PRACTICA N 2: DIGESTIN DE CARBOHIDRATOS POR LA AMILASA SALIVAL

Jennifer Melissa Giorgi Ortiz (2080130)

Carlos Mario Beltrn Castao (2132219)
Universidad Industrial De Santander
Facultad de Ciencias
Escuela de Biologa
Metabolismo
Grupo D1

RESUMEN
La saliva es un lquido generado por glndulas exocrinas, que cumple la funcin de
controlar el pH de la boca y ayuda a la creacin del bolo alimenticio que a su vez, facilita
la digestin de los alimentos. Este lquido, transparente, incoloro e inodoro est
compuesto por sustancias orgnicas e inorgnicas. El grupo de las orgnicas est
conformado por las glucoprotenas, enzimas e inmunoglobulinas, diferente a las
inorgnicas, que presentan solo dos sustancias, el bicarbonato y fosfato (que actan
como neutralizadores de los cidos que provocan la caries) En esta prctica, se
estudiarn los factores que alteran la actividad enzimtica de la amilasa salival en el
proceso de digestin de los carbohidratos.

I.

INTRODUCCIN

Las
enzimas
son
biomolculas
especializadas en la catlisis de las
reacciones qumicas que tienen lugar en
la clula. Son muy eficaces como
catalizadores ya que son capaces de
aumentar la velocidad de las reacciones
qumicas mucho ms que cualquier
catalizador artificial conocido, y adems
son altamente especficos ya que cada
uno de ellos induce la transformacin de
un slo tipo de sustancia y no de otras
que se puedan encontrar en el medio de
reaccin.1 En la imagen que se muestra
a continuacin (fig.1), se explica cmo se
dan los estados de transicin de un
1 TEMA 14: ENZIMAS. https://
http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/te
ma14.pdf

sustrato a producto, en presencia o no,

de una enzima.

Fig. 1 Estado de transicin de sustrato a producto en

presencia o no de la enzima.

- Factores que afectan la actividad

enzimtica:
- Temperatura:

La actividad enzimtica es directamente

proporcional a la temperatura, es decir, si
se aumenta la temperatura, aumentar la
velocidad de la reaccin catalizada,
proceso contrario al que ocurre cuando
se disminuye la temperatura. Este efecto
posee un punto en el cual la actividad
enzimtica disminuye debido a que, a
cierta temperatura la enzima comienza a
desnaturalizarse
y
perder
sus
propiedades.
- pH
Las enzimas poseen unas cualidades
optimas de pH que cuando actan bajo
condiciones estndares, presentan una
actividad de mxima eficiencia. Debido a
que las enzimas son de naturaleza
proteica, poseen ciertos lmites de pH en
las cuales su funcin es ptima. Si se
trabaja con pH fuera de estos lmites la
enzima comienza a desnaturalizarse.
- Inductores e inhibidores
Esta actividad se basa en el resultado de
una mayor sntesis de enzimas tras la
exposicin duradera a un agente inductor
y la inhibicin enzimtica, consiste en
una reduccin de la actividad enzimtica
tras la administracin de un agente
inhibidor.
MATERIALES Y MTODOS
-

Gradilla
18 tubos de ensayo
Pipetas de 5 ml - 10 ml
3 beakers de 50 ml o 100 ml
Varillas de agitacin
Bao termosttico
Platos Petri
Sln. de Almidn al 1% y 2%
Reactivo de Benedict
Yodo
Sln. Buffer
Agua destilada

Saliva humana
Cloroformo
HgCl al 2% y 1%
Fenol
NaF
NaCl al 0.9%
Una persona voluntaria de cada grupo,
saliv 2 ml de saliva, los cuales se
dividiran en dos tratamientos distintos. El
primero, 1 ml de saliva que se diluira en
9 ml de agua destilada, formando as una
solucin 1:9 para los experimentos #1 y
#2. Y el mililitro restante, se diluy en 4
ml de agua destilada, formando una
solucin 2:8, la cual ir destinada al
experimento #3.

