ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

INTRODUCCIN
La centrifugacin es un mtodo por el cual se pueden separar slidos de lquidos de diferente densidad por
medio de una fuerza giratoria. La fuerza centrfuga es provista por una mquina llamada centrifugadora, la cual
imprime a la mezcla un movimiento de rotacin que origina una fuerza que produce la sedimentacin de los
slidos o de las partculas de mayor densidad.
Los componentes ms densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de rotacin de la centrfuga, mientras que
los componentes menos densos de la mezcla se desplazan hacia el eje de rotacin. De esta manera los qumicos y
bilogos pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de ensayo para producir una
precipitacin del sedimento en la base del tubo de ensayo de manera ms rpida y completa.

OBJETIVO DE LA PRCTICA.
Manejar la centrifuga de acuerdo con sus especificaciones tcnicas para la separacin de
mezclas en un anlisis determinado.

GENERALIDADES
Funcin de la centrifugacin.
El objetivo de la centrifugacin es separar slidos insolubles (de partculas muy pequeas difciles de
sedimentar) de un lquido. Para ello, se aplica un fuerte campo centrfugo, con lo cual las partculas tendern
a desplazarse a travs del medio en el que se encuentren con la aceleracin = velocidad angular x radio

Tipos de centrifugacin
Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las molculas. Esta
diferencia debe ser grande para que sea
observada al centrifugar. Las partculas que
posean

densidades

similares

sedimentarn

juntas. Este mtodo es inespecfico, por lo que

se usa como centrifugacin preparativa para
separar

componentes en la

mezcla (por

ejemplo, para separar mitocondrias de ncleos

y membrana) pero no es til para separar
molculas.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de sedimentacin se separan al

usar medios de diferente densidad. Se usa para la separacin de ADN con mucha frecuencia.

Centrifugacin zonal: Las partculas se separan por la diferencia en la velocidad de

sedimentacin a causa de la diferencia de masa de cada una. La muestra se coloca encima de un
gradiente de densidad preformado. Por la fuerza centrfuga las partculas sedimentan a distinta
velocidad a travs del gradiente de densidad segn su masa. Se debe tener en cuenta el tiempo de
centrifugacin ya que si se excede, todas las molculas podran sedimentar en el fondo del tubo
de ensayo.
Ultracentrifugacin: Permite estudiar las caractersticas de sedimentacin de estructuras
subcelulares (lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomolculas. Utiliza rotores (fijos o de
columpio) y sistemas de monitoreo. Existen diferentes maneras de monitorear la sedimentacin
de

las

partculas

en

la

ultracentrifugacin,

el

ms

comn

de

ellos

mediante

luz ultravioleta o interferones.

Equipos para centrifugacin

La centrifugacin en el laboratorio se realiza por medio de un aparato llamado centrfuga, en el cual
se colocan tubos de ensayo que contienen la mezcla; la centrfuga gira con tal velocidad que separa
el slido y lo deposita en el fondo del tubo. Luego se efecta una filtracin o una decantacin. Este
procedimiento, es muy til cuando el slido que est disuelto en el lquido es muy fino y no
sedimenta.

Tipos de centrifugacin
Centrifugacin diferencial: Se basa en la diferencia en la densidad de las molculas. Esta diferencia
debe ser grande para que sea observada al centrifugar. Las partculas que posean densidades
similares a la del medio sedimentarn juntas. Este mtodo es inespecfico, por lo que se usa como
centrifugacin preparativa para separar componentes en la mezcla (por ejemplo, para separar
mitocondrias de ncleos y membrana)pero no es til para separar molculas.
Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de sedimentacin se separan al usar
medios de diferente densidad. Se usa para la separacin de ADN con mucha frecuencia.

ANDRS ROMERO NAVARRO.

PRCTICA 4

Centrifugacin zonal: Las partculas a separar se separan por la diferencia en la velocidad de

sedimentacin a causa de la diferencia de masa de cada una. La muestra se coloca encima de un
gradiente de densidad preformado. Por la fuerza centrfuga las partculas sedimentan a distinta
velocidad a traves del gradiente de densidad segn su masa. Se debe tener en cuenta el tiempo de
centrifugacin ya que si se excede, todas las molculas
podran sedimentar en el fondo del tubo de ensayo.
Ultracentrifugacin: Permite estudiar las caractersticas de
sedimentacin de estructuras subcelulares (lisosomas,
ribosomas y microsomas) y biomolculas. Utiliza rotores
(fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. Existen
diferentes maneras de monitorear la sede las partculas en
la ultracentrifugacin, el ms comn de ellos mediante luz
Uerfresones.

