedad menor al 20 %. Mayor humedad cambia las condiciones
originales del producto en cuanto a
compactacin, y el nmero de clulas al final de la prueba disminuye mientras ms humedad existe.
Probablemente, debido a que las clulas se activan con la humedad, pero no cuentan con los nutrientes
necesarios para su crecimiento en la tableta.
Enero 2010
Da
Masa
Tableta (g)
102,2
100,1
100,1
98,7
98,5
98
97,7
97,5
Conc.celular
CellmL Ola 1
(tableta
completa)
Conc.
Celular
CellmL da
30
4,20 x 10
3,8 x 10
a tiempo variable
De acuerdo a los resultados observados, se puede concluir que la tableta puede mantener
condiciones, al conservarlas a una temperatura y humedad adecuadas, por al menos 60 das.
sus
Enero 2010
ETAPAS
Etapa 3 :
Estudio de
ACTIVIDADES
INTELECTUAL
nov.oS
dic.oS
ene.o9
feb.o9
mar.o9
abr.o9
1615
1616
1617
1611
1619
1620
3.4: Seminario y
pubicaciores
1621
DEL PRODUCTO
1622
jul.o9
ago.o9
1623
lE 24
ACTIVIDAD.3.1.
DESARROLLO
Enero 2010
Este plan de negocio implic el desarrollo de todo un plan de marketing, cuyos principales contenidos
son:
COBERTURA
DE MERCADO
X REGiN
XI REGiN
DISTRIBUIDORES,
para la:
X Regin
XI Regin
HERRAMIENTAS
Folletos y manuales
Incentivos al vendedor
"'-r-.~-
- --
Incentivos vendedores
Charlas-seminarios
Enero 2010
y lanzamiento producto
DEFINICIN
MERCADO
CLIENTES
ACnJALES
VENTA
CLIENTES
NUEVOS
CARTERA
CLIENTE
INF O Rl\.fAC ION
GESTION
ANALISISDE
RESULTADOS
PREPARACIN
DEPRODUCTO~----~
ARGENTINA
;"IPORTAcr:-,
FACTURACIOl'\
ENTREGA
COBRA"lZA
ASISTENCIA
COMERCIAL
Enero 2010
POST-VENTA
-1 E-MAIUNG
~I----~
RECLAMOS
INFORMACIN
CONSULTAS
INFORMACIN
HELPDESK
L....--------I
CONTACT
CENTER
I TELEMARKETING I
1-----1
yWEB
3.2. ESTABLECER
PARTICIPACIN
LOGISTICA
RESPUESTAS
ACTIVIDAD
H PEDIDOS
INVERSIN
PAGO
COBRANZA
SEGUIMIENTO
Y COSTOS DE PRODUCCIN
Para el desarrollo de esta actividad se contrataron los servicios de Asesora de la empresa Tecnovax,
empresa especializada en procesos de fermentacin biolgicos a nivel industrial.
Se realizaron estudios de Investigacin y Desarrollo con nuestro principio activo fabricado en la planta
piloto, con el objetivo de disear e implementar un sistema de produccin industrial de los
microorganismos constituyentes de producto biorremediador.
ACTIVIDAD
3.3. SEMINARIOS
Enero 2010
Y PUBLICACIONES
3.3.1. SEMINARIO
Realizado en Puerto Montt el da 1 de Diciembre del 2009. A ste asistieron representantes de las
diferentes empresas salmoneras pertenecientes al rea de medio ambiente, del rea de salud, de
I+D ... asi como representantes de Semapesca, SISS ....
La exposicin fue realizada por:
3.3.2. PUBLICACIONES
~ REVISTA VIS ION ACUICOLA
En la siguiente figura ~
Enero 2010
._III
oI1SA
.EI.-- __ ..._-quo __
EI"",yocIO",,*,_"/I(I01Odo"""'CIoolIIdoCodoy_.fao
xx __
~_
pItJIfCd/lndol
.--."-.
-,,--
~~~Ioo~-~::::;~~"':=
_doI,.,.,.,.bs_
IIIImiIl'MltlelfI'IettIIt)
hIemIt:IOnIIl'IC~
..::iId:sallR:lusnldel."oo,.
1I.,bftm. . ~pIIiJ
DCI05for11b.p::r!oOUlno""
~
elB"5"
.......
""",,~-..pn:a".,."Seoa.alOl.fI~
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fI'IiIrJ'ICII,la::usns.
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ur.ando ast JI
T'1!tdlrWlIAdt:Trnt:#dB\a
SJaMooIIin di! Pesa ~-.IJSO
--y.
-"......,..'"""'1:IC)eI'me!"Uf,,~'*
Iint*fIlM'lflEllflllWotellll
rIo.~~""dIJj
p1IdU;iIpnu 2
--,
_
..-....
-"-"'_.
........-. '._~11'8"
-""FINC--..
GcrtnI!zWcll6bfS.llldosOt
8~c:o'ttIa"'lN"
aae.eIIf!'e'ItIIranlesdt~
_50,
__
.....
_"""_iala
lI'tIIzavItiIIIOI~
OemiCIcItepeM'lt/eo::nf"lI
~.IoOJlll'lCllpenrdll
. elteDO'f)r:.IdudC
~_~.tIiI
_"""""'
30
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1I1I
VICMi
Hac:fp:x:o U 011 10
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flpllSlNdCU"II
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RiardlillOeI!IIhtr
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ee lamr.IidId de 11
~1rI0We.
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}1>
REVISTA AQUA
Se est preparando el publirreportaje, el cual saldr publicado en dicha revista el mes de Marzo
2010 coincidiendo con la Feria Aqua Sur 2010, en la que se entregar a todos los asistentes un
ejemplar de la revista.
ACTIVIDAD
Enero 2010
Enero 2010
D. RESUMEN Y CONCLUSIONES
Se cumpli en cabalidad con todos los objetivos del proyecto, que a grandes rasgos son:
~
del producto
autctonas.
Adems la ventaja de que existe una mayor conciencia ambiental y exigencia social por preservar el
medio ambiente.
No existe una tecnologia inserta en el mercado, que aporte al impacto ambiental asociado al cultivo
del salmn.
Con esta nueva tecnologia se ayuda al cumplimiento de las normativas vigentes para la Acuicultura
que introducen mayores exigencias para operar.
Con esta tecnologla se permite la recuperacin de sitios a travs de un producto inocuo y autctono
y por ende, la permanencia de los centros en sus lugares, disminuyendo los costos que implica la
rotacin de centros.
a nivel social.
Ambiental
Tcnica
Enero 2010
Productiva
Econmica
Con este producto innovador se puede cumplir con el objetivo empresarial de crecimiento
manteniendo la armonla con el medio ambiente.
Enero 2010
E. BIBLIOGRAFA
Berg, H., Michlsen, P., Troell, M., Folke, C. & Kautsky, N. (1996). Managing
sustainability in tropical Lake Kariba, Zimbabwe. Ecological Economics, 18, 141-159.
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F.ANEXOS
1. INSTRUCTIVO
2. PROTOCOLO
3. OVO 1
Infonne tcnico
Anexos
Libros de compras
Libros de ventas
Filmacin planta piloto
4. OVO 2- Filmaci6n submarina LAGO
5. OVO 3- Filmacin submarina MAR
6. CARTA GANTT COMPLETA
Enero 2010
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