UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
SEMESTRE 2016- I
I CICLO

SEMINARIOS DE BIOLOGA
MOLECULAR

PROFESOR COORDINADOR:
Mg. EDITH RODRIGUEZ QUISPE

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
CURSO DE BIOLOGA MOLECULAR
SEMINARIO # 1

ENLACES QUE GOBIERNAN LA MATERIA VIVA

Las actividades de las clulas se derivan directamente de la actividad de las
molculas que las constituyen. Es imposible entender las funciones de las clulas
sin un conocimiento adecuado de la estructura y las propiedades de los principales
tipos de molculas que forman parte de ellas.
Uno de los objetivos de este tema es suministrar la informacin esencial acerca de
los aspectos qumicos de la materia para poder comprender las bases de la vida.
Una breve exposicin de las bases atmicas y moleculares de los seres vivos resulta
una necesidad para poder comprender los siguientes niveles de organizacin de la
materia viva.
Las bacterias, las levaduras los hongos, los gatos, los perros, los monos, los
elefantes, en fin todos los seres vivos tienen una gran similitud en su composicin
elemental.
Si
se
analizan
las
membranas
de
todos
ellos
se
encontrarn molculas muy semejantes y hasta idnticas que son parte integrante
de las mismas, por solo citar un ejemplo. A continuacin se iniciar el estudio de los
aspectos elementales esenciales de la qumica que permitan comprender los
mecanismos moleculares de organizacin de los seres vivos: Entre los elementos
ms abundantes presentes en los seres vivos estn los tomos de carbono (C),
hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N), que llegan a representar ms del 99 %
de la composicin del organismo humano
Con tan solo esos cuatro bioelementos, existen biomolculas tales como
monosacridos, polisacridos, cidos orgnicos y cidos grasos, alcoholes, aminas,
triglicridos, colesterol y esteres del colesterol, adems de hormonas esteroides, la
mayora de los aminocidos (sin los dos azufrados), algunas protenas que estn
libres de aminocidos azufrados, y una infinidad de metabolitos intracelulares y
extracelulares.
La formacin de cidos nucleicos y sus precursores requiere de otro
bioelemento: el fsforo (P). El P forma parte de aproximadamente el 0,5% de los
restantes bioelementos destacados en la composicin de nuestro cuerpo
De todo lo anterior se puede destacar que los componentes orgnicos mayoritarios
de los seres vivos requieren de los elementos C, H, 0, N, S y P; para constituir los
lpidos, los glcidos o carbohidratos, las protenas y los cidos nucleicos, son
necesarios estos seis elementos qumicos. El resto de los elementos qumicos,
aunque pueden estar formando parte de algunas de esas molculas, presentan
destacadas funciones como iones en las clulas. El cloruro (Cl ), el potasio (K), el
sodio (Na), el calcio (Ca), el magnesio (Mg), etc, son componentes electrolticos de
importancia capital para la regulacin. del equilibrio hidro-mineral. No menos
importantes se presentan otros en tan nfimas cantidades que se les consideran
oligoelementos, ms adelante se encontrarn algunos ejemplos de su importancia
para
nuestro
organismo
.

La inadecuada ingestin en la dieta de algunos de los oligoelementos puede tener

serias consecuencias sobre la salud humana. La anemia (condicin en la cual la
sangre contiene menor concentracin de hemoglobina que la normal) microctica es
la ms comn de las anemias nutricionales y su causa es la falta de hierro. Tambin
la falta de cobre puede provocar este tipo de anemia. La deficiencia de zinc
ocasiona severos trastornos en la piel entre otros. Pero tambin los excesos
nutricionales en
Bioelementos son dainos a la salud. El fluoruro, un elemento tan renombrado para
proteger las caries dentales y que se utiliza como aditivo a las cremas dentales para
prevenir las caries, es causante de tina enfermedad dental que motea los dientes de
forma desagradable. La fluorosis dental es una condicin que es provocada por el
consumo excesivo de fluor durante el periodo de desarrollo dentario, desde el
nacimiento hasta los 6-8 aos de edad Se presenta una foto de una dentadura
afectada por fluorosis.
Concepto DE BIOMOLCULAS
Las biomolculas son las molculas orgnicas que forman parte de los seres vivos,
con diversos grados de complejidad, desde muy simples hasta muy complejas. Una
caracterstica esencial de las biomolculas orgnicas es su gran diversidad, a pesar
de tener es su composicin un nmero relativamente pequeo de elementos
qumicos (ms frecuentes C, H, 0, N, y otros dos en menor proporcin, el P y el S).
Estos elementos qumicos integran la mayora de los compuestos orgnicos al
unirse entre s mediante uniones que se estudiarn a continuacin.

LA COMBINACIN DE TOMOS Y LAS FUENTES DE ESTABILIDAD

A) EL ENLACE COVALENTE
Los tomos que constituyen una molcula se mantienen unidos por enlaces
covalentes. Este tipo de enlace se genera cuando os pares de tomos que se
unen comparten pares de electrones. Las biomolculas deben su estabilidad a los
enlaces covalentes que mantienen los tomos adyacentes unidos. Pero adems,
muchos de los procesos biolgicos que ocurren en la clula viva se producen por
ruptura
o
formacin
de
algunos
de
estos
enlaces
covalentes.
Los tomos de cada elemento qumico tienen un nmero de protones en el ncleo,
lo cual se corresponde con su nmero atmico, y un nmero equivalente de
electrones en la envoltura. Estos electrones ocupan los orbitales, que se
caracterizan por un estado energtico permitido, que se seala con un nmero, el
nmero cuntico principal, y con una letra (s, p, d) que corresponde al orbital.
En cada orbital pueden estar slo 2 electrones de spin opuesto. En el caso de!
tomo de carbono, que tiene nmero atmico 6, existen 6 electrones que deberan
ocupar esos orbitales con una distribucin 1s 2, 2s2p2.
Pero en el caso particular del C no ocurre as y se originan 4 orbitales hbridos entre
el 2s y los 2p, denominados sp3, que se dirigen hacia los vrtices de un tetraedro
Cada uno de estos orbitales sp 3 contiene ahora un electrn que puede ser
compartido por ejemplo con un orbital 1s de un tomo de hidrgeno, y formar el
metano CH4, mediante enlaces covalentes sencillos o simples, Asimismo, en el caso
del C se pueden hibridizar los orbitales 2s con slo dos de los 2p y dar lugar a un
orbital hbrido sp2.

El enlace covalente es un enlace fuerte, estable en medio acuoso. Un enlace C-C

simple, donde se comparten 2 electrones, uno por cada tomo de carbono, tiene una
energa de enlace de 85.kcal/mol (356 KJ/mol), lo que significa que una alta cantidad
de
energa
debe
ser
suministrada
para
romper
esa
unin.
Un enlace covalente doble, por ejemplo C=O, tiene una energa d 175 kcal/ mol
(732 Kj/mol). Entre los enlaces covalentes que se pueden presentar se destacan los
siguientes:
EnIace
H-H
C-H
C-C
C-O
C-N
O-H
N-H
C=O

Energa k/Imol
436
414
343
351
292
460
393
686

Como resultado de la formacin de enlaces covalentes entre los tomos surgen los
grupos funcionales que caracterizan a familias de sustancias. A continuacin se
estudiarn las agrupaciones atmicas ms frecuentes encontradas en las
biomolculas
y
que
se
denominan
grupos
funcionales
Los principales grupos funcionales:
Las biomlculas se caracterizan por presentar agrupaciones atmicas o grupos
funcionales, de los cuales dependen muchas de sus propiedades fisicoqumicas.
Entre estos grupos funcionales se pueden distinguir los que se muestran en la tabla
Principales grupos funcionales presentes en las biomolculas.
Grupo
funcional

Represent. Principales propiedades

Hidroxilo

-OH

Grupo funcional caracterstico de los alcoholes. En

forma abreviada R-OH. Puede aparecer en otras
biomolculas diferentes de los alcoholes.

C=O

Si la funcin carbonilo se encuentra

en un carbono primario es un aldehdo R-CHO; si en
carbono secundario (carbono unido a otros 2 carbonos)
el compuesto es una cetona (R-CO-R).

-COOH
.

Grupo que caracteriza a los cidos orgnicos. Este

grupo le confiere carcter cido a las biomolculas que
lo poseen al disociarse.
R-COOH <>R-COO-+H+

- NH2

Se comporta este grupo corno una base, aceptando con

facilidad H+ del medio. R-NH2 + H+<-> R-NH3+ Amida
-CONH2. El grupo hidroxilo de los cidos carboxlicos
es desplazado por un amino.