TIPOS DE CENTRIFUGA
Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de velocidades de giro:
Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo tamao y sin refrigeracin.
Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm. Son tiles para la separacin de partculas grandes
como clulas o precipitados de sales insolubles.
Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de
ms de 10.000 rpm, Los volmenes de trabajo son muy pequeos. Son tiles en el campo de la
biologa molecular.
Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas
y algunas tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con
el aire. Son tiles en la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin de
ribosomas, virus o macromolculas en general.
Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeracin i
de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos precisos de
propiedades de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas,
tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de sedimentacin (microsomas, virus,
macromolculas).

Centrifugacin diferencial
Es el proceso que tiene como resultado la obtencin de un sobrenadante y un material sedimentado.
Centrifugacin mediante un gradiente de densidades:
Este tipo de centrifugacin es un proceso mediante el cual las partculas se distribuyen en fracciones
de diferentes densidades de un fluido lquido. El mtodo es un poco ms elaborado que la

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

centrifugacin diferencial, no obstante presenta ventajas

que compensan el trabajo aadido. La tcnica permite la
separacin de varios o todos los componentes de la
muestra y la realizacin de medidas analticas. El mtodo
de gradiente de densidades implica la utilizacin de un
soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona
superior a la inferior. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa
molecular, de tal manera que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solucin resultante.
Como solutos se utilizan la sacarosa, polisacridos sintticos, derivados yodados del cido
benzoico, o sales de metales alcalinos pesados como el rubidio o el cesio, entre otros. La muestra se
deposita en la parte superior del gradiente como una fina banda y, tras centrifugar, la separacin de
los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas que pueden ser
separadas (o fraccionadas).
Hay dos variantes de este mtodo, la centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica:
Centrifugacin zonal

En la centrifugacin zonal la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de

densidades previamente formado. A causa de la fuerza centrfuga las partculas se mueven a
velocidades que dependen de la masa y sedimentan en diferentes zonas del gradiente. La densidad
mxima del gradiente no ha de exceder a la de las partculas a separar.
Centrifugacin isopcnica

La centrifugacin isopcnica separa les partculas en un gradiente de densidades en funcin de la

densidad de las mismas. Las partculas se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto donde
la densidad de stas i la del gradiente son idnticas (de aqu el nombre de isopcnico). En este
caso, es condicin fundamental que la densidad mxima del gradiente final ha de exceder siempre a
la densidad de las partculas. Por este motivo la sedimentacin final no se produce si se controlan
las condiciones de centrifugacin, ya que las partculas flotan sobre un "colchn" de material que
posee una densidad superior a la de stas. Esta tcnica se utiliza, por ejemplo, para separar

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

partculas similares en tamao pero de diferente densidad. En este sentido, la centrifugacin

isopcnica es un mtodo adecuado para separar cidos nucleicos o diferentes orgnulos celulares.

La centrifugacin se utiliza para separar partculas en suspensin en el

seno de un lquido o partculas en disolucin, siendo ste el caso donde se
encuentran ms aplicaciones. As, se utiliza habitualmente en biologa ya
que permite separar clulas, orgnulos subcelulares o macromolculas.

Centrifugadora

Una centrifugadora es una mquina que pone en rotacin una muestra para por fuerza centrfuga
acelerar la decantacin o la sedimentacin de sus componentes o fases (generalmente una slida y
una lquida), segn su densidad. Existen diversos tipos, comnmente para objetivos especficos.

Aplicaciones
Una aplicacin tpica consiste en acelerar el
proceso de sedimentacin, dividiendo el plasma
sanguneo y el suero sanguneoen un proceso
de anlisis de sangre.
Tambin se utiliza para determinar
el hematocrito mediante una toma de muestra capilar.
En este caso la mquina utilizada se
denomina Microcentrfuga.
Es muy usada en laboratorios de control de calidad y en fbricas que elaboran zumos a base
de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina, mediante separacin del zumo exprimido.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

Otra aplicacin ocurre en la elaboracin de aceite de oliva. En ella, una vez molidas y batidas
las aceitunas, se introducen en una centrifugadora horizontal, en la cual el aceite, que es la
fraccin menos pesada, se aparta del resto de componentes delfruto: agua, hueso, pulpa, etctera.
Una aplicacin importante es la separacin del uranio 235 del uranio 238.

Para cuantificar el grado de grasa o crema que contiene la leche. Las centrifugadoras utilizan
instrumentos denominadosbutirmetros, de los cuales existen diferentes tipos: para crema,
manteca, etctera.

