UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SINALOA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICO-BIOLGICAS

CUESTIONARIO ENZIMAS

1. Si el sitio activo de una enzima normalmente consiste de una serie de

aminocidos, por qu se necesita al resto de la protena?
Se requiere el resto de la protena ya que esta desempea la funcin de
mantener la estructura tridimensional del sitio activo necesaria para la catlisis
y se necesita para mantener la cadena polipeptdica en la posicin correcta,
proporcionar sitios de unin adicionales para los objetivos regulatorios y
localizar las protenas en la clula.

2. En la presencia de alcohol deshidrogenasa la velocidad de reaccin de

acetaldehdo a etanol incrementa a medida que se incrementa la
concentracin de acetaldehdo. Eventualmente la velocidad de reaccin
alcanza un mximo, en donde la concentracin de acetaldehdo no tiene
efecto. Explique qu est sucediendo
En toda reaccin en la que participa una enzima como catalizadora, conforme
aumenta la concentracin de sustrato, en este caso el acetaldehdo, aumenta
le velocidad de la reaccin. Sin embargo, si la concentracin se lleva a un
punto de saturacin, la enzima ya no estar libre para seguir aceptando
sustrato, por ello la velocidad se mantiene constante, independientemente de
la cantidad de sustrato que se le aada. Debido a ello cuando se representan
estos casos en una grfica que relacione velocidad vs concentracin, siempre
se podr observar una hiprbola.

3. Defina Km y Kcat e indique porque son importantes estos parmetros?

Km (constante de Michaelis-Menten)
Es la concentracin de sustrato a la cual la reaccin alcanza la mitad de su
velocidad mxima, es un valor caracterstico de cada enzima y constituye una
medida de la afinidad del enzima por el sustrato: valores bajos de KM indican
una alta afinidad mientras que valores altos representan una baja afinidad.
Kcat (constante para cada enzima)
Tambin conocida como numero de recambio, es el nmero de molculas de
sustrato convertidas en producto por molcula de enzima y unidad de tiempo,
en condiciones de saturacin de sustrato. Representa la eficiencia de la
enzima.
Son importantes ya que son tiles para evaluar la eficiencia cintica de los
enzimas. Pero para este fin no es suficiente cada uno de estos parmetros por
si solos. As mismo, son tiles para el estudio y comparacin de diversas
enzimas.

4. Qu es el estado de transicin de una reaccin? Explique mediante un

diagrama como es la energa libre de activacin se realiza una reaccin
qumica sin y con la ayuda de una enzima

En la grfica se observa que la energa de transicin es una de las variables

dependientes del progreso de

una

reaccin.

Esta es

la cantidad de energa a
aplicar para que comience la
reaccin. Es decir, lleva al
sustrato a un estado de
transicin a una
Temperatura determinada. En la
figura se muestra el cambio de energa libre de una reaccin catalizada
enzimticamente (Lnea Continua) y la misma no catalizada (Lnea Punteada)
Notamos una gran diferencia entre ambas reacciones, aunque en su estado
inicial y final sea igual. Su diferencia radica en que la reaccin sin catalizar
posee mayor energa de activacin ya que el estado de transicin (energa de
activacin mxima para dar lugar a productos) est en un nivel de energa
mayor. En cambio en la reaccin catalizada se ocupa mucho menor energpia
de activacin llegando al estado de transicin ms rpido.
Vemos que la reaccin catalizada comienza a formar producto sin necesidad de
tanta energa como la reaccin sin catalizar, aunque ambas lleven el mismo
progreso de la reaccin.

5. Cules son las variables que influyen en una reaccin enzimtica o

Concentracin del enzima o Concentracin del sustrato o PH o Temperatura o
Efectores (activadores e inhibidores)

6. Imagine que usted est trabajando en la extraccin de una enzima y quiere

saber cul es el comportamiento enzimtico o actividad enzimtica de esa
enzima. Describa Cmo lo hara?
La presencia de una enzima es determinada por la medida de la reaccin que
cataliza, pudiendo as estimar la cantidad de enzima por la velocidad de la
reaccin. La caracterizacin de una enzima implica la determinacin de su
actividad en diferentes condiciones.
Adems de considerar la variacin de la velocidad con el tiempo, se debe tener
en cuenta que la actividad de un enzima es afectada por otros factores como la
temperatura, el pH, la fuerza inica, la concentracin del sustrato, y as como
tambin la cantidad de enzima en el medio de medida. Para hacer la
determinacin cuantitativa del sustrato o producto se puede hacer por distintos
mtodos analticos, segn sea el caso: espectrofotomtricos, volumtricos,
potenciomtricos, radioqumicos, etc.

