Guías de Práctica de Laboratorio de Genética

Carrera de Medicina
Ctedra de Gentica - Gua de prcticas de laboratorio
GUA DE PRCTICAS DE
LABORATORIO
CTEDRA DE GENTICA
2013- 2014
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Carrera de Medicina
1. Prctica N
2. Ttulo
de la prctica
Estructura del ADN
y del genoma humano
3. Objetivo general / propsito

Interpretar la estructura
y los procesos de estructuracin del genoma
humano y del ADN.
4. Resultados del aprendizaje

El estudiante estar en capacidad de comprender los procesos de
estructuracin del genoma humano.
Describe con responsabilidad y criticismo las funciones de los
componentes celulares, seales celulares,
ciclo celular y ADN, mitosis
y meiosis
5. Material
Por parte del laboratorio:
ADNA ZOLE
Micropipeta
Alcohol isoamilico
Etanol de 90 y 70 grados
Tubos ependorff
EDTA
Jeringuilla 5 ml
g 21x1
Por parte del estudiante
Mandil
1Torniquete
1 Mascarilla de ciruga
1 Par de guantes
6. Procedimiento
Toma de muestra de sangre perifrica
Colocar torniquete 4 travesees de dedo sobre el pliegue del codo.
Seleccionar la vena perifrica de ms fcil acceso y puncionar.
Proceder
realizar
antisepsia
en
la
zona
con
algodn
con
alcohol
yodado.
Verificar la permeabilidad de la jeringuilla y agregar 0,03 ml de EDTA.
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Realizar la puncin en ngulo de 45 con el bisel hacia arriba.
Extraer la sangre.
El volumen de sangre para cada jeringuilla es de 3 ml.
Retirar el torniquete
Retirar
la
jeringuilla
poner
un
algodn
limpio
seco
para
la
hemostasia.
Extraccin de ADN de sangre perifrica
Poner 500 microlitros de sangre total
en dos ependorff de 1,5
ml
A cada tubo se aadir 1000 microlitros de
buffer de
extraccin de ADN
Mezclar vigorosamente en el vortex
Dejar incubar por
Retirar el sobrenadante
Aadir
Dejar reposar por 5 minutos
Aadir
Dejar reposar por 5 minutos
Aadir
Agitar por inversin
Extraer el ADN
por 1 minuto
10 minutos
500 microlitros de
500 microlitros de
500 microlitros de
alcohol 90
por 1 minuto
alcohol 70
por 1 minuto
alcohol Isoamilico
por 1 minuto
por 5 minutos a 10 minutos
con una pipeta Pasteur pasar el ovillo
(blanquecino) a otro ependorff
Visualizacin ADN mediante Corrido electrofortico
7. Prerrequisitos tericos
El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y tambin
DNA, del ingls DeoxyriboNucleic Acid), es un tipo de cido nucleico, una
macromolcula
nucletidos
que
que
forma
forman
parte
una
de
cadena
todas
doble.
las
clulas,
Desde
el
biopolmero
punto
de
de
vista
qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido.

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Carrera de Medicina
Un
polmero
es
un
compuesto
formado
por
muchas
unidades
simples
conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones.
Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento

de los organismos vivos conocidos, siendo el responsable de su transmisin
hereditaria.
El estudiante debe conocerla estructura del ADN y el genoma humano.
La
estructura
del
ADN
est
definida
por
la
"secuencia"
de
bases
nitrogenadas en la cadena de nucletidos, es en esta secuencia de bases

en la que reside la informacin gentica del ADN.
El orden en el que aparecen las cuatro bases a lo largo de una cadena
en el ADN es, por tanto, crtico para la clula, ya que este orden es el
que constituye las instrucciones del programa gentico de los organismos.
Conocer esta secuencia de bases, es decir, secuenciar un ADN equivale a
descifrar su mensaje gentico.
La
estructura
en
doble
hlice
del
ADN,
con
el
apareamiento
de
bases
limitado ( A-T; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una

de las cadenas delimita automticamente el orden de la otra, por eso se
dice que las cadenas son complementarias.
Una vez conocida la secuencia de las bases de una cadena ,se deduce
inmediatamente la secuencia de bases de la complementaria
Cuando Watson
Crick
propusieron el
modelo
de
la
estructura
en doble
hlice del ADN, sugirieron tambin un posible mecanismo para la replicacin

de esta molcula:
-No
se
escapa
nuestra
comunicacin
que
el
emparejamiento
especfico
que hemos postulado sugiere inmediatamente un mecanismo copiador para el

material gentico. (Traduccin de su artculo en Nature 25-Abril-1953). Cinco
semanas despus de la publicacin de este artculo publicaron nuevamente
en Nature otro artculo explicando ese posible mecanismo de replicacin:
Nature, 30-Mayo-1953
Debido a la complementariedad de las cadenas, cada una de ellas podra
servir de molde para la sntesis de una nueva cadena complementaria.
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De
esta
manera
se
obtendran
dos
molculas
de
ADN
idnticas
la
molcula original, cada una de las cuales contendra una cadena del ADN
original y otra de nueva sntesis.
Este
modelo de replicacin
para
indicar
que
cada
es conocido como
molcula
hija
solo
Replicacin Semiconservativa,
conserva
la mitad (una
de
las
dos cadenas) de la molcula original Resumen corto del tema a conocer

antes
de
realizar
la
prctica,
no
mayor
tres
pginas.
NO
es
una
repeticin de la clase terica.
Funciones del ADN

1. Almacenamiento de informacin gentica
2. Auto-replicacin y herencia
3. Expresin gnica
La funcin ms importante es codificar para protenas o RNAm
La informacin es codificada en el orden de las bases nitrogenadas
Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas formadas por un
elevado nmero de compuestos qumicos llamados nucletidos.
Estas cadenas forman una especie de escalera retorcida que se llama doble
hlice.
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Cada
nucletido
est
formado
por
tres
unidades:
una
molcula
de
azcar
llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos

nitrogenados
llamados
bases: adenina (abreviada

como
A),
guanina
(G),
timina (T) y citosina (C).

Cada
base
cada
cadena
orgnica
se
une
de
a
la otra base de la otra

cadena
enlace
mediante
o
puente
hidrgeno
da
entre
A y
entre G
C,
unidas
por
de
el
apareamiento
se
un
de
puentes de
bases
hidrgeno
(lneas punteadas)existen
dos puentes entre tiamina y adenina, y tres entre

citosa y guanina.
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Una de las caractersticas comunes de la organizacin del material gentico

es su alto grado de compactacin: masa compacta que ocupa un espacio
bien delimitado.
Nucleosoma
El empaquetamiento bsico de la unidad de cromatina
Histonas y no-histonas dos copias de cada histona: H2A,H2B, H3 and H4,
forman
octmero
el
octmero
con
nucleosoma
un
este
El
tamao
se
ADN
de
puede
se
160
unir
enrolla
a
200
entre
alrededor
pares
s,
por
del
de
la
exterior
bases
Nucleosoma =
este
formando
presencia
encontrado entre los nucleosomas para formar la estructura del
de
de
el
H1
solenoide.
ADNA + octmero de histonas
GEN
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Un
gen
se
define
como
un
segmento
de
ADN
que
codifica
normalmente
para una protena o cido nucleico; es un segmento corto de ADN, que le

dice al cuerpo cmo producir una protena especfica. Hay aproximadamente
30.000
genes
en
cada
clula
del
cuerpo
humano
la
combinacin
de
todos los genes constituye el material hereditario para el cuerpo humano y

sus funciones
geno
Un gen es un subconjunto determinado de nucletidos de uno de los lados

de
la
escalera
del
cromosoma
referenciado,
se
encuentra
dogma
central
en
la
misma
posicin en cada cromosoma.

La
codificacin
moderna
de
esta
informacin
es
el
de
la
biologa
una secuencia de nucletidos del ADN determina la secuencia de
aminocidos de las protena
CROMOSOMA
Dentro de las clulas, el ADN est organizado dentro de estructuras llamadas
cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula
se divida.
En biologa, se denomina cromosoma (del
griego
chroma,
color
, - soma, cuerpo o elemento) a

cada
uno
de
los
pequeos
cuerpos
en
forma de bastoncillos en que se organiza
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la
cromatina
del
ncleo
celular
durante
las
divisiones
celulares
(mitosis
meiosis).
La cromatina es un material microscpico que lleva la informacin gentica de
los organismos eucariotas y est constituida por ADN asociado a protenas
especiales llamadas histonas.
Las histonas se unen al ADN, ayudan a dar su forma a los cromosomas y
ayudan a controlar la actividad de los genes.
En los organismos eucariontes, el ADN est organizado en
Cada especie tiene un nmero caracterstico: la cebolla tiene 16
en 8 pares), la mosca de la fruta Drosophila melanogaster, 8,
humanos, 46. De esto no se desprende que una mayor
cromosomas equivale a ser s inteligente ya que las
componen las papas tienen 48 cromosomas.
cromosomas.
(organizados
y los seres
cantidad de
clulas que
Los seres humanos tenemos 23 pares de cromosomas: 22 de ellos se

llaman cromosomas autonmicos y se heredan uno del padre y otro de la
madre. Los cromosomas del par 23 se llaman cromosomas sexuales y son
diferentes entre s.
EL GENOMA
El genoma humano tiene unas 3.000 megabases (1-2m) y un ncleo ocupa
unas 6m.
El genoma es todo el
organismo en particular.
material
gentico
contenido
en
las
clulas
de
un
Por lo general, al hablar de genoma en los seres eucariticos nos referimos

slo al ADN contenido en el ncleo, organizado en cromosomas.
Ser
eucariota
consiste
bsicamente
en
tener
la
mayor parte del genoma

confinado en el ncleo
Esto
constituye
el
genotipo se refiere a la
dotacin
gnica
del
individuo, a su genoma,
mientras que el fenotipo
hace
referencia
a
la
manifestacin
del
genotipo. Si el genotipo
es
el
plan
de
instrucciones, el fenotipo
constituye el resultado de
la accin. Pero slo el
genotipo se hereda.
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Carrera de Medicina
El conjunto de genes de un individuo es el mismo desde su constitucin en
el zigoto, pero el fenotipo puede definirse a muy distintos niveles y es
variable en el tiempo. El tipo celular, el tejido resultante del proceso de
divisin, la morfologa del organismo, su co port iento, son tambin
fenotipos en la medida en que son expresin del genotipo.
No existe una correspondencia biunvoca entre el genotipo y el fenotipo. Un
mismo genotipo puede dar lugar a distintos fenotipos, y un mismo fenotipo
puede ser consecuencia de distintos genotipos.
Heterogeneidad: diferentes genotipos pueden producir fenotipos similares.
8. Referencias
Nussbaum RL, McInnes RR, Willard HF. Thompson & Thompson, Gentica
en Medicina. 7 edicin. Elsevier-Masson, Espaa. 2008
Watson y Crik
Estructura del ADN Nature 25-Abril-1953
9. Post-requisitos (informe posterior a la prctica)
Desarrollo del informe
1. Observe la imagen. Identifique las estructuras del cromosoma , ponga los

nombres correspondientes.
1.- _________________________________________________________
2.- _________________________________________________________
2
1
3.- _________________________________________________________
4.- _________________________________________________________
5.- _________________________________________________________
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Carrera de Medicina
2. Qu tipo de ADN es y porque
3. Dibuje la estructura secundaria segn modelo de Watson y Crik
4. Indique las caractersticas del extracto de ADN obtenido
5. Haga un resumen del artculo de Watson y Crick Nature 25-Abril-1953 indicando:
Por qu el ARN es monocatenario
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En que trabajos se sustenta la teora de Watson y Crik
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Prctica N
Ttulo
de la prctica
Expresin del ADN

Comprender la expresin del ADN como mecanismo de estructura y
funcin celular y de la herencia

Comprende y describe con responsabilidad y criticismo los procesos de
estructuracin y expresin
gentica y las mutaciones.
Resultados de aprendizaje 2
Describe con responsabilidad y criticismo los procesos de expresin
genoma humano y de
del
la genmica
3. Material
Material que provee la ctedra
Microfotografas de Intercambio de cromatides Hermanas (ICH)
Hojas de resultado PCR en tiempo real
Material que trae el alumno
Lpiz Hb
Borrador
Mandil
4. Procedimiento
1. Revise el cdigo gentico
2. En una hoja de papel realice las anotaciones
3. Utilizar cdigo Gentico para realizar la Protena a partir de la siguiente
secuencia de ADN
3- TACCGACGAAGCGTAGCTTCGCATCGA-5
Revise los conceptos de mutacin como expresin anormal del ADN
4 Identificar en el ICH
el nmero de mutaciones encontradas
Revisar la
microfotografa
Reconocer los intercambios de cromatide Hermana
Contar los intercambios de cromatide.
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El material gentico de cualquier organismo (procarionte o eucarionte) est sometido a una
serie de procesos cclicos que aseguran la realizacin de sus dos funciones esenciales: la
transmisin entre generaciones de la informacin gentica con fidelidad y la expresin de
sa informacin gentica con precisin para que pueda cumplir la misin para la que ha
sido seleccionada. Por consiguiente, el ciclo del material gentico comprende tres
procesos: replicacin del material gentico para su transmisin en copias idnticas a la
descendencia, transcripcin del material gentico que se transmite entre generaciones
para sintetizar el material gentico que asegura la expresin de la informacin en la clula
y traduccin de la informacin gentica de la forma de cido nucleico a la forma de
protenas. Estos tres procesos ocurren independientemente de cul sea la molcula
transmisora principal de la informacin gentica entre generaciones (ADN en la mayora de
los casos y ARN en el caso de los virus de ARN) y son esencialmente iguales en
procariontes y en eucariontes.
Replicacin: La replicacin del material gentico es un proceso complejo en el que
participa un gran nmero de protenas que reconocen la molcula de material gentico y
llevan a cabo la polimerizacin de otras molculas complementarias cada una de sus
hebras de forma que, al final, se logra disponer de dos molculas idnticas (salvo errores
denominados mutaciones) a la inicial. El proceso presenta ciertas diferencias segn el
material gentico que se transmite entre generaciones sea ADN o A RN y, en el primer
caso, si el organismo es eucarionte o procarionte.
Replicacin del ADN. En este proceso interviene un grupo de enzimas conocido
genricamente como ADN polimerasa. Este complejo multienzimtico va incorporando
nucletidos a la cadena que se va sintetizando utilizando como molde una de las hebras de
la cadena antigua. Esta polimerizacin se produce aadiendo nuevos nucletidos al
extremo 3' de una hebra de ADN en crecimiento. Por ello se dice que la sntesis del ADN
se produce en direccin 5'<3' mientras la ADN polimerasa va leyendo la hebra molde en
direccin 3'o5'.
Por consiguiente, para que se produzca la sntesis de ADN por la ADN polimerasa,
adems de la enzima que realiza la polimerizacin en s, es necesario otro juego de
protenas que van desenrollando la doble hlice de ADN delante de la ADN polimerasa
para permitir que sta funcione. Estas enzimas se denominan genticamente
topoisomerasas y girasas. La accin de las topoisomerasas y girasas permite abrir unas
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burbujas en la doble hlice de ADN en las que entra el complejo de la ADN polimerasa y
realiza la polimerizacin.
Sin embargo, la ADN polimerasa no es capaz de iniciar la polimerizacin del ADN sino que
solamente es capaz de continuarla. Para que la ADN polimerasa funcione es necesario
que exista un extremo 3' libre al que aadir un nuevo nucletido. Quin pone ese extremo
3' libre?. En todos los casos (salvo algunas excepciones de ciertos virus) se extremo 3'
viene de una pequea cadena de ARN que se ha sintetizado como paso inicial de la
replicacin del ADN. Por consiguiente, la replicacin del ADN comienza con la sntesis de
una pequea molcula de ARN que luego contina como molcula de ADN. Esta pequea
olcul
de ARN se deno in
ceb dor o pri er y es sintetiz d
por otro co plejo
multienzimtico denominado ARN polimerasa.