Carbonilo
.

Carboxilo

Amino

Sulfhdrilo

-SH

Se conoce tambin como tiol. Dos grupos sulfhidrilo

pueden reaccionar entre s para formar un enlace
disulfuro, frecuente en las protenas.

Agrupaciones atmicas derivadas. Los grupos funcionales son capaces de

reaccionar entre s y originar nuevas agrupaciones atmicas, las cuales tienen
mayor complejidad. Algunas biomolculas presentan estos tipos de agrupaciones:
_Hemiacetales. En la formacin de este enlace se produce una reorganizacin de
los tomos. A los hemiacetales (o hemicetales si el carbonilo era de una cetona)
pertenecen por ejemplo las formas cclicas de los monosacridos.
_Acetales. Se forman al reaccionar el hidroxilo de los hemiacetales (o. hemicetales)
y otro OH, con formacin de una molcula de agua. Tambin el hidroxilo de un
hemiacetal puede reaccionar con un amino (o imino) y formar un enlace N-acetal,
como es por ejemplo el enlace N-glicosdico que une a las bases nitrogenadas con
el azcar en el caso de los nucletidos y nuclesidos.
_Esteres. Los steres se forman al reaccionar un cido con un alcohol, con prdida
de una molcula de agua. Se analizarn dos tipos de steres por su importancia en
la
constitucin
de
algunas
biomolculas.
ster

carboxlico. Formado

entre

un

grupo

COOH

un

OH. :

ster fosfrico. Se forma al reaccionar un cido fosfrico con un alcohol.

Es posible que un ster fosfrico ya formado reaccione con otro grupo OH para
formar un enlace fosfodister, como es por ejemplo el que une a los nucletidos para
formar
las
molculas
de
los
cidos
nucleicos.
_Tioster. Un tioster se forman cuando reacciona un grupo carboxilo con un grup
sulfhidrilo SH. Algunas biomolculas con enlace tioster son compuestos muy
importantes en el metabolismo celular. Este enlace es tambin importante porque al
hidrolizarse libera gran cantidad de energa til para muchos procesos.
_Amidas. Se forman al reaccionar un grupo carboxilo (COOH) con un amino
(NH2). Este tipo de enlace qumico para formar esta agrupacin atmica es el que
permite la unin de los aminocidos para formar los pptidos y las protenas
_Anhdrido de cido. Un anhdrido de cido se forma cuando reaccionan cidos
que pueden ser iguales o diferentes, con prdida de una molcula de agua Los
anhdridos del cido fosfrico desempean un papel extraordinario en la
conservacin y liberacin de la energa qumica en la clula.
La multifuncionalidad resulta un hecho notable que en una misma biomolcula se
pueden encontrar varios grupos funcionales, en ocasiones el mismo tipo de grupo
funcional y otras veces grupos funcionales distintos. Ms adelante se ver cmo los
monosacridos, Los nucletidos, Los aminocidos y los cidos grasos presentan
este fenmeno de la multifuncionalidad. Esta propiedad de la mayora de las
biomolculas hace mucho ms diversa la existencia de la materia orgnica, as
como la forma en que muchas partes de ellas pue4en interactuar por medio de
atracciones o repulsiones. As por ejemplo un alcohol importante en el metabolismo
de los lpidos (un polialcohol) como es el. Glicerol o glicerina (propanotriol) presenta

tres

grupos

hidroxlos:

La molcula del aminocido glicina presenta dos grupos funcionales diferentes,

presentando la siguiente frmula molecular, en la que puede observarse la presencia
de un grupo amino y otro carboxilo:
Polaridad del enlace covalente. En las molculas formadas por tomos iguales
unidos a grupos similares los electrones se comparten de manera simtrica, pero en
molculas
cmo
el
H20,
con
tomos
que
poseen
diferente
electronegatividad, o en molculas con tomos iguales pero unidos a grupos
diferentes, El compartimiento del par electrnico es desigual y un tomo, el ms
electronegativo, atrae ms fuertemente el par electrnico que el otro tomo,
adquiriendo el primero una fraccin de carga negativa y el segundo positiva.
Un enlace de este tipo es polar, para distinguirlo del enlace, por ejemplo la molcula
de H2 que es apolar.
En el caso ms simple, una molcula formada por 2 tomos y un enlace polar, esa
molcula constituye un dipolo elctrico, con un momento dipolo u (u = q X 4 donde q
es la carga y d la distancia entre los centros de carga opuesta). A consecuencia del
momento dipolo las molculas tienden a orientarse en un campo elctrico y a
interactuar favorablemente unas con otras sin ambas son polares. Por el contrario
estas molculas no interactan bien con las apolares; Esa es la razn por ejemplo
de que el etanol, que es una sustancia. formada por molculas polares se disuelve
bien en agua que tambin es polar mientras que las grasas (triacilglicridos) que es
una sustancia apolar no. Una regla muy simple es que lo polar tiene afinidad por
lo polar y lo apolar por lo apolar.
Caractersticas compuestos covalentes.

B) LAS INTERACCIONES DBILES.

Entre las biomolculas se pueden establecer interacciones dbiles o fuerzas

covalentes que desempean un papel muy importante en numerosos e importantes
fenmenos que ocurren en las distintas formas de materia viva. Ejemplo de esto se
pueden encontrar en los procesos de reconocimiento molecular, en la morfoestructuracin de las macromolculas, en los proceso de flujo de la informacin
gentica, en la transmisin de seales entre las clulas y otras:
La interaccin eIectrosttica o unin salina. Esta interaccin se establece
entre tomos con carga elctrica. Si son de la misma carga se repelen y si son de
carga contraria se atraen. Muchas biomolculas poseen agrupaciones atmicas que
pueden ionizarse en el medio acuoso de la clula y adquirir carga positiva o
negativa, y es posible as que se establezcan interacciones electrostticas entre
partes de la misma biomolcula o entre biomolculas diferentes. La energa de este
tipo de interaccin est dada por la ley de Coulomb F= K ( q1*q2/r2)
Donde E es la energa, q1 y q2 son las cargas sobre los dos tomos, r la
distancia entre esos tomos, D la constante dielctrica del medio y k una constante
de
proporcionalidad. Como
la
constante
dielctrica
del
H2O es
muy elevada, tiene un valor de 80, la energa de la interaccin electrosttica de 2
tomos que estn a una distancia de 0.3 nm (3 ngstrom) es, aplicando esta
frmula, solamente de 1.4 kcal/mol (5.9 kJ/mol).
El puente de hidrgeno.-Aunque tambin es una interaccin dbil, el puente de
hidrgeno es crucial en el mantenimiento de la estructura espacial de
macromolculas como las protenas y el ADN. Esta interaccin adems es
responsable de muchas de las propiedades del H 20 como solvente. En realidad el
puente de hidrgeno tambin se establece por una interaccin electrosttica. En un
enlace covalente entre un tomo de H y otro muy electronegativo, como el O o el N,
los electrones no se comparten equitativamente y son ms atrados hacia el tomo
electronegativo. Se crea as una pequea carga negativa sobre el O 2 o el N, y una
pequea carga positiva sobre el H. Esta carga positiva pequea puede a su vez
interactuar con otro tomo electronegativo de otra molcula o de la misma molcula
y
as
formarse
el
puente
de
H.
De igual forma, esta interaccin es mucho ms dbil que un enlace covalente. La
energa de esta interaccin es de slo 1.3 kcal/mol (4.13 kJ/mol), comparada con
unas 100 kcal/mol aproximadamente del enlace covalente. Los puentes de
hidrgeno ms fuertes se establecen cuando los 3 tomos se encuentran en una
lnea recta. Tngase en cuenta que en una macromolcula como el ADN se
establecen
miles
de
estas
interacciones,
de
ah
su
importancia
como fuerza estabilizadora en sta y otras biomolculas.
Las interacciones de Van der Waals.-Denominadas as en honor del cientfico que
las descubri, las interacciones de Van der Waals se originan porque la distribucin
electrnica alrededor de los tomos vara con el tiempo. En cada instante la
distribucin electrnica alrededor de un tomo no es simtricamente perfecta y,
como los electrones tienen una pequea carga negativa, se puede originar alrededor
del tomo un pequeo dipolo elctrico y esta asimetra elctrica puede inducir en
tomos vecinos una asimetra complementaria, de tal manera entonces que los
tomos se atraen. La atraccin entre los dos tomos aumenta a medida que estos
se acercan, hasta una cierta distancia llamada distancia de Van der Waals, si se
acercan ms se genera entonces una fuerte repulsin entre esos tomos porque los
orbitales electrnicos se solapan. La energa asociada con esta interaccin es muy
pequea, entre 0.5 a 1.0 kcal/mol por par de tomos. Si las superficies de contacto
entre 2 biomolculas son extensas la fuerza neta de este tipo de interaccin puede
ser
significativa.