lndique los modelos de accin enzimtica

o Modelo de llave y cerradura

Se denomina as debido a que el sito activo de la enzima tiene una forma
definida y rgida a la vez, por su contraparte el sustrato tiene la forma que
encaja en el sitio activo de la enzima, eso las hace ser tan especficas. (Este
modelo tiene problemas con la cintica enzimtica por la rigidez del sitio activo,
este reducira la efectividad de la enzima) o Modelo de ajuste inducido
Es el modelo ms aceptado ya que se adapta ms a la cintica enzimtica. El
sitio activo del enzima presenta cierta flexibilidad, y esto a su vez le permite
ser capaz de modificar la alineacin de sus grupos funcionales, permitiendo as
mejores enlaces entre enzima-sustrato y con ello garantiza que se lleve a cabo
la catlisis.
o Estabilizacin del estado de transicin
El sitio activo de la enzima muchas veces acta como un molde flexible
molecular donde el sustrato se una de forma geomtrica adecuada para llegar
al estado de transicin lista para convertirse en producto.
La formacin del complejo ES mantiene al sustrato en la orientacin correcta y
facilita las interacciones entre los grupos funcionales que van a la reaccin.
La interacciones dbiles formadas entre enzimas y sustrato sustituyen a las
que habr entre S y agua, as se elimina la capa de solvatacin del Sustrato
facilitando su transformacin a producto mediante el secuestro del sustrato en
el centro activo de la enzima, elimina la barrera energtica que exista con las
interacciones del H2O e incrementa las interacciones no covalentes entre E y S
acelerando la reaccin.

7. Determine la clase de enzima que cataliza cada una de las reacciones

siguientes:

a)

Oxidoreductasa

b)

Transferasas

c)

Liasas

d) Oxidorreductasa

e) Ligasas

9. En el siguiente grfico, se muestran los pH ptimos de tres enzimas Qu

puede decir al respecto?
En el grfico se observa como tres
enzimas a pesar de ser distintas
comparten

un

mismo

grado de

actividad mxima, sin embargo sus

pH

ptimos

respectivos,

son

distintos. Cabe sealar que

la

mayora de las enzimas presentan

un pH ptimo para el cual su actividad es mxima y tanto por
encima como por debajo de ese pH, la actividad de esa enzima disminuye
bruscamente.
10. Explique cul es la influencia de las variaciones de temperatura sobre las
velocidades de reaccin enzimtica.
a) Dibuje un grfico de la velocidad de reaccin en funcin de la
temperatura explicando qu pasa a baja temperatura y alta temperatura
La

velocidad

de

una

reaccin

enzimtica vara dependiendo de la

temperatura. La elevacin de la
temperatura
velocidad

incrementa
de

una

la

reaccin

catalizada por enzimas; esta se

eleva debido al incremento en la
energa cintica de

las molculas reactantes. Cabe sealar que en este aumento, la temperatura se

encuentra dentro de un rango determinado, en el cual alcanza un valor mximo
que se denomina temperatura ptima. Cuando la temperatura est por encima
de este valor, el aumento de velocidad de la reaccin es contrarrestado por la
prdida de actividad cataltica, lo que provoca la prdida de la estructura
tridimensional de las enzimas (desnaturalizacin). Posteriormente la actividad
enzimtica decrece rpidamente hasta que termina por anularse.
11. Cul

es

la

diferencia

entre

inhibicin

enzimtica

inactivacin

enzimtica?
12.

Indique las afirmaciones correctas y reescriba correctamente aquellas

que considere falsas:

A. Una

enzima

presenta

regulacin

alostrica

cuando

distintas

sustancias compiten con el sustrato a nivel del centro activo.

B. Se dice que una enzima se regula covalentemente cuando su actividad
es modificada por la unin de ciertos grupos qumicos a residuos de
aminocidos.
C. Hablamos de zimgenos cuando una enzima presenta distintas
estructuras moleculares que catalizan la misma reaccin.
D. La induccin o represin gentica permite modificar la actividad de
una enzima hacindola ms o menos activa, respectivamente.