La sntesis de ADN (replicacin) va procediendo detrs de la horquilla que se forma en el
punto en que se van abriendo las dos hebras de ADN molde por accin del complejo de
girasas y topoisomerasas. De esta forma, la hebra que se va sintetizando es continua. Sin
embargo, la hebra que se sintetiza usando como molde la complementaria de la anterior no
puede ser contina porque la accin de las topoisomerasas y girasas se produce detrs del
punto de origen de la transcripcin. Por esto, de las dos hebras hijas, una ser continua y l
a otra discontinua. Los fragmentos de sta ltima se unirn entre s mediante la accin de
otra enzima denominada ADN ligasa que une los fragmentos anteriores.
En las bacterias, cuyo material gentico es cerrado, no tiene extremos, slo existe un
origen de replicacin del ADN en cada molcula de ADN. Esto es vlido para los plsmidos
y para los cromosomas bacterianos. Asimismo, esto se cumple tambin en el ADN de los
orgnulos celulares procariticos presentes en las clulas eucariticas.
Replicacin del ADN eucaritico. La replicacin del ADN eucaritico es esencialmente igual
a la del procaritico aunque presenta ciertas diferencias los cromosomas eucariticos son
abiertos, en lugar de cerrados, y el nmero de orgenes de transcripcin es mltiple en
cada cromosoma en lugar de tener uno solo por cromosoma.
Replicacin del material gentico de los virus de ARN. Los virus de ARN tienen esta
molcula como transmisora de la in formacin gentica entre generaciones. Para la
transmisin de las copias de informacin gentica entre los descendientes es necesario
que el ARN del virus que infecta una clula se transcriba, en primer lugar, en una molcula
de ADN que servir como molde para la copia de muchas molculas de ARN que formarn
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la descendencia. Esta transcripcin de ARN a ADN se produce en direccin opuesta a la
transcripcin clsica que hemos descrito antes (ADN < ARN) y se lleva a cabo por un
complejo multienzimtico en el que el constituyente principal es la enzima denominada
transcriptasa reversa.
Transcripcin: es el proceso por el que se transmite la in formacin contenida en el ADN al
ARN. Este proceso se lleva a cabo por la ARN polimerasa que utiliza como molde una de
las dos hebras del ADN, la denominada hebra codificante. Durante el proceso de
transcripcin se reconoce un sitio especfico de la molcula de ADN en el que se van a unir
las enzimas del complejo de ARN polimerasa. Este sitio especfico se denomina promotor
del gen y permite que se produzca la transcripcin. Genes sin promotores no pueden ser
transcritos aunque un promotor puede servir para transcribir varios genes seguidos que
forman lo que se denomina un opern.
En clulas procariticas existe una serie de protenas que pueden un irse a la ARN
polimerasa controlando a qu promotores se puede unir sta y regulando as la expresin
gnica. Estas protenas se denominan factores sigma. En clulas eucariticas la unin de
la ARN polimerasa a un promotor o a otro viene regulada por la unin de otras muchas
protenas que, de alguna forma, dirigen la unin de la polimerasa al promotor conveniente.
No todas las molculas de ARN que se sintetizan en una clula van a ser traducidas en
protenas. La gran mayora de las molculas de ARN tienen otras funciones estructurales o
enzimticas diferentes de la transmisin de la informacin gentica. Son las molculas de
ARN transferente (que sirve para activar los aminocidos de manera que puedan ser
polimerizados en protenas) y las de ARN ribosomal que sirven para que estos orgnulos
celulares puedan desarrollar su funcin. Constantemente se van encontrando nuevas
molculas de ARN con funcin diferente a la de transmisin de la informacin gentica. En
cualquier caso, stas molculas especiales de ARN son sintetizadas por un procedimiento
de transcripcin similar al descrito aunque el complejo enzimtico de la ARN polimerasa
pueda ser algo diferente.
Traduccin: Es el proceso por el que la informacin gentica con tenida en el ADN y
transcrita en una ARN mensajero va a ser til izada para sintetizar una protena. El proceso
de lleva a cabo en los ribosomas.
Para que un ribosoma pueda reconocer una ARN mensajero y utilizarlo para sintetizar una
protena, el ARN tiene que contener, adems de la serie de nucletidos que llevan la
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secuencia de la protena, otras secuencias que permitan al ribosoma unirse al ARN, saber
dnde ha de iniciarse la traduccin de la secuencia (el denominado codn de iniciacin),
saber dnde debe terminar la traduccin (codn de terminacin) y saber en qu punto de la
molcula de ARN mensajero deben separarse ste y el ribosoma.
Los ribosomas de las clulas procariticas son diferentes de los de l as clulas eucariticas
como puede comprobarse por su diferente susceptibilidad a antibiticos ribosomales. Por
otra parte, la traduccin en clulas procariticas ocurre simultneamente a la transcripcin
del gen, mientras que en las clulas eucariticas, la traduccin se produce slo una vez
que el ARN mensajero ha llegado al citoplasma y a la zona donde se encuentran los
ribosomas, por lo que nunca es simultnea con la transcripcin.
La traduccin del mensaje gentico desde el ARNm hasta una protena no es suficiente, en
algunos casos, para que se exprese correctamente. Es necesario que el polipptido que se
va sintetizan do por el ribosoma se pliegue de forma adecuada para que pueda desarrollar
su funcin biolgica correctamente; sin embargo, en muchos casos esto no ocurre de una
manera completamente espontnea: es necesario el concurso de un grupo de protenas
esenciales denominadas chaperoninas (anglicismo que viene a significar protenas tutoras
o, si se quiere, tutorinas) que ayudan al pptido naciente a adquirir la configuracin
tridimensional correcta. Estas protenas son muy importantes, por otra parte, para corregir
errores pequeos que se produzcan en protenas maduras y que causan su inactivacin o
bajada de rendimiento.
Modificaciones del ARN mensajero: Tiene que producirse una serie de modificaciones en
el ARN mensajero para que pueda ser traducido correctamente. En las clulas eucariticas
las molculas de ARN deben ser trasladadas del ncleo, donde ocurre la transcripcin, al
citoplasma, donde ocurre la traduccin. Por otra parte, los genes de organismos
eucariticos suelen tener fragmentos que no se traducen pero si se transcriben, son los
denominados intrones por contraposicin a los exones o secuencias del ARN que van a
ser traducidas. Cuando se transcribe un ARN eucaritico ste es una secuencia de
intrones y exones que debe ser procesada para eliminar los intrones y dejar slo los
exones colocados ordenadamente. Esta eliminacin selectiva de intrones se denomina
tcnicamente procesamiento o splicing, y ocurre en el ncleo. En los genes procariticos
no existen (salvo alguna excepcin muy rara en un grupo especial de arqueobacterias)
intrones y, por lo tanto, no hay procesamiento.
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Aplicaciones de los procesos y sistemas enzimticos que intervienen en el ciclo del
material gentico, en la ingeniera gentica y la Biotecnologa: Los procesos y sistemas
enzimticos involucrados en la transmisin y expresin de la informacin gentica entre
generaciones pueden ser aislados y utilizados en la Biotecnologa para lograr la expresin
y manipulacin de informacin gentica por microorganismos e, incluso, por organismos
superiores. Como ejemplo citaremos dos aplicaciones derivadas de las propiedades y
enzimas involucradas en la replicacin del ADN.
Deteccin se secuencias de ADN o ARN mediante hibridacin de cidos nucleicos. Estas
tcnicas estn basadas en la especificidad de la unin de hebras de cidos nucleicos con
secuencias complementarias. Dependiendo de la perfeccin del acoplamiento de las dos
secuencias (del grado de complementariedad) la unin entre las dos cadenas ser ms o
menos fuerte. Esto significa que podr resistir temperaturas ms elevadas cuando la
complementariedad es ms alta o se separarn las hebras (se producir la fusin) cuando
la complementariedad es demasiado baja. En cualquier caso, las hebras se mantendrn
unidas o no dependiendo del binomio grado de complementariedad-temperatura.
La especificidad de la unin de hebras nos permite detectar la presencia de secuencias en
una molcula, o en una mezcla de molculas, de cido nucleico (ADN o ARN) usando
como sonda una molcula con secuencia complementaria y convenientemente marcada
para facilitar su deteccin. Estos procedimientos se utilizan en hibridacin in situ,
experimentos de Southern (deteccin de secuencias de ADN) o en experimentos de
Northern (deteccin de secuencias de ARN).
Amplificacin de secuencias de cidos nucleicos mediante la reaccin en cadena de la
polimerasa: en esta tcnica se utiliza la capacidad de la ADN polimerasa de sintetizar ADN
a partir de una secuencia cebadora determinada. En ella se usan dos cebadores que
flanqueen una secuencia de ADN que se quiere detectar o de la que se desea disponer de
un gran nmero de copias; estos cebadores deben servir para iniciar la sntesis de ADN en
cada una de las dos hebras del fragmento que se quiere amplificar y, por consiguiente,
deben est r orient dos h ci el interior de l secuenci que se quiere amplificar. Mediante
la adicin de ADN polimerasa y de los cofactores y substratos necesarios es posible
realizar la sntesis de la molcula de ADN flanqueada por los dos cebadores in vitro. Si,
adems, se realizan varios procesos de sntesis de ADN usando los mismos cebadores en
procesos consecutivos el nmero de copias de l a molcula, de ADN que se quiere
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amplificar aumentar exponencial mente permitiendo disponer de grandes cantidades de la
misma.
En la prctica, esta reaccin de polimerizacin se lleva a cabo con la ADN polimerasa de
una bacteria termfila (Thermus aquaticus u otras similares) capaz de resistir mltiples
ciclos a elevada temperatura (Taq-polimerasa). La tcnica tambin se puede utilizar para
detectar ARN siempre y cuando se realice un paso previo de transcripcin reversa dei
mismo.
Control de la expresin gnica
La transmisin de la informacin gentica entre generaciones y la expresin en forma de
protenas de dicha informacin gentica no son suficientes para permitir que el programa
de desarrollo de un organismo se lleve a cabo correctamente. Es necesario, adems,
asegurar que los genes que constituyen la informacin gentica transmitida se expresen en
momentos adecuados bien desde el punto de vista cronolgico o espacial (procesos de
desarrollo) o bien como respuesta a cambios en las condiciones ambientales en las que se
encuentra la clula o el individuo. Por otra parte, las respuestas al ambiente o los procesos
de desarrollo no suelen producirse como con secuencia de la activacin de un nico gen
en un momento, sitio o condicin determinado, sino que suele ser necesaria la expresin
coordinada de un conjunto de ellos para que tenga lugar el efecto. Estos dos hechos hacen
que el control de la expresin gnica sea central en el proceso de la biologa molecular de
los seres vivos.
El modelo ms coherente de regulacin de la expresin gnica se conoce con el nombre
de Modelo del Opern que explica, como veremos, l a expresin coordinada de genes. Por
otra parte, veremos a continuacin cul es el proceso por el que llega al material gentico
la in formacin ambiental o de desarrollo que permita la expresin coordinada;
estudiaremos el proceso de transduccin de la seal.
Modelo del opern: La expresin de un grupo de secuencias codificantes de diferentes
pptidos cuya presencia debe ser coordinada se logra colocando todas las secuencias bajo
el control de un mismo promotor.
La transcripcin de todas estas secuencias darn lugar a un ARN mensajero de gran
tamao que codifica todos los genes contenidos en el opern (ARN policistrnico) de forma
que siempre se podrn traducir coordinadamente las diferentes protenas del opern. La
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cantidad de cada una de las protenas del opern que se produce como consecuencia de
la traduccin no siempre es equimolecular porque existen elementos de regulacin de la
traduccin que provocan la separacin del ribosoma y el ARNm en ciertos momentos
controlando as ms finamente la coordinacin de la expresin.
Cmo se regula de la expresin gnica?. Entre el promotor del opern y el inicio del
primer gen estructural del fragmento policistrnico existe una secuencia de ADN
denominada Operador. A esta secuencia se puede unir una protena denominada
Regulador de forma que cuando se encuentra unido el regulador a la secuencia del
operador impide el paso de la ARN polimerasa en su trayecto de transcripcin del ADN
para sintetizar el ARN policistrnico. Por con siguiente, la regulacin de la expresin se
logra mediante un impedimento fsico de la actividad de la ARN polimerasa causado por la
unin de una protena al ADN.
Existen dos clases de operones segn sea su respuesta a las condiciones ambientales: los
operones indecibles y los operones represibles.
Opern inducible: es aqul en el que como consecuencia de la presencia de una molcula
inductora se produce la expresin de los genes del opern. El ejemplo ms clsico es el
del Opern de la lactosa que regula la sntesis de las protenas que permiten el
metabolismo de la lactosa por las bacterias.
Cuando una bacteria se encuentra en un ambiente donde puede disponer de lactosa los
genes que hacen posible la utilizacin de este azcar por la bacteria se inducen. Estos
genes, agrupados en el Opern de la lactosa, estn constitutivamente reprimidos porque a
la regin del operador del opern se ha unido una protena inhibidora que impide el paso
de la ARN polimerasa. Cuando hay lactosa en el medio de crecimiento alguna molcula de
este azcar puede llegar al interior de la clula usando alguno de los sistemas de
transporte presentes en la membrana bacteriana para azcares. Una vez en el interior de
la clula, la lactosa puede unirse a la protena inhibidora unida a la regin reguladora del
opern de la lactosa de suerte que, cuando la lactosa est unida, la protena inhibidora se
separa de la regin operadora permitiendo el paso de la ARN polimerasa y la transcripcin
de los genes correspondientes.
Cuando desaparece la lactosa del medio la protena inhibidora queda de nuevo libre de
forma que puede volver a unirse al fragmento operador del opern impidiendo, de nuevo, la
transcripcin de los gen es que lo forman.
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Carrera de Medicina
El resultado de este proceso es que, como respuesta a la presencia de lactosa en el
medio, se induce la expresin de los genes que permiten su catabolismo. Este sistema es
extremadamente sensible porque la accin de las enzimas que permiten el paso de la
lactosa a travs de la membrana (transportadoras de lactosa) permite que la concentracin
intracelular de lactosa sea suficientemente alta hasta el momento en el que la
concentracin extracelular es ya tan baja que no puede utilizarse el azcar eficientemente.
Opern represible: en otros casos es necesario que la expresin de ciertos genes se
detenga tan pronto como sea metablicamente posible, porque su actividad no sea
necesaria, para lograr una mayor economa de la energa celular. Es el caso, por ejemplo,
de los operones de la arginina y del triptfano. Estudiaremos con ms detalle el primero de
ellos.
Si la cantidad de arginina presente en la protenas que se encuentran en el medio en que
crece una bacteria es suficientemente alta como para satisfacer las necesidades
bacterianas de este aminocido, no es necesario que la bacteria lo sintetice sino que,
simplemente, lo asimila de la dieta. Ahora bien, si la cantidad de arginina exgena no fuera
suficiente, las bacterias pueden sintetizarla a partir de otros precursores mediante el
concurso de una serie de enzimas codificadas en el opern de la arginina.
De nuevo, nos encontramos con un opern y a su secuencia operadora se une una
protena represora especfica. Sin embargo, en este caso l a protena represora se
mantiene unida siempre que a ella se encuentre unida, a su vez, una molcula de arginina
o de un anlogo de arginina. Cuando la concentracin celular de arginina desciende por
debajo de unos niveles crticos (que vienen determinados por la constante de afinidad de la
molcula represora por la arginina o su anlogo) el represor se separa de la arginina y
queda inactivo separndose, tambin, de la secuencia operadora y permitiendo la
transcripcin de los genes que codifican las protenas de sntesis endgena de arginina.
El efecto final es la expresin de los genes del opern como respuesta a los niveles de
arginina presentes en la clula.
Mecanismos de transduccin de seal. Se conocen con este nombre los mecanismos que
permiten a las clulas sentir condiciones exteriores (ambientales o seales de desarrollo) y
activar como consecuencia de ello la expresin de algunos genes u operones. Los dos
ejemplos de opern descritos anteriormente responden a las condiciones ambientales de
concentracin de lactosa y arginina, respectivamente; sin embargo, no se consideran
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Carrera de Medicina
incluidos dentro de l os mecanismos de transduccin de seal porque la deteccin del
estado ambiental no se realiza a travs de la membrana bacteriana sino que se produce
directamente por interaccin del inductor con el represor modulando su unin al operador.
En el caso de los sistemas de transduccin de sea, un complejo de protenas de
membrana recibe la seal externa. Para ello, este complejo ha de tener una protena, al
menos, dirigida hacia el exterior de l a clula de manera que acte como receptor de la
seal. Como con secuencia de la deteccin de la seal (lo que, en trminos bioqumicos
suele significar "cuando se ha unido I receptor de membrana la molcula que acta como
inductor") se produce un cambio conformacional en la molcula del receptor; cambio que, a
su vez, causa otros en las otras protenas del complejo de membrana con las que
interacciona. Como consecuencia de estos cambios estructurales el complejo de protenas,
por su cara interna, es capaz de modificar qumicamente protenas citoplsmicas activando
o inactivando as su funcin como represores de operones o genes (esto suele ocurrir
mediante procesos de fosforilacin) o bien sintetiza molculas que son inductores que
regulan la actividad de represores presentes en la clula (estas molculas inductoras son
lo que se suele denominar colectivamente "segundos mensajeros").
Los sistemas de transduccin de seal son muy importantes porque de ellos depende gran
parte del control de la expresin gnica y porque son manipulables genticamente de
forma que podemos utilizarlos para disparar procesos de expresin gnica usando seales
inductoras diferentes de las que normalmente las controlan en la naturaleza pero que son
poco manejables eh procesos industriales biotecnolgicos.
El ADN est constituido por una doble cadena helicoidal que est formada por parejas de
nucletidos
(T-A,
C-G)
los
cuales
llevaran
inscrito
el
cdigo
gentico.
As pues, el bloque gentico de un ser vivo ( genoma ) constara de un conjunto de