El centrifugado es una sedimentacin acelerada, ya

que la aceleracin de la gravedad se sustituye por
la aceleracin centrfuga: ,

donde es

la velocidad

angularde giro de la centrifugadora y es la distancia

al eje de la centrifugadora. Puesto que la velocidad
mencionada puede ser de miles de revoluciones por
minuto, se alcanzan aceleraciones mucho mayores que
la intrnseca de la gravedad.
Adems de ser ms rpida que la sedimentacin, la centrifugacin permite separar componentes que
la mera sedimentacin no podra realizar, por ejemplo separar el uranio 235 del uranio 238.
Como la sedimentacin, al centrifugado lo rige la ley de Stokes, segn la cual las sedimentan ms
fcilmente cuanto mayores sean su dimetro y su peso especfico comparado con el del, y cuanto
menor sea su viscosidad. Es importante considerar que la funcin del fluido es esencial, pues sin su
viscosidad todas las partculas se precipitaran a la misma velocidad.

Tipos de centrifugadoras
Los aparatos en los que se lleva a cabo la centrifugacin son las centrifugadoras:
Contienen dos componentes esenciales:

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

1. Motor
1. Rotor (donde se coloca la muestra por centrifugar). Existen dos tipos de rotores:
Fijos. Los tubos se alojan con un ngulo fijo con respecto al eje de giro. Se usan para
volmenes grandes.
Basculantes. Los tubos se hallan dentro de carcasas colgantes, unidas al rotor con un
eje. Se mueven cuando el mecanismo centrifugador gira. Se usan para volmenes
pequeos y para separar partculas de coeficiente de sedimentacin igual o casi igual. El
mecanismo centrifugador est colocado en el interior de una cmara acorazada, a unos
4 C. Si no existiera esta cmara, al comenzar la centrifugacin, debido al rozamiento
con el aire, se incrementara la temperatura de la muestra y podra desnaturalizarse.
En una centrifugadora, las masas de las muestras deben estar compensadas entre s. En caso
contrario podra saltar por los aires. Para que no ocurra esto, hoy casi todas estas mquinas se
detienen si las masas no estn compensadas.

Existen dos grandes grupos de centrifugadoras:

Posibilitan obtencin de datos moleculares: masa
Analticas.

molecular, coeficiente de sedimentacin, etctera.

Son muy caras y escasas.

Preparativas.

Con ellas se aslan y purifican las muestras. Hay

de cuatro tipos

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

NOMBRE

DESCRIPCIN.
Alcanzan unas 5 000 revoluciones por
minuto (rpm). Se produce una
sedimentacin rpida. Con
las microcentrifugadoras, que llegan a

De mesa.

12 00015 000 rpm, se obtiene el

precipitado en menos tiempo.

Se utilizan para centrifugar volmenes de

cuatro a seis litros. Alcanzan hasta 6 000

De alta capacidad.

rpm. Son del tamao de una lavadora y

estn refrigeradas.

Son del mismo tamao que las de alta

De alta velocidad.

capacidad y llegan a 25 000 rpm.

Pueden alcanzar hasta 100 000 rpm.

Ultracentrifugadoras.

Tambin estn refrigeradas. Son capaces

de obtener virus.

Microcentrfuga
Microcentrfuga es una mquina centrfuga especializada utilizada en el laboratorio clnico. sta
pone en rotacin una muestra ms pequea para separar por fuerza rotatoria sus componentes
o fases (generalmente una slida y una lquida), en funcin de su densidad. Esta es de uso para
los tubos capilares.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

El tubo capilar consiste en un tubo de plstico transparente cerrado por su extremo inferior con un
tapn. Perpendicularmente al tubo de plstico y en su parte inferior, se perfora y se introduce
un tubo de vidrio de pequeo dimetro, que hace de capilar a travs del cual se descarga la columna
de fluido viscoso. Una regla colocada en su parte exterior o marcas sobre el tubo permiten medir la
altura de la columna de fluido en funcin de tiempo.

MATERIAL, EQUIPO, APARATOS A UTILIZAR.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

ACIDO CLORHIDRICO.
1 HUEVO
AGUA DESTILA
2 VASOS DE PRECIPITADO
11 TUBOS DE ENSAYE
1 GRADILLA
1 PIPETA
1 AGITADOR DE VIDRIO
1 PROBETA DE 25 ML
CENTRFUGA
GUANTES PROTECTORES.

PROCEDIMIENTO Y OBSERVACIONES.
Al igual que en prcticas anteriores, la realizacin de la presente lleva una relacin con los
conocimientos adquiridos en ejercicios y prcticas anteriores, pero el resultado ms grande que
se espera obtener es, conocer con cuales tipos de centrifugas se cuenta en el laboratorio, as
como cual es el proceso de funcionamiento de cada una de ellas, cuales son sus caractersticas y
que medidas de seguridad se deben de seguir para un uso correcto y as evitar cualquier tipo de
accidente.
LOS RESULTADOS OBTENIDOS FUERON LOS SIGUIENTES.