Las interacciones hidrofbicas .-Estas interacciones se producen cuando

molculas apolares se encuentran disueltas en un medio acuoso, es decir, rodeadas
de molculas polares como el H 2O. En esas condiciones las molculas apolares
tienden a agruparse entre s, separndose del H2O, cumplindose as la segunda ley
de la termodinmica, que establece que la entropa total de un sistema ms su
entorno siempre tiende a aumentar en los procesos espontneos. Al agregarse las
molculas apolares y separarse de las molculas de agua, estas ltimas adquieren
una mayor libertad de movimiento y un mayor desorden o entropa.
ENLACE IONICO
Las fuerzas de atraccin que mantienen juntos a los tomos en los compuestos son
visibles en los enlaces de tipo inico, siendo el resultado de la transferencia neta de
uno o ms electrones de un tomo o grupo de tomos a otro.
Es necesario que para que pueda darse un enlace inico uno se los tomos pueda
ceder electrones y por el contrario el otro pueda ganar electrones, es decir, se
produce la unin entre tomos que pasan a ser cationes y aniones. Este tipo de
enlace generalmente se produce entre un elemento metlico (electropositivo) y
elemento no metlico (electronegativo).
La existencia de enlaces inicos dar formacin a compuestos inicos.
Los iones al poseer cargas elctricas pueden:

poseer ms electrones que protones, estn cargados negativamente: son aniones.

tener menos electrones que protones, estan cargados positivamente: son catin.

IONES MONOATOMICOS

IONES POLIATOMICOS

CATIONES

ANIONES

ANIONES

Zn2+

Br-

NO2-

Mg2+

O2-

SO42-

K+

N3-

MnO4-

Ca2+

S2-

HPO42

Tabla. Iones monoatmicos y poliatmicos.

Caractersticas de compuestos inicos.

Fuente dateka.unad

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SEMINARIO # 4

TECNICAS EN BIOLOGIA MOLECULAR

La biologa Molecular es un rea de la biologa referida al proceso de la transcripcin del

gen para rendir el ARN, la traslacin del ARN en las protenas y el papel juego de esas
protenas en la funcin celular. Desde hacia 1960, los bilogos moleculares han
desarrollado mtodos para determinar, para aislar, y para manipular componentes
moleculares en clulas incluyendo la DNA, el ARN, y las protenas.

INTRODUCCIN
La estructura que conocemos hoy como ADN (cido desoxirribonucleico) fue descrita por Watson
y Crick en el ao 1953. Tras este hecho confluyeron ideas y nuevos enfoques experimentales que
condujeron a lo que ha sido denominado como dogma central de la gentica molecular, que
establece que lainformacin gentica fluye del ADN al ARN (cido ribonucleico) y de este a la
protena, y por tanto es el ADN el material que almacena la informacin gentica en unidades de
informacin hereditaria denominadas genes. An cuando este enunciado es cierto para la mayora
de los seres vivientes; se ha comprobado que en determinados virus la informacin gentica se
almacena en forma de ARN y esta puede ser transferida del ARN al ADN a travs de
un proceso de transcripcin inversa (Moreno, 1996).
Al igual que en las protenas, el ADN y el ARN estn compuestos por repeticiones de pequeos
bloques, pero con la diferencia de que en lugar de aminocidos, se trata de molculas ms
complejas conocidas como nucletidos. Los nucletidos, en el ARN, estn dispuestos en una sola
cadena resultante de la copia del ADN en forma complementaria; en cambio, en el ADN, los
nucletidos se sitan formando dos cadenas orientadas en direcciones opuestas y enrolladas
alrededor de un eje imaginario formando una doble hlice (Moreno, 1996).
El genoma es la informacin gentica con que cuentan los seres vivos, la cual est almacenada en
los genes y estos a su vez en los cromosomas. Los cromosomas estn compuestos por ADN y
un grupo de protenas llamadas histonas. El genoma humano contiene cerca de 3 billones de
nucletidos (pares de bases, pb) (National Human Genome Research Institute, 2004) presentes
en 46 cromosomas (22 autosomas y 2 cromosomas sexuales).
En las ltimas dcadas la tecnologa de recombinacin del ADN tambin conocida
como ingeniera gentica, o ms acertadamente recombinacin gentica in vitro, ha
revolucionado la Biologa. El campo de la salud es, uno de los ms beneficiados con el desarrollo
de esta tecnologa. Las investigaciones que se realizan en esta rea estn enfocadas a un
diagnstico oportuno de enfermedades, as como su posible tratamiento a travs de la terapia con
molculas recombinantes e introduccin de genes. Adems, la manipulacin de genes
proporciona una herramienta fundamental para la eliminacin futura de enfermedades mortales
para el hombre (Cerezo & Madrid, 1995). Por estas razones resulta til que el mdico de asistencia
est familiarizado con conceptos bsicos sobre biologa molecular, su aplicacin en
la investigacin biomdica, y en especial con sus posibles aplicaciones clnicas, conceptos estos
que aparecen cada vez con mayor frecuencia en toda la literatura biomdica, tanto bsica como
clnica.
Principios de clonacin molecular

La denominacin "ADN recombinante" se refiere a combinaciones muevas de ADN creadas entre

secuencias o fragmentos de esta molcula (los cuales son de inters por alguna razn) y molculas
de ADN bacteriano (o de otra clase) capaces de duplicarse indefinidamente en
el laboratorio (Freifelder, 1983). En este proceso, primero se obtiene un fragmento del ADN de
inters denominado inserto, el cual se une a otra molcula de ADN (generalmente de mayor
tamao) llamado vector. Posteriormente se lleva a cabo el proceso de clonacin molecular en s,
en el cual se introduce el ADN recombinante en una clula receptora y esta finalmente al

multiplicarse da lugar a nuevas clulas con similares caractersticas a ella; obtenindose de esta
manera lo que se denomina un clon. Por consiguiente un clon no es ms que un grupo grande de
clulas, molculas de ADN o bacterias que surge de una clula o molcula ancestral y son
idnticas a esta; y clonacin es el proceso que le da origen (Granner, 1992; Plata 1996).
Las clulas receptoras del ADN hbrido pueden ser tanto procariotas como eucariotas y el proceso
de introduccin del mismo se denomina transformacin para las primeras y transfeccin para las
segundas (Cerezo, 1995).
Para llevar a cabo la clonacin molecular se requiere lo siguiente:
a) Una fuente adecuada de ADN: Las fuentes ms importantes de ADN para clonacin son el
ADN genmico (cromosmico) que contiene los genes completos y lo que se conoce como ADN
complementario (ADNc) que se obtiene a partir del ARN mensajero (ARNm) bajo la accin de la
enzima transcriptasa reversa o transcriptasa inversa (Freifelder, 1983 & Plata, 1996). Esta enzima
es capaz de sintetizar ADN a partir del ARN el cual le sirve como molde. El empleo de una u otra
fuente depende de los objetivos que se persigan con el estudio a realizar.
b) Vectores de clonacin (ADN recombinante): Un vector de clonacin es una molcula
pequea de ADN que puede replicarse de manera autnoma en un husped (clulas bacterianas o
de levaduras), a partir de las cuales es posible aislarlo en forma pura para el anlisis. Los vectores
se utilizan para clonacin porque pueden seguir su desarrollo normal a pesar de que secuencias
adicionales de ADN sean incorporadas en su material gentico; se autorreplican utilizando la
maquinaria enzimtica de la clula husped, y en este proceso, no se mezclan con el ADN
genmico de la clula (Plata, 1996).
Debido a que los vectores de clonacin pueden generar un gran nmero de copias por clula, ya
que los huspedes bacterianos o de levaduras pueden crecer indefinidamente en el laboratorio, es
posible obtener grandes cantidades de secuencias del ADN de inters. Cierto nmero de vectores
se utiliza de modo comn para este propsito, cada uno con ventajas y limitaciones y dentro de
ellos tenemos:
Plsmidos: Son molculas circulares de ADN de doble cadena que se replican de modo
extracromosmico en bacterias, o menos comnmente en levaduras (Lehninger, 1993; Ministerio
de Educacin, 1981). En ellos se encuentran genes que le confieren al organismo que los
posee resistencia a algunos antibiticos, as como genes involucrados en la produccin de toxinas
y la degradacin de productos naturales (Stryer, 1995).
Bacterifagos: Son virus que infectan a las bacterias y estn constituidos, segn su clase, por un
ncleo de ADN o ARN y una cubierta proteica; algunos presentan una cola, y son incapaces de
replicarse autnomamente por lo que necesitan infectar a la clula para poder hacerlo. Dentro de
los fagos ms utilizados como vehculos moleculares de clonacin, se encuentran el lambda (l ) y
sus derivados (Cerezo, 1995; Freifelder, 1983; Granner, 1992; Moreno, 1996; Plata, 1996; Stryer,
1995).
Csmidos: Son bsicamente plsmidos que emplean la habilidad de las partculas infecciosas
del bacterifago l para "empaquetar" de manera eficiente grandes piezas lineales de ADN e
introducirlas en las clulas bacterianas. Estos vectores se reproducen de igual manera que los
plsmidos en las bacterias (Granner, 1992; Lehninger, 1993).
"Cromosomas artificiales" de levadura: Adems de los vectores anteriormente
mencionados, existe otro tipo que permite clonar hebras de ADN de gran tamao y que se
conocen como cromosomas artificiales de levadura (YAC, del ingls yeast artificial chromosome).
Este tipo de vector es capaz de replicarse en el husped Saccharomyces cerevisiae (levadura
comn usada en panadera) y tiene la estructura semejante a los cromosomas de levadura
normales (Plata, 1996).
c) Enzimas que permitan la escisin o corte en sitios especficos del fragmento de
ADN a clonar y su posterior fusin con el vector: Existe un grupo de enzimas
con funciones diferentes que tienen gran aplicacin en ingeniera gentica; de ellas ya se ha
mencionado a la transcriptasa inversa. Nos referiremos con ms detalle ahora a las endonucleasas