cromosomas, formados a su vez por eslabones o genes, todos ellos formados por parejas
de nucletidos que contendran los datos genticos segn su distribucin en la cadena.
el cdigo gentico es justamente eso, un cdigo. Segn define la Real Academia Espaola
RAE , un cdigo es una combinacin de signos que tiene un determinado valor dentro de
un sistema establecido, o t
bin, un cifrado para formular y comprender mensajes
secretos".
Mediante largos y difciles estudios se descubri la existencia del ADN y del ARN y su
importancia para la gentica. Desde entonces, al hablar de estos cidos nucleicos se los
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Carrera de Medicina
relaciona con la sntesis de las protenas que van a determinar las caractersticas
genotpicas y fenotpicas de un organismo
El cdigo gentico es, entonces, la clave para la traduccin de la informacin o mensaje
gentico contenido en los genes y que se ha de traspasar a las protenas, y est contenida
dentro de la cadena de ADN formado por la combinacin de esas cuatro bases
nitrogenadas: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T).
As, se comprueba que el cdigo gentico establece la relacin existente entre las cuatro
bases nitrogenadas, presentes en los nucletidos que constitutyen los cidos nucleicos, y
los veinte aminocidos en que se basan las protenas.
Lo misterioso del cdigo consiste en averiguar (entender, mejor dicho) cmo se establece
dicha relacin.
En el cdigo gentico, cada gen es un segmento del cido desoxirribonucleico (ADN) con
informacin para un carcter o rasgo de un ser vivo.
Al ser la molcula de ADN muy grande y llevar muchos genes en ella, el mensaje se
transcribe en ARNm (cido ribonucleico mensajero), que es una molcula pequea capaz
de sintetizar los aminocidos que constituyen las protenas.
Cdigo organizado en tripletes o codones
Como ya vimos, la informacin gentica almacenada en el ADN se trascribe en el ARNm a

partir de las cuatro letras, que corresponden a las bases nitrogenadas, pero aqu en el
ARNm se agrupan de tres en tres.
Cada grupo de tres de estas bases nitrogenadas ahora incorporadas en el ARNm se llama
triplete o codn y est encargado de codificar un aminocido especfico.
En la dcada de 1960 los cientficos demostraron que hay 61 tripletes o codones que
codifican aminocidos, que son solo 20, pero muchos de los cuales son codificados por
ms de un codn, por lo que se dice que el cdigo est degenerado.
Los distintos aminocidos son codificados por un nmero diferente de codones (algunos
por 1, otros por 2, o por 3), e incluso existen tres tripletes que no codifican para ningn
aminocido.
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Carrera de Medicina
En resumen: de los 64 codones, 61 codifican aminocidos y los tres restantes no son

codificantes sino que son utilizados como seales de terminacin.
Esta informacin es llevada de un ser vivo a otro el cdigo gentico tiene una serie de
caractersticas:
- Es universal, pues lo utilizan casi todos los seres vivos conocidos. Solo existen algunas
excepciones en unos pocos tripletes en bacterias.
- No es ambigo, pues cada triplete tiene su propio significado
- Todos los tripletes tienen sentido, bien codifican un aminocido o bien indican terminacin
de lectura.
- Est degenerado, pues hay varios tripletes para un mismo aminocido, es decir hay
codones sinnimos.
- Carece de solapamiento, es decir los tripletes no comparten bases nitrogenadas.
- Es unidireccional, pues los tripletes se leen en el sentido 5-3
MUTACION
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Carrera de Medicina
Las mutaciones
Una mutacin es un cambio permanente en el ADN, el material hereditario de los seres

vivos. El ADN de un organismo influye en su aspecto fsico, en su comportamiento y en su
fisiologa en todos los aspectos de su vida. Por lo tanto, un cambio en el ADN de un
organismo puede producir cambios en todos los aspectos de su vida.
Las mutaciones son aleatorias

Las mutaciones pueden ser beneficiosas, neutras o dainas para el organismo, pero las
mutaciones no intentan proporcionar lo que el organismo necesita. En este sentido,
las mutaciones son aleatorias el hecho de que una mutacin concreta suceda o no, no
est relacionado con lo til que sera.
No todas las mutaciones son relevantes para la evolucin

Dado que todas las clulas de nuestro cuerpo contienen ADN, hay multitud de lugares en
los que pueden producirse las mutaciones; sin embargo, no todas las mutaciones son
relevantes para la evolucin. Las mutaciones somticas son las que se producen en las
clulas no reproductoras y no se transmiten a la descendencia.
Las mutaciones las podemos clasificar segn la cantidad de material comprometido en
Genomicas
Cuando todo el material de una clula esta mutado normalmente es una adicin por no
disyuncin o divisin del ADN en clulas hijas se denominan poliploidicas y estas pueden
tener el triple de material gentico Triploidia , cuatro veces el material gentico Tetraploidia
etc.
Cromosmicas
Las cuales afectan a un cromosoma o segmento de cromosoma, siendo de dos tipos
Numricas o Aneuploidias donde hay aumento o disminucin de un cromosoma estas son
denominadas somias las cuales pueden ser trisomas tres cromosomas en lugar de dos o
monosomias un cromosoma en lugar de los dos puede ocurri en cualquier cromosoma
pero los viables son trisomas 13-15 sndrome de Patau ,18
sndrome Edwuars, 21
sndrome de Down; en los cromosomas sexuales Klinefelter XXY, la nica monosomia

viable es la de Turner
Las mutaciones estructurales de los cromosomas son cambios de su morfologa por
adicin, translocacin, deleccin, inversin, rupturas
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Carrera de Medicina
Mutaciones gnicas son las que afectan a un gen en particular pudiendo ser puntuales Se
denomina mutacin gentica, mutacin molecular o mutacin puntual a los cambios que
alteran la secuencia de nucletidos del ADN. No confundir con una mutacin gnica que se
refiere a una mutacin dentro de un gen.
Tipos:
-Mutacin por sustitucin de bases: Se producen al cambiar en una posicin un par de
bases por otro (son las bases nitrogenadas las que distinguen los nucletidos de una
cadena). Distinguimos dos tipos que se producen por diferentes mecanismos bioqumicos:
--Mutaciones transicionales o simplemente transiciones, cuando un par de bases es
sustituido por su alternativa del mismo tipo. Las dos bases pricas son adenina (A) y
guanina (G), y las dos pirimdicas son citosina (C) y timina (T). La sustitucin de un par AT,
por ejemplo, por un par GC, sera una transicin.
--Mutaciones transversionales o transversiones, cuando un par de bases es sustituida por
otra del otro tipo. Por ejemplo, la sustitucin del par AT por TA o por CG.
-Mutaciones de corrimiento, cuando se aaden o se quitan pares de nucletidos
alterndose la longitud de la cadena. Si se aaden o quitan pares en un nmero que no
sea mltiplo de tres (es decir si no se trata de un nmero exacto de codones), las
consecuencias son especialmente graves, porque a partir de ese punto, y no slo en l,
toda la informacin queda alterada. Hay dos casos:
--Mutacin por prdida o delecin de nucletidos: En la secuencia de nucletidos se pierde
uno y la cadena se acorta en una unidad.
--Mutacin por insercin de nuevos nucletidos: Dentro de la secuencia del ADN se
introducen nucletidos adicionales, interpuestos entre los que ya haba, alargndose
correspondientemente la cadena.
-Mutaciones en los sitios de corte y empalme (Splicing)
Las mutaciones de corrimiento del marco de lectura tambin pueden surgir por mutaciones
que interfieren con el splicing del ARN mensajero. El comienzo y final de cada intrn en un
gen estn definidos por secuencias conservadas de ADN. Si un nucletido muta en una de
las posiciones altamente conservada, el sitio no funcionar ms, con las consecuencias
predecibles para el ARNm maduro y la protena codificada. Hay muchos ejemplos de estas
mutaciones, por ejemplo, algunas mutaciones en el gen de la beta globina en la beta
talasemia son causadas por mutaciones de los sitios de splicing.
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Carrera de Medicina
INTERCAMBIO DE CROMTIDAS HERMANAS
Distribucin recproca de cromatina por rotura y unin recombinada de las cromtidas de
un mismo cromosoma (entrecruzamiento). La induccin de aumento de ocurrencia de este
fenmeno durante la mitosis se interpreta como mutagenicidad.
El intercambio entre cromtides hermanas (ICH) es un evento celular normal, con

frecuencia basal relativamente constante de ICH espontneos por metafase, variable en
clulas de tejidos diferentes. Factores individuales y por proceso de laboratorio pueden
hacer variar la frecuencia basal de ICH. La exposicin a agentes clastognicos es capaz
de incrementarla.
El rango normal de ICH es de 2 por metafase
Para contar los intercambios hay que dar un punto para los terminales y dos para los
intercalares.
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Carrera de Medicina
6. Referencias
Universidad de Navarra EXPRESIN DE LA INFORMACIN GENTICA

http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/08expresion%20de%20la%20informacion%20genetica.htm 2014
Gentica en Medicina. Thompson & Thompson. 7 edicin (2008). R. L. Nussbaum,