Como primer punto y con la ayuda de el

profesor de grupo, usando la campana de
extraccin

como medida de seguridad, el

profesor procedi a medir 1 ml de cido

clorhdrico concentrado al 97% y a depositarlo
en un vaso de precipitado de cada uno de los
equipos, el vaso de precipitado ya contena 100
ml de agua este paso se realizo con la ayuda de
la campana de extraccin debido a que el cido desprenda vapores que eran muy txicos y que
afectaban directamente a la salud de todos los presentes el HCL se midi con la ayuda de una pipeta
graduada, por lo cual el total de cido solo fue un aproximado a un ml recordando que el antes
mencionado fue tomado directamente del recipiente que lo contena. En el recipiente fue posible
observar cual era el grado de peligrosidad que presentaba, comprobando que era una sustancia
altamente corrosiva, adems observamos su composicin y el rombo de seguridad que mostraba el
grado de riesgo que se presentaba en cada uno de los 4 aspectos.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

Posteriormente en el mismo vaso que contena el

cido clorhdrico agregamos la yema y la clara de un
huevo

previamente

seleccionado,

agitamos

vigorosamente con ayuda de un agitar de vidrio por

aproximadamente 5 minutos hasta haber creado una mezcla homognea dejamos reposar por un
momento y comprobamos si en verdad se haba convertido en una mezcla homognea, de no ser as
volveramos a agitar por unos cuantos minutos ms para que no hubiera margen de error dentro del
procedimiento, la mezcla aumento a un volumen de aproximadamente 50 mililitro y la mezcla se
torno de un color amarillo plido no se distingua ninguno de sus componentes

Con ayuda de un plumn permanente procedimos a

marcar cada uno de los 10 tubos que bamos a usar,
con numeracin del 1 al 10 y a colocarlos en la
gradilla de hierro por parejas: el tubo 1 con el tubo 2
y as sucesivamente, comprobamos que ninguno de
ellos tuviera muestra de que haba sido previamente
etiquetado por ejemplo: restos de masquen o cinta de
algn otro tipo, adems de que los tubos por parejas deban de ser prcticamente del mismo tamao.

Con ayuda de

una probeta graduada

procedimos a medir volmenes iguales en

los 12 tubos de ensaye de la mezcla
previamente preparada, esto implico una
serie de errores constante, debido a que por
la pequea cantidad de sustancia a medir era
muy fcil confundirse por la graduacin que
nos marcaba una medida determinada, por lo
que llegaba a presentarse duda en nosotros si el volumen era en verdad igual en todos los tubos,
aunque esta fue la nica opcin que pudimos usar para medir los volmenes debido a que en la
pipeta la mezcla provocaba que se tapara debido a lo densa que se encontraba. Al final procuramos
que los volmenes fueran prcticamente iguales.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

Utilizamos dos tipos de centrifugas diferentes, una de ellas tena al menos 30 aos de antigedad y
la segunda era una centrifuga usada recientemente, algunas de las caractersticas de ambas eran las
siguientes:

La primera centrifuga utilizada, se encontraba

La segunda centrifuga utilizada era de un

fabricada de un metal demasiado pesado, no

modelo mucho ms reciente, con una capacidad

contaba con una pantalla digital en frente por lo

de 16 tubos de ensaye, es decir, tena una

que el tiempo y las revoluciones por minuto

capacidad menor que la anterior, estaba

deban ser ajustados con ayuda de dos perillas,

fabricada de un metal un poco ms ligero que la

esta centrifuga tena una capacidad de 24 tubos

anterior, adems contaba con una pantalla

de ensaye y una velocidad mxima de 1500

digital en donde se determinaban los minutos y

revoluciones por minuto, por ningn motivo se

las revoluciones por minuto, esta centrifuga no

deba de abrir la tapa en donde se colocaban los

alcanzaba velocidades superiores a 1500

tubos de ensaye mientras la centrifuga se

revoluciones por minuto, una de las cosas ms

encontraba girando, al haber terminado la

importantes que debemos recordar es que la

velocidad comenzaba a reducirse y una especie

centrifuga deba de estar perfectamente

de campana nos daba la seal de que el trabajo

nivelada, de lo contrario podra ocurrir un

haba terminado, esta centrifuga era la nica que

accidente con los tubos que se encontraban en

mostraba un diagrama de los paso a seguir para

su interior, la tapa en donde se encontraban los

hacer uso correcto de la misma.

tubos no deba de abrirse por ningn motivo.