- Parte 1: Efecto de la temperatura

Se usaron 4 tubos de ensayo, a los
cuales se les agreg 0.5 ml de la
solucin saliva 1:9 y se dejaron incubar
por 5 minutos a distintas temperaturas.
Tubo #1: 0C
Tubo #2: T Ambiente
Tubo #3: 38C
Tubo #4: 100C
Seguidamente en cada tubo se
agregaron 2.5 ml de sln. de Almidon al
1%, luego se realiz la prueba del Yodo
cada 3 minutos hasta que se obtuviera
un resultado negativo (a los 0, 3, 6 y 9
min) y finalmente, se le realizara a cada
uno de los cuatro tubos, la prueba de
Benedict para determinar presencia de
monosacridos.
- Parte 2: Efecto del pH
Se tomaron 7 tubos de ensayo, y a cada
uno se agreg 0.75 ml se sln. de saliva
1:9. A cada tubo se aadi 1.5 ml de la
sln. Buffer correspondiente, es decir:
Tubo #1: Sln. Buffer Ph 2.4
Tubo #2: Sln. Buffer Ph 5.4
Tubo #3: Sln. Buffer Ph 6.0
Tubo #4: Sln. Buffer Ph 6.8

Tubo #5: Sln. Buffer Ph 7.4

Tubo #6: Sln. Buffer Ph 8.0
Tubo #7: Sln. Buffer Ph 10.0
Luego se incubaron a una temperatura
de 37C por 5 min. Posterior a esto, se
agreg 2.5 ml de sln. de Almidn al 2% a
cada tubo y se realiz el mismo
procedimiento
de
la
Parte
1,
contabilizando el tiempo para la prueba
del Yodo, y finalmente la de Benedict.
- Parte 3: Inhibicin
enzimtica

Induccin

Se tomaron 4 tubos de ensayo y a cada

uno se agreg 0.5 ml de sln. de saliva
2:8. Despus a cada uno de estos tubos
se les agreg 0.5 ml de la sustancia
correspondiente:
Tubo #1: Cloroformo
Tubo #2: Fenol puro
Tubo #3: Agua destilada
Tubo #4: NaCl 0.9%

Fig. 2 Tubo
todos los
con
temperatura

#1, en
tiempos,
de 0C

Para
esta
primera
prueba,
no se
observ
ningn
cambio, ya que los tubos mostraron una
coloracin verde oscura (0 min), verde
oscura (3 min), marrn oscuro (6 min) y
marrn oscuro (9 min).

Se dejaron incubar por 5 minutos a 38C

y luego se le agreg a cada tubo 2.5 ml
de sln. de Almidn al 1% y se realizaron
las mismas pruebas de las partes
anteriores del Yodo y Benedict.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Parte 1. Efecto de la temperatura
Para los resultados de la primera parte,
con los tubos adaptados a diferentes
temperaturas, se obtuvo lo siguiente:

Fig. 3 Tubo #2, en todos los tiempos, en temperatura

ambiente.

Para esta segunda prueba, los cambios

tampoco fueron visibles, ya que el color
que permaneci durante los 9 minutos,
siempre fue un marrn muy oscuro, casi
negro.

Fig. 4 Tubo #3, en todos los tiempos, con temperatura

de 38C

Para la tercera prueba, se apreci un

color verde oscuro, y los cambios entre
tiempo y tiempo de cada uno de los
tubos fueron muy leves.

Fig. 6 Efecto de distintos pHs en el minuto 9, para 7

tubos de ensayo.

En cuanto a esta segunda parte, se

observ experimentalmente, que la
enzima, acta en ciertos rangos de pH,
notndose algunos cambios en los tubos
2, 3 y 4 de 5.4, 6.0 y 6.8 pH
respectivamente. En los dems, que no
se observ cambio de coloracin,
deducimos que la enzima no actu
eficientemente.

