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MICROBIOLOGIA
MICROBIOLOGIA - BACTERIOLOGIA
Bactrias so seres procariontes, que possuem como principais
estruturas morfolgicas:
- Cpsula: revestimento importante na preveno da fagocitose
bacteriana e no auxlio da aderncia das bactrias aos tecidos.
reserva de gua e nutrientes, aumenta a capacidade invasiva de
bactrias patognicas e lhes d resistncia.
- Parede celular: manuteno da forma bacteriana, proteo contra
rupturas causadas pela elevada presso osmtica, e local de
determinantes antignicos (diferenciam microorganismos).
- Membrana citoplasmtica: separa o meio exterior e o meio interior
da bactria, realizando o transporte de eltrons e solutos.
- Citoplasma: local onde ocorrem muitos processos metablicos.
- Polirribossomos: sntese de protenas.
- Incluso / grnulo: acmulo de alimentos.
- Plasmdeo: contm informaes genticas (DNA) independente do
ncleide.
- Mesossomos: provvel concentrao de enzimas respiratrias.
- Nucleide: contm informaes genticas (DNA ou ADN).
- Fmbrias: auxiliam na adeso das bactrias s clulas-alvo e facilitam
a troca de DNA na hora da conjugao bacteriana.
- Flagelos: atuam na motilidade bacteriana, que muito importante
para a sua sobrevivncia.
1- ________________________________________________________
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TEMP. MN.
40C a 45C
5C a 15C
-5C a 5C
-15C a 5C
importante,
podendo
TEMP. TIMA
55C a 75C
30C a 37C
25C a 30C
12C a 15C
dividir
os
TEMP. MX.
60C a 90C
35C a 47C
30C a 35C
15C a 20C
CRESCIMENTO BACTERIANO
As bactrias se multiplicam por fisso numa progresso geomtrica,
e o tempo que isso leva (surgimento de duas clulas idnticas clula
me) chamado de tempo de gerao. O crescimento bacteriano
demonstrado numa curva, onde so reconhecidas quatro fases:
- Lag (pouca diviso celular, com aumento de tamanho da clula)
- Log (crescimento logartmico rpido e constante)
- Estacionria (nmero de mortes igual ao nmero de nascimentos)
- Declnio (nmero de mortes superior ao nmero de nascimentos)
Definies e Comentrios
Esterilizao
Desinfeco
Anti-sepsia
Germicida
Bacteriostase
Mecanismo de ao
Comentrios
Uso preferencial
a) Fervura
Desnaturao de protenas
Mata
bactrias, fungos e Processo de desinfeco
muitos vrus, em 15 min de
larga
utilizao
No eficaz para todos os caseira
endsporos
b) Autoclavao
Desnaturao de protenas
c) Pasteurizao
Desnaturao de protenas
1. Calor mido
leite,
2. Calor seco
a) Flambagem
b) Incinerao
Papis,
carcaas
de
animais,
restos
de
curativos,
algodo
e
gazes
utilizados
em
hospitais
c) Fornos
Oxidao
3. Filtrao
Remoo mecnica
a) Ionizantes
Destroem DNA
b) No-ionizantes
Alteram DNA
4. Radiaes
germicidas
5. Baixas temperaturas
Geladeira
(0C), Interrupo do metabolismo
congelador (-20C)
e nitrognio lquido
(-179C)
Efeito microbiosttico
Preservao
microrganismos
seco
utilizada
LCOOIS (age sobre as protenas): O lcool etlico hidratado possui maior eficincia
do que o absoluto, portanto deve ser utilizado na forma de soluo a 70%. Ele o
anti-sptico mais empregado, especialmente em situaes que levam a ruptura da
integridade da pele (injees, punes etc). O lcool isoproplico puro apresenta ao
germicida superior do lcool etlico, alm de ser menos corrosivo para os
instrumentos.
FENIS (age sobre as protenas): Exs. Creolina, utilizada para desinfeco de pisos,
vasos sanitrios; componentes de sabes.