E. La presencia de isoenzimas junto con la compartimentalizacin celular

permiten establecer un mecanismo eficiente de regulacin enzimtica
Respuesta:
a) Falsa.
La regulacin alostrica se desarrolla fuera del centro activo y
modifican la actividad enzimtica
b) Verdadero
c) Falsa
Los zimgenos son enzimas inactivas ha perdido su actividad
debido a diferentes factores, como factores fsicos, qumicos o aun
metablicos, necesita ser activada para convertirse en una enzima
activa, en especfico son precursores de las enzimas
d) Verdadero
e) Verdadero
13. Cmo se define la velocidad de un proceso enzimtico? Qu efecto tiene
sobre ella la cantidad de sustrato presente en el medio de reaccin?

Mediante el incremento de la reaccin de sustrato, la velocidad de la

reaccin aumentar debido al aumento de la probabilidad de formacin de
los complejos enzima-sustrato. Esto ocurrir hasta que no haya ms
enzimas disponibles para la formacin de complejos ES, lo que
corresponde a un punto en el que el cambio en la velocidad de reaccin es
mnimo o ya no aumenta.
14. Dnde actan los enzimas alostricos?
Este tipo de enzimas desempean un papel importante en la regulacin de
las reacciones metablicas. Actan como PUNTOS ESTRATEGICOS,
como la 1ra reaccin de una de las rutas metablica o los puntos de
ramificacin de una ruta, casi siempre el S de la 1ra reaccin de la ruta
metablica acta como modulador positivo o activador alostrico, que al

unirse a la enzima alostrica provoca la aparicin de la conformacin activa

de la enzima.
En las rutas metablicas no ramificadas el producto final acta como
modulador negativo o inhibidor alostrico, unindose a la enzima alostrica
y provocando su conformacin negativa.
En las rutas ramificadas el inhibidor de la primera enzima es el metabolito
del punto de ramificacin, mientras que los productos finales sern los
inhibidores de las enzimas alostricas que actan en la primera reaccin
despus de la ramificacin.
15. Define centro activo y complejo enzima-sustrato
El sitio activo es una hendidura o cavidad formada por las cadenas laterales
de residuos especficos y es por eso que con frecuencia tiene una
estructura tridimensional diferente al resto de la enzima. La estructura y
composicin de esta cavidad estn configuradas para que nicamente un
determinado sustrato tenga afinidad suficiente como para unirse a esta
zona de la enzima,
En este lugar es donde se produce la reaccin para la formacin de
productos. Es donde se forma el complejo Enzima-Sustrato y es en este
estado que disminuyen la energa de activacin.
Complejo ES: La molcula S se une al sitio activo de una enzima particular
formando el complejo E-S, esto es cuando la afinidad es grande en estas
dos molculas, por lo que la
enzima fija el S de manera que
queda

prxima

los

grupos

funcionales de reaccin de la
enzima, estabilizando la unin por
numerosas interacciones dbiles.
Despus de este complejo la enzima induce cambios en la molcula del S
que hacen disminuir su energa de activacin y conducen a la formacin de

un producto final y la liberacin de la enzima inalterada, que puede volver a

actuar de nuevo.
16. En los enzimas alostricos, es lo mismo el centro activo que el centro
alostrico?

No, no es lo mismo ya que el centro activo se encarga de la unin al ligando

o sustrato a la enzima. Mientras que el alostrico es una regin diferente a
la enzima donde acta un efector alostrico, para controlarla (activarla o
provocar la inhibicin de la enzima).
17. Cita tres propiedades por las que podamos considerar a los enzimas como
catalizadores.

Aumentan en gran magnitud la velocidad de una reaccin biolgica con un mayor

aprovechamiento de la energa.
No altera las variables termodinmicas del proceso, ni las constantes de equilibrio
de la reaccin porque el catalizador ni aporta ni consume energa del sistema.
La enzima no sufre cambios o modificaciones conformacionales al finalizar la
reaccin. Se mantiene exactamente igual que al inicio.
18. Diferencias entre inhibicin competitiva y no competitiva.

En el caso de la inhibicin competitiva, el inhibidor compite con el sustrato

por los sitios activos de la enzima, por lo que nicamente uno de los dos se
puede adherir a la enzima. En cambio en la inhibicin no competitiva, el
inhibidor no requiere del sitio activo para fijarse en la enzima y actuar, ya
que se adhiere a cualquier parte de ella, y el sustrato puede ser reconocido
por la enzima a travs de su sitio activo.

