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MICROBIOLOGIA FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES

GENERAL

ENERO 2016V

OBSERVACION E IDENTIFICACION MICROSCOPICA DE BACTERIAS


EXAMEN DIRECTO Y COLORACION SIMPLE
OBJETIVOS:

Conocer las tcnicas de coloracin bacteriana


Uso correcto de las tcnicas de coloracin
Conocer las diferentes formas bacterianas

INTRODUCCIN:

Los microorganismos, concretamente las bacterias, pueden observarse directamente al


microscopio de campo claro. Sin embargo, debido al bajo contraste entre las clulas y su
entorno, estos procedimientos se utilizan en ocasiones muy limitadas. La tincin es un
mtodo sencillo para incrementar el contraste entre la clula y su entorno y por lo tanto
contribuye a mejorar la imagen observada.
MARCO TERICO:
Colorantes.- Los colorantes son sustancias de origen qumica o biolgico,
generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la
coloracin de tejidos microorganismos para exmenes microscpicos, debiendo tener
al menos, un grupo cromforo que le proporcione la propiedad de teir.
Origen de obtencin de los colorantes:
Colorantes naturales. Los colorantes naturales son bsicamente histolgicos,
encontrndose entre los empleados con mayor frecuencia, los siguientes:

ndigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigfera que


contiene indican, el cual se fermenta para producir el colorante.
Carmn: Se produce, mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metlicas
a hembras del insecto cochinilla "Coccus castis".
Orcena y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de lquenes
de los gneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria.
Hematoxilina: Este colorante se extrae con ter de la madera de un rbol oriundo
de Mxico y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxilium
campechianum.

Colorantes sintticos. Se obtiene de la anilina, o es ms exactamente del alquitrn de


hulla siendo todos derivados del benceno.
Clasificacin
Los colorantes se clasifican, teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra
en el anin o el catin de su estructura qumica. Sobre esta base se pueden dividir en
tres grupos: bsicos, cidos y neutros.

Colorantes bsicos: La accin colorante est a cargo del catin, mientras que el
anin no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.
Colorante cido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante esta a cargo del
anin, mientras que el catin no tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+

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Colorantes neutros: Estn formados simultneamente por soluciones acuosas de


colorantes cido y bsicos, donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente
en alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la propiedad tintorial de sus
componentes cidos y bsicos, por ejemplo: la giemsa.

Toxicidad de los colorantes. Ventajas y Desventajas.


Los colorantes son sustancias txicas, por lo tanto el proceso de la tincin
generalmente resulta letal para los microorganismos, provocando su inmovilizacin, lo
cual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador. Veamos algunos
Ejemplos:

Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tincin


se reducen las posibilidades de contaminacin para el manipulador.
Los colorantes pueden ser txicos para el manipulador, algunos incluso han
resultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos del
mercado.
Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o
gneros bacterianos, siendo utilizados como constituyentes de medios de
cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y
favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. Por ejemplo:
el verde de malaquita.
Otros se emplean como desinfectantes microbianos, mas que para teir, con
fines de microscopia, por sus propiedades bacterianas o bacteriostticas.
Algunos tipos de colorantes son empleados no para teir, sino como
indicadores de pH, formando parte de la composicin de los medios de cultivo
para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en el
medio como consecuencia de su actividad metablica. Ejemplo: rojo fenol, azul
de bromotimol, etc.

Mtodos de coloracin

Tincin simple: En la tincin simple se utiliza un solo colorante con el que se tie
rpidamente el microorganismo, utilizndose fundamentalmente para observar su
morfologa y tamao. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este
tipo de tincin son los siguientes: azul de metileno, violeta cristal y fuscina
fenicada,
entre
otros.

Azul de metileno, cuyo nombre cientfico es Cloruro de Metiltionina, es un colorante que


se usa para tratar una enfermedad llamada metahemoglobinemia. Es un compuesto
qumico heterocclico aromtico con frmula molecular: C16H18ClN3S.

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Atendiendo a los objetivos que se persigan, los mtodos de coloracin se clasifican en:
Tincin simple, tincin compuesta y tincin especial.

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Tincin compuesta: En este tipo de tincin, se utiliza ms de una sustancia


tintrea. Los colorantes se aplican, a la preparacin, separados o juntos, formando
parte de una solucin. En consecuencia se puede determinar algunas
caractersticas propias de diversos gneros que permiten diferenciarlo de los
dems, por lo que reciben tambin el nombre de coloraciones diferenciales. Entre
los mtodos mas utilizados se encuentran: La coloracin de Gram. y la de Ziehl
Neelsen.

