UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y
MICROBIOLOGIA
PROFESORA: Ing Teresa Alvarado Y
CONTENIDO:
I.
II.

OBJETIVOS
MICROSCOPIO
a. PARTES
b. TIPOS DE MICROSCOPIOS
c. MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

OBJETIVO
El objetivo de la presente prctica es:

1. Familiarizar al estudiante con el uso del microscopio as como de los materiales bsicos de
laboratorio en el uso de la microbiologa.

EL MICROSCOPIO
Es un instrumento (de un lente o varios lentes), que amplifica una imagen y permite la observacin de
mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio ms simple es una lente de aumento o

un par de anteojos. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la

informacin. La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del

espcimen, la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin.

El microscopio compuesto est formado por tres sistemas: 1. Sistema de iluminacin; 2. Sistema ptico
y 3.Sistema mecnico.

1. El sistema de iluminacin corresponde a la fuente de luz y sus aditamentos para iluminar

eficazmente la preparacin y est formado principalmente por la lmpara (6V), el diafragma de
campo y el condensador (lente frontal, diafragma de iris y lente auxiliar)

2. El sistema ptico est formado por una serie de lentes de vidrio en los objetivos y oculares
que permiten agrandar la imagen y est formado por los objetivos, tubo y el ocular.

3. El sistema mecnico est formado por una serie de engranes y botones que permiten
realizar el movimiento y cambio de las lentes as como el enfoque de la preparacin y est
formado por la base, estativo, tornillos macromtrico y micromtrico, platina, revolver y porta
revolver

Funcin bsica de cada parte del microscopio:

a.- Sistema mecnico

Base. Pieza metlica que sostiene a todo el aparato

Platina. Es una plancha cuadrada y gruesa de metal con un orificio central en donde descansa la

Estativo. Lugar de donde se debe tomar para trasladar al microscopio

preparacin, la cual es fijada por dos pequeas pinzas, se puede mover hacia arriba y hacia abajo
con los tornillos macromtrico y micromtrico por medio de un sistema de engranes. Posee

escalas numricas que permiten ubicar fcilmente la posicin de lo que se observa y, al mismo
tiempo, deslizar la preparacin en forma de cruz (ejes X y Y) para su localizacin.

Pinzas. Sirve para sujetar al portaobjetos.

Tubo del ocular. Sostiene el lente del ocular.

Tornillo macromtrico. Permite el enfoque mayor.

Tornillo micromtrico. Permite el enfoque con precisin.

Revolver. es un dispositivo giratorio en donde se atornillan las lentes de los objetivos de

Tubo binocular. Cada uno de los tubos contiene en el interior un sistema de prismas y espejos

distinto aumento

que dividen el haz de luz en dos haces, cada uno de los cuales se enva por separado a cada tubo,

estos tubos se deslizan hacia los lados para ajustar la distancia interpupilar ya que cada persona

posee una diferente separacin entre sus ojos. Los microscopios binoculares tienen entre los
tubos una escala grabada para poder ajustar la distancia y cada persona debe memorizar su
valor de apertura interpupilar; uno de los tubos tiene el ocular fijo y el otro tiene un sistema

mecnico que sube o baja. Para realizar el enfoque de cada ojo primero se enfoca con el tornillo
micromtrico el tubo que tiene el ocular fijo y despus se enfoca el que tiene el ocular mvil,
pero en este caso sin mover el tornillo micromtrico, girando el ocular mvil hasta encontrar el
foco.

b.- Sistema de iluminacin

Lmpara. Es la encargada de proporcionar los haces de luz y tiene las siguientes caractersticas:
6V, 5-15 W 12V, 50-100 W

Diafragma de campo. Est situada en la base del microscopio y su funcin es la de regular el

dimetro de la emisin de la luz a fin de que se ilumine solo el rea de campo visual, es decir
controla la cantidad de luz que atraviesa la preparacin.