de restriccin o enzimas de restriccin y a la ADN ligasa como tiles herramientas en el proceso

de clonacin de genes.
Endonucleasas de restriccin: Las endonucleasas son enzimas que cortan al ADN en
secuencias especficas dentro de la molcula (contrario a las exonucleasas, que digieren a las
molculas de ADN por sus extremos) (Granner, 1992). Estas enzimas se encuentran en una
amplia variedad de especies bacterianas y su funcin biolgica consiste en reconocer y romper el
ADN ajeno que puede penetrar en la clula (por ejemplo, ADN procedente de bacterifagos)
(Lehninger, 1993). De esta forma estas endonucleasas restringen el funcionamiento de los fagos
en el interior de la bacteria, motivo por el cual originalmente se les llam enzimas de restriccin
(Granner). El ADN propio, sin embargo, no es digerido porque las bacterias cuentan con un
mecanismo que impide que esto ocurra. As, al conferir la naturaleza este sistema de defensa a las
bacterias, otorg tambin a los cientficos un arsenal de enzimas altamente especfico para
manipular el ADN (Granner; Lehninger; Merino & Gamba, 1996).
ADN ligasa: La ADN ligasa es una enzima que tiene la capacidad de formar enlaces fosfodister
en una cadena de ADN rota, pudiendo unir covalentemente ADNs de diferentes orgenes para
formar molculas hbridas. Existen diversos mtodos en los que se aprovecha la accin de esta
enzima para la unin del fragmento a clonar con el vector; la seleccin de uno u otro depende de
las caractersticas de los extremos de ambas molculas de ADN (Cerezo & Madrid, 1995).
d) Mtodos de transformacin o transfeccin celular: Una vez obtenido el ADN
recombinante, el prximo paso es introducirlo dentro de una clula husped que le ofrezca la
maquinaria necesaria para su autorreplicacin. Como no es objetivo de este trabajo explicar en
detalles cada uno de los mtodos que existen para estos fines, nos limitaremos slo a mencionar
algunos de los ms empleados que son: electroporacin, transfeccin mediada por calcio-fsforo o
DEAE-dextrn, empleo de polibreno, fusin de protoplastos, empleo de liposomas,
microinyeccin directa al ncleo, uso de virus (Cerezo & Madrid, 1995; Freifelder, 1983; Plata,
1996; Lehninger, 1993; Stryer, 1995), entre otros.
e) Mtodos para analizar los clones resultantes hasta la identificacin del que
contiene el gen de inters: Un importante paso en el proceso de clonacin es la identificacin
de aquel clon o clones que contienen el ADN recombinante. An en las mejores condiciones los
plsmidos se mantienen de forma estable slo en una minora de la poblacin bacteriana. Para
identificar estos transformantes se emplean varios mtodos, los cuales tambin solamente sern
mencionados. As tenemos los ensayos de hibridacin (Freifelder, 1983; Lehninger,
1993; Mercado & Gamba, 1997; Plata, 1996), los mtodos inmunolgicos (anticuerpos radiactivos,
inmunoprecipitacin) (Freifelder; Plata), el empleo de marcadores de seleccin (Freifelder ), etc.
Mtodos de anlisis de cidos nucleicos.
Hibridacin molecular.
La hibridacin molecular es uno de los pilares de la mayor parte de las metodologas que se
utilizan en el laboratorio de biologa molecular. Un grupo de estas tcnicas se ha diseado para
identificar determinadas secuencias en los cidos nucleicos.
La hibridacin se refiere al apareamiento especfico que ocurre entre cadenas de cidos nucleicos
con secuencias complementarias, proceso que es anlogo a la reaccin antgeno-anticuerpo, pero
con la diferencia de que en la hibridacin en lugar de anticuerpos se emplean las llamadas sondas
(Mercado & Gamba, 1997). Las sondas no son ms que fragmentos cortos de ADN o ARN
sintetizados in vitro y que se marcan con sustancias radiactivas fluorescentes o de otro tipo a fin
de hacer posible su posterior deteccin y de esta manera la identificacin de la secuencia de ADN
o ARN de inters (Cerezo & Madrid, 1995; Mercado & Gamba).
A continuacin se sealan diferentes procedimientos de laboratorio que utilizan el principio de
hibridacin y en los que la variacin est dada por el tipo de cido nucleico utilizado, el soporte en
que se lleva a cabo la hibridacin y la forma de colocar los cidos en la membrana.
Southern blot: Es una tcnica empleada para detectar secuencias especficas de ADN. Para
llevar a cabo hibridaciones de este tipo, se asla el ADN de un tejido o lnea celular, luego se

