11 - Procesamiento del RNA

20 de mayo de 2015

Procesamiento del RNA

Procesamiento
del ARN
Gentica Molecular Ctedra 2016
Universidad de Morn

Procesamiento del ARN

Procesamiento del ARN en procariotas

ARNm

Tipos de procesamiento
Modificaciones

qumicas que afectan los extremos de los

transcriptos (caperuzas, poliadenilacin)

funcional
ARNr
ARNt

Cambios fsicos en la longitud de los transcriptos (splicing, eventos

de corte)

Pre-ARN
(cortes y modificaciones
qumicas)

Modificaciones qumicas de nucletidos dentro de los transcriptos

(en pre-ARNr y pre-ARNt tanto de bacterias como de eucariotas y en

menor medida en pre-ARNm de eucariotas)

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funcional
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Procesamiento del ARN en procariotas

Procesamiento del ARN en procariotas

Clivaje de genes para ARNr y ARNt

Clivaje de los ARNr
Los operones rrn de Escherichia coli contienen genes que codifican
tanto para rRNA como para tRNA.

procariotas
* Ribonucleasas III, P y F.
* Recorte bordes:
ribonucleasas M16, M23 y M5.

Procesamiento del ARN en procariotas

Procesamiento del ARN en procariotas

Modificaciones qumicas del el ARNr precursor: conversin de uridina a

pseudouridina, adicin de grupos metilo, amino, carbonilo o tiol

Clivaje de ARNt:

Ejemplos:
Metilacin

Isomerizacin de base

Ribonucleasa E o F: corte 3.

Ribonucleasa D: corte 9 nts.

Ribonucleasa P: corte 5.

CCA 3: si es eliminado por

error por la ribonucleasa Z

guanosina

7-metil guanosina

uridina

pseudouridina

ARNt nucleotidiltransferasa lo

Su funcin es desconocida (catlisis?)

repara

Son conservadas: misma modificacin en todas las copias

Procesamiento de un pre-tRNA de Escherichia coli

Se realizan a travs de enzimas y pueden modificar la secuencia o la

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estructura

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Procesamiento del ARN en procariotas

Procesamiento del ARN en procariotas

Modificaciones qumicas de los ARNt procariotas:

Modificaciones qumicas de los ARNt procariotas:

2. Por reemplazo de nucletidos:

1. Por modificacin de nucletidos existentes:

Ej. reemplazo de guanina por queosina: en la primera posicin del anticodon

(posicin wobble de ARNt de los aas tirosina, histidina, aspartato,
asparagina

adenosina -> inosina

uridina -> 4-tio-uridina

queosina

dihidrouridina
guanosina -> 7-metil guanosina
guanosine

uridina -> pseudouridina

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Nucletidos modificados en ARNt: aprox. 1 de cada 10. Modificaciones varian

Procesamiento del RNA en procariotas

segun la especie y segun el ARNt

Degradacin del RNA en procariotas

Regula la expresin por medio de las variaciones en la vida media.
La RNasa II elimina nts (35). La fosforilasa polinucletido (PNPasa) tambin,
pero a diferencia de las nucleasas verdaderas- requiere fosfato inorgnico
como cosustrato.
Hasta ahora no se ha aislado en bacterias ninguna enzima capaz de degradar
ARN en la direccin 53, lo cual indicara que el proceso de degradacin
principal del ARNm bacteriano es la remocin de nucletidos del extremo 3.
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ARNt de E. coli para metionina

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Procesamiento del RNA en procariotas

Procesamiento del RNA en procariotas

Degradacin del RNA en procariotas

Degradacin del RNA en procariotas

Esto no es posible bajo circunstancias normales ya que la mayora de los ARNm

RNasa E y/o III son capaces de realizar cortes internos (puesto que son

tiene un bucle cerca de dicho extremo, el mismo que induce a la terminacin de

endonucleasas) para eliminar la horquilla.

la transcripcin. Esta estructura bloquea el progreso de la RNasa II y la PNPasa,

impidiendo que tengan acceso a la parte codificante del transcripto.