Condensador. Es un sistema de tres lentes convergentes que concentran los rayos luminosos sobre
el objeto a observar, el condensador utilizado es capaz de agrupar todos los rayos que provienen

del foco y permite aprovechar toda la luz posible que inciden sobre l y los dirige hacia el plano
focal

del

objeto.

c. Sistema

ptico
Oculares.- El ocular es la parte ptica final externa, situados en el tubo a travs de

los cuales se obtiene la imagen final, el ocular tiene aumento propio (los aumentos son denominados

con la letra X), en nuestro caso es de 10X. El ocular consta de una lente cercana al ojo, collar, tubo
del ocular y una lente cercana al objetivo. Datos importantes grabados sobre la periferia de un ocular:
1) Correccin esfrica (CPL);

2) Ocular de gran campo (W); 3) aumentos (10X); 4) distancia focal amplia (1,8) y
5) Para observacin con gafas.

Tubo.- El tubo es la parte ptica mecnica, situada en la parte superior del microscopio,

este puede ser monocular o binocular, adems est adaptada para poderle colocar una cmara

fotogrfica una cmara de televisin. El tubo generalmente est diseado para trabajar a una
distancia mecnica fija entre ellos y este valor puede ser de 160 mm, el factor del tubo del
microscopio a utilizar en el laboratorio es de 1,25X, dato que nos sirve para calcular el aumento total

Objetivos.- Son lentes que captan la imagen a observar, estn construidos de cristal o fluorita, poseen

aumento propio, apertura numrica y est diseada para trabajar con diferentes campos. Todos los objetivos

tienen anillos de colores y nmeros grabados sobre el tubo metlico, que nos permite saber a detalle cules
son sus ventajas, la disposicin de estos caracteres es la siguiente:
1.- El anillo de color superior indica los aumentos (tabla 2)

2.- El lado superior izquierdo indica el nmero de aumentos

3.- El lado superior derecho la apertura numrica.
4.- El lado inferior la distancia mecnica

5.- El lado inferior derecho el espesor del cubre objetos

6.- El anillo de color inferior indica en qu medio se hace la inmersin del objetivo

ndice de refraccin:
Se denomina as a la relacin existente entre la velocidad de la luz en el aire y su velocidad

en el medio transparente utilizado. De la misma manera, se pueden obtener los ndices de refraccin de una
serie de sustancias que se utilizan en la construccin y tallado de las lentes de los objetivos. La

velocidad de la luz es de 300,000 Km/sg en el aire. Al atravesar un medio transparente como el vidrio del
cual estn fabricados las lentes de los microscopios, su velocidad se reduce a 200, 000 km./sg. Por lo tanto

el vidrio tendr un ndice de refraccin de 1.5; pues el ndice de refraccin de un objeto o una sustancia
transparente se expresa mediante la frmula:

Ve l o c idad de la l uz en el aire

IR= Velocidad de la luz en el medio

A continuacin se muestran los ndices de refraccin de una serie de sustancias transparentes que se
emplean en microscopa para construir lentes o como sustancias de inmersin:
Agua = 1.3300
Aceite de inmersin = 1.5150
Fluorita = 1.4340
Vidrio (crown) = 1.5200
Flint = 1.6600

Poder de resolucin. Se define as la capacidad de un objetivo de poder distinguir la distancia mnima que
debe existir entre dos puntos del objeto para que se puedan visualizar como dos puntos separados. La
calidad de una imagen, en la que se observe la claridad,
nitidez y la riqueza de detalles, depende del poder de resolucin del objetivo. El poder de resolucin (PR)
de un objetivo depende de la longitud de onda () del rayo luminoso utilizado y la apertura numrica del
sistema ptico del objetivo.
El PR (d) se expresa segn la siguiente formula:

Esto significa que si empleamos un objetivo de AN = 1.25 con una longitud de onda de

560nm, el poder de resolucin ser de 273nm, la cifra obtenida nos indica que el objetivo ser capaz de

distinguir o resolver la imagen de dos puntos que en el objeto estn separados entre s por 273nm. Si la
separacin de ellos es menor a esta cifra el objetivo no podr distinguirlos como dos puntos separados.
La cifra resultante de aplicar la frmula se denomina lmite de resolucin.

