Deteccin de Salmonella

I.INTRODUCCION.
EL GNERO Salmonella
Salmonella sp. es la Enterobacteria de mayor importancia a nivel de salud
pblica por producir trastornos del tracto gastrointestinal y septicemia no solo
en el ser humano, sino en todas las especies animales (Selbitz et al; 1995)
Los microorganismos del gnero Salmonella estn extensamente
diseminados en la naturaleza como comensales y como patgenos del
aparato digestivo de los mamferos domsticos y silvestres, aves, reptiles e
insectos, en los cuales pueden llegar a producir una amplia gama de
enfermedades. Todas las salmonelas son potencialmente patgenas (Stanchi
2007)
Los miembros del gnero Salmonella son bacilos Gram-negativos, de 0,7-1,5
x 2,0-5 m, no fermentadores de lactosa, anaerobios facultativos, no
esporulados (Terragno et al, 2003); generalmente mviles por flagelos
pertricos con la excepcin de Salmonella gallinarum y Salmonella pullorum,
responsables de la tifoidea aviar y pullorosis respectivamente (Stanchi 2007,
Terragno et al, 2003).
Posen metabolismo fermentativo y oxidativo; fermentan glucosa con
produccin de cido y gas (excepto S. typhi), tambin fermentan L-arabinosa,
maltosa, D-manitol, D- manosa, L-ramnosa, Dsorbitol, trehalosa, D-xilosa y Ddulcitol (Terragno et al, 2003). Son oxidasa negativo, catalase positivo, indol y
Voges- Proskauer (VP) negativo, rojo de metilo y citrato de Simmons positivo,
producen H2S, son urea negativo, lisina ornitina y descarboxilasa positivo
(Terragno et al, 2003). Entre otras caractersticas bioqumicas se encuentran
la reduccin de nitratos a nitritos, no desaminan la fenilalanina y son
tetrationato reductasa (Jawetz, et al, 2005).
La estructura antignica de Salmonella sp. es similar a la de otras
Enterobacterias, contando con la presencia de dos clases de antgenos
principales: Antgenos O (somticos) y Antgenos H (flagelares). En algunas
cepas se encuentra un tercer tipo de Antgeno de superficie, anlogo
funcionalmente a los Antgenos K (capsulares) de otros gneros. Al estar
este antgeno relacionado con la virulencia de las cepas se le denomina
Antgeno Vi (Koneman y Allen. 1999), que puede interferir con la aglutinacin
por antisueros O y que se relacionan con invasividad (Jawetz et al, 2005).

CONSIDERACIONES GENERALES:
Los mtodos para el aislamiento e identificacin de Salmonella a partir de los
alimentos pueden considerarse divididos en 5 etapas sucesivas:

Enriquecimiento no selectivo
Enriquecimiento selectivo
Aislamiento selectivo, siembra en placa de medios solidos selectivos y
diferenciales
Identificacin bioqumica, estudio de las caractersticas bioqumicas de
las colonias sospechosas.
Anlisis antignico, en dos fases:
(a) empleo del antisuero polivalente antisuero polivalente H, y
(b) utilizacin de los antisueros especficos del grupo 0 y H.
Tipificacin por medio de bacterifagos.

Los tres primeros pasos se refieren al aislamiento y los tres ltimos a la

identificacin. El primer paso tiene como fin la revitalizacin de las salmonelas
daadas por las diferentes condiciones de tratamientos industriales o de
almacenamiento. El segundo paso es de enriquecimiento selectivo y sirve para
favorecer el crecimiento de las salmonelas en un ambiente que puede contener
gran nmero de bacterias diferentes de ellas mismas. El tercer paso permite la
visualizacin de las colonias sospechosas, Por su aspecto caracterstico. El
cuarto paso se refiere a la identificacin bioqumica.
El quinto paso conduce por medio de pruebas serolgicas, a la identificacin
definitiva de las cepas sospechosas como miembro del genero Salmonella. El
sexto paso logra La identificacin mas exacta, identificacin que es de
particular inters para propsitos epidemiolgicos, ya que los tipos serolgicos
de un grupo fgico como suelen tener el mismo origen y a la inversa, las cepas
que presentan igual estructura antignica, pero diferente grupo fgico, son
probablemente de diferente origen.
II.

III.

OBJETIVOS:
Disponer de un mtodo para investigar la presencia de Salmonella en
un alimento de consumo humano.
MATERIALES:
Vasos para homogenizar
Balanza elctrica.
Estufa de 35 a 37C
Pipetas bacteriolgicas
1ml
Matraz de 500 ml
Placas Petri
Tubos de ensayo

de

Agua peptonada
Agua destilada estril
Caldo
tetrationato
verde
brillante
Agar Salmonella Shigella
Agar MacConkey
Agar Hierro Azcar
Agar Lisina Hierro

IV. PROCEDIMIENTO:

1. Pre enriquecimiento:

Preparacin de alimentos para el aislamiento de Salmonella

Los siguientes mtodos estn basados en el anlisis de una unidad
analtica de 25 g en una relacin de muestra/caldo de 1:9. Dependiendo
del grado del compsito, aadir suficiente caldo para mantener esta
relacin 1:9, a menos que se indique lo contrario. Para muestras que no
son analizadas con un peso exacto, por ejemplo, patas de rana,
remitirse al mtodo especfico para instrucciones.