R.R. McInnes y H.F. Willard. Elsevier-Masson, S.A., Barcelona. Edicin espaola de la
sptima americana.
B. Alberts, D. Bray, J.Lewis, M. Raff, K. Roberts y J.D. Watson. Biolog Molecul r de

l Clul . 5 Edicin 2010. Ed. O eg .
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Carrera de Medicina
INFORME POSTERIOR A LA PRCTICA
Datos de informacin bsica
Nombres completos
Nmero de prctica
Fecha
Tema
Paralelo
Grupo
Tutor
Calificacin
1.- ponga la protena resultante de uso del cdigo gentico
2 Cual es nmero de intercambio de cromatides hermanas encontrado
Haga un anlisis del estudio de
Prevalencia de intercambio de cromatides
hermanas en una poblacin libre de exposicin a agentes clastognicos. Norma

Prez-Herrera Rev Biomed 1999; 10:71-76.
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Carrera de Medicina
Prctica N
Ttulo
de la prctica
Leyes y Patrones de la herencia

Comprender Leyes y Patrones de la herencia como mecanismo de estructura y
funcin de la herencia

Realiza
e interpreta
con
responsabilidad
criticismo
los
heredogramas y los
patrones de la herencia.
Describe
con
responsabilidad
criticismo
los
procesos
de
herencia
del
genoma humano
3. Material
Por la catedra
Esquemas de patrones de herencia
Lpiz Hb
Borrador
Mandil
4. Procedimiento
1. Establecer y reconocer el patrn de transmisin del rasgo evaluado.
2. Describir el patrn de herencia en las enfermedades monognicas.
3. Resolver, analizar e interpretar los cuadros de Punnet.
4. Calcular el riesgo de recurrencia
5. Se
formaran
subgrupos
de
alumnos
quienes
debern
de
resolver
uno de los
6. casos problema en la pizarra y explicar la simbologa empleada en el

7. heredograma as como la tabla de Punnet correspondiente al clculo
de riesgo de
8. cada caso al resto de sus compaeros de clase
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Carrera de Medicina
El heredograma, o rbol Genealgico es un instrumento que nos informa de
la existencia de diversos rasgos normales o anormales en una familia y nos
permite dilucidar si existe o no un mecanismo hereditario.
Actualmente
en
base
los
estudios
de
Gregorio
Mendel
conocemos
los
mecanismos de transmisin de estos rasgos en relacin a un gen.

En
la
prctica,
las
enfermedades
monognicas
mendelianas
son
aquellas
que estn originadas por la alteracin o mutacin de un gen especfico de

la persona afectada. Ejemplos de enfermedades monognicas son la fibrosis
qustica, la anemia de clulas falciformes, enfermedad de Tay Sachs, distrofia
miotnica o la distrofia muscular de Duchenne
Los genes son secuencias de ADN que codifican productos celulares (ARN, protenas), los
cuales se traducen en la aparicin de un determinado rasgo o carcter.
Cada gen puede existir en dos o ms versiones, responsables de la variacin de un rasgo.
Dichas versiones reciben el nombre de alelos.
Independientemente de las variantes existentes de un gen, cada individuo slo hereda dos
copias del mismo, una de la madre y otra del padre. Dichas copias estn ubicadas en el
mismo locus (lugar) de los cromosomas que forman el par de homlogos.
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Carrera de Medicina
Conviene aclarar que Mendel, por ser pionero, careca de los conocimientos
actuales sobre la presencia de pares de alelos en los seres vivos y sobre el
mecanismo de transmisin de los cromosomas, por lo que esta exposicin est
basada en la interpretacin posterior de los trabajos de Mendel.
A continuacin se explican brevemente las leyes de Mendel:
Primera ley de Mendel: A esta ley se le llama tambin Ley de la uniformidad de
los hbridos de la primera generacin (F1) hoy a este se considera como principio de
dominancia ya que no siempre se cumple ,
y dice que cuando
se cruzan dos
variedades individuos de raza pura, ambos homocigotos, para un determinado

carcter, todos los hbridos de la primera generacin son iguales.
Los individuos de esta primera generacin filial (F1) son heterocigticos o hbridos,
pues sus genes alelos llevan informacin de las dos razas puras u homocigticas:
la dominante, que se manifiesta, y la recesiva, que no lo hace..
Mendel lleg a esta conclusin trabajando con una variedad pura de plantas de
guisantes que producan las semillas amarillas y con una variedad que produca las
semillas verdes. Al hacer un cruzamiento entre estas plantas, obtena siempre
plantas con semillas amarillas.
Otros casos para la primera ley. La primera ley de
Mendel se cumple tambin para el caso en que un
determinado gen d lugar a una herencia intermedia y
no dominante, como es el caso del color de las
flores del "dondiego de noche". Al cruzar las plantas
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Carrera de Medicina
de la variedad de flor blanca con plantas de la variedad de flor roja, se obtienen
plantas de flores rosas, como se puede observar a continuacin:
Segunda ley de Mendel: A la segunda ley de

Mendel tambin se le llama de la separacin o
disyuncin de los alelos.
Experimento de Mendel. Mendel tom plantas
procedentes
de
las
semillas
de
la
primera
generacin (F1) del experimento anterior y las

poliniz entre s. Del cruce obtuvo semillas
amarillas y verdes en la proporcin que se
indica en la figura. As pues, aunque el alelo
que
determina
la
coloracin
verde
de
las
semillas pareca haber desaparecido en la primera generacin filial, vuelve a

manifestarse en esta segunda generacin.
Los dos alelos distintos para el color de la
semilla presentes en los individuos de la primera
generacin filial, no se han mezclado ni han
desaparecido
simplemente
ocurra
que
se
manifestaba slo uno de los dos. Cuando el

individuo de fenotipo amarillo y genotipo Aa,
forme los gametos, se separan los alelos, de tal
forma que en cada gameto slo habr uno de
los alelos y as puede explicarse los resultados
obtenidos.
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Carrera de Medicina
Otros casos para la segunda ley.
En
el
caso
presentan
de
los
genes
herencia
que
intermedia,
tambin se cumple el enunciado de

la
segunda
ley.
Si
tomamos
dos
plantas de flores rosas de la primera

generacin filial (F1) y las cruzamos
entre
s,
se
obtienen
plantas
con
flores blancas, rosas y rojas. Tambin

en
este
caso
se
manifiestan
los
alelos para el color rojo y blanco,

que
permanecieron
ocultos
en
la
primera generacin filial.

Retrocruzamiento de prueba.
En
el
caso
manifiestan
existe
entre
de
herencia
ninguna
los
los
genes
dominante,
diferencia
individuos
que
no
aparente
heterocigticos
(Aa) y los homocigticos (AA), pues

ambos
individuos
presentaran
un
fenotipo
amarillo.
La prueba del retrocruzamiento, o simplemente cruzamiento prueba, sirve para

diferenciar el individuo homo- del heterocigtico. Consiste en cruzar el fenotipo
dominante con la variedad homocigtica recesiva (aa).
- Si es homocigtico, toda la descendencia ser igual, en este caso se cumple la
primera Ley de Mendel.
- Si es heterocigtico, en la descendencia volver a aparecer el carcter recesivo
en una proporcin del 50%.
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Carrera de Medicina
Tercera ley de Mendel. Se conoce esta ley como la de la herencia independiente

de caracteres, y hace referencia al caso de que se contemplen dos caracteres
distintos. Cada uno de ellos se transmite siguiendo las leyes anteriores con
independencia
de
la
presencia
del
otro
carcter.
Experimento
de
Mendel.
Mendel
cruz
plantas de guisantes de semilla amarilla y

lisa con plantas de semilla verde y rugosa (
Homocigticas
ambas
para
los
dos
caracteres).
Las semillas obtenidas en este cruzamiento
eran todas amarillas y lisas, cumplindose
as la primera ley para cada uno de los caracteres considerados , y revelndonos
tambin que los alelos dominantes para esos caracteres son los que determinan el
color
amarillo
la
forma
lisa. Las
plantas
obtenidas y que constituyen la F1 son dihbridas

(AaBb).
Estas plantas de la F1 se cruzan entre s,
teniendo en cuenta los gametos que formarn
cada una de las plantas.
que
los
alelos
de
los
Se puede apreciar
distintos
genes
se
transmiten con independencia unos de otros, ya

que en la segunda generacin filial F2 aparecen
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Carrera de Medicina
guisantes amarillos y rugosos y otros que son verdes y lisos, combinaciones que
no se haban dado ni en la generacin parental (P), ni en la filial primera (F1).
Asmismo, los resultados obtenidos para cada uno de los caracteres considerados
por separado, responden a la segunda ley.
El heredograma, o rbol Genealgico es un instrumento que nos informa de

la existencia de diversos rasgos normales o anormales en una familia y nos
permite dilucidar si existe o no un mecanismo hereditario.
Actualmente
en
base
los
estudios
de
Gregorio
Mendel
conocemos
los
mecanismos de transmisin de estos rasgos en relacin a un gen.

En
la
prctica,
las
enfermedades
monognicas
mendelianas
son
aquellas
que estn originadas por la alteracin o mutacin de un gen especfico de

la persona afectada. Ejemplos de enfermedades monognicas son la fibrosis
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Carrera de Medicina
qustica, la anemia de clulas falciformes, enfermedad de Tay Sachs, distrofia
miotnica o la distrofia muscular de Duchenne.
Patrones de herencia
Lods patrones de herencia se consideran a la forma como un gen se trasmite de una
generacin a otra y se clasifican de acuerdo a como siguen la leyes mendelianas y
tenemos tres
Patrones Mendeleanos
Clasificndose en autosmicos Dominante y recesivo
PATRON AUTOSMICO DOMINANTE
una enfermedad gentica donde el gen defectuoso tiene un patrn de herencia dominante,
para que la enfermedad se produzca en un individuo (sin importar el sexo), el individuo
deber tener solamente un gen defectuoso de los dos de un par de cromosomas. Esto
ltimo significa, que solo uno de los padres del individuo deber tener un gen defectuoso.
En el caso que el individuo afectado conciba hijos, existe posibilidad de tener hijos
afectados
Es aquel que cumple con las dos leyes de Mendel y el principio de dominancia se
caracteriza por expresarse en heterocigosis principio de dominancia, se presenta en todas
las generacin tiene una frecuencia de trasmisin que va del 50 al 100% de individuos
afectados, no tiene relacin con el sexo por lo cual hay igual cantidad de afectados en
cada sexo, Puede existir expresividad variable en una misma familia.
PATRON RECESIVO
En una enfermedad gentica donde el gen defectuoso tiene un patrn de herencia
Recesivo, para que la enfermedad se produzca en un individuo (sin importar el sexo), el
individuo deber tener dos genes defectuosos iguales en un par de cromosomas, del cual
un cromosoma proviene del padre y otro de la madre. Esto ltimo significa, que los dos
padres del individuo debern tener cada uno un gen defectuoso. En el caso que el
individuo solamente tenga un gen defectuoso, la enfermedad no se produce, aunque tenga
un gen defectuoso, en este caso el individuo se conoce como portador, el cual si concibe
hijos con otro portador, existe posibilidad de tener hijos afectados, as como hijos
portadores.
Se expresa solo en homocigocis recesiva, se presenta saltando una de las generacin
tiene una frecuencia de trasmisin que va del 0 al 50% de individuos afectados, no tiene
relacin con el sexo por lo cual hay igual cantidad de afectados en cada sexo.
HERENCIA MENDELIANA MODIFICADA
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Carrera de Medicina
HERENCIA LIGADA AL CROMOSOMA X
En una enfermedad gentica donde el gen defectuoso se localiza en el cromosoma X (que