purifica, y se digiere con enzimas de restriccin especficas. Los fragmentos generados se separan
mediante electroforesis y despus son transferidos a la membrana que sirve de soporte (gel de
agarosa). Este proceso se lleva a cabo colocando el gel de agarosa sobre papel filtro previamente
remojado en una solucin llamada de transferencia (solucin salina concentrada). A continuacin
se sita la membrana sobre el gel y encima de esta una pila de papel filtro seca, y por capilaridad
la solucin de transferencia es atrada a la pila de papel filtro, arrastrando consigo al ADN hacia la
membrana, donde queda inmovilizado conservando la misma posicin relativa que ocupaba en el
gel. Luego, el ADN puede ser hibridado en la membrana con una sonda marcada (Cerezo &
Madrid, 1995; Correa-Rotter & Gamba, 1997).
Debido a que la transferencia del ADN del gel a la membrana se produce por capilaridad, con el
mismo principio utilizado por aos para limpiar manchas con papel secante, el proceso se conoce
en ingls como blotting; Southern propuso utilizar el trmino blot (secado) o blotting para
referirse a esta tcnica y actualmente se conoce como Southern blot (Mercado & Gamba, 1997).
Esta tcnica se ha empleado para el diagnstico y caracterizacin de diversas inmunodeficiencias,
la distrofia muscular de Duchenne, la hipoplasia adrenal congnita, la deficiencia de glicerolquinasa, la distrofia miotnica severa y en anlisis de mutaciones de genes en clulas B de
leucemia linfoblstica crnica, entre otras enfermedades (Cerezo & Madrid, 1995).
Northern blot: Es una variante del mtodo anterior en el que en lugar de utilizar ADN como
sustrato de estudio, se emplea ARN. El procedimiento que se sigue es similar al Southern blot y
por analoga con este se le conoce como Northern blot. Esta tcnica se ha aplicado en estudios de
la modulacin de la sntesis de interleucina 6 en pacientes con artritis reumatoide, en el anlisis
de expresin de receptores que participan en la sntesis de molculas en cultivos celulares, en
anlisis de mutaciones y alteraciones del RNAm de enzimas, y en la regulacin de la expresin
gnica de marcadores moleculares de clulas leucmicas humanas y molculas del
reconocimiento inmunolgico (Cerezo & Madrid, 1995).
Western blot: No es un mtodo de anlisis directo de los cidos nucleicos, sino del producto de
la expresin de los genes, o sea las protenas. Aunque difiere de los anteriores en cuanto a que no
existe hibridacin, sino que la identificacin de las protenas se realiza con anticuerpos marcados,
s se mantiene el principio de la transferencia a la membrana que sirve de soporte posterior a la
electroforesis y previo a la identificacin, y por lo cual siguiendo el juego de palabras ha sido
denominado de esta manera (Cerezo & Madrid, 1995; Mercado & Gamba, 1997). Esta tcnica
permite el desarrollo de pruebas para diferenciar tipos de virus que infectan a clulas, se ha
aplicado en estudios de la variabilidad individual de los niveles de determinadas enzimas, en la
caracterizacin molecular de genes (Cerezo & Madrid), etc.
Dot blot y slot blot: Son procederes similares al Northern con la diferencia de que el ARN no es
sometido a electroforesis sino que se sita directamente sobre la membrana. Este tipo de anlisis
requiere de un molde asociado a succin con vaco para colocar el ARN que puede producir
crculos o puntos (dot blot) o hendiduras (slot blot). Este tipo de prueba es muy til cuando se
quieren estudiar gran nmero de muestras, pero tienen la limitante de no ofrecer informacin
sobre el tamao de las bandas del ARN hibridado (Correa-Rotter & Gamba, 1997).
Hibridacin de colonias bacterianas: Es un mtodo empleado para identificar colonias
bacterianas que contengan determinada secuencia de cidos nucleicos de inters.
La metodologa consiste en sembrar los clones sobre placas de Petri con agar para despus de
crecidos transferirlos a membranas de nylon o nitrocelulosa y luego realizar la hibridacin (Plata,
1996).
Hibridacin in situ: Es un mtodo histoqumico que emplea a la biologa molecular de la
misma manera que la inmunohistoqumica utiliza los mtodos de la inmunologa. La
especificidad de la hibridacin in situ (HIS) se basa en la unin recproca de una secuencia de
oligonucletidos (la sonda), con una secuencia complementaria de nucletidos presente en las
molculas de ARN o ADN dentro del tejido (Quintanilla-Martnez & Gamba, 1997).
Entre las ventajas de esta tcnica estn su alto grado de resolucin espacial que permite la
localizacin de secuencias gnicas a escala cromosmica, con lo que se pueden detectar

translocaciones y otras alteraciones, as como tambin el estudio de expresin gnica a escala

celular y subcelular. Otra de sus ventajas es que se puede realizar en material fijado e incluido en
parafina lo que permite realizar estudios retrospectivos en material de archivo. Por otra parte la
cantidad de tejido requerido para realizar un estudio de HIS es mnima en comparacin con otras
tcnicas de biologa molecular (Quintanilla-Martnez & Gamba, 1997).
Entre las principales aplicaciones de la HIS tenemos la deteccin de ARN o ADN de origen viral,
el anlisis de la expresin gnica (deteccin de ARNm) y los anlisis cromosmicos (QuintanillaMartnez & Gamba, 1997).
La HIS con fluorescencia (FISH) (Hogge & Mowery-Rushton, 1997; Bobadilla & Gamba, 1996) es
una importante herramienta de uso rutinario en investigacin y con grandes posibilidades de
aplicacin en el diagnstico de enfermedades neoplsicas, genticas, estudios a nivel
cromosmico, etc. En ella la sonda se marca con sustancias fluorescentes que se visualizan
despus mediante microscopa.
Mapas de restriccin.
Esta tcnica se basa en el principio de la enzimologa de restriccin donde de una molcula de
ADN dada se obtendrn siempre los mismos fragmentos cada vez que sea expuesta a una enzima
de restriccin particular. La complejidad del mapa depende del tamao de la molcula (a mayor
nmero de bases ser mayor el nmero de sitios de restriccin) y del nmero de enzimas
utilizadas. De esta forma, dos molculas de ADN del mismo tamao pueden ser fcilmente
diferenciadas por los mapas de restriccin que producen al tratarlas con las mismas enzimas
(Merino & Gamba, 1996).
Este mismo principio lo utiliza el procedimiento denominado anlisis de polimorfismos de
longitud de fragmentos de restriccin (RFLP) (Granner, 1992), pero aprovechando el hecho de la
existencia de variaciones en la constitucin gentica de la poblacin (polimorfismo gentico), que
hace que se observen diferencias entre los individuos en cuanto al nmero y longitud de los
fragmentos producidos. La existencia de los RFLPs es la base de la tcnica que se ha
denominado huellas digitales del ADN y que permite establecer inequvocamente la relacin
padres e hijos, entre otras aplicaciones.
Reaccin en cadena de la polimerasa.
La reaccin en cadena de la polimerasa o PCR como comnmente se conoce (del ingls
polymerase chain reaction) es un mtodo enzimtico de amplificacin de secuencias especficas
de ADN, concebido por Kary Mullis y sus colaboradores a principios de los aos 80. Este mtodo
permite la sntesis in vitro de un fragmento de ADN de forma tal que, en cada ciclo del proceso, se
duplica el nmero de molculas (Bobadilla & Gamba, 1996).
El principio del PCR consiste en determinar la secuencia de inters y seleccionar pequeos
segmentos de nucletidos llamados iniciadores o cebadores, complementarios con la secuencia de
nucletidos de los extremos opuestos de las cadenas que flanquean a dicha secuencia, a partir de
los cuales se inicia la elongacin o sntesis de nuevas cadenas en el extremo 3' de cada iniciador
(Cerezo & Madrid, 1995).
En esta tcnica se consideran importantes los siguientes parmetros: un suministro abundante de
iniciadores y de desoxinucletidos trifosfatados (dNTPs); una fuente renovada de ADN
polimerasa (enzima encargada de la sntesis de las cadenas complementarias); y los ciclos
peridicos de cambios de temperatura. Estos ltimos consisten en: desnaturalizacin del ADN a
100 C, alineamiento de los iniciadores con las secuencias de inters entre 50 y 60 C y sntesis
del ADN a 72 C. Estas temperaturas pueden variar de acuerdo con las condiciones de la reaccin
(Bobadilla & Gamba, 1996).
Cuando se comenz a utilizar la PCR, el empleo de la ADN polimerasa I de E. coli haca el proceso
muy tedioso, pues esta enzima perda su funcin al incrementar la temperatura, lo que obligaba a
agregar ADN polimerasa en cada ciclo. Con la introduccin de la llamada Taq polimerasa, una
ADN polimerasa aislada de la bacteria Thermus aquaticus que vive en aguas termales y tiene una

temperatura ptima entre 70 y 75 C, la PCR se hizo ms eficiente, ms accesible e incluso fue