Un clculo ms exacto del poder de resolucin se obtiene cuando en la frmula se aade la apertura

numrica del condensador, tal como se observa en la frmula (b). Cuando se efecta correctamente la
iluminacin del objeto utilizando (adecuar la distancia apropiada del condensador y la regulacin de
captacin de la luz abriendo o cerrando el diafragma iris del mismo) la apertura numrica del condensador,

la imagen que forma el objetivo logra mostrar el mximo poder de resolucin. Por ejemplo si se emplea

el mismo objetivo del caso anterior (de AN = 1.25), el mismo tipo de luz ( = 560nm) y se ilumina la
muestra con un condensador de AN = 8

TIPOS DE MICROSCOPIOS
Los tipos de microscopio son:
1. Simple
2. Electrnico permitan un aumento de 200 0003. Petrogrfico o polarizado
4. De fase
5. De campo ultravioleta
6. Rayos X
7. Interferenciales

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

Mira el microscopio asignado a usted y compararla con la fotografa de la figura 1.1. Tenga en cuenta que
sus partes de trabajo se establecen en un marco robusto que consta de una base de apoyo y un brazo para
llevarla. (Nota: Al levantar y llevar el microscopio, siempre use las dos manos, una para agarrar el brazo
con firmeza, y el otro para apoyar la base (fig.
1.2). Nunca levante por la parte que mantiene las lentes.

Fig.1.2.- Partes del Microscopio

1) Compruebe que las lentes del ocular y de los objetivos estn limpias: de no ser
as, lmpielas cuidadosamente con papel especial para ptica. No tocar las lentes con los dedos.
2) Coloque la preparacin (sin cubreobjetos y con la muestra en la parte superior) sobre la platina
sujetndola con el dispositivo mvil. Compruebe previamente, que el objetivo de menor aumento
est en posicin de empleo.
3) Para bacteriologa, iluminar la preparacin bajando el condensador (ms contraste), y
con el diafragma abierto.
4) Ajuste los binoculares a la distancia interpupilar y ajuste el foco de cada ocular si el microscopio lo
permite.
5) Coloque el objetivo de 10 aumentos (x10) y enfocar:
a) Acerque al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando para ello el
macromtrico. No realizar dicha operacin mirando por el ocular, pues correra el riesgo de
clavar el objetivo en la preparacin con el consiguiente destrozo de ambos. 19
b) Enfoque con el micromtrico observando por el ocular hasta obtener un enfoque ntido.
6) Pase al objetivo de 40 aumentos (x40). Suba ligeramente el condensador. La imagen debe estar casi
enfocada, afine el foco con el micromtrico. Si la imagen no est ni medianamente enfocada, es
preferible volver a un enfoque con el objetivo de x10. El objetivo de x40 trabaja muy cerca de la
preparacin y por ello es susceptible de dos tipos de accidentes: ser clavado en la preparacin y
resultar manchado con aceite de inmersin si se observa la preparacin ya usada con ste ltimo.
7) Empleo del objetivo de inmersin:

a) Gire el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el
objetivo de x40
b) Coloque una gota de aceite de inmersin sobre el punto de la luz.
c) Termine de girar el revlver hasta la posicin del objeto de inmersin, asegurndose de
que ste no toca la preparacin, pero s la gota de aceite.
d) Enfoque cuidadosamente con el micromtrico. Recuerde que la distancia entre el objetivo y
la preparacin es mnima.
e) Una vez que ya ha puesto aceite de inmersin sobre la preparacin ya no puede volverse a
colocar los objetivos de x10 y de x40 sobre ese campo. Por lo tanto, si desea enfocar otro
campo, debe retirar el objetivo de inmersin girando el revlver hacia el objetivo de menor
aumento (x10), seleccionando otro campo y empezando a enfocar desde ste ltimo.
f) Finalizada la observacin de una preparacin, y antes de retirarla de la platina, se colocar
el objetivo de menor aumento girando el revlver en el sentido hacia la lupa. Nunca retire la
preparacin con el objetivo de
inmersin en posicin de observacin.
g) Retire la preparacin y limpie el objetivo de inmersin cuidadosamente con un papel
especial para ptica. Compruebe tambin que el objetivo de x40 est limpio.