19. Qu caractersticas poseen los enzimas alostricos?

Realizan su funcin a travs de la unin no covalente, reversible, de compuestos
reguladores denominados moduladores o efectores alostricos.
Tienen estructura cuaternaria, es decir, presenta varias subunidades.
Adems de los sitios activos, los enzimas alostricos tienen uno o ms sitios
reguladores o alostricos para la unin del regulador. Cada sitio es especfico
para su modulador.
No se rigen por la cintica de Michaelis-Menten.
Los enzimas alostricos dan lugar a una curva de saturacin sigmoidea cuando se
grafica V0 contra [S], en lugar de la tpica curva hiperblica de los enzimas no
alostricos.
La unin de un regulador a un enzima alostrico modifica la estructura
tridimensional de la enzima y afecta la conformacin del sitio activo, por lo que
aumenta o disminuye su actividad segn sea el caso.
20. Explique la cintica enzimtica de Michaelis-Menten y cules son los
fundamentos de sta ecuacin.
La cintica enzimtica se encarga de estudiar la velocidad de las
reacciones qumicas que son catalizadas por enzimas, para tratar de
comprender as el mecanismo de accin de dicha enzima y el rol que sta
reaccin lleva acabo en el metabolismo. En este modelo la enzima se une
reversiblemente al sustrato formando el complejo ES que posteriormente se
separa liberando el producto (P) regenerando a la enzima en condiciones
de volver a iniciar el proceso, los pilares de este modelo se basan en una
ecuacin formulada por Leonor Michaelis y Maud Menten la cual lleva sus
apellidos donde se calcula la velocidad de una reaccin partiendo de las
reacciones bsicas del proceso cataltico E+S = ES = E+P. La deduccin de
la ecuacin de Michaelis-Menten comienza con las dos reacciones bsicas
de descomposicin E+S = ES = E+P, la velocidad de las reacciones y las
concentraciones de sustrato [S] y enzima [E]. La deduccin da como

resultado V0 = Vmax [S] / Km + K [S] (Ecuacin de Michaelis-Menten)

Donde Km es la constante de Michaelis que refleja la afinidad de la enzima
por el sustrato (a menor Km mayor afinidad). La consideracin principal
para la ecuacin es que siempre habr mayor la [S] que la [E].
21. Cul es el fundamento qumico de la alta especificidad de una enzima?

Se basa en la energa que emiten las mltiples interacciones no covalentes

que establecen los restos aminocidos que estn alineados en una
disposicin geomtrica especfica en el sitio activo de la enzima con el
sustrato, esta se denomina energa de fijacin y tambin provoca la
disminucin de la energa de activacin del enzima.
La exactitud de la alineacin geomtrica antes descrita provoca que la
enzima no pueda establecer enlaces con ningn sustrato que no sea
especfico para esa enzima
22. Explique los factores que determinan la especificidad de al sustrato de las
siguientes enzimas: a) Tripsina b) Quimotripsina c) Elastasa
a) Tripsina. Es una peptidasa con funciones digestivas, hidroliza pptidos.
Poseen residuos de aspartato (Asp 189) localizados en la regin cataltica
de las tripsinas que tienen la funcin de atraer y estabilizar lisinas y
argininas (ambas cargadas positivamente) y por ello es responsable de la
especificidad

de

la

enzima.

Esto

significa

que

las

tripsinas

predominantemente cortan protenas en el extremo carboxlico (o extremo

C-terminal) de sus residuos de lisinas y argininas, excepto cuando el
residuo siguiente es una prolina. Las tripsinas son endopeptidasas, esto es,
el corte se lleva a cabo en medio de la cadena peptdica y no en los
residuos terminales de la misma.
b) Quimotripsina. Es una proteasa que cataliza la ruptura de enlaces
peptdicos. Acta especficamente sobre los enlaces peptdicos adyacentes
a residuos aminocidos aromticos. La actividad cataltica de la
quimotripsina depende de tres residuos de aminocidos: histidina 57,