MEIOS DE CULTURA
Sistema utilizado para isolar microorganismos em laboratrios, que permite o
crescimento e a multiplicao dos agentes. Um bom meio de cultura deve preencher
todas as necessidades nutricionais dos agentes, ser estril e possuir pH adequado. Os
meios de cultura podem ser lquidos ou slidos. Podem ser ainda:
- No seletivos: permitem crescimento de um grande nmero de espcies
- Seletivos: meio geral no qual so adicionadas substncias que inibem ou reduzem
certos grupos, salientando outros.
Os meios de culturas possuem como principais componentes: H2O destilada, fonte
de carbono (energia - CO2, lipdeos, acar, lcool e outras substncias), fonte de
nitrognio, fatores de crescimento (vitaminas que variam de espcie para espcie),
extratos (de carne, levedura, casena de leite, hidrolisado de protena de soja), minerais
(P, Fe, Zn, Mn, Ca, Cu, Na em baixas concentraes).
Eles se apresentam na forma desidratada, devendo ser diludos em H2O
deionizada (sem ons) e esterilizados. A esterilizao um processo que elimina todos os
contaminantes provenientes da gua ou do prprio meio de cultura. Esse processo feito
em autoclave 121C por 15 minutos e o pH do meio deve ser ajustado conforme
indicado pelo fabricante, ou de acordo com o microorganismo pesquisado.
SEMEADURA
o processo de isolamento de uma substncia que esteja sob suspeita de
contaminao por algum microrganismo. Esse isolamento deve proporcionar as condies
ideais de crescimento e desenvolvimento do microrganismo, caso este esteja presente.
Portanto, semear um material (substncia suspeita) significa espalh-lo sobre o
meio de cultura em Placa de Petri, e incub-la em temperatura ideal (geralmente em
estufa a 37C por cerca de 24 - 48 h). Aps o perodo de incubao, realiza-se a leitura
da placa.
O no crescimento de colnias significa a ausncia de microrganismos na
substncia pesquisada, enquanto que o crescimento significar a presena de um ou
mais tipos de microrganismos.
Tcnicas de Semeadura
Tcnica I: Meio Slido (gar em Placa de Petri): Semeadura por esgotamento.
1- Mergulhe a ala de platina esterilizada na amostra que lhe apresentada.
2- Encoste a ala carregada de bactrias na superfcie do gar e inicie movimentos de
zigue-zague retilneos, uniformes e bem prximos.
3- Desencoste levemente a ala de platina da superfcie, gire a placa ( 90), encoste
novamente a ala de platina no final da primeira semeadura e inicie nova semeadura
com movimentos em zigue-zague, retilneos, unifomes e um pouco mais espaados.
4- Desencoste levemente a ala de platina da superfcie, gire a placa ( 90), encoste
novamente a ala de platina no final da segunda semeadura e inicie nova semeadura
com os mesmos movimentos, mas desta vez, bem espaados.
5- Incube em estufa para crescimento sob tempo e temperatura sugeridos.
REAES TINTORIAIS
Para que se enxergar as bactrias (que so transparentes), necessria a utilizao
de corantes que evidenciam suas estruturas e auxiliam na separao por gnero e espcie.
Para evidenciar estruturas gerais, utiliza-se a colorao simples, a qual contrasta
apenas o corpo da bactria. J para se distinguir estruturas especficas, utiliza-se colorao
diferencial, composta por mais de um corante, o que possibilita sua separao em espcies ou
cepas. Dentre as coloraes existentes, duas se destacam por suas caractersticas,
importncia e grupos de microrganismos que atingem.
Mtodo ou Colorao de Gram: Essa colorao a que possui maior importncia no campo
da microbiologia, pois permite separar as bactrias em dois grandes grupos (pela diferena na
composio da parede celular), as Gram-positivas e as Gram-negativas. Ela realizada da
seguinte forma:
1 Etapa: imerge-se o esfregao em soluo cristal-violeta por 1. Esse corante
principal tingir os dois grupos de bactrias, ou seja, todas se coraro de violeta.
2 Etapa: imerge-se o esfregao em soluo de lugol por 1. Esse mordente far com
que a colorao violeta das clulas permanea, atravs da formao do complexo CV-1.
