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1. INTRODUCCIN :
Cursos prcticos de bioqumica pretenden introducir a los estudiantes
las propiedades bsicas de los materiales biolgicos y satisfacer los
deseos de los estudiantes para llevar a cabo investigaciones de
investigacin similar. El estudio de la activacin y la inhibicin de las
enzimas proporcionan un rea de tema nico para lograr este ltimo
propsito. Sin embargo, el nmero de enzimas adecuadas para el
estudio de ambos efectos es limitado debido a los procedimientos de
purificacin sofisticadas ya que implican un equipo que no es
disponible comnmente en el laboratorio prctico.
polifenoles oxidasa de uva es una enzima ideal para estos estudios,
ya que tiene un protocolo de purificacin fcil (menos de tres horas) y
se encuentra como un precursor inactivo (forma latente) que puede
ser activado por varios agentes.
Adems, esta enzima no est muy alejada de la vida cotidiana de los
estudiantes, ya que se relaciona con el proceso de tostado indeseable
de frutas, jugos y verduras. Este pardeamiento es causado
principalmente por la oxidacin de fenoles en el tejido de la planta
por esta protena que contiene cobre multifuncional. Cataliza tanto
orto-hidroxilacin de monofenoles a o-difenoles (actividad cresolasa)
y la posterior oxidacin de o-difenoles a o-quinones (actividad
catecolasa). Este ltimo reacciona con s mismos y tambin con
aminocidos y protenas para dar las caractersticas pigmentos
oscuros que disminuyen el valor comercial de las frutas y verduras.
Este documento ilustra algunos de los inhibidores utilizados para
controlar la actividad de la polifenol oxidasa y algunos de los agentes
capaces de la activacin de la enzima latente, cuyo estudio y el
mecanismo de accin son de gran inters industrial.
2. MATERIALES Y MTODOS
Reactivos bioqumicos eran de Sigma (St Louis, MO), metabisulfito de
sodio de Merck y todos se usaron sin purificacin adicional.
Enzyme purificacin de uva polifenol oxidasa se purific mediante el
uso de Triton X-114 particin de fase. La enzima obtenida de este
modo fue latente, y tuvo que ser activado antes de que pudiera ser
medido.
actividad de la oxidasa de polifenol ensayo enzimtico hacia catecol
terc-butilo (TBC) se determin en un espectrofotmetro de registro a
400 nm. La mezcla de reaccin contena 1,5 ml 50 mM de tampn de
acetato, pH 5,0, 1 ml TBC 5 mM y 0,2 ml de
La
inhibicin
de la polifenol
oxidasa por el
cido cinmico
con
dos
espectrofotmetro. La etiqueta de
concentracin de ascorbato utilizado
cada
lnea
representa
la