30-6-2016

VIROLOGIA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA
Y ZOOTECNIA

Carlos Andres Heredia Vargas

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

INMUNODIFUSION EN GEL DE AGAR

INTRODUCCION
Cuando un anticuerpo es puesto en contacto con el antgeno correspondiente, se forman complejos
antgeno-anticuerpo que se insolubilizan en su mayor parte, dando lugar a una reaccin de
precipitacin.
Los geles utilizados como soporte tienen como base pectina, alginatos, poliacrilamida e incluso pueden
utilizarse tiras de acetato de celulosa gelatinizado. Los precipitados que se originan se visualizan como
bandas, que permanecern estables mientras un mayor flujo de molculas de alguno de los reactivos
empleados no provoque su redisolucin.
Se utiliza normalmente el mtodo de doble difusin. Consiste en enfrentar en pequeas perforaciones
efectuadas en el agar, las soluciones de antgeno y anticuerpo. Al difundir y ponerse en contacto,
producirn una banda de precipitacin slo si se encuentran en concentraciones ptimas. Si sta
concentracin es la que corresponde a la zona de equivalencia de la banda de precipitacin estar
situada aproximadamente en la distancia media que separa los reservorios. Cuando hay exceso de
antgeno o anticuerpo, la banda estar ms prxima al pocillo del anticuerpo o del antgeno,
respectivamente.
Este sistema permite identificar las bandas de precipitacin mediante el empleo simultneo de
antgenos y anticuerpos conocidos.
Se pueden observar tres tipos de reacciones:
a. Reaccin de identidad: los dos sistemas difunden en una nica banda de precipitacin.
b. Reaccin de no identidad: cada sistema reacciona independientemente, originando bandas de
precipitacin que se cruzan.
c. Reaccin de identidad parcial: Se produce cuando uno de los antgenos tiene menos de un
componente y es capaz de dar una reaccin cruzada con un anticuerpo elaborado contra un
antgeno ms simple. En este caso las bandas de ambos sistemas se unen y funden
parcialmente en una banda, apareciendo una prolongacin. Esto indica que en este antgeno
hay componentes antignicos no compartidos.

Ventajas
Este mtodo, que debido a su sencillez, se puede realizar en cualquier laboratorio, ha sido utilizado
prcticamente en todas las virosis, como mtodo de diagnstico serolgico. Debido a su limitante, la
baja sensibilidad, ha sido desplazado por otras tcnicas.
En VIROLOGA VETERINARIA se lo utiliza en la actualidad para identificar reactores para las siguientes
infecciones: Influencia aviar, Fiebre aftosa, Leucosis Bovina Enzotica, Lengua Azul, Anemia Infecciosa
Equina, Enfermedad de Gumboro, Bronquitis Infecciosa.
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TECNICA DE INMUNODIFUSION EN AGAR PARA LEUCOSIS BOVINA

ENZOOTICA

Materiales
a)
b)
c)
d)

Agar: Buffer Tris 0,05 M PH 8, CINa 8,5%, Agar Noble 0,85%.

Antgeno y antisuero control.
Sueros problema.
Otros:
Portaobjetos
Pipetas
Cmara hmeda.

Mtodo
a. Preparacin del agar:
Disolver a Bao Mara hasta que se vea transparente. Colocar 3,5ml. Sobre un portaobjeto limpio y
desengrasado. Dejar enfriar en un ambiente libre de polvo o tapado hasta que solidifique bien. Una
vez solidificado conservar tapado y a 4C hasta su uso. Perforar usando el sacabocado convencional
que indique el kit, de 7 bocas (una central y 6 perifricas). Extraer el agar de los pocillos con bomba de
vaco.

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b. Siembra
Colocar el suero positivo de referencia en 3 de los pocillos perifricos en forma alternada. Colocar
luego los sueros problema en los orificios restantes. Llenar los pocillos hasta la superficie, sin dejar
menisco (aproximadamente 25 ul.).
Colocar el antgeno en el pocillo central de la misma manera.
Incubar a temperatura ambiente (20 - 25), en cmara hmeda durante 48 horas.

1.

Perforacin del medio solido

2.

Colocacin de sueros

c. Interpretacin de resultados
Usar una fuente de iluminacin que provea y que incida en forma oblicua al
plano inferior de la placa.

Negativo (reaccin de no identidad): La lnea control contina hasta el

pocillo del suero problema.
Positivo (reaccin de identidad): La lnea control se une en forma
continua con la lnea producida por el suero problema.
Inespecfico: La lnea del suero problema se cruza con la lnea control.
Positivo o dbil: La lnea control se curva ligeramente pero no alcanza a
formar una lnea completa entre el suero problema y el antgeno.

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