posible automatizarla (Cerezo & Madrid, 1995).
El poder de la amplificacin con PCR es tan alto que los ms pequeos contaminantes pueden dar
resultados falsos positivos, por lo que el material y las soluciones a emplear deben ser
escrupulosamente controlados.
Las aplicaciones de la PCR son mltiples y parecen estar slo limitadas por la imaginacin de los
cientficos. Entre ellas tenemos: la amplificacin de fragmentos de genes como rpida alternativa
de la clonacin, la modificacin de fragmentos de ADN, la deteccin sensible de microorganismos
seguido de una segura genotipificacin, si se desea, el anlisis de muestras arqueolgicas y
estudios antropolgicos, la deteccin de mutaciones importantes en enfermedades hereditarias,
transformacin maligna o tipaje de tejidos, el anlisis de marcadores genticos para aplicaciones
forenses, pruebas de paternidad y para el mapeo de rasgos hereditarios, el estudio de expresin de
genes, entre otras (Herrera & Gamba, 1996).
Secuenciacin nucleotdica del ADN.
La consecuencia inmediata de clonar un fragmento de ADN es la posibilidad de secuenciarlo. El
entendimiento a fondo de la estructura, funcin y mutacin de un fragmento de ADN depende en
primera instancia de conocer la estructura primaria de sus nucletidos; es decir, la secuencia de
nucletidos.
Bsicamente existen dos mtodos para la secuenciacin del ADN, uno qumico y otro enzimtico,
desarrollados en la dcada de los 70 por Maxam y Gilbert y Sanger y colaboradores (Lehninger,
1993; Ministerio de Educacin, 1981), respectivamente.
Conocer la secuencia de un segmento de ADN que ha sido clonado, representa una gran ventaja
para su caracterizacin ya que, a travs de la secuencia es posible determinar las diferentes
regiones que conforman un gen, deducir la secuencia de aminocidos para la sntesis de una
protena y la formacin de sus estructuras secundarias (Cerezo & Madrid, 1995). En medicina la
secuenciacin del ADN tiene importantes implicaciones en la comprensin de los mecanismos
fisiopatolgicos que se generan por la inferencia en la secuencia y homologa entre genes.
El conocimiento de genes responsables de enfermedades hereditarias hace posible mediante
secuenciacin, identificar a individuos portadores asintomticos o en fase preclnica (Martnez &
Gamba, 1996). La secuenciacin del genoma de determinados agentes biolgicos patgenos por
ejemplo Haemophilus influenzae (Caskey, 1997) yHelicobacter pilory (Scientists complete
decoding of the H pylori genome, 1997) permite, adems de comprender los mecanismos de
produccin de la enfermedad, desarrollar nuevos mtodos diagnsticos y teraputicos.
Proyecto del Genoma Humano
El Proyecto del Genoma Humano (PGH), esfuerzo internacional considerado por muchos como
una de las empresa ms grandes emprendidas por el hombre en todos los tiempos, dirigido a
entender, fundamentalmente, nuestro genoma, comenz en Estados Unidos en 1990 cuando al
Instituto Nacional de Salud y al Departamento de Energa se unieron otras instituciones del resto
del mundo para descifrar la masiva cantidad de informacin contenida en l. Su ejecucin tom
como base el arsenal de conocimientos y herramientas aportados por la biologa molecular y
la computacin hasta ese momento. Este proyecto en sus inicios se traz un grupo importante de
ambiciosas metas las cuales han sido sobrepasadas en su mayora. Su conclusin estaba prevista
para el ao 2005, sin embargo, ya el 14 de abril de 2003, algo ms de dos aos antes y
coincidiendo con el 50 aniversario de la descripcin por James Watson y Francis Crick de la doble
hlice del ADN; el Consorcio Internacional para la Secuenciacin del Genoma Humano anunciaba
su culminacin exitosa, la cual alcanz una exactitud del 99,99 %, lo que equivaldra a slo un
error por cada 10000 pb (National Human Genome, 2004, National Human Genome Research
Institute, National Institute of Health, 2004).
La secuenciacin del genoma humano es slo el comienzo de lo que ha sido denominado era
genmica y el conocimiento que de ello se derive permitir arrojar luz sobre un amplio espectro
de cuestiones bsicas tales como, cuntos genes tenemos, cmo trabajan las clulas, como

evolucionaron los seres vivientes, cmo una simple clula se desarrolla en complejas criaturas,
qu sucede exactamente cuando enfermamos. Adems de responder innumerables preguntas
sobre nuestra individualidad molecular. Las aplicaciones directas en medicina incluyen el
diagnstico, pronstico y prevencin de diversas enfermedades, as como su tratamiento efectivo.
En 1990, por ejemplo, se tena idea de la existencia de alrededor de 100 genes involucrados en
determinadas enfermedades; hoy se han identificado ms de 1400 y la lista contina
incrementndose. Muchas de estas enfermedades sern blanco de disciplinas que se han
desarrollando en los ltimos aos, como la farmacogenmica y la terapia basada en los genes (An
Interview with Francis S. Collins, M.D., Ph.D., 2003; Austin, 2003; Collins, Green, Guttmacher &
Guyer, 2003).
Campos de aplicacin de la tecnologa del ADN recombinante
Uno de los principales objetivos de la ingeniera gentica ha sido la produccin de grandes
cantidades de protenas, las cuales por dems pueden ser difciles de obtener de sus fuentes
naturales (bien porque son producidas en baja concentracin por la clula o porque su
manipulacin es demasiado peligrosa) (Freifelder, 1983). La importancia de obtener tales
protenas por esta va estriba, entre otros aspectos, en su bajo costo de produccin y en que
algunas de ellas como la insulina, el interfern y la hormona del crecimiento (somatotropina),
concebidas para terapia en humanos por otros medios, pueden inducir reacciones alrgicas
(Ministerio de Educacin, 1981)
La fuente principal de protenas va recombinacin gentica in vitro son los microorganismos,
aunque los animales y plantas tambin son empleados en ensayos para obtener protenas de
inters; as por ejemplo investigadores de la misma compaa que clon la oveja Dolly en Escocia
a mediados de los aos 90, lograron la obtencin de una oveja transgnica que produce en
su leche la protena de la coagulacin humana factor IX (Scientists achieve new breakthroughs in
cloning of transgenic animals, 1998). La hemoglobina humana recombinante ha sido sintetizada
en cultivos de bacterias, levaduras y en clulas animales transfectados, sin embargo, las plantas
transgnicas parecen ofrecer, a juicio de los investigadores, un nmero de ventajas que incluyen
la reduccin de los problemas del envejecimiento de la sangre de banco, as como la exclusin de
contaminantes derivados de fuentes bacterianas o animales (Researchers use tobacco plants to
synthesize human haemoglobin, 1997). Se trabaja, por otra parte, en la produccin de animales
transgnicos y clonados que expresaran inmunoglobulinas y otros productos biofarmacuticos
para el tratamiento de enfermedades autoinmunes (Pigs cloned to produce human antibodies,
1997).
Son tambin ejemplos del poder de la ingeniera gentica en el terreno de la medicina la
identificacin de genes sin conocer la funcin de sus productos en procesos patolgicos como la
ataxia telangiectasia, la poliquistosis renal y el subtipo infantil de lipofuscinosis ceroide (McCabe,
1996). En otras enfermedades se ha podido profundizar en su fisiopatologa, tal es el caso de la
fibrosis qustica (Ramsey, 1996) y la enfermedad de Alzheimer (Mcmanus & Gascoyne, 1997;
Transgenic mice provide insights into Alzheimers desease, 1998). La recombinacin gentica in
vitro ha permitido, adems, encontrar los genes responsables de enfermedades como la distrofia
miotnica, la enfermedad de Huntington, la hemocromatosis hereditaria (Voelkerding, 1998) y
algunos tipos de inmunodeficiencias (Villa, 1997; Spickett, 1997).
Uno de los grandes retos que tiene la medicina actual es llegar a conocer con certeza los
mecanismos y procesos involucrados en la gnesis del cncer y poder actuar en consecuencia. La
clonacin de genes ha revelado la existencia de dos categoras gnicas que se caracterizan por la
presencia de mutaciones especficas y que tienen un importante papel en la expresin de clulas
cancerosas, estas categoras corresponden a los oncogenes y a los genes supresores del cncer. Se
ha agregado a estas una nueva categora cuyas mutaciones se vinculan especficamente con el
cncer colorectal, se trata de los genes de la reparacin de errores de apareamiento del ADN
(National Cancer InstituteNational Human Genome Research Institute Workshop, 2004).
Un enfoque no menos importante en la utilizacin de la tecnologa del ADN recombinante en
medicina es la terapia gnica. Como concepto la terapia gnica consiste en la transferencia de
material gentico a las clulas de un enfermo, producindole efectos teraputicos benficos. En

principio se podran tratar enfermedades hereditarias como la inmunodeficiencia severa

combinada, la anemia falciforme, la distrofia muscular, la fibrosis qustica, etc. (Moreno &
Gamba, 1996), aunque de modo general cualquier afeccin en la que se pudiese demostrar una
alteracin gnica como factor involucrado en su fisiopatologa; sera susceptible de recibir esta
teraputica.
Aun cuando hasta el momento no se dispone de un vector que permita una transferencia de genes
directamente dentro del paciente, que sea eficiente, efectiva y estable, la terapia de genes es
fuente de esperanzas para investigadores, mdicos, pacientes y familiares (Marshal, 1995; Vogel,
1997). Los vectores virales aunque han sido los ms empleados no satisfacen las expectativas
iniciales. Ahora se prueba con otros vectores no virales como los liposomas (Ramsey, 1996) y se
piensa incluso en usar las clulas indiferenciadas y con alta capacidad para multiplicarse de la
mdula sea, para modificarlas genticamente en el exterior y luego tratar con ellas no slo
trastornos hematolgicos, sino tambin, afecciones del colgeno, hueso y msculo; dada su
capacidad de distribuirse por todo el organismo despus de madurar (Brenner, 1996).
CONCLUSIONES