Figure 1.4 Examples of Bacterial Shapes as Seen with the Bright-field Light Microscope. (a) Staphylococcus
aureus cocci; singular, coccus (1,000). (b) Bacillus subtilis rods or bacilli; singular, bacillus (1,000). (c) A single,
large spirillum; plural, spiralla (Spirillum volutans;1,000). (d) Numerous, small spirilla (Rhodospirillum rubrum;1,000).

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1) No se deben tocar nunca las lentes con las manos, sino con pauelos especiales
para lente.
2) No dejar nunca una preparacin sobre la platina cuando no est usando el
microscopio.
3) Para cambiar el objetivo, utilice siempre el revlver.
4) Despus de utilizar el objetivo de inmersin lmpielo. En caso de que el aceite se
haya secado, avise al docente para limpiarlo con xilol.
5) No fuerce nunca los dispositivos giratorios del microscopio (macro y
micromtricos, platina, revlver y condensador).
6) No cambie nunca de objetivo mientras est observando a travs del ocular.
7) Cuando finalice el trabajo ponga el objetivo de menor aumento en posicin de

observacin.
8) Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin de prcticas.
POSIBLES CAUSAS DE UNA MALA IMAGEN

Cuando usted tenga problemas al momento de querer visualizar tenga presente los siguientes tems:
l. Verificar que la iluminacin sea la correcta.
2. Verificar que las lentes del objetivo estn limpias.
3. Comprobar que entre el diafragma de campo y el de abertura, no haya ningn filtro difusor.
4. El centrado del revlver porta objetivos debe ser el correcto.
5. El portaobjetos y el cubreobjetos deben estar limpios. Comprobar que el primero est bien
colocado, y que no haya dos cubreobjetos superpuestos.
6. Verificar la limpieza de todo el sistema ptico. Esto se puede efectuar haciendo girar por
separado los oculares que el microscopio posea, comprobando si las pequeas motas de suciedad se
mueven Si es as, es que hay que limpiar el ocular. Luego, habr que hacer girar el tubo ocular
en su conjunto; ste no debe ser desmontado nunca, pero s se pueden limpiar cuidadosamente los
prismas soplando sobre las superficies accesibles. El objetivo puede limpiarse desenroscndolo
ligeramente y ayudndose de un pincel seco.
7. Comprobar que el aceite de inmersin sea el suficiente, sin burbujas ni impurezas, y que
no sea fluorescente.
8. Asegurarse de que el objetivo est bien enroscado.
9. Verificar el grosor del cubreobjetos, portaobjetos y medio de montaje, que es decisivo, sobre todo
en medianos y grandes aumentos. Es importante, igualmente, no colocar dos cubreobjetos
superpuestos.
10. La montura del condensador debe estar bien centrada y la frontal bien sujeta, en el caso de que sea
abatible. Comprobar que la cremallera est bien apretada, para mantener la posicin.
11. La intensidad lumnica no debe ser dbil, ni excesiva. No hay que regularla nunca con el
diafragma del condensador.
12. Tener cuidado de no utilizar objetivos de contraste de fases para observaciones de campo claro,
sobre todo cuando trabajamos con grandes aumentos.
13. Si el microscopio tiene espejo, es necesario comprobar que la cara plana sea la que proyecte el
haz luminoso sobre el diafragma del condensador.
14. Utilizar una combinacin correcta entre el ocular y el objetivo, pues puede ocurrir que el
ocular sea demasiado potente.

Cuestionario
1A que llamamos poder de resolucin de un microscopio?
2Que es la apertura numrica?
3Cul es el trabajo del aceite de inmersin?
4Que diferencias existe entre una bacteria, un virus y un hongo
5 Cual es la diferencia entre el poder de resolucin y poder de aumento de
una lente. Qu se entiende por el trmino "parfocal"?
6.Por qu el objetivo de baja potencia es colocado en posicin cuando el microscopio se
almacena
7 Cmo se puede aumentar la resolucin en el microscopio?