CUESTIONARIO:

2. Describa los componentes de un colorante


Estn conformados qumicamente por uno o ms anillos bencnicos con dos tipos
distintos de grupos radicales.
Grupo radical cromforo: es responsable de brindar el color a las sustancias y que
usualmente se encuentra cargado positiva o negativamente. Mientras exista mayor
cantidad de grupos cromforos, dicho colorante poseer mayor capacidad de
coloracin.
Grupo radical auxcromo: no tiene propiedades colorantes pero ayuda a dar
estabilidad a la molcula.

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1. Mencione los factores que afectan toda tcnica de coloracin.


Algunos de factores que afectan las tcnicas de coloracin bacteriana son los
siguientes:
El pH del colorante, determina la fijacin correcta o no del colorante en la
estructura de los microorganismos.
Concentracin del colorante, a mayor concentracin mayor ser el error en el
proceso, y a menor concentracin menor ser el error.
Conservacin del colorante, este deber ubicarse siempre en lugares secos,
frescos y oscuros, adems de estar adecuadamente encasados y etiquetados.
Tcnica de la coloracin, el proceso de cada tcnica debe ser realizado
correctamente.
Temperatura, se aplica en cada tcnica segn se precise para la penetracin
del colorante en la estructuras bacterianas.
Agentes xido-reductores
El frotis, si se hizo correctamente.
Tiempo de coloracin, luego se agregar el colorante

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3. Indique a que se denomina MORDIENTE, mencione algunos ejemplos.


Mordiente proviene del latn morder que significa morder, apresar y agarrar; que
es lo deseado en las fibras naturales en el campo textil, dando a estas la capacidad de
atrapar las partculas de color.
El mordiente es una sustancia que tiene como misin servir de puente o enlace entre
el tinte y las fibras, permitiendo que las partculas colorantes que poseen las materias
tintreas queden adheridas a la estructura de las fibras de forma permanente, es decir
con capacidad de resistir a la accin del agua, el rozamiento, la luz solar entre otros
que afectan la perdurabilidad de los colores en las fibras.
Algunos ejemplos de mordiente son: alcohol etlico, cido crmico, hematoxicilina.
4. Porqu es importante el colorante y las coloraciones.
La importancia de los colorantes y las coloraciones reside en las funciones que
cumplen en los mtodos de observacin e identificacin de microorganismos, debido a
que estos son transparentes. Los colorantes y las coloraciones nos revelaran en la
observacin, las estructuras internas y externas de los microorganismos, por medio de
reacciones qumicas especificas
Las coloraciones incrementan el contraste entre la clula y su entorno y por lo tanto
contribuye a mejorar la imagen observada. Las tcnicas de tincin con diversos
colorantes facilitan la observacin al aumentar notablemente el contraste.

Nombre del microorganismo:


- Penicilium
Tipo de colorante:
- Bsico
tipo de coloracin:
- Coloracin simple Azul Lactofenol
Muestra :
- Cultivo puro

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5. Realice esquemas de todo lo observado.


Nombre del microorganismo:
- Criptococcus neorformous
Tipo de colorante:
- Tinta china
tipo de coloracin:
- Tincin negativa simple indirecta
Muestra :
- Cultivo puro hongo levaduriforme

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Nombre del microorganismo:


- Clula eucariota, bacilos, diplococos
Tipo de colorante:
- Bsico
tipo de coloracin:
- Coloracin simple Azul de Metileno
Muestra :
- Hisopado bucal

Nombre del microorganismo:


- Clula
eucariota,
diplococos
lanzeolados, bacilos curvos
Tipo de colorante:
- Bsico
tipo de coloracin:
- Coloracin simple Azul de Metileno
Muestra :
- Hisopado bucal
Nombre del microorganismo:
- Sarcina, estreptococo
Tipo de colorante:
- Bsica
tipo de coloracin:
- Coloracin simple Azul de Metileno
Muestra :
- Hisopado bucal

Nombre del microorganismo:


- Clula eucariota, estafilococo ,
diplococo, coco, bacilo
Tipo de colorante:
- Bsica
tipo de coloracin:
- Coloracin simple Azul de Metileno
Muestra :
- Hisopado bucal

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Nombre del microorganismo:


- Diplococos
Tipo de colorante:
- Bsica
tipo de coloracin:
- Coloracin simple Azul de Metileno
Muestra :
- Hisopado bucal