Hoy prcticamente no existen dudas de que la Biologa Molecular con sus mtodos, unido a los
conocimientos derivados del Proyecto del Genoma Humano afectar el curso de la ciencia y la
medicina a lo largo del siglo 21. La fisiopatologa de ms y ms enfermedades ser comprendida
hasta el nivel molecular, se desarrollarn nuevas drogas dirigidas contra las causas subyacentes
de las enfermedades, las pruebas genticas antes de prescribir una droga asegurarn que
cada individuo reciba aquellos medicamentos que traten sus malestares efectivamente sin efectos
colaterales, aumentar nuestro conocimiento sobre cuestiones bsicas de Biologa, los cientficos
entendern mejor los componentes esenciales de la vida y cmo funcionan las clulas y
organismos; sin embargo, el reto fundamental estar en mantener un balance saludable que evite
los daos potenciales derivados de estos avances, y permita preservarlos slo para darle un uso
adecuado.

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA MEDICINA HUMANA

CURSO BIOLOGIA MOLECULAR

SEMINARIO 4

EL ORIGEN Y LA TEORA CELULAR

El problema del origen de la vida es el problema del origen de la clula. No se sabe cmo apareci
la primera clula en la Tierra, pero se acepta que su origen fue un fenmeno fsico-qumico. Esta
visin lleg con las propuestas de A.I. Oparin y J.B.S. Haldane en torno a los aos 20 del siglo
pasado (tambin fue sugerida por C. Darwin en una carta personal). Todo el desarrollo de la teora
de la aparicin de las primeras clulas est basado en especulaciones y en experimentos de
laboratorio que simulan las supuestas condiciones de la Tierra en sus orgenes. Estos experimentos
apoyan en mayor o menor medida tales ideas. Puesto que es un proceso fsico-qumico surgen dos
posibilidades interesantes. a) Crear vida. Se podra "fabricar" una clula, utilizando las molculas
que existen hoy en da en las clulas actuales y colocndolas todas juntas dentro de una vescula
membranosa. Actualmente se estn dando los primeros intentos serios para conseguirlo desde una
rama de la biologa denominada biologa sinttica. Ya se puede sintetizar en una mquina todo el
ADN de una clula procariota y se ha conseguido sintetizar un cromosoma eucariota. b) Vida
extraterrestre. Existe la posibilidad de que en otro lugar del Universo se hayan dado las
condiciones necesarias, similares a las que se dieron en la Tierra, para la aparicin de la vida
extraterrestre, probablemente en muchos planetas y en muchas ocasiones, incluso en estos
momentos.(Teora de la panspermia que nos dice que las primeras clulas llegaran del espacio
exterior, s se cree que la lluvia inicial de meteoritos que sufri la Tierra en sus orgenes fue
una fuente inmensa de molculas orgnicas).

Para investigar el origen de la vida deberamos saber reconocer a un ser vivo. Qu es un ser
vivo? Intuitivamente somos capaces de identificar a los seres que consideramos vivos. Sin
embargo, escribir una definicin es ms complicado. Podemos decir que es un organismo que tiene
la cualidad de la vida. Esto es algo que los define sin ninguna duda. Pero nos encontramos con otro
problema de definiciones: Qu es la vida? No existe un consenso entre los cientficos sobre las
palabras que deben definir sin ninguna duda el concepto vida. Se da la paradoja de que la Biologa,
parte de la ciencia que estudia la vida y a los seres vivos, se ocupa de algo mal definido, casi una
intuicin. Actualmente se tiende a no proponer una definicin sino a considerar a la vida como un
conjunto de propiedades que debera poseer un organismo para ser considerado como vivo. O
dicho de otro modo, un organismo debera cumplir con una serie de propiedades si queremos
considerarlo como que posee vida o est vivo. Sin embargo, tampoco existe consenso sobre cuntas
y cules son esas propiedades, aunque se suelen incluir:
a) Reproduccin o transmisin de informacin codificada por el cido desoxirribonucleico o
ADN. b) Mantenimiento de la homeostasis interna gracias a su capacidad para obtener
energa externa (metabolismo). c) Tener capacidad para producir respuestas a estmulos
externos o internos. d) Evolucin condicionada por la interaccin con el medio externo,
capacidad para la adaptacin (evolucin darwiniana).

1.- Formacin de molculas orgnicas. Las clulas estn formadas por

molculas orgnicas que son los ladrillos de los que est hecha la vida, adems
del agua e iones. Las principales son protenas, nucletidos, azcares y grasas.
Cmo se formaron? a) Condiciones fsicas extremas . Si se coloca en un matraz
una disolucin acuosa con sustancias como CO 2 , amoniaco, metano e hidrgeno,
y se les somete a una alta temperatura y a descargas elctricas, se consigue que
se formen pequeas molculas orgnicas como cianuro de hidrgeno,
formaldehdo, aminocidos, azcares, purinas y pirimidinas (necesarios para
formar nucletidos). ste fue el experimento que realizaron Miller y Urey
intentando simular las condiciones primitivas. Ello no demuestra que estas

molculas se formaran as en el origen de la vida, pero es una prueba de que las

molculas orgnicas se pueden formar mediante reacciones fsico-qumicas .
Adems, debido a la diversidad de los ambientes terrestres se pudieron dar
multitud de condiciones diferentes que favorecieron la creacin de unas
molculas u otras. Hoy se tiende a situar esa sntesis prebitica en las
profundidades del mar, ms concretamente en los alrededores de las fumarolas,
donde se daran condiciones propicias y habra una cierta proteccin.
2.- Formacin de polmeros. Ya tenemos molculas orgnicas, pero las ms importantes para la
clula suelen aparecer en forma de polmeros complejos y no como molculas simples: las cadenas
de aminocidos forman

las protenas y los polinucletidos forman el ADN y el ARN. La formacin de polmeros es uno de
los grandes problemas en las teoras del origen de la vida, puesto que no se ha encontrado un
sistema de polimerizacin prebitico que satisfaga completamente. Habra varias posibilidades: a)
Calor sobre compuestos secos.. b) Catlisis por superficies minerales. ej. polifosfatos o minerales
catalticos produce polmeros con secuencias aleatorias. En este punto se ha demostrado que ciertas
arcillas son capaces de atraer molculas orgnicas, entre ellas el ARN, y favorecer su
polimerizacin. c) Fumarolas. El proceso de formacin de molculas orgnicas se produce hoy en
da en las fumarolas, que bajo unas condiciones de presin y calor elevados, con la ayuda de
minerales, pueden producir polmeros orgnicos.

3.- Membrana celular. Uno de los principales eventos en el origen de las clulas fue el desarrollo
de una envuelta que aislara un medio interno y otro externo. Esto tiene muchas ventajas: a) permite
tener todos los componentes necesarios prximos para las reacciones metablicas y se hace ms
eficiente el proceso de replicacin; b) se evita que variantes ventajosas de molculas orgnicas sean
aprovechadas por grupos competidores. Esto es el egosmo evolutivo; c) se gana una cierta
independencia respecto a las alteraciones del medio externo favoreciendo la homeostasis interna.
Las membranas lipdicas son fciles de producir a partir de molculas de cidos grasos anfipticos,
es decir, que tienen una parte cargada elctricamente y otra es hidrfoba. Estas molculas se
organizan en soluciones acuosas formando pelculas finas. Las membranas de los organismos vivos
poseen las mismas molculas anfipticas: glicerofosfolpidos y esfingolpidos.

4.- Autorreplicacin de las primeras molculas. Una de las caractersticas que debieron adquirir
los polmeros para aumentar su nmero y conseguir copias de s mismos debi ser la capacidad de
autorreplicacin, es decir, la posibilidad de producir otras molculas similares o idnticas a ellas
mismas. Con ello se consigue la propiedad de la transmisin de la informacin, que es una de las
propiedades de la vida. Esta informacin transmitida sera de dos tipos: secuencia de monmeros y
organizacin espacial del polmero (genotipo y fenotipo?).