Una de las cosas ms importantes que debemos

aplicar es que cada una de las parejas de tubos
deba de ser colocado en lado contrario a cada uno
es decir no podemos colocar una pareja en la
misma esquina porque si realizamos esto podra
ocurrir un accidente con los tubos y podan llegar a
romperse por la velocidad que alcanzaba la
centrifuga, de colocar solamente un tubo de ensaye
en la centrifuga era necesario colocar un segundo
con solamente agua que contuviera el mismo volumen que el primer tubo.

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

Este fue el resultado obtenido en la primera

centrifuga utilizada, como podemos observar,
la mezcla se torno de color prcticamente
similar al inicial y las dos sustancias no se
separaron esto se pudo deber a que las
velocidades alcanzadas por esta centrifuga no
son tan constantes por el modelo adems de que debi haber permanecido un mayor tiempo debido
a la velocidad alcanzada, dentro de esta centrifuga no ocurri ningn accidente todo transcurri con
normalidad.

Este fue el resultado obtenido en la segunda

centrifuga, podemos observar que la mezcla
se torno de un color mucho ms oscuro que el
inicial, adems en el fondo se poda observar
un precipitado incoloro, posiblemente se
trataba de una pequea muestra de cido
clorhdrico y agua que por las velocidades
constantes alcanzadas por la centrifuga se
separaron recordando que el cido clorhdrico y el agua eran incoloros aunque no inoloros en el
caso del cido, dentro del uso de la misma ocurrieron una serie de accidentes en donde se rompieron
4 tubos de ensaye debido a que la centrifuga no se encontraba sobre una superficie plana por lo que
debido a la velocidad alcanzada y al existir una desnivelacin en referencia a la pareja de tubos de
ensaye estos se rompieron.
NMERO DE TUBOS DE ENSAYE

VELOCIDAD Y TIEMPO REQUERIDOS

TUBOS 1 Y 2

500 RPM DURANTE 5 MINUTOS

TUBOS 3 Y 4

100 RPM DURANTE 5 MINUTOS

TUBOS 5 Y 6

1500 RMP DURANTE 5 MINUTOS

TUBOS 7 Y 8

200 RPM DURANTE 5 MINUTOS

TUBOS 9 Y 10

2500 RPM DURANTE 5 MINUTOS

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4

Una de las cosas ms importantes que aprendimos durante el desarrollo de la presente prctica, fue
el conocer y aprender cuales son las partes internas y externas que forman una centrifuga, adems
de todo esto, algo extra que se aplico por primera vez fue el usar la campana de extraccin en la
manipulacin de cido clorhdrico, debido a que se encontraba muy concentrado y poda desprender
vapores muy txicos se conoci cuales son las medidas y precauciones que se deben de seguir para
la utilizacin de las dos centrifugas que se encuentran en el laboratorio, adems se comprob
mediante prcticas experimentales cuales son las fallas resultantes de una mala centrifugacin en
donde nos quedo claro el tema a travs de 4 tubos de ensaye ocasionado por el desnivel al que se
encontraba cada par de tubos, se considero que para que no se suscitara ningn accidente, los dos
tubos deberan de tener el mismo nivel de sustancia y la compuerta no se deba de abrir por ningn
motivo, cuando se introduca un solo tubo, forzosamente se debera de introducir otro que contenga
agua.

LOGRO
RASGO

PERSONAL

EQUIPO

GRUPO

RESPONSABILIDAD

100%

90%

89%

ACTITUD

100%

99%

87%

CALIDAD

100%

95%

85%

DESEMPEO

100

90%

88%

Harrison, Roger G., Todd, Paul, Rudge, Scott R., Petrides D.P. Bioseparations Science and
Engineering. Oxford University Press, 2003.
Dishon, M., Weiss, G.H., Yphantis, D.A. Numerical Solutions of the Lamm Equation. I.
Numerical Procedure. Biopolymers, Vol. 4, 1966. pp. 449455.
Cao, W., Demeler B. Modeling Analytical Ultracentrifugation Experiments with an Adaptive
Space-Time Finite Element Solution for Multicomponent Reacting Systems. Biophysical
Journal, Vol. 95, 2008. pp. 5465.
Cole, J.L., Hansen, J.C. Analytical Ultracentrifugation as a Contemporary Biomolecular

ANDRS ROMERO NAVARRO

PRCTICA 4: MANEJA LA
CENTRIFUGA DE ACUERDO AL
MANUAL DE OPERACIN.

2108