3 Etapa: descora-se o esfregao com soluo lcool-acetona e depois lava-se em
gua corrente. Esse descorante ir, no caso das gram-positivas, permitir a permanncia
do complexo CV-1 no interior da clula atravs da desidratao, diminuio da porosidade
e da permeabilidade da parede celular. J no caso das gram-negativas, ela vai remover o
complexo CV-1 da clula atravs da extrao dos lipdeos e do aumento da porosidade da
parede celular.
4 Etapa: imerge-se o esfregao em soluo contra-corante (fucsina) por 30- 40,
logo depois lavando-o em gua corrente. Esse contra-corante ir, no caso das grampositivas, no surtir efeito, portanto as gram-positivas permanecero violetas. J no caso
das gram-negativas, que foram descoradas anteriormente, esse corante penetrar na
clula, tornando-a vermelha (arroseada).
Ao final o processo, as bactrias gram-positivas coram-se de violeta, e as gramnegativas coram-se de vermelho (arroseado). A etapa mais importante dessa colorao a
3 etapa. Se no houvesse a etapa da descolorao, as gram-negativas no descorariam e
no se corariam de vermelho (arroseado) na 4 etapa, assim no havendo a diferenciao dos
dois grupos; sem contar que as gram-positivas no fixariam a colorao violeta, podendo
assim, corar-se de forma diferente at o final do processo.
Staphylococcus sp
So cocos G+ arranjados em cachos, que fazem parte da microbiota da pele,
porm podem causar patogenias e serem responsveis infees piognicas e septicemias
fatais. Alguns fatores favorecem estas infeces, como alteraes hormonais
(puberdade) e metablicas (diabetes). Possuem as seguintes caractersticas: so catalase
positivos; crescem em vrios meios de cultura (gar-sangue, gar-chocolate, gar
Meller-Hinton e gar Manitol Hipertnico) e fermentam carboidratos.
Os Staphylococcus sp patognicos possuem a capacidade de hemolisao,
coagulao do plasma, produo de toxinas/enzimas extracelulares e resistncia
antimicrobianos. Esse gnero abrange mais ou menos 30 espcies, dentre as quais as de
interesse clnico so trs:
Streptococcus sp
So cocos G+ arranjados em cordes ou em duplas (forma de gota), catalase
negativos. Embora esses microrganismos faam parte da microbiota normal da pele, vias
areas, aparelho genito-urinrio e trato intestinal, muitos deles so responsveis por
uma variedade de manifestaes clnicas. Os estreptococos necessitam de meios de
cultura enriquecidos pela adio de sangue (gar-sangue) e possuem capacidade
hemoltica. Sendo assim, so classificados como -hemolticos (hemlise total), hemolticos (hemlise parcial) e -hemolticos / no-hemolticos (no causam hemlise).
Os estreptococos de maior importncia clnica so:
Catalase
Coagulase
Manitol
Novobiocina
S. aureus
Sensvel
S. epidermides
Sensvel
S. saprophyticus
Resistente
Catalase
Hemlise
Bacitracina
Optoquina
CAMP
S. pyogenes
Sensvel
Resistente
S. agalactiae
Resistente
Resistente
S. pneumoniae
Resistente
Sensvel
Neisseria sp
ENTEROBACTRIAS
Grupo de bacilos G- encurvados ou retos, anaerbios facultativos, que podem ou no
apresentar motilidade (flagelos) e que possuem muitas propriedades em comum. Embora possam
ser encontradas amplamente na natureza, a maioria habita os intestinos do homem e dos animais.
Elas so associadas quadros diarricos e desintricos, podendo tambm estar associadas
quadros de meningite, pneumonias, intoxicao alimentar e infeces urinrias.
O representante clssico deste grupo a Escherichia coli, um dos mais importantes
membros da flora intestinal dos mamferos e um importante patgeno, causador de infeco no
trato intestinal e urinrio. As outras enterobactrias tambm podem ser chamadas de coliformes,
devido a importncia da E. coli na medicina.
Impediente para:
MacConkey
Bactrias Gram-positivas
Enterobactrias em geral
Teague
Bactrias Gram-positivas
Enterobactrias em geral
SS
Bactrias
Gram-positivas
microbiota intestinal normal
germes
gar-VB
Bactrias
Gram-positivas
microbiota intestinal normal
germes
Wilson-Blair
Bactrias
Gram-positivas
microbiota intestinal normal
germes
da S. typhi
EPM-MILI (Probac)
Meio EPM: este meio uma modificao do meio de Rugai e Arajo, e contm os testes de
produo de gs por fermentao da glicose, produo de H2S, metabolizao da uria e do
triptofano (LTD).
Meio MILI: so determinadas a motilidade, produo de indol e metabolizao da lisina.
Os sete testes do EPM-MILI associados fermentao da lactose, observada nas placas de
isolamento (gar SS ou MacConkey), permitem a identificao presuntiva das seguintes
enterobactrias: E. coli, Salmonella sp, Shigella sp e Yersinia enterocolitica.
Semeadura: Tocar com o fio de platina uma colnia bem isolada e inocular nos 2 meios. Para
inocular o meio EPM, introduzir at o fundo do tubo e ao retir-la, semear a superfcie do meio. A
inoculao do meio MILI deve se feita por picada central, introduzindo o fio de platina at o fundo
do tubo. Incubar os tubos com as tampas semi-rosqueadas a 37C e fazer leitura aps 18 a 24
horas.
Leitura e Interpretao:
Meio EPM:
Produo de gs: aparecimento de bolhas ou deslocamento do meio de cultura para cima.
Produo de H2S: enegrecimento do meio em qualquer grau.
Metabolizao da uria: aparecimento de cor azul ou verde-azulada (reao fraca) que estende
para a base do meio, envolvendo-o totalmente ou no.
LTD: aparecimento de cor verde-escuro na superfcie do meio; quando a reao negativa, a
superfcie do meio adquire colorao azul ou amarela (rara).
Meio MILI:
Motilidade: a bactria mvel cresce alm da picada, turvando parcial ou totalmente o meio; a
bactria imvel cresce somente na linha de semeadura.
Metabolizao da lisina: se a lisina metabolizada, o meio adquire colorao arroxeada;
quando o aminocido no metabolizado, o meio se torna amarelo nos seus 2/3 inferiores.
Produo de indol: aps a leitura dos testes de motilidade e lisina, adicionar 3 a 4 gotas do
reativo de Kovacs superfcie do meio e agita levemente; quando a bactria produz indol, o
reativo adquire cor rosa ou vermelha; quando no produz, o reativo mantm sua cor original.
Yersinia
enterocolitica
H2S
Urease
LTD
Motili-
Indol
Lisina
dade
Base
amarela
e
superfcie
Ausncia de bolhas de gs
enegrecimento.
azul.
e de
-a
+/-
Base
amarela
e
superfcie
Ausncia de bolhas de gs
enegrecimento.
azul.
e de
EIEC
Salmonella sp
Meio MILI
Gs
Shigella sonnei
EPEC, ETEC e
outras
Aspecto geral
+/-
+/-
+/-
+/-
-b
+/-
a)
b)
Gs
Uria
H2 S
Lisina
Mot
-/+
-/+
+/-
Klebsiella sp
Serratia sp
Providencia sp
E. coli
Shigella sp
Salmonella sp
Proteus sp
Enterobacter sp
Citrobacter sp
+ = prova positiva
- = prova negativa
Indol
LTD
Sacarose Glicose
+/-
Esta tabela vlida somente para o meio de Rugai e este aspecto apresentado refere-se a
amostras de perfil bioqumico tpico.
Outros fatores como procedncia do material, resistncia a antimicrobianos, sorologia e provas
bioqumicas adicionais devem ser necessrias para a o identificao final do microrganismo em
questo.
Neste meio, devido grande diversidade de substratos, pode ocorrer interferncia entre as reaes
observadas. O microbiologista deve estar atento a este fato.
ANTIBIOGRAMA (ATB)
Antibiogramas so bioensaios conduzidos in vitro que visam testar a
sensibilidade de bactrias frente aos antimicrobianos. A proposta primria deste teste
guiar o clnico na escolha do agente apropriado para a terapia. Alm disso, estes testes
so utilizados para avaliar in vitro a atividade de novos agentes.
ANTIMICROBIANOS
Os antimicrobianos compreendem:
Agentes quimioterpicos: substncias qumicas sintetizadas em laboratrio
Agentes antibiticos: molculas produzidas por seres vivos como bactrias e
fungos. (Ex: Penicilinas, produzidas pelo Penicillium sp e Cefalosporinas produzidas
pelo Cephalosporium sp)
Agentes antibiticos semi-sintticos: molculas parcialmente sintetizadas por
microrganismos, concludas em laboratrio
resistentes
aos
Bactria
Staphyococcus sp
Grau de
capacidade
+++
Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae
Neisseria gonorrhoeae
++
Neisseria meningitidis
Enterobacteriaceae
Pseudomonas sp
++++b
+++
Haemophilus influenzae
++
Anaerbios
Micobactrias
++
Espiroquetdeos
2-
Semeie a suspenso sobre a superfcie estril de uma placa contendo gar MellerHinton, utilizando sucessivamente trs direes para obter um inculo uniformemente
espalhado sobre toda a superfcie do gar.
3-
4-
5-
MICOLOGIA
Os fungos so seres eucariticos pertencentes ao Reino Fungi, que podem possuir um
s ncleo (leveduras) ou vrios ncleos (filamentosos ou bolores). Eles podem ser saprfitas
(nutrem-se de matria orgnica morta) ou parasitrios (nutrem-se de matria orgnica viva).
Um fungo formado estruturalmente por:
Parede celular: estrutura rgida que protege a clula de choques osmticos e mantm
sua forma.
Membrana citoplasmtica: atua como uma barreira entre os meio exterior e interior da
clula fngica, e realiza o transporte de solutos alm de outras funes.
Ncleo: contm genoma fngico composto por DNA, RNA e protenas.
Ribossomos: sntese protica.
Mitocndria: produo de energia.
Retculo endoplasmtico: produo de protenas e lipdeos.
Aparelho de Golgi: armazenam substncias desprezadas pela clula, glicognio e
lipdeos.
Lomassomos: corpculos de funo ainda desconhecida.
Para que um fungo se desenvolva, eles necessitam de algumas substncias como: O2,
H2O, carboidratos simples (glicose, sacarose, maltose, amido, celulose), substncias
nitrogenadas e vitaminas. Os meios de cultura fngica mais utilizados so o gar Sabouraud e
o gar batata.
Em meios de cultura, dependendo das condies nutricionais e de
temperatura, os fungos podem se desenvolvem e obter morfologias diferentes, como
acontece no dimorfismo fngico (capacidade fngica de se desenvolver sob a forma de
levedura e/ou bolor).
Colnias leveduriformes
Colnias filamentosas
Leveduras
MICOSES
MICOSES SUPERFICIAIS e CUTNEAS
Ptirase Versicolor (micose de praia) dermatose
cosmopolita, que produz aparecimento de manchas
esbranquiadas pela pele, principalmente no tronco e
abdmen. causada pela Malassezia furfur.
Candidase pode acometer boca, garganta, couro cabeludo, vagina, dedos, unhas,
brnquios, pulmes, trato gastrintestinal ou fungemia. Seu principal agente a espcie
Cndida albicans.
MICOSES SUBCUTNEAS
Os agentes de micoses subcutneas vivem em estado saproftico no solo, nos
vegetais e nos animais de vida livre, sendo parasitas acidentais do homem e dos
animais, que se infectam por ocasio de um traumatismo na pele, com material
contaminado. Em geral, a micose se localiza na pele e tecido subcutneo, prximo ao
ponto de inoculao, sendo rara sua disseminao.
Doena de Jorge-Lobo
Causada pelo Lacazia loboi,
que ainda no foi cultivado.
Gera
leses
quelides,
multilobuladas,
ulceradas,
endurecidas, localizadas ou
disseminadas.
MICOSES PROFUNDAS
Procedimento 3 Microcultivo.