forma parte del par que dicta el sexo), esta tiene un patrn de herencia ligado al
cromosoma X. En este patrn los varones son quienes padecen la enfermedad, mientras
que las mujeres son portadoras (sin sntomas). En el caso que una mujer portadora
conciba hijos, existe la posibilidad de tener hijos varones afectados e hijas portadoras.
Mientras que en el caso que un varn afectado conciba hijos, todas la hijas sern
portadoras, mientras que todos los hijos sern completamente sanos.
Las probabilidades de que una madre portadora tenga un hijo varn afectado son del 50
por ciento, de que tenga una hija portadora el mismo 50 por ciento, y de que sea
completamente sano (en ambos sexos) el mismo 50 por ciento.
Esto se debe a que se expresa el nico gen que tiene a lo que se denomina hemicigosis
porque no hay correspondencia entre el cromosoma X y el cromosoma Y.
Hay que decir que no siempre un individuo hereda el gen defectuoso de sus padres, en
ocasiones el defecto en el gen se produce de forma espontnea en el momento de la
concepcin, lo que se conoce como mutacin espontanea. En este caso el afectado ser el
nico en la familia en tener el gen defectuoso.
HERENCIA INTERMEDIO O DOMINANCIA INCOMPLETA
El gen dominante no logra encubrir por completo la expresin del gen recesivo, sino que
ambos se expresan parcialmente. En los individuos heterocigotas aparece entonces un
tercer fenotipo, diferente del dominante y el recesivo, e intermedio entre los dos. A estos
tipos de herencia se les da el nombre de do in nci inco plet . Por eje plo, en ciert s
plantas, l s flores pueden ser bl nc s, roj s o ros d s. El fenotipo flores ros d s se
observa en los individuos heterocigotas, como resultado de la expresin parcial de los
alelos que codifican los colores rojo y blanco. Cabe aclarar que, sin embargo, la aparente
ezcl solo se produce
nivel fenotpico, y que los lelos
ntienen su individu lid d,
tal como lo advirti Mendel. As, de la cruza de dos individuos rosados, se obtendr una
progenie 25% roja, 25% blanca y 50% rosada.
HERENCIA CODOMINANCIA
Se denomina codominancia al proceso por el cual un individuo manifiesta dos
caractersticas genticas dominantes.
Estado en que un gen expresa su caracterstica en el heterocigoto de modo equivalente a
su par. Los alelos del gen se expresan al mismo tiempo dando origen al gameto masculino
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Carrera de Medicina
que despus se unir al femenino. En pocas palabras la codominancia o dominancia
compartida es en la cual los caracteres dominantes dan una caracterstica fenotpica tanto
del padre como de la madre a la siguiente generacin
.
Un ejemplo cuando una flor "achira" amarilla cruzada con una flor "achira" roja resulta una
"achira" amarilla con manchas de color rojo. Esto se explica as: El gen que contiene
enzimas para la coloracin roja se manifiesta en algunas partes de la flor mientras que las
enzimas de coloracin amarilla se manifiestan en lugares que no son los de la coloracin
roja. En otros casos, como en el de algunas rosas, puedo obtener un individuo
fenotpicamente neutro, de esta manera al realizar un cruce entre una rosa roja (RR) y una
rosa blanca (rr) me producir una descendencia de rosas rosadas, cuyo genotipo
corresponde a Rr, en el cual la dominancia es parcial o incompleta, o sea tenemos un
fenotipo intermedio entre el dominante y el recesivo
En la codominancia los alelos se expresan de manera simultnea en los heterocigotos, es
decir, el fenotipo de los heterocigotos es la expresin de los genes de ambos padres
simultneamente
ALELOSMLTIPLES
Se designa como alelos mltiples a la existencia de ms de dos genes alterno en un

mismo locus. Dicha serie de genes puede ser numerosa como en el caso del sistema HLA,
o poconumerosa como en el sistema de grupo sanguneo ABO. Por otro lado es importante
anotar que los genes allicos entre s deben tener relacin con la misma caracterstica en
estudio, esto es, con HLA o con el sistema ABO; en s lo que los hace allicos es el
nmero y sitio de las mutaciones ocurridas sobre un gen ancestral.
HERENCIA POLIGENICA
La herencia poligenica se da cuando algn carcter se debe a la accin de ms de un gen
que pueden tener adems ms de dos alelos, lo cual origina numerosas combinaciones
que son la causa de que exista una gradacin en los fenotipos. Se debe a este tipo de
herencia el color de la piel en nuestra especie, por eso existen tantas posibilidades y tanta
variacin del color de la piel entre blancos y negros.
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Carrera de Medicina
La herencia polignica se distingue por:
-Cuantificarse midiendo ms que contando
-Dos o ms pares de genes contribuyen al fenotipo
-La expresin fenotpica abarca un gran rango
En humanos se observa en:
-Altura
-Peso
-Color de ojos
-Inteligencia
-Color de la piel
-Formas de comportamiento
CONCEPTOS DE PENETRANCIA Y EXPRESIVIDAD

La penetrancia se expresa como el porcentaje de individuos con un genotipo dado
exhiben el fenotipo asociado correspondiente. Esta penetrancia puede ser incompleta
cuando hay individuos que portando un genotipo patolgico no expresan el fenotipo pero
sin embargo son capaces de transmitir a su descendencia. En una genealoga aparecen
como saltos generacionales.
La expresividad variable se refiere al grado o intensidad con que se expresa una
enfermedad. El grado de afectacin puede ser muy variable en una misma familia y un
grado leve en un individuo no hace predecir que en su descendencia se presente de la
misma manera
Herencias No Mendelianas
Herencia uniparental es una forma no mendeliana de la herencia, que consiste en la
transmisin de los genotipos de un tipo parental a toda la progenie. Es decir, todos los
genes en la descendencia se originan solamente de la madre o slo el padre. Este
fenmeno se observa ms comnmente en orgnulos eucariotas tales como mitocondrias
y cloroplastos. Esto es porque tales organelos contienen su propio ADN y son capaces de
replicacin mittica independiente que no soportar cruzar con el ADN de otro tipo de los
padres. Aunque la herencia uniparental es la forma ms comn de la herencia en
orgnulos, hay una mayor evidencia de la diversidad. Algunos estudios encontraron
herencia doble uniparental y transmisin biparental de existir en las clulas. La evidencia
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Carrera de Medicina
sugiere que incluso cuando hay herencia biparental, el sobrecruzamiento no siempre
ocurre. Adems, hay evidencia de que la forma de orgnulo herencia vari con frecuencia
con el tiempo. Herencia uniparental puede ser dividida en mltiples subtipos sobre la base
de la va de la herencia.
La disoma uniparental hace referencia a la situacin en la que las dos copias de un
cromosoma provienen del mismo progenitor, en lugar de que una copia provenga de la
madre y la otra copia del padre. En general, heredamos una copia de cada par de
cromosomas de nuestra madre biolgica y la otra copia del par de cromosomas de nuestro
padre biolgico
Herencia Mitocondrial
El genoma extracelular es heredado solamente a travs de la madre.
Las mitocondrias masculinas no contribuyen a la formacin de los nuevos zigotos. El
patrn da lugar a pedigre es en los cuales todos los nios de una madre afectada pueden
estar afectados y ninguno de los nios de un padre normal pueda estar afectado.
En la prctica, la expresin de las enfermedades heredadas a travs de las mitocondrias
es a menudo variable y puede ser de penetrancia incompleta. Esta observacin es
posible, debido en parte al hecho que una poblacin de mitocondrias , que puede en s
misma ser genticamente heterognea, es en el hecho transmitida por la madre.
Si todas las mitocondrias transmitidas por la madre son del mismo genotipo, esto se llama
homoplasmia. Si existen diferencias genticas entre ellas, se llama heteroplasmia.
A pesar de su pequeo tamao en relacin al genoma nuclear ( 1:200.000) , las
mutaciones del genoma mitocondrial son una contribucin significativa de la enfermedad
en humanos. Esto es en parte debido a que la tasa de mutacin asociada con la
replicacin del genoma mitocondrial es 10 veces ms alta que la del genoma nuclear y que
consiste, proporcionalmente y con mucha diferencia, de secuencia no codificad
La mayor parte del material gentico se encuentra en los cromosomas en el interior del
ncleo de la clula, pero las mitocondrias, unos orgnulos del interior celular que producen
la energa que se utiliza en el metabolismo, tambin contienen una pequea cantidad de
ADN denominado ADN mitocondrial. Las alteraciones del material gentico de las
mitocondrias son la causa de algunas enfermedades que se transmiten con un patrn
caracterstico debido a que las mitocondrias solo se heredan de la madre. Todos los hijos e
hijas de una mujer afectada heredarn las mitocondrias con la mutacin y sern afectados
por la enfermedad (figura 1), mientras que ninguno de los hijos e hijas de un hombre
afectado heredaran la alteracin ni desarrollaran la enfermedad (figura 2).
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Carrera de Medicina
Fig 1. Patrn de herencia mitocondrial cuando la madre est afectada (azul).
Fig 2. Patrn de herencia mitocondrial cuando el padre est afectado (azul).
HERENCIA CROMOSOMA Y O HALONDRICA

Trmino utilizado para definir el tipo de herencia en el cual los genes, encontrados en el
cromosoma Y, son directamente traspasados a los descendientes masculinos. Esto sucede
puesto que el cromosoma Y solo puede provenir del macho (al menos en la especie
humana), ya que la hembra carece de ste dentro de su genotipo. Se da cuando el alelo
alterado es dominante sobre el normal, y el gen se encuentra en el cromosoma xy, solo se
necesita una copia para que se exprese la enfermedad.
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Carrera de Medicina
Dentro de esta categora se encuentran caractersticas como el desarrollo de los testculos
y otros caracteres sexuales masculinos. Anteriormente, se han mencionado otras como la
hipertricosis auricular, las membranas interdigitales pero anlisis genealgicos posteriores
han descartado que este sea el modo de herencia que siguen estas caractersticas.
CONCEPTOS FUNDAMENTALES.
Genotipo: Dotacin gentica del individuo para un determinado carcter o bien el

conjunto total de genes que tiene el individuo. Ej.: AA, Aa, aa.
Fenotipo: Expresin observable determinada por el genotipo, es decir, lo que se

expresa y podemos ver. Ej.: Amarillo, verde, liso, rugoso.
Alelo o alelomorfo: Cada una de las variantes gnicas que determinan un

carcter. Genes alelos son los que transmiten el mismo carcter. Generalmente
uno es dominante (A) y otro recesivo (a).
Alelo Dominante: Aquel que transmite un carcter que se manifiesta siempre. Se

representa con una letra mayscula. Ej.: A, L.
Alelo Recesivo: Aquel que transmite un carcter que solamente se manifiesta si no

est presente el alelo dominante. Se le representa con una letra minscula,
correspondiente a la del dominante. Ej.: a, l.
Homocigtico o Puro: Individuo con el genotipo para un determinado carcter

compuesto por dos alelos idnticos. Es decir, los gametos sern idnticos para ese
carcter. Ej.: AA, aa, LL, VV. Cuando se estudian dos caracteres, diremos que es
Dihomocigtico aquel que tenga los dos alelos idnticos para cada uno de los
caracteres. Ej.: AALL (dihomocigtico dominante), aall (Dihomocigtico recesivo).
Heterocigtico o Hbrido: Individuo que porta en el genotipo dos alelos distintos

para un carcter concreto. As pues, los gametos tendrn cada uno una variedad
distinta de ese carcter. Ej.: Aa, Ll. Cuando se estudian dos caracteres, diremos
que es Diheterocigtico aquel que tenga los dos alelos distintos para ambos
caracteres. Ej.: AaLl.
Generacin Parental (P): Son los progenitores que se cruzan para obtener las
siguientes generaciones ("Padres").
Primera Generacin Filial (F1): Descendientes resultado del cruce de individuos

de la generacin Parental ("Hijos").
Segunda Generacin Filial (F2): Descendientes resultado del cruce de individuos

de la primera generacin filial ("Nietos").
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Carrera de Medicina
Heredograma
Genealoga o heredograma, es una manera grfica de registrar la transmisin de un
carcter gentico dentro de un grupo familiar y de esta manera podemos predecir la
aparicin de enfermedades. La informacin consolidada del grupo familiar es de vital
importancia para el diagnstico preciso de los patrones de herencia. Para elaboracin de la
misma se utilizan signos y smbolos aceptados internacionalmente para evitar confusiones
durante la interpretacin.
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Carrera de Medicina
1. Referencias
Speicher, Michael (2010). Vogel and Motuskys Human Genetics. Problems and
Approaches. Springer. Jorde,L.B. et al. (2000).- Gentica mdica. Cap., 4, 5 y12.
Nussbaum, RL, McInnes, R R. and Williard, H.F. (2004). Gentica en Medicina. Cp 5 y

15
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Carrera de Medicina
MODELO DE FORMATO DE INFORME
Nombres completos
Nmero de prctica
Fecha
Tema
Paralelo
Grupo
Tutor
Calificacin
1. Hacer el heredograma segn caso planteado
2. Describir el patrn de herencia en las enfermedades monognicas.
3. Resolver, analizar e interpretar los cuadros de Punnet.
4. Calcular el riesgo de recurrencia
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Carrera de Medicina
Prctica N
Ttulo
de la prctica
Cariotipo Normal y Patolgico

Comprender la estructura y nomenclatura del cariotipo como mecanismo de estudio
y diagnstico de la herencia

elaboracin del cariotipo e ideograma.
Interpretar con responsabilidad y criticismo los resultados del examen de cariotipo en
la prctica medica
3. Material
Material que provee la ctedra
Microfotografas de cariotipo Normal y Patologico
Placas con cariotipos
Lpiz Hb
Borrador
Mandil
4. Procedimiento
1. Reconocer en el microscopio las lminas de cariotipo
2. Contar el nmero cromosmico en una metafase del cariotipo
3. Identificar el sexo del paciente
4. Colocar el diagnostico de acuerdo a nomenclatura ISCN
5. En la microfotografa contar nmero cromosmico y determinar el sexo
6. Recortar los cromosomas y armar el ideograma
7. Colocar el diagnostico de acuerdo a nomenclatura ISCN
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Carrera de Medicina
El
objetivo
de
esta
prctica
es
aprender
reconocer
los
cromosomas
humanos, elaborar un cariotipo a partir de una fotografa y saber determinar

las anomalas cromosmicas ms frecuentes.
La
tcnica
empleada
es
la
de
obtencin
de
metafases
sangre
de
linfocitos
perifrica
para
de
lo
que:
Se extrae 3 cc de sangre
perifrica con heparina
Se sedimenta
por
45
minutos
Se
aade
sangre
1,5
total
al
cc
medio
de
de
cultivo por 72 h a 37C

Se
aade
70
horas
colchicina
para
las
parar
la
mitosis
Se
trasvasa
de
tubo
cnico
15
ml
todo
el
contenido
del
medio
de
cultivo
Fuente:
http://www.oni.escuelas.edu.ar/2002/santiago_del_estero/adn/caritecn.htm Se
centrifuga por 5 minutos a 1000 rpm

Se
extrae
sobrenadante
al
pellet
botn
celular
se
le
aade
solucin
hipotnica de cloruro de potasio Cl K e incubar por 20 minutos

Se centrifuga y fija con solucin de Suarenson (metanol y cido Actico) y
se lava por varios ocasiones
Se prepara en placa
porta objetos coloreando con solucin de Giemsa al
5%
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Carrera de Medicina
Se fotografa
Se ampla fotografas y se realiza idiograma
El cariotipo humano normal consta de (hablando de una clula diploide):
22 pares de de autosomas o cromosomas homlogos, los cuales son iguales
en el hombre y la mujer (del par 1 al 22)
1 par (el ltimo, n 23) de cromosomas sexuales, que es XX en la mujer
y XY en el varn.
Es
decir
que
nuestras
clulas
smticas
del
cuerpo,
que
son
diploides
poseen en total 23 pares de cromosomas (46). Recuerda que los gametos,

vulo y espermatozoide, poseen slo 23 cromosomas, un intergante de cada
par.
La
clula
cultivo
con
de
la
sangre
posteriormente
que
vamos
perifrica,
tincin
con
trabajar
despus
Giemsa
se
ha
obtenido
se hizo
un
tratamiento
para
obtener
un
partir
con
bandeo
de
tripsina
G.
un
y
La
microfotografa as obtenida pertenece a una persona que no tiene ninguna

anomala cromosmica.
La dotacin cromosmica normal de la especie humana es de 46,XX para
las mujeres y de 46, XY para los varones.
En el cariotipo humano los cromosomas se ordenan de mayor a menor. Hay
cromosomas
grandes,
medianos
y pequeos.
Al
ordenar
los cromosomas
se
constituyen 7 grupos atendiendo no slo al tamao sino tambin a la forma

de las parejas cromosmicas, dentro del cariotipo humano podemos encontrar
cromosomas metacntricos (tienen los dos brazos aproximadamente iguales en
longitud),
submetacntricos
(con
un
brazo
ms
pequeo
que
otro)
acrocntricos (con un brazo corto muy pequeo).