Suponiendo que el primer autorreplicante fuera una molcula,qu molcula podra

autorreplicarse? El ADN es bsicamente inerte y tiene que ser manejado por las protenas, que son
las verdaderas trabajadoras de la clula. Las protenas necesitan al ADN y el ADN a las protenas.
Entonces, qu fue primero el huevo o la gallina (ADN o protenas)? Todas las miradas se vuelven
entonces al ARN. Esta idea se basa en la capacidad enzimtica que poseen las molculas de ARN
(denominados por ello ribozimas). Por ejemplo, la maduracin del ARNm de las clulas eucariotas
por parte de las ribonucleoprotenas o la sntesis de protenas en los ribosomas por parte de los
ARN ribosmicos son ejemplos de actividad cataltica llevada a cabo por el ARN. No es
descabellado, aunque improbable, pensar que existieran molculas de ARN con la capacidad de

unir ribonucletidos y hacerlo con una secuencia similar de bases a las suya propia. Podran usar
como molde la complementariedad de su propia secuencia de nucletidos. Pero adems, la
secuencia condiciona el plegamiento tridimensional de la molcula de ARN, lo que afecta a su
estabilidad y a su actividad. Por tanto, la informacin de la secuencia de nucletidos sera crucial
para su estabilidad y capacidad de duplicacin. Ocurriran fallos durante la autorreplicacin que
produciran molculas de ARN con distintas secuencias y por tanto con distintas propiedades. Entre
ellas comenzara una competencia darwininiana por los recursos. As, la sopa inicial dentro de la
vescula se ira enriqueciendo en aquellas molculas y sus variantes que se replicaran con ms
facilidad. Las secuencias ya no seran aleatorias sino que, el "genotipo" (la secuencia de bases) y el
"fenotipo" (estructura espacial) conferiran a la molcula determinadas propiedades ventajosas. Por
todo ello se ha propuesto que existi un mundo dominado por el ARN en la etapa prebitica.

5.- Interacciones entre molculas diferentes. Independientemente de la molcula o molculas

con capacidad de autorreplicacin y competicin, tendra que darse en algn momento la
interaccin entre mollulas diferentes (protenas, ADN, ARN, lpidos y azcares) y la formacin de
complejos y reacciones heterogneas. Podramos pensar en asociaciones de molculas de ARN que
en unin de polipptidos favorecieron la replicacin, o rutas metablicas que interaccionaron con
el ARN o el ADN. Con estas interaccinoes se seleccionaran no ya unas pocas molculas sino
grupos heterogneos de molculas que actuaran en cooperacin, coevolucin. Esto podra haber
ocurrido hace 3,5 a 4 mil millones de aos.

6.- Cdigo gentico. En algn momento el ARN tuvo que intervenir en la sntesis de las protenas.
Para ello hubo que inventar un cdigo que identificara una secuencia de nucletidos con un
aminocido determinado. Esto es lo que actualmente se denomina el cdigo gentico, en el que tres
bases nucleotdicas codifican para un aminocido determinado. Este cdigo parece arbitrario y es
prcticamente universal para todos los organismos vivientes, lo cual sugiere que hubo una sola
organizacin de molculas de ARN y pptidos, de todas las posibles, que dieron lugar a todos los
organismos actuales. A estas protoclulas de las cuales partieron todas las dems clulas que
conocemos hoy en da se les denomina LUCA

7.- ADN como principal soporte de la informacin. Actualmente la informacin que transmiten
los organismos a sus descendencia est codificada en forma de ADN y no de ARN o protenas. El
ADN tiene una serie de ventajas sobre el ARN: al ser el ADN una doble hlice es ms estable, es
ms fcil de replicar y permite reparaciones ms eficientes. Se conocen enzimas que son capaces
de realizar el paso de informacin contenida en el ARN al ADN, son la retrotranscriptasas. Estas
enzimas las contienen muchos virus, como el del SIDA, con un genoma de ARN que se convierte
en ADN tras la infeccin. En algn momento de la evolucin, antes de LUCA, debi darse el paso
de la informacin desde el ARN al ADN, y quedar este ltimo como base para la conservacin,
lectura y transmisin de la informacin de las protoclulas.

TEORA CELULAR

Los estudios sobre la clula comenzaron a mediados del siglo XVII y vienen ligados a la mejora en
la calidad de los microscopios. Los primeros conocimientos sobre la clula se remontan a ao
1665, gracias a Robert Hooke, que al analizar un trozo de corcho con un sencillo microscopio
construido por l mismo, descubri que estaba formado por una especie de celdillas parecidas a las
de un panal de abejas, a las que denomin clulas. Un contemporneo de Hooke, Anthony van
Leeuwenhoek, construy microscopios simples de hasta 200 aumentos, y descubri mltiples

microorganismos al estudiar el agua de las charcas y de los fluidos de los animales, a los que llam
animculos. Pero hasta que no se dispuso de buenos microscopios, a principios del siglo XIX, no se
realizaron nuevos descubrimientos. As, en 1831, Robert Brown descubri un corpsculo al que
denomin ncleo y poco despus Purkinje descubri el medio interno viscoso al que denomin
protoplasma. El protoplasma que rodea el ncleo pas a llamarse citoplasma. Pero la teora celular
no se desarroll hasta 1939. Su desarrollo se atribuye al botnico Schleiden y al zologo Schwann,
que enunciaron que todas las clulas son morfolgicamente iguales y que todos los seres vivos
estn constituidos por clulas. Aos ms tarde, en 1855, Virchow ampli la teora celular al
postular que slo pueden aparecer nuevas clulas a partir de otras ya existentes. Brucke la
complet al decir que la clula es el ser vivo ms pequeo y sencillo que existe portador de todos
los elementos necesarios para permanecer con vida.

La teora celular de Schwann expona dos cosas: 1) El reconocimiento de que el organismo

compuesto se desarrolla de clulas; 2) Una nueva filosofa inductiva, gentica y mecnica.

Tanto Schleiden como Schwann afirmaban que el organismo era un agregado (segn ciertas leyes)
de otros seres de orden inferior; contra la opinin vitalista de la unidad de la vida en el cuerpo
orgnico y contra la fuerza vital unitaria. Schleiden aduca que la vida es el resultado de la
colaboracin de muchas clulas. Schleiden, botnico, y Schwann, zologo, estudiaron muchos
tipos de tejidos en sus campos respectivos. Ambos llegaron a la conclusin de que la clula es la
unidad estructural bsica de todos los organismos. La clula constituye la unidad fundamental de
los seres vivos. Todo organismo vivo est constituido por una o por multitud de clulas. Este es el
enunciado bsico de la teora celular. La Teora Celular, tal como se la considera hoy, puede
resumirse en cuatro proposiciones: 1. En principio, todos los organismos estn compuestos de
clulas. 2. En las clulas tienen lugar las reacciones metablicas de organismo. 3. Las clulas
provienen tan solo de otras clulas preexistentes. 4. Las clulas contienen el material hereditario.
La segunda y tercera proposiciones fueron aadidas por el patlogo y tambin estadista Rudolf
Virchow (1821 1902). En su trabajo Patologa celular (1858), Virchow consider la clula
como la unidad bsica metablica y estructural. En ese mismo trabajo subray la continuidad de
los organismos: todas las clulas provienen de otras clulas (preexistentes).

Esto condujo a la primera definicin de clula: Unidad anatmica y fisiolgica de todos los seres
vivos. Esto es vlido excepto para los virus. A pesar de haber sido aceptada la teora celular, los
cientficos seguan considerando al tejido nervioso como una excepcin, ya que mostraba una
estructura reticular, donde no era posible diferenciar unidades celulares. Fue el histlogo Santiago
Ramn y Cajal el que hizo posible la generalizacin de la teora celular al demostrar la
individualidad de la neurona en su teora neuronal (1889). Gracias a estos estudios recibi el
premio Nbel de Fisiologa y Medicina en 1906

Recopilando la Teora celular queda definida por los siguientes principios:

La clula es el ser vivo ms pequeo y sencillo que existe.
La clula es la unidad morfolgica de todos los seres vivos: Todos los seres vivos estn
constituidos por una o ms clulas.
La clula es la unidad fisiolgica de los organismos: Es capaz de realizar todos los procesos
metablicos necesarios para permanecer con vida.
La clula es la unidad gentica autnoma de los seres vivos: Contiene toda la informacin sobre

la sntesis de su estructura y el control de su funcionamiento, y es capaz de trasmitirla.

Toda clula proviene, por divisin, de otra clula (ya existente).