asprtico 102 y serina 195; en la molcula activa las tres cadenas laterales
estn muy cerca y en posicin correcta para catalizar la hidrlisis del enlace
peptdico en la protena que se une a la enzima nicamente en los lugares
donde se encuentra fenilalanina, tirosina y triptfano.
c) Elastasa. Es una enzima encargada de la degradacin de las fibras
elsticas. Hidroliza con rapidez la protena elastina con alto contenido de
Alanina, Glicina y Valina. El bolsillo de especificidad de la Elastasa esta
ocluido en gran parte por las cadenas laterales de un residuo de Valina y
Treonina que reemplazan los residuos Glicina de la quimotripsina y la
tripsina. Por consiguiente, la Elastasa escinde especficamente los enlaces
peptdicos despus de pequeos residuos neutros, en particular Alanina.
23. Estudios realizados con mutantes y enzimas han mostrado que el cambiar
un residuo de aminocido en el sitio activo influye sobre el nmero de
recambio enzimtico pero no sobre Km, cmo puede explicarse esto?
Probablemente lo que sucede en la enzima mutada es que el residuo
aminocido que fue sustituido no influa en gran magnitud en la afinidad de
la enzima por el sustrato, es decir, una vez removido ese residuo
aminocido de la enzima original, no se vio afectada K m porque la enzima
aun poda reconocer sin dificultad el sustrato. Sin embargo, a pesar de que
la enzima mutada posee la misma capacidad de afinidad por el sustrato que
la enzima original, una vez que esta reconoce el sustrato no realiza la
transformacin de ste a sus productos correspondientes de la misma
manera que la enzima original, por lo que afecta en el nmero de recambio
enzimtico o Kcat. Lo cual probablemente tambin altere la velocidad
mxima de la accin de dicha enzima.

24.- Identifica que tipo de inhibicin se presenta en cada una de las

siguientes grficas y el porqu de esa respuesta.
COMPETITIVA: esto es debido a que tanto el sustrato como el inhibidor se unen
al mismo lugar, el
sitio activo. Por lo
que la Vmax no
cambia, pero Km es
afectado debido a
que S no puede
unirse a la enzima
debido al inhibidor
[EI], habiendo as menor afinidad por S y es as
como se debe aumentar la concentracin del
sustrato para poder llegar a la mitad de Vmax. La
cantidad de

EI

se

puede

reducir

AUMENTANDO concentracin del sustrato.

NO COMPETITIVA: el inhibidor puede unirse tanto en presencia del sustrato como

la enzima sola, es
decir,

son

independientes de
lo que haga el
sustrato,
que
impide

por

ste
la

lo
no

unin

(afinidad) del sustrato (siendo Km igual) pero si la

accin cataltica, ya que habra menos enzimas
que generen productos la velocidad mxima baja.
NO

SE

SUTRATO.

COMPENSA

AGREGANDO

MS

ACOMPETITIVA: este tipo de inhibicin slo sucede cuando existe el complejo

ES,

se

inhibidor

une
al

el

centro

activo una vez que el

sustrato

lo

haya

hecho, es por eso

que

el

inhibidor

estimula la formacin
de ES disminuyendo Km, sin embargo el complejo
ESI no puede formar productos por lo que la Vmax
baja, debido a que slo pocas enzimas lograran
formar el producto.

25.- Explique qu es lo que sucede al aadir un inhibidor irreversible a una

concentracin de enzimas.
Estos inhibidores son muy especficos reaccionando con un grupo qumico de su
enzima formando un enlace covalente y estable, borrando del mapa al sitio
activo de la enzima. Queremos decir que NO destruye la estructura proteica, solo
modifican por medio de acilacin un residuo de AA del sitio activo impidiendo la
formacin del complejo ES.
El efecto de estos inhibidores va a depender del tiempo en el que actan, se dice
que es una inactivacin permanente.
26.- Qu es el efecto cooperativo que poseen las enzimas alostricas?
Este efecto como bien dicho, ocurre en enzimas oligomricas (ms de una
subunidad proteica) que poseen varios sitios de unin de sustrato y es el
fenmeno por el cual la unin de un ligando (sustrato o inhibidor) a una enzima
influye sobre la unin de las molculas subsiguientes.

La fijacin de un sustrato favorece o desfavorece la fijacin siguiente hasta

ocuparse todos los centros activos de la molcula. Km1>Km2>Km3 lo mismo
ocurre con los inhibidores.
Cuando el ligando afecta la unin de otras molculas del mismo ligando, se
conoce como HOMOPRTICO. Si lo que se ve afectado es la unin de un ligando
de

una

naturaleza

HETEROPRTICO.

diferente,

se

presenta

un

efecto

cooperativo