Concretamente en el cariotipo humano hay 7 grupos de cromosomas. Dentro
de cada grupo vamos a ordenar y reconocer los cromosomas con la ayuda
de un idiograma:
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Carrera de Medicina
Un idiograma es la representacin esquemtica del tamao, forma y patrn

de bandas de todo el complemento cromosmico, los cromosomas se sitan
alineados por el centrmero, y con el brazo largo siempre hacia abajo.
Cada brazo ha sido dividido en zonas y cada zona, a su vez, en bandas
e incluso las bandas en subbandas, en virtud de las tcnicas de tincin con
Giemsa y del marcado con sondas moleculares. Gracias a estas tcnicas ha
sido
posible
cartografiar
los
genes
contenidos
en
regiones
cromosmicas
especficas. Mediante el cariotipo se pueden diagnosticar anomalas numricas

y
estructurales
de
los
cromosomas,
denominadas
genricamente
aberraciones
cromosmicas, que son debidas a fallos en el proceso meitico

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Carrera de Medicina
Los grupos que comprende el cariotipo humano son los siguientes:
- Cromosomas grandes
Los cromosomas ms grandes son los del grupo A y los del grupo B, el
grupo A consta de 3 pares de cromosomas metacntricos y el B de dos
pares de cromosomas submetacntricos.
Grupo A, (cromosomas 1, 2 y 3), meta y submetacntricos
El par 1 es el mayor de los metacntricos con un ndice centromrico Ic =
48-49. El bandeo C muestra una banda de heterocromatina constitutiva en el
brazo
que
largo,
se
al lado del centrmero (al igual
describirn,
existe
polimorfismo
para
que en las otras

su
tamao).
El
bandas C
brazo
largo
presenta una serie de bandas oscuras distribuidas en toda su longitud. En el

brazo
corto
tiene
bandas
proximales
(ms
prximas
al
centrmero)
bien
marcadas y la mitad distal (ms alejadas del centrmero) de aspecto ms

claro.
El par 2 es el submetacntrico ms grande, Ic = 38-40, por su tamao es
fcilmente identificable.
El
par
3,
metacntrico,
es
un
20%
menor
que
el
par
1;
su
ndice
centromrico es Ic = 45-46 y sus brazos se pueden distinguir por tener: el

corto una banda doble muy marcada cerca del telmero mientras en brazo
largo tiene dos bandas dobles aproximadamente en la misma posicin.
Grupo B, (cromosomas 4 y 5), submetacntricos
Son los cromosomas submetacentricos grandes que le siguen al cromosoma 2
El bandeo G muestra en el brazo largo del cromosoma 4 cuatro grupos de
bandas dobles casi regularmente distribuidas; por su parte, el brazo largo del
cromosoma
5,
con
idntico
tratamiento
muestra
tambin
cuatro
grupos
de
bandas muy marcadas pero irregularmente distribuida

- Cromosomas medianos
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Carrera de Medicina
Grupo C, (cromosomas 6,7, 8, 9, 10, 11, 12 y adems los cromosomas
X), son submetacntricos medianos el ms grande de estos es el cromosoma
6 seguido del X y luego los dems en tamao descendente.
El
par
distribuidas
tiene
un
brazo
un
brazo
largo
corto
con
muy
varias
bandas
caracterstico
con
oscuras
una
regularmente
zona
muy
clara
una
distal
ms
entre dos bandas oscuras casi en los extremos.

El
par
tenue;
tiene
en
el
en
el
brazo
brazo
corto
largo
presenta
bandas
una
oscuras
banda
oscura
en
el
extremo
telomrico.
El
par
tiene
dos bandas
oscuras en el
brazo
largo,
la
ms
distal
es
ms marcada y el aspecto general del brazo es oscuro.

El par 9 tiene una banda oscura en su mitad del brazo corto. Adems, el
par 9 con bandeo C muestra una banda de heterocromatina constitutiva en
la zona proximal del brazo largo, al lado del centrmero, para la que existe
polimorfismo; esta heterocromatina hace que la zona proximal del brazo sea
estrecha.
El
brazo
largo
tiene
dos
bandas
oscuras
regularmente
separadas
entre s.
El par 10 tiene una morfologa bastante conspicua, con un ensanchamiento
del brazo largo justo al lado del centrmero y coincidiendo con una banda
oscura. Tres bandas oscuras en el brazo largo.
Los
pares
11
12
son
de
morfologa
muy
similar.
Se
diferencian
principalmente en: ndice centromrico mayor en par 11 que en 12; banda

doble del brazo largo ms distal en 11 que en 12
Grupo D, (cromosomas 13, 14 y 15)
Son acrocntricos
medianos
Se pueden diferenciar por el patrn de bandas G del brazo largo; el 13

tiene dos bandas muy marcadas en la mitad distal, el 14 una proximal y
otra distal y el 15 dos en la mitad proximal si bien slo suele verse bien
la ms distal.
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Carrera de Medicina
- Cromosomas pequeos
Grupo E, (cromosomas 16, 17 y 18) submetacntricos
Son cromosomas metacntricos o submetacntricos relativamente cortos.
El
par
16
(Ic=40)
tiene
una
banda
de
heterocromatina
constitutiva
en
el
brazo largo, al lado del centrmero cuyo tamao puede variar. El par 17,
ms
submetacntrico
banda
doble
en
que
el
posicin
anterior
distal.
El
(Ic=31),
par
tiene
18,
ms
en
el
brazo
largo
submetacntrico
una
todava
(Ic=26), tiene una banda proximal y una distal en el brazo largo.
Grupo F, (cromosomas 19 y 20) metacntricos

Pares 19 y 20 son los ms pequeos de los metacntricos, con Ic entre
36
y 46.
Tambin son
llamados
cruces
por
el
aspecto
que presentan
en
metafases avanzadas.
El
par
19
es
de
aspecto
general
ms
claro
que
el
20
presenta
una
banda centromrica muy intensa.

El par 20 es de aspecto ms oscuro y presenta en el brazo corto una
banda oscura
Grupo G, (cromosomas 21 y 22) acrocntricos
Son los ms pequeos de los acrocntricos, con Ic entre 13 y 33. Esta
variacin tan amplia se debe al polimorfismo que pueden presentar para el
tamao de los satlites.
Por
razones
histricas
se
clasifican
ligeramente mayor que el 21.
en
este
orden
aunque
el
par
22
es
El par 21 tiene una fuerte banda ligeramente
separada del centrmero en el brazo largo. El par

22 tiene una pequea banda oscura prcticamente pegada al centrmero.
Cromosomas sexuales
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Carrera de Medicina
Por acuerdo los cromosomas sexuales X e Y se separan de sus grupos
correspondientes y se ponen juntos aparte al final del cariotipo.
El cromosoma X es submetacntrico mediano, con silueta similar a la de los
primeros pares del grupo C. Tiene una banda muy marcada en la mitad del
brazo corto y otra tambin intensa aproximadamente en la mitad de la mitad
proximal del brazo largo.
El cromosoma Y es usualmente, pero no siempre, ligeramente ms largo que
los cromosomas del grupo G, siendo fcil su identificacin por el paralelismo
que suelen presentar las cromtidas del brazo largo le da un aspecto ms
estrecho que el resto de los cromosomas. Es acrocntrico, su Ic vara entre
0
26
tiene
un
segmento
de
heterocromatina
constitutiva
de
tamao
variable en el extremo telomrico del brazo largo.

Procedimiento
La
clula
con
la
que
continuacin
vamos
condiciones
de
vamos
realizar
un
condensacin
trabajar
es
cariotipo
cromosmica
los
la
de
que
320
se
observa
bandas.
cromosomas
En
pueden
otras
aparecer
con ms bandas.
Lo primero que vamos a hacer es contar el nmero de cromosomas para
confirmar
que
coincide
con
el
nmero
diploide
normal.
En
este
caso
confirmamos la presencia de 46 cromosomas.

Como hemos dicho anteriormente, en una dotacin cromosmica normal,
el
grupo G consta de 4 cromosomas muy pequeos y acrocntricos y el nico

cromosoma que tambin
una
primera
es pequeo y acrocntrico
aproximacin
al
sexo
del
individuo
es
es el Y,
contar
por
el
lo tanto
nmero
de
cromosomas pequeos y acrocntricos. En nuestro caso hay 5 luego se trata

de un varn.
No
hay un mtodo o
tcnica determinado
para la realizacin
del cariotipo,
nosotros vamos a irlo haciendo por partes y con unos determinados criterios
que a juicio del autor son los ms sencillos, pero teniendo en cuenta que
puede
haber
otros
mtodos
otras
formas
de
realizar
el
cariotipo.
Otro
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Carrera de Medicina
factor a tener en cuenta es que en cada clula la tincin y condensacin
de los cromosomas puede variar algo, por ello las bandas o el aspecto de
los mismos puede observarse de alguna forma ligeramente distinta a la de
esta clula que vamos a analizar.
Cariotipo Normal
Nomenclatura ISCN
Desde de 1995 se emplean distintos smbolos para describir la anomala que
sufre
un
impone
cromosoma
el
Nomenclatura
ISCN
para
en
concreto
(siglas
inglesas
procedentes
Citogentica
un
cariotipo,
Humana).
Es
de
decir,
siguiendo
las
Sistema
Internacional
la
frmula
reglas
que
de
cromosmica
refleja la descripcin simplificada de un cariotipo. En la frmula cromosmica

se
registra el nmero
total de cromosomas
(incluidos
los sexuales)
seguido
de una coma, tras la cual se escriben los cromosomas sexuales. Si existen

aberraciones numricas o estructurales de los autosomas, stas se escriben a
continuacin,
tras
otra
coma.
Cuando
hay
un
mosaico,
es
decir,
coexisten
dos o ms poblaciones celulares diferentes, los cariotipos correspondientes a

cada una se escriben separados por una barra; primero se escribe el que
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Carrera de Medicina
tiene
menor
nmero.
nmero
Algunos
de
de
cromosomas
los
smbolos
abreviaturas
luego
sucesivamente
usados
los
para
de
mayor
describir
los
cariotipos son:
p: brazo corto del cromosoma.
q: brazo largo del cromosoma.
+: ganancia de un cromosoma completo.
-: prdida de un cromosoma completo.
tel: telmero.
r:
cromosoma
en
anillo.
Entre
parntesis
ponemos
el
cromosoma
involucrado.
del:delecin de. En el primer parntesis ponemos los cromosomas en

los que se produce la delecin, y en el segundo de dnde a dnde
se produce la delecin.
ins: insercin de.
dup: duplicacin de.
inv: inversin de. En el primer parntesis ponemos los cromosomas en

los que se produce la inversin, y en el segundo los extremos del
segmento invertido.
t: translocacin de.
mar: fragmento de ADN que no se sabe de donde procede, y se le

designa el nombre de "cromosoma marcador".
dic: cromosoma dicntrico.
dn:
aberracin
cromosmica
no
heredada
de
los
padres
sino
surgida
de novo.
h: regin de heretocromatina.
i: isocromosoma, es decir, cromosoma que tiene los dos brazos iguales

ya sean dos brazos p o dos brazos 1.
.ish: cariotipo estudiado por FISH.
mat: rearreglo de un cromosoma de origen materno.
pat: rearreglo de un cromosoma de origen paterno.
psu dic: cromosoma pseudodicntrico, es decir, en el que solo uno de

los centrmeros est activo.
tri: trisoma.
trp: triplicacin de una porcin de un cromosoma.

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Carrera de Medicina
Mutaciones Cromosmicas
La
aneuploida
cariotipo,
pudiendo
supernumerarios
pareja
consiste
(p.ej.
(monosomas).
en
la
alteracin
concretarse
trisomas)
Este
en
o
tipo
nmero
la
en
de
del
la
de
presencia
prdida
alteracin
cromosomas
de
de
un
provoca
del
cromosomas
miembro
patologas
de
la
graves
directamente asociables con rasgos fenotpicos identificativos (trisoma del 21

sndrome
de
Down,
trisoma
del
13
sndrome
de
Patau,
sndrome
de
cuando
un
Klinefelter 47: XXY, Sndrome de Turner 45: X, etc.).
Cariotipo con metafase aneuploide

Las
alteraciones
estructurales
de
los
cromosomas
se
producen
fragmento de cromosoma se separa del mismo. Esta alteracin puede producir

una anomala equilibrada cuando el cariotipo mantiene la misma cantidad de
material cromosmico, o en una anomala desequilibrada cuando se pierde o
gana
material
cromosmico.
Una
alteracin
equilibrada
pueden
no
tener
consecuencias clnicas, pero cuando la alteracin es desequilibrada, aparecen

efectos clnicos severos en muchos casos incompatibles con la vida.
Pgina 57 de 77
Carrera de Medicina
Existen
varias
patologas
debido
al
anormal
de
cromosomas
ya
sean
autosomas o cromosomas sexuales.