2. Enriquecimiento Selectivo:

Ajustar Ia tapa y agitar suavemente la mezcla de muestra incubada

(excepto camarones); transferir 1 ml de la mezcla a 10 ml de Caldo
Selenito-Cistina (SC) y 1 ml de mezcla a caldo Rappaport-Vassiliadis
(RV), o Caldo Tetrationato verde brillante a 24 2 h a 35C, y el medio
de RV por 24 2h a 43C en bao Mara.

Mezclar (en vortex, si es tubo) y sembrar por agotamiento y estra o asa

de 3 mm de caldo de SC y RV en medios de aislamiento selectivo. Agar
SS, XLD y agar Rambach. Incubar las placas 24 2 h a 35C.

3. Siembra En Placa En Medios De Agar Selectivo:

Examinar las placas para detectar la presencia de colonias que se

sospeche con Salmonella.

a) Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD). Colonias rosadas con o sin

centros negros.

Muchos cultivos de Salmonella pueden tener grandes centros negros y

brillantes o pueden aparecer como colonias completamente negras.
Atpicamente, algunas especies de Salmonella producen colonias
amarillas con o sin centros negros.

b) Agar SS. Colonias incoloras o transparentes, con o sin centro negro.

c) Agar Rambach. Colonias rojas caractersticas.

d) Agar MacConkey. Los microorganismos no fermentadores de lactosa

producen colonias incoloras.

4. Pruebas Bioqumicas:

Seleccionar 2 o ms colonias tpicas (o sospechosas) de Salmonella de

cada agar selectivo. Inocular en Agar Triple Azcar Hierro (TSI), Agar

Lisina Hierro (LIA). Tocar suavemente el centro de la colonia que se va a

escoger con una aguja de inoculacin estril, e inocular el TSI
sembrando en estras cultivo inclinado y picando la columna del medio.
Sin flamear, inocular Agar LIA picando la columna del medio tres veces y
luego sembrando en estras cultivo inclinado.

Incubar a 35C por 24 2h. Tapar los tubos sin ajustar demasiado para
mantener las condiciones aerbicas durante Ia incubacin de los cultivos
inclinados, para prevenir una excesiva produccin de H 2S.

Generalmente, la Salmonella en cultivo de Agar TSI produce

tpicamente en Ia parte inclinada una reaccin alcalina (roja) y en la
columna del medio una reaccin acida (amarillo), con o sin produccin
de H2S (oscurecimiento del agar).

En el caso del Agar LIA, Ia Salmonella produce tpicamente una reaccin

alcalina (prpura) en la columna del medio en el tubo. Considerar una reaccin
acida (negativa) solo cuando la columna presente un color amarillo distintivo.
No eliminar los cultivos que producen decoloracin en Ia columna del medio
nicamente sobre esta base. La mayora de cultivos de Salmonella producen
H2S en Agar LIA. Algunos cultivos que no son producen una reaccin rojoladrillo en el Agar LIA.

Las colonias identificadas bioqumicamente como Salmonella son

enfrentadas a diversos sueros para su confirmacin serolgica.

Diagrama para aislamiento de Salmonella

Caldo Tetrationato

Agar MacConkey

5. Pruebas Serolgicas Para La Identificacin De Salmonella.

a) Tcnica para la reaccin con el antisuero polivalente o somtico en

suero o porta:
Los antisueros polivalentes O no contienen aglutininas para los
antgenos de algunas salmonellas. Debido a esto dan algunas reacciones
negativas.

b) Tcnica para la reaccin con el antisuero polivalente flagelar:

Los cultivos que son inmviles dan resultados negativos cuando se
ensayan de nuevo con el antisuero polivalente H, flagelar.

c) Tcnica para la reaccin con cada uno de los antisueros o de grupo

Esta prueba se lleva a cabo para determinar el grupo O (somtico) al
que pertenece el cultivo en estudio.

d) Tcnica para la reaccin de los antisueros h (flagelares) de Spicer

Edwars:
Estas reacciones pueden llevarse a cabo en vez de la reaccin con el
antisuero polivalente H (III anterior) para determinar la presencia o
ausencia de antgenos H.

6. Tipificacin De Salmonella Mediante Bacterifagos:

La tipificacin mediante bacterifagos es una ayuda muy interesante y

deseable, desde el punto de vista epidemiolgico, para la identificacin
de Salmonelas, para la cual ya existen fagos adecuados. La produccin
de fagos de Salmonella est bajo el control de la OMS, pero an no es
posible la distribucin Internacional de los Bacterifagos con que se
cuenta actualmente.

V.

BIBLIOGRAFIA:

Moreno Garca, Microorganismos de los alimentos su significado y

mtodos de enumeracin / ICMSF, (2 EDICION.)

Manual de anlisis de microbiologa de los alimentos. Direccin general
de salud ambiental. Lima- Per 2001. Ministerio de salud (MINSA)