Fig. 5 Tubo #4, en todos los tiempos, con temperatura

de 100C

Los tubos estn organizados de

izquierda a derecha 0 min, 3 min, 6 min y
9 min respectivamente. En esta ltima
prueba de la primera parte, el cambio
que se present con una temperatura de
100C, tampoco fue muy notorio.
Parte 2: Efecto del pH
Los resultados de la segunda parte
fueron los siguientes:

Fig. 7 Prueba de Benedict para los 7 tubos de ensayo.

En esta imagen de la prueba de Benedict

se puede confirmar lo propuesto en el
punto anterior al ver que en los pHs de
5.4, 6.0 y 6.8 los cambios fueron ms
evidentes que en los dems pHs donde
no reacciono la enzima, o en caso de
que s lo hubiese hecho, no fue muy
eficiente.

Parte 3: Inhibicin
enzimtica.

Induccin

Las siguientes
imgenes son
los resultados
obtenidos
de
esta
tercera
parte
de
la
prctica:

A simple vista, se puede asumir que dos

sustancias fueron las que reaccionaron
positivamente a la enzima con el
transcurso de los minutos. Siendo
primero, el Fenol, que cambi a los 3
minutos y luego el agua destilada, que
present un cambio de coloracin, no tan
intenso como el del Fenol, pero si
diferente al de las otras dos sustancias
que no reaccionaron.
Fig. 10 Prueba de Benedict. Inhibidores e Inductores.

Igual que en el resultado anterior, se not

el cambio en las sustancias ya
mencionadas. Lo cual reafirma que el
fenol y el agua destilada si reaccionaron
a favor de la enzima.
CONCLUSIONES

En
primera
medida,
algo
importante por resaltar es el
hecho de que las diluciones
ptimas para la saliva de
diferentes personas son distintas,
ya que las caractersticas y
concentraciones
de
los
compuestos varan de una
persona a otra.

De acuerdo a los resultados de la

primera y segunda parte, se
podra concluir que un factor de
gran importancia es el hecho de
que
no
se
conozca
la
concentracin de la amilasa en la
saliva de la persona donante, ya
que dependiendo de esta,
tambin se puede indagar la
temperatura, el pH y los reactivos
a los que son afines y por tanto
su reaccin se dara de forma
ms eficaz.

En cuanto al factor temperatura, a

partir de los resultados obtenidos,
se podra concluir que la amilasa
se desnaturaliza al ser expuesta a
una temperatura elevada, ya que

Fig. 8 Inhibidores e Inductores enzimticos a los 0 min.

Fig. 9 Inhibidores e Inductores

enzimticos a los 9 min.

el choque entre sus molculas,

genera una mayor energa
cintica que provoca la ruptura de
enlaces, afectando la estructura y
funcionalidad de la enzima.

exposicin para cada prueba fuese

mayor, y el nmero de pruebas fuese
menor para cada parte.
BIBLIOGRAFA

La enzima trabaja a unos rangos

de pH ptimos, es decir que a
pHs muy extremos, esta pierde su
funcionalidad,
o
disminuye
notablemente su actividad.

FUNCION DE LA SALIVA. PropDental.

https://www.propdental.es/blog/odontolog
ia/funcion-de-la-saliva/

RECOMENDACIONES

TEMA
14:
ENZIMAS.
http://www.bionova.org.es/biocast/docum
entos/tema14.pdf

Mejorar el material del laboratorio, ya que

la eficiencia del laboratorio se vio
afectada por la ausencia de material en
buen estado, especialmente las peras
que dificultaron mucho el trabajo para
todos los grupos.

INTERACCIONES CON EL SISTEMA

ENZIMTICO
P450.
Servicio
De
Farmacia Hospitalaria Hospital Juan
Ramn
Jimnez
Huelva.
http://www.sefh.es/bibliotecavirtual/Curso
_actualizacion3/1.3.pdf

Los resultados se hubiesen podido

evidenciar mejor si el tiempo de