Alteraciones genticas debido al n normal de cromosomas Somaticos
El Sndrome de Down o Trisona 21:
En este caso las personas cuentan con 3 cromosomas en el par n 21;
Estas
personas
se
caracterizan
por
la
presencia
de
un
grado
variable
de
retraso mental y unos rasgos fsicos peculiares. Es la causa ms frecuente

de
discapacidad
Haydon
Down
psquica
que
fue
congnita
el
primero
debe
su
en
describir
nombre
esta
John
alteracin
Langdon
gentica
en
1866, aunque nunca lleg a descubrir las causas que la producan. En julio
de
1958
un
joven
sndrome
es una
conocen
con
investigador
alteracin
exactitud
llamado
en
las
el
Jrme
mencionado
causas
que
Lejeune
par
descubri
de cromosomas.
provocan
el
exceso
que
el
No
se
cromosmico,
aunque se relaciona estadsticamente con una edad materna superior a los

35
aos.
Si
se
sabe
que
se
debe
la
formacin
de
un
vulo
espermatozoide con 2 cromosomas en el par 21, lo que al juntarse ambos

gametos
generan
un
cigoto
con
Down
tienen
una
cromosomas
Sndrome
de
poblacin
general
de
padecer
algunas
digestivo
sistema
endocrino,
sistema
probabilidad
algo
patologas,
debido
21.
Las
superior
especialmente
al
exceso
personas
a
la
de
de
de
con
la
corazn,
protenas
sintetizadas por el cromosoma de ms
Pgina 58 de 77
Carrera de Medicina
Cariotipo de un individuo con Trisoma 21:
Alteraciones genticas debido al n normal de cromosomas sexuales:

Antes que nada, es importante aclarar que casi todos los embriones producto
de la fusin de gametos anormales abortan espontneamente.
Respecto a los cromosomas sexuales, el cromosoma X es indispensable para
la
supervivencia
del
embrin,
por
lo
tanto
debe
tener
al
menos
un
cromosoma X.
Sndrome de Turner: X0 (1 slo cromosoma sexual X):
Mujeres
que
no
desarrollan
caracteres
sexuales
secundarios
por
deficiencia
hormonal, si bien pueden desarrollarlos con tratamiento hormonal son infrtiles.

Baja
estatura,
enfermedades
pliegues
alrededor
del
cardiovasculares
cuello.
Mayor
y
riesgo
de
padecer
renales.
Ms informacin.
Sndrome de Klinefelter: son XXY
Varones con 2 cromosomas X y un cromosoma Y. No es perceptible, salvo
en la pubertad en la que algunos manifiestan caracteres sexuales secundarios
mixtos (desarrollo parcial de las glndulas mamarias, ensanchamiento de las
Pgina 59 de 77
Carrera de Medicina
caderas,
testculos
pequeos)
Generalmente
estriles.
Trastornos
en
el
aprendizaje sobre todo del lenguaje. Ms informacin.

Trisoma X, tienen 3 cromosomas X: XXX
Mujeres, no presentan sndromes perceptibles Altas, inteligencia por debajo de
lo normal. Frtiles y por lo general con hijos normales. Ms informacin.
Varones XYY:
Niveles
altos
de
testosterona.
Suelen
padecer
acn
importante,
altos,
inteligencia debajo de lo normal. An se debate si los varones XYY estn

genticamente
un
individuo
predispuestos
XYY tiene
la
violencia,
pues
un riesgo 24 veces
una estimacin
mayor
seala
de presentar
que
problemas
de conducta o actividad criminal. Ms informacin.

Referencias
Citogentica Bsica y Biologa de los Cromosomas. Monografa No 20,

Programa Regional de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico, Departamento de
Asuntos Cientficos, Secretaria General de la OEA.
Universidad Rey Juan Carlos PRACTICAS DE GENTICA Grado de

Medicina Dpto. de Ciencias de la Salud III rea de Bioqumica y Biologa
Molecular
Mitelman F, Karger Cytogenetics and cell Genetics Basel 1995 ISCN

International System for Human Cytogenetic Nomenclatura 1995
ww.unioviedo.es/A.Roca/quimica/01_NOMENCLATURA_DE_LA_CITOGENETICA_HU
MANA.pdf 2014
Leer el artculo:
Ijdo J.W. et al 1991. Origin of human chromosome 2: an ancestral telomeretelomere fusion. Proceedings of the National Academy of Sciences 88: 9051
5.
Pgina 60 de 77
Carrera de Medicina
Prctica N
Ttulo
de la prctica
Reaccin de la cadena de polimerasa PCR

Comprender la replicacin y amplificacin
celular y diagnostico
del ADN como mecanismo de funcin
enfermedades genticas

realizacin de la prueba de PCR.
Interpretar
con responsabilidad y criticismo los resultados de una prueba de
PCR
3. Material
Del Laboratorio
Muestras de ADN
Kit de
Termociclador en tiempo real
Reactivos de PCR
Tubos eppendorf, micropipetas, puntas estriles, agua estril,
icro globin
microcentrfuga.
Cubeta de electroforesis.
Fuente de alimentacin.
Equipo de visualizacin de geles.
Del Estudiante
Mandil
Guantes, lpiz y hoja de trabajo
4. Procedimiento
1 Se realizar una master mix
Poner en el micro ependorff
Colocar en el tubo de ensayo
Colocar de 0.2 mM
DNTP cada una 5 l
Cebador 1 0.5 UM
5 l
para amplificacin de AD:
5 l
de bufer
Pgina 61 de 77
Carrera de Medicina
25 mM MgCl2 5l
Muestra de ADN 10pg-1mg 5l
Agua libre de nucleasa 5ol
Total 75 l
2 Colocar en el Termo ciclador
La desnaturalizacin Inicial 95C 3 minutos
La desnaturalizacin en ciclo
Anillado
Extensin 72C 3 minutos
Total de Ciclos
Extensin Final 72C 5 minutos
3 interpretar resultado de PCR
54C
95C 0.5 minutos
4minutos
25
3. PROTOCOLO A REALIZAR
A
cada
reaccin
tubo
de
eppendorf
PCR,
de
300
de
se
solucin
aaden
6,1
de
bacteria
la
de
la
que
mezcla
se
de
prepara
resuspendiendo una colonia en 100 l de agua destilada (aprox. 1 ng de

plsmido, DNA molde), y se completa con agua destilada hasta 25 l.
Los
cebadores
utilizados,
RB1
RB3,
corresponden
los
del
gen
de
la
paramomicina presente en el plsmido recombinante.
3.1. Programa de PCR

1. 96 C dur nte 5
desn tur liz cin
2. 96 C dur nte 1
desn tur liz cin
3. 60 C dur nte 1
hibrid cin de los ceb dores
4. 72 C dur nte 30
elong cin de l
poli er s
35 veces
5. 72 C dur nte 5
fin liz cin de fr g entos elong dos
6. 4 C (mantener hasta retirar los tubos)
3.2. Separacin mediante electroforesis de los productos amplificados por

la PCR anterior
Preparacin del gel de agarosa:

1. Preparar en un erlenmeyer 100 ml de suspensin 0,8 % de agarosa en
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Carrera de Medicina
buffer de electroforesis.
2. Fundir en una placa calefactora.
3. Dejar enfriar la suspensin hasta que alcance 50 C aprox.
4. Sellar la cama en la que se va a verter el gel de agarosa y colocar
el peine que formar los pocillos del gel.
5. Una vez la solucin de agarosa ha alcanzado los 50 C aadir 8 l de
bromuro de etidio (5 mg/ml) y homogeneizar la solucin.
6. Verter la solucin de agarosa con BrEt en la cama previamente sellada
y con el peine para la construccin de los pocillos de carga. Dejar que
polimerice durante 20-30 min.
Electroforesis:
1. Aadir 3 l de buffer de carga al vial donde tenemos el producto de la
PCR; homogeneizar y cargar el contenido del vial en un pocillo del gel
de agarosa ya polimerizado.
2. Establecer una diferencia de potencial de 60 V entre los polos de la
cubeta de electroforesis. Mantener estas condiciones hasta que la
separacin de los colorantes del buffer de carga, nos de idea de que
los fragmentos originados por los digestin estn bien separados (45-60
min).
3. Visualizar por medio de luz UV.
La
reaccin
Mullis
en
cadena
mediados
producir
en
especfico,
el
incluso
de
de
los
la
aos
laboratorio
en
nicos
una
cadena
requerimientos
80.
mltiples
presencia
Se basa en la actividad de
fabricar
polimerasa
(PCR)
fue
Con
esta
copias
de
de millones
de
desarrollada
metodologa
un
por
se
Kary
pueden
fragmento
de
DNA
otras molculas
de
DNA.
la enzima DNA polimerasa que es capaz de
de
DNA
son
que
complementaria
existan
nucletidos
otra
en
ya
el
existente.
medio
Sus
(adenina,
timina, citosina y guanina), que son los componentes de la cadena de DNA,

y
una
pequea
cadena
de
DNA
molcula que queremos copiar para
(oligonucletido)
que
pueda
unirse
la
que sirva como cebador.
PCR son las siglas en ingls de Polymerase Chain Reaction o Reaccin en

Cadena de la Polimerasa. La idea bsica de la tcnica es sintetizar muchas
Pgina 63 de 77
Carrera de Medicina
veces un pedazo o fragmento de ADN utilizando una polimerasa que puede
trabajar
temperaturas
muy
elevadas,
ya
que
proviene
de
la
bacteria
Thermus aquaticus que vive a altas temperaturas (79C a 85C), de ah su

nombre
comercial
ms
reaccin
de
simulamos
PCR
conocido:
lo
taq
polimerasa.
que
sucede
Cuando
en
una
hacemos
clula
una
cuando
se
sintetiza el ADN y en el tubo se mezclan todos los ingredientes necesarios

para hacerlo: la polimerasa, el ADN del organismo que queremos estudiar
donde
se
encuentra
el
fragmento
que
queremos
sintetizar
los
oligonucletidos (llamados tambin primers, iniciadores, cebadores, oligos, etc.)

necesarios
para
que
se
condiciones
para
determinadas
cantidades
necesitarse
tcnica
que
otras
tan
inicie
la
de
sales
ingeniosa
la
transcripcin,
enzima
trabaje
magnesio
reactivos,
tiene
dinucletidos
en
adecuadamente
forma
de
MgCl2,
dependiendo
de
cada
muchsimas
(dNTPs),
aplicaciones
las
(cierto
KCl,
pH,
pueden
polimerasa).
distintas
Esta
se
ha
convertido en una herramienta muy importante en la biologa molecular; sus

aplicaciones
van
desde
la
gentica
de
poblaciones,
evolucin
molecular
genmica hasta la medicina forense.
La PCR se desarrolla en tres pasos. El primero es la separacin de las

dos cadenas que forman la molcula de DNA que se quiere amplificar, para
lo cual
se debe calentar el DNA a una temperatura de 95-96 C. Cada
una de estas
cadenas actuar como molde para fabricar su complementaria.
A continuacin
se baja la temperatura para conseguir que cada cebador se
una a su regin
complementaria dentro de la cadena de DNA. El ltimo
paso consiste en la
generacin de la cadena de DNA complementaria por
accin de la DNA
cientficos
que
idearon
temperatura
de
70C
para
que
estas
temperaturas
preciso
aadirla
descubri
la
polimerasa. El problema con el que se encontraron los
la
esta
mezcla
las
dos
tan
de
en
Thermus
es
reaccin
cadenas
elevadas
nuevo
bacteria
de
tcnica
la
de
que
resulta
preciso
hasta
valores
por
DNA
DNA
cada
que
encima
mantengan
polimerasa
ciclo.
aquaticus
se
Esto
fue
vive
en
se
aumentar
separadas.
inactivaba
as
hasta
aguas
cuya DNA polimerasa (Taq polimerasa) es capaz de trabajar
de
la
los
A
era
que
se
termales
a temperaturas
superiores a los 70C. De esta manera slo hay que aadir la enzima al
inicio
del
proceso
de
reaccin
llevar
cabo
tantos
ciclos
como
sea
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Carrera de Medicina
necesario. Cada una de las molculas de DNA hijas pueden volver a entrar
en el proceso y servir como molde para fabricar
una
ms copias. Se consigue
amplificacin de 2n , siendo n el nmero de ciclos de reaccin.
Las
aplicaciones
de
la
PCR
de
sus
numerosas
variantes
son
muy
numerosas, entre ellas:

- Simplifica sobremanera muchos experimentos de ingeniera gentica
- Permite muchos estudios de expresin gentica
- Secuenciacin directa de secuencias amplificadas
- Deteccin de mutaciones
- Diagnsticos de enfermedades genticas e infecciosas
- En ciencia forense: identificacin de restos biolgicos, determinacin de
paternidad, pruebas periciales en criminologa
- En arqueologa y paleontologa
Al aplicar un campo elctrico a una solucin de molculas con carga neta,

stas se desplazarn hacia el polo contrario a su carga. En este principio
se
basa
molcula
la
tcnica
denominada
electroforesis
el
desplazamiento
de
la
en cuestin depende de dos factores: la carga y el tamao.
La electroforesis en gel es una tcnica muy utilizada para separar molculas

o
fragmentos
de
molculas
de
cidos
nucleicos.
Los
materiales
ms
comunes para separar molculas de cidos nucleicos son polmeros como la

poliacrilamida y la
agarosa. Estos geles van en una cuba, sumergidos en
un tampn, con pH
superior a 8. De esta forma, las molculas de DNA
o RNA sometidas a
electroforesis se desplazarn al polo positivo, porque
poseen carga neta negativa a valores de pH superiores a 5.