RNasa E y la PNPasa: dentro de un complejo multiproteico llamado

degradosoma. Este incluye otros componentes como una ARN-helicasa:
desenreda la estructura de doble hlice de los bucles de ARN.
Algunos fragmentos de ARNr se purifican con el degradosoma: quizas este
complejo est involucrado tanto en la degradacin del ARNr como en la del
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Procesamiento del RNA en eucariotas

ARNm

Relacin entre ARNhn y ARNm

ARNhn

mucho ms largo que el ARNm

ARN nuclear

muy inestable
complejidad de secuencia mucho mayor

Heterogeneous nuclear RNA (hnRNA)

Es el conjunto de todos los pre-ARN del ncleo

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ARNm

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Relacin entre RNAhn y ARNm

Relacin entre ARNhn y ARNm

La fragmentacin y modificacin del ARNhn para formar otros tipos de
ARN constituye la maduracin o procesamiento del ARN

ARNhn: Conjunto de ARNm

asociados a otras molculas de
ARN y a protenas (forma una
ribonucleoprotena (RNPhn)

Maduracin:
Encapuchamiento

Hay 20 protenas: algunas

participan en el empaquetamiento
del ARNhn y otras en la
exportacin del ARN

Poliadenilacin
Eliminacin de intrones
Modificaciones qumicas
Edicin

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Procesamiento del RNA en eucariotas

Procesamiento del RNA en eucariotas

Poliadenilacin en el extremo 3

Encapuchamiento del ARNm en 5

Existe una seal de poliadenilacin muy conservada en el extremo

3 del transcripto. Un complejo proteico se une al transcripto, lo

corta y sintetiza la cola de poli-A
Poli-A participa en la exportacin, transporte y estabilidad del ARNm

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Resumen de modificaciones en el extremo 5 y 3 del pre-ARNm

Procesamiento del RNA en eucariotas

Eliminacin de intrones (= splicing)

Genes interrumpidos: se encuentran en toda clase de organismos

eucariotas
En eucariotas inferiores proporcin minoritaria
En eucariotas superiores vasta mayora de los genes
Un mamfero tpico tiene 7-8 exones cada 16 kb aprox.
Los exones son cortos (100-200 pb) y los intrones largos (1 kb o ms)
Pre-ARNm splicing mensajero de 2,2 kb aprox.

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Procesamiento del RNA en eucariotas

Procesamiento del RNA en eucariotas

Spliceosoma

Ejemplos de intrones en genes de mamferos

Gen

Longitud (kb)

N intrones

% ocupado por intrones

Insulina

1,4

69

-globina

1,6

61

Albmina srica

18

13

79

Colgeno tipo VII

31

117

72

Factor VIII

186

25

95

Distrofina

2400

78

98

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- Funcin: remocin de intrones: reconoce secuencias consenso

cortas en las fronteras exon-intron y dentro del intron
- Complejo de gran tamao (visible al microscopio electronico).
- Formado por 5 ribonucleoproteinas nucleares pequeas: U1, U2,
U4, U5, U6
- Cada ribonucleoprotena esta formada por 10 protenas y una
pequea molecular de ARN rica en uracilo. Esta reconoce al intron
mediante apareamiento complementario de bases.

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Remocin de intrones por el spliceosoma

Procesamiento del RNA en eucariotas

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Modificaciones qumicas

- ARNr y ARNt: metilaciones y pseudouridinilaciones

- Reguladas por snoRNA (small nucleolar RNA): guian a las enzimas hacia la
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posicin de modificacin correcta por secuencias anti-sentido.

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Procesamiento del RNA en eucariotas

Procesamiento del RNA en eucariotas

Edicin

Degradacin del RNA en eucariotas

- Cambios de nucletidos realizados en la secuencia del ARN luego de su

sntesis
- Se ha observado en ARNt, ARNr, ARNm y microARNs de eucariotas y

Exosoma: complejo multiproteico,

procariotas, pero es un fenmeno raro.

degrada 35.

- En ARNm los cambios pueden afectar la secuencia proteica:

1) Prdida de poli A por exonucleasa.

Ej.

2) Prdida de caperuza por la enzima

Dcp1p. Impide la traduccin y por lo
tanto finaliza la vida funcional del mRNA
3) Digestin 53.

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- En ARNr y ARNt (no codificantes): cambios estructurales

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Procesamiento del RNA

Estabilidad y permanencia
- ARNr y ARNt: muy estables tanto en eucariotas como en procariotas ya que
tienen gran procesamiento postranscripcional y estructura secundaria.
- ARNm en eucariotas: son mas estables que los ARNm de procariotas, vida
media 10 veces >, por procesamiento postranscripcional (aunque no tienen
estructura secundaria)
- Vida media del ARNm es directamente proporcional a la cantidad de
proteina sintetizada.
- Cuanta mas larga es la cola poli-A -> mayor es la vida media
- Los ARNm de menor vida media codifican para proteinas reguladoras
(factores de crecimiento y proteinas de regulacion genica, cuyos niveles
deben cambiar rapidamente).
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