30/03/2016

Replicacin del ADN

- Proceso esencial del cual dependen todas las formas de vida
- Es necesaria para la divisin celular -> generacin de nuevos
organismos (unicelulares) o de nuevas clulas en un tejido
(multicelulares)
- La secuencia de bases nucleotdicas existente en cada molcula
larga de la doble hlice de ADN debe duplicarse con precisin para
generar una copia de la molcula original

Replicacin del ADN

Universidad de Morn

Gentica Molecular - 2016

Watson y Crick: 1 ao despues de publicar el modelo de la doble hlice,

describieron un modelo para la replicacin del ADN

Hiptesis de replicacin de Watson y

Crick (1954)
- Se separan ambas hebras
- Se aparean nucletidos a cada hebra de
manera complementaria
- Los nucletidos se unen entre si por
accin de una o mas enzimas
- Resultante: 2 replicas, cada una con una
hebra parental y una hija -> proceso
semiconservativo

El experimento de Meselson-Stahl (1958) confirm la hiptesis de la replicacin

semiconservativa de Watson y Crick
E. coli cultivadas en un medio con un radioisotopo pesado (alta densidad
en gradientes de cloruro de cesio) -> se transfieren a medio liviano, sin
radioisotopo -> 1 : hibridos de densidad intermedia

Cada hebra hija en

un hibrido es o
pesada o liviana

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Mecanismo de crecimiento de la cadena de ADN

Reaccin de sntesis de ADN

Los nucletidos se aaden en
el extremo 3de la cadena

n(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)

ADN polimerasa
Templado de ADN

sustratos

ADN + nPPi
productos

El grupo OH- del nucletido en

el extremo 3reacciona con el
primer fosfato (fosfato a ) del
nucletido entrante.
Se libera pirofosfato

Los nucletidos se aaden

segn la complementariedad
de bases:
A-T
C-G

Replicacin
Origen de replicacin: Regin generalmente rica en AT donde se inicia el
proceso de replicacin
Horquilla de replicacin: las dos cadenas de la doble hlice se separan y se
comienzan a copiar de manera independiente (cada una en direccin es 5 -> 3:
avanzan en direcciones opuestas: replicacin bidireccional)
Replicn: segmento de ADN que contiene un
origen de replicacin y que se copia como una
unidad
Procariotas:
- Origen de replicacin (Ori) nico
- Replicn: cromosoma bacteriano
- Se forman dos horquillas de replicacin que avanzan
en ambas direcciones, formando estructuras en forma
de la letra griega tetha (q)
- Cuando se juntan las dos horquetas al finalizar el
crculo, se separan los dos cromosomas resultantes

Eucariotas:
- ADN mucho mas largo que procariotas: (ADN humano: 1,8 m; ADN E. coli:
1,3 mm)
- Mltiples replicones (cada 10 a 100 mm, 40 a 100 kb), cada uno con su
origen de replicacin -> la replicacin es mas rpida que con un origen nico
- Los fragmentos sintetizados por cada replicn se unen con los adyacentes al
encontrarse

Horquetas de replicacin

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Ambas cadenas se copian en direccin 5- 3 : para que la horquilla

de replicacin pueda avanzar: una de las cadenas se copia de
manera continua y la otra discontinua en cada horqueta

cadena lder: sntesis continua

EVENTOS de la REPLICACION
1. Inicio de la replicacin
-

El origen de replicacin es reconocido por protenas especificas:

- Proteinas especificas que controlan que la replicacin comience
- Helicasas desenrollan la doble hlice
- Topoisomerasas: alivian el superenrollamiento resultante en las
zonas que circundan a la horqueta de replicacion, mediante
cortes de un nucleotido unico (nicks). Ej. girasa de ADN
- SSBs: single stranded DNA binding proteins (proteinas de unin a
ADN de cadena simple): mantienen ambas cadenas separadas

cadena retardada: sntesis discontinua

direccin de avance
de la horqueta

2. Primosoma

Sntesis de ADN en bacterias

- La ADN polimerasa necesita de un primer para comenzar la sntesis de una

cadena de ADN (segmento corto de nucletidos complementarios a la
hebra templado)
- La Primasa (bacterias) o ADN polimerasa a (eucariotas) sintetiza primers de
ARN (10 nt aprox). Primasa forma un complejo con otras protenas =
Primosoma
- La ADN polimerasa III (bacterias) o d (eucariotas) agrega nt comenzando en
el extremo 3 del primer:

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3. Accin del Replisoma

Sntesis de ADN en eucariotas

1) Replisoma: Complejo proteico, contiene ADN polimerasa con

dos sitios cataliticos (para cada una de las cadenas)
Enzima encargada de polimerizacion:
1) Bacterias: ADN polimerasa III
2) Eucariotas: ADN polimerasa d
-

Cadena lider: se sintetiza en forma continua

Cadena retardada: fragmentos de Okazaki: 1000-2000 nt
en bacterias y 100 nt en eucariotas

Replisoma : Fabrica de ADN que contiene mas de 30 protenas. El complejo puede estar
unido a la membrana plasmtica. El ADN entra en esta fabrica y es copiado. En
bacterias de crecimiento lento: 2 replisomas, uno en la membrana y otro en el centro de
la clula. En bacterias de crecimiento rpido: 4 o mas replisomas. En eucariotas: mltiples

4. Reemplazo de primers de ARN

RNASA H o ADN polimerasa I degrada los primers de ARN. ADN polimerasa I
o III agregan desoxiribonucletidos para llenar los huecos.

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5. Ligacin de fragmentos
Los fragmentos de ADN de la cadena
retardada (o los de distintos replicones
son unidos por una ADN ligasa

La ligacin tiene lugar con gasto de ATP

Puente fosfodiester entre el OH- del

extremo 3 de la cadena creciente y
el fosfato en posicin 5del fragmento
de Okasaki (o entre el OH- del nt rio
arriba y el fosfato del nt rio arriba)

Terminacin de la replicacin
En procariotas
En muchos procariotas: la replicacin se detiene cuando se
encuentran ambas horquetas -> se separan los dos
cromosomas
En E. coli: Cuando el complejo de polimerasa llega a un sitio de
terminacin en el ADN : sitio Ter. La proteina Tus se une a
estos sitios y la polimerasa no puede avanzar -> la replicacin se
detiene -> se separan los dos cromosomas

Terminacin de la replicacin
En eucariotas
Al terminar la replicacin: la cadena retardada queda un poco mas corta
(cuando se agrega el ultimo primer de ARN, la polimerasa no puede unirse a
la cadena para reemplazar los ribonucleotidos por nucletidos.
La evolucin resolvi este problema con los telomeros: secuencias
repetitivas (ricas en C + A) que son aadidas en los extremos por una
enzima (telomerasa o transferasa terminal de telomeros )
Sin los telomeros, una de las cadenas quedara cada vez mas corta
Los telomeros estabilizan al cromosoma (lo sellan)
Sirven para que la celula distinga el fin del cromosoma de un extremo suelto
de ADN (por rotura). Este ultimo debe ser reparado, el telomero no
Telomerasa: es activa en clulas germinales pero no en clulas adultas. normales
En celulas cancerosas se activa -> se buscan drogas que inhiban a la telomerasa
para combatir el cncer

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Telomeros
Los telomeros siempre tienen la estructura

Cn(A/T)m

Los telmeros son sintetizados por la telomerasa: una enzima compleja formada
por ARN y subunidades proteicas que agrega secuencias repetitivas en los
extremos de los cromosomas

donde n > 1 y m = 1 a 4

El nmero de repeticiones varia entre organismos, de 100 a 1000

Ej. de telomero
Telomero inicial

Degradacion parcial del

extremo rico en C+A
Los telomeros tienen un extremo de 14 a 16 nt como cadena simple en el extremo, por
degradacin parcial de la hebra rica en C+A
El extremo cadena simple forma un bucle
que estabiliza al cromosoma

Replicacin extra-cromosmica: crculo rodante

en bacterifagos, viroides y plsmidos
1

Replicacin de ADN de mitocondrias y cloroplastos

6
3
En fago l: varias vueltas de replicacin alrededor del
templado circular: se forma un concatamero, que
luego se cliva en unidades individuales y se
empaqueta

- La apertura de un dplex no conduce de forma necesaria al comienzo de

la replicacin en la otra cadena.
- La replicacin es unidireccional.

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ADN polimerasas en procariotas: E. coli

Polimerasa

No subunidades

Funcion

Pol I

Remocion de primers de
ARN, reparacion

Pol II

Reparacion de ADN

Pol III (holoenzima)

Replicacion de ADN

Pol IV

Reparacion de ADN.
Sintesis trans-lesion (TLS)

Pol V

TLS

ADN polimerasas de
eucariotas

Abrazadera, cargador de abrazadera y ADN polimerasa

Procesividad de una ADN polimerasa: nmero de nucletidos que puede
incorporar a una cadena de ADN en formacin antes de disociarse del
templado. La eficiencia de sintesis de ADN es proporcional a la
procesividad de la polimerasa
Las ADN polimerasas aumentan su procesividad al asociarse a protenas
llamadas clamp = abrazaderas. Estas tienen una forma de anillo que rodea al
ADN. El hueco del anillo tiene cargas positivas. La abrazadera interactua con el
ADN pero no se une a el, permitiendo que la ADN polimerasa se desplace por la
cadena sin desprenderse.

cargador de la
abrazadera

dos mitades de
la abrazadera
deslizante

El ADN es cargado a la abrazadera por otra proteina: clamp loader (cargador

de abrazadera): abre la abrazadera, la carga al ADN (luego del agregado de un
primer de ARN) con gasto de ATP y luego la descarga en un momento apropiado
Es un mecanismo conservado en bacterias, arquibacterias y eucariotas y ocurre
en la cadena lider y la retardada.

ADN polimerasa

ADN polimerasa unida al ADN