Cuando la electroforesis se realiza en un gel, ste se comporta como un
tamiz
molecular
permite
separar
molculas
cargadas
basndose
en
su
tamao y forma. As una mezcla de molculas de DNA de diferente tamao,

2que
pueden
separarn
de
tamao
resultar
de
una
reaccin
con
enzimas
de
restriccin,
se
en funcin de aquel. Es importante el empleo de un marcador

conocido
porque
permite
calcular
la
masa
molecular
de
las
bandas de DNA.
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Carrera de Medicina
Para
comprobar
recombinante
que
que
las
colonias
queremos,
transformantes
analizaremos
los
elegidas
tienen
insertos
de
el
los
plsmido
plsmidos
aislados mediante PCR.
Los vectores de clonacin poseen sitos de anclaje de cebadores conocidos,

que estn situados flanqueando el sitio de clonacin mltiple del vector.
Usaremos estos cebadores para amplificar el inserto de los plsmidos aislados
el da anterior.
Los
productos
de
PCR
se
analizarn
mediante
separacin
electrofortica
en
gel de agarosa
LISTADO DEL MATERIAL NECESARIO

- Tubos eppendorf, micropipetas, puntas estriles, agua estril, microcentrfuga.
- Termociclador.
- Cubeta de electroforesis.
- Fuente de alimentacin.
- Equipo de visualizacin de geles.
3. PROTOCOLO A REALIZAR
A
cada
reaccin
tubo
de
eppendorf
PCR,
de
l
300
de
se
solucin
aaden
6,1
de
bacteria
la
de
la
que
mezcla
se
de
prepara
resuspendiendo una colonia en 100 l de agua destilada (aprox. 1 ng de

plsmido, DNA molde), y se completa con agua destilada hasta 25 l.
Los
cebadores
utilizados,
RB1
RB3,
corresponden
los
del
gen
de
la
paramomicina presente en el plsmido recombinante.
3.1. Programa de PCR

1. 96 C durante 5 (desnaturalizacin)
2. 96 C durante 1 (desnaturalizacin)
3. 60 C durante 1 (hibridacin de los cebadores)
4. 72 C durante 30 (elongacin de la polimerasa)
35 veces
5. 72 C durante 5 (finalizacin de fragmentos elongados)
6. 4 C (mantener hasta retirar los tubos)
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Carrera de Medicina
3.2. Separacin mediante electroforesis de los productos amplificados
por la PCR anterior
Preparacin del gel de agarosa:

1. Preparar en un erlenmeyer 100 ml de suspensin 0,8 % de agarosa en
buffer de electroforesis.
2. Fundir en una placa calefactora.
3. Dejar enfriar la suspensin hasta que alcance 50 C aprox.
4. Sellar la cama en la que se va a verter el gel de agarosa y colocar
el peine que formar los pocillos del gel.
5. Una vez la solucin de agarosa ha alcanzado los 50 C aadir 8 l de
bromuro de etidio (5 mg/ml) y homogeneizar la solucin.
6. Verter la solucin de agarosa con BrEt en la cama previamente sellada
y con el peine para la construccin de los pocillos de carga. Dejar que
polimerice durante 20-30 min.
Electroforesis:
1. Aadir 3 l de buffer de carga al vial donde tenemos el producto de la
PCR; homogeneizar y cargar el contenido del vial en un pocillo del gel
de agarosa ya polimerizado.
2. Establecer una diferencia de potencial de 60 V entre los polos de la
cubeta de electroforesis. Mantener estas condiciones hasta que la
separacin de los colorantes del buffer de carga, nos de idea de que
los fragmentos originados por los digestin estn bien separados (45-60
min).
3. Visualizar por medio de luz UV.
4. RESULTADOS ESPERADOS
Amplificacin de 300pb esperada
Dmero de cebadores
Calle 1: marcador de 1 kpb ("ladder")
Calle 2: control positivo
Calle 3: control negativo
Calles 4 a 10: resultado de la PCR de distintas colonias

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Carrera de Medicina
5. DISCUSIN Y COMENTARIOS
La
PCR
es
una
tcnica
rutinaria
que
permite
obtener
en
corto
plazo
los
resultados esperados. Mediante esta metodologa, de un conjunto de colonias

puede
las
determinarse,
usando
los
cebadores
del
fragmento
de
DNA
deseado,
que contienen o no el inserto de inters. De esta forma solamente las
colonias positivas que se obtengan se cultivarn y se aislar suficiente DNA

para su
anlisis posterior.
REFERENCIAS
Espinosa Asuar Gua prctica sobre la tcnica de PCR Laura UNAM 2013 Alberts B,
Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, and Walter P (2002). Molecular Biology
of the Cell, 4th edition.
Pgina 68 de 77
Carrera de Medicina
Prctica N
Ttulo
de la prctica
Nuevas Tcnicas genticas

Reconocer los avances tecnolgicos en el tratamiento de algunas enfermedades
y la naturaleza de las terapias alternativas y experimentales

Comprende y describe con responsabilidad y criticismo los nuevos adelantos y
tcnicas genticas usadas en medicina
Interpreta y aplica con responsabilidad y criticismo los nuevos adelantos y tcnicas

genticas usadas en medicina
Evaluar la aplicacin de la medicina personalizada y su relacin con la medicina

genmica
3. Material
Por el Laboratorio
Tres artculos de terapia genetica y diagnostico con nuevas pruebas genticas
Estudiante
Lpiz
Mandil
hoja
4. Procedimiento
La prctica consiste en el desarrollo de tres artculos relacionados a la aplicacin de
la terapia gnica, dianas teraputicas y terapia celular. Los artculos base sern
entregados por el docente responsable
Pgina 69 de 77
Carrera de Medicina
La Gentica Mdica se ocupa de la prevencin y tratamiento de las enfermedades
genticas y defectos congnitos en general. Toda manifestacin de enfermedad
tiene alguna contribucin gentica y en la mayora de las enfermedades crnicas
comunes (diabetes, hipertension arterial, enfermedades mentales, cncer), existe una
predisposin gentica determinada por mltiples genes, que influye en su ocurrencia
y grado de severidad. Por otra parte, los factores ambientales son fundamentales
en el desarrollo de cualquier desviacin de la salud, ya sea gentica o adquirida.
Las enfermedades genticas son aquellas que se deben total o parcialmente a
defectos en el material gentico. Las tres categoras principales de enfermedades
genticas son las anomalas cromosmicas, los trastornos gnicos, y los trastornos
multifactoriales, causados por interaccin gentico-ambiental.
Las pruebas genticas son mtodos de laboratorio mediante los que se pueden identificar
alteraciones de protenas, ciertos metabolitos, cromosomas o cidos nucleicos; con los que
se determina o infiere, un genotipo. Tienen un amplio rango de aplicacin que incluye: la
confirmacin de hiptesis diagnsticas, la identificacin de afecciones en estadios
presintomticos, la determinacin de la posibilidad de padecer ciertas dolencias, de la
condicin de portador de trastornos recesivos, la realizacin del diagnstico prenatal o el
pronstico de ciertas enfermedades, entre otros fines.
De acuerdo con su propsito, las pruebas genticas se distinguen en distintas categoras y
se clasifican en:
1. Diagnsticas.
2. Predictivas:
- Presintomticas.
- De predisposicin
3. Apoyo en la toma de decisiones reproductivas:

Identificacin de portadores
Diagnstico prenatal
4. Otros tipos:
- Pesquisaje en recin nacidos
- Pesquisaje en grupos tnicos
- Pruebas de paternidad
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Carrera de Medicina
- Identificacin de cigosidad
- Forenses
Las pruebas genticas permiten confirmar o excluir un diagnstico conocido o sospechado
en un individuo con manifestaciones clnicas con una enfermedad de causa gentica. Al
ser el diagnstico la piedra angular de la prctica mdica, las pruebas genticas para el
diagnstico son de inters especial para quienes se dedican a la prctica de la gentica
clnica.
Los
nuevos
Biologa
conocimientos
Molecular
predicciones
de
establecidas,
avances
la
tecnolgicos
Gentica
comienzan
ya
en
los
campos
molecular,
de
acuerdo
aplicarse
para
abordar
de
con
la
las
problemas
mdicos mediante terapias moleculares o celulares, dentro de un campo que,

cada vez, es ms generalizado denominar como Medicina molecular.
Debemos
conocer
levantar
falsas
las
perspectivas
esperanzas
de
que
abren
aplicaciones
estos
nuevos
generalizadas
enfoques,
inmediatas
sin
los
afectados, pero con unos sentimientos generales muy positivos por la rapidez
de los logros que se van consiguiendo
Las tcnicas que estn disponibles en un momento dado determinan aquello
que podemos conocer, y en ese sentido nuestro conocimiento es contingente
de
la
disponibilidad
de
dichas
tcnicas:
conocemos
en
un
sentido
fuerte
aquello que podemos "observar" directamente. La Gentica clsica infiere las

propiedades
tcnicas
del
material
moleculares
hereditario,
que
se
pero
puede
no
es
determinar
hasta
que
finalmente
la
se
aplican
composicin
las
y
propiedades qumicas de ese material. Los nuevos desarrollos tcnicos facilitan

la
adquisicin
de
informacin
previamente
inaccesible.
El
acceso
la
secuencia de DNA, por ejemplo, ha generado una informacin cualitativamente

nueva
desarrollo
las
otras
exenta
de
las
de las tcnicas
tcnicas
limitaciones
moleculares
genticas.
De
de
otras
aproximaciones.
no ha significado
hecho
se
ha
Pero
el
una eliminacin
de
producido
una
autntica
integracin de tcnicas que permiten integrar, a su vez, los diferentes niveles

de lo gentico. La gentica del desarrollo o la gentica de poblaciones son
claros ejemplos de integracin de tcnicas de anlisis gentico con tcnicas
moleculares. Fue la integracin de los estudios de cruces y la citologa la
que condujo, a principios de siglo, a la teora cromosmica de la herencia.
Pgina 71 de 77
Carrera de Medicina
La integracin de enfoques y tcnicas es uno de los motores del avance
de la ciencia gentica.
TECNOLOGAS GENTICAS
Los cientficos han desarrollado una serie de tcnicas bioqumicas y genticas
mediante las cuales el ADN puede ser separado y transferido de una clula
a otra. Algunos de esos mtodos de laboratorio ayudan a los investigadores
a
estudiar
las
propiedades
de
los
genes
en
la
naturaleza
(permiten,
por
ejemplo, comparar los ADN de diferentes animales para establecer distancias

evolutivas).
Otras
tcnicas
de
ADN
constituyen
herramientas
bsicas
en
el
campo de la ingeniera gentica (alteracin de genes de un organismo). Esas

herramientas
son
utilizadas
en
la
industria
para
desarrollar
productos
comerciales tales como cosechas ms resistentes a la desecacin o a las

plagas,
como
microorganismos
hidrocarburos
compuestos
tiles
en
capaces
de
petrleo,
medicina
en
descomponer
o
capaces
grandes
compuestos
de
cantidades
contaminantes
producir
como
determinados
la
insulina,
el
interfern o determinadas vacunas.
ADN RECOMBINANTE
Genoteca puede contener el genoma completo de un organismo troceado en
pequeos fragmentos.
BIOINFORMTICA
La secuenciacin del genoma humano ha generado un amplio catlogo de los
aproximadamente
31.000
genes
humanos;
mapas
de
alta
resolucin
de
los
cromosomas, incluyendo cientos de miles de puntos significativos; y miles de

millones de informaciones sobre secuencias de pares de bases. Para ayudar a los
investigadores a determinar el sentido de este aluvin de datos han hecho falta
muchos instrumentos informticos, como sistemas de informacin y gestin de
laboratorios, robots, sistemas de gestin de bases de datos e interfaces grficas de
usuario.
Se ha desarrollado un nuevo campo de investigacin llamado bioinformtica para
satisfacer
las
exigencias
planteadas
por
el
programa.
Los
investigadores
de
bioinformtica han creado bases de datos pblicas conectadas a Internet para poner
los datos del genoma a disposicin de los cientficos de todo el mundo. La
Pgina 72 de 77
Carrera de Medicina
informacin de secuenciacin del ADN se encuentra en varias bases de datos,
entre ellas GenBank del NIH, Base de Datos de Secuencias de Nucleticos del
Laboratorio Europeo de Biologa Molecular y DNA Databank de Japn.
TERAPIA GNICA
En la actualidad, la dotacin gentica de una clula puede ser modificada mediante

la introduccin de un gen normal en el organismo diana que sustituya al gen
defectuoso en su funcin; es lo que se denomina terapia gnica. La terapia gnica
se puede definir como el conjunto de tcnicas que permiten vehiculizar secuencias
de ADN o de ARN al interior de clulas diana, con objeto de modular la expresin
de determinadas protenas que se encuentran alteradas, revirtiendo as el trastorno
biolgico que ello produce.
Aunque muchos descubrimientos fueron aplicados a las tcnicas diagnsticas, la
utilizacin de tcnicas moleculares en el tratamiento de enfermedades genticas es
lgico y natural. Terapia gnica consiste en la utilizacin de cidos nucleicos con
fines teraputicos. Aunque esta tcnica es muy joven, ya que el primer paciente
tratado fue en 1990, presenta un futuro muy prometedor. En los primeros 9 aos,
396 protocolos clnicos, en ms de 3.000 pacientes de 22 pases fueron ensayados.
La terapia gnica es una tcnica potencialmente poderosa, pero est restringida por
el conocimiento limitado de los vectores y la fisiopatologa de las enfermedades a
tratar. Un mayor conocimiento del proceso de las enfermedades genticas, mejoras
en el diseo de los vectores y gran atencin a las aplicaciones de los aspectos
farmacolgicos, van a permitir un eficaz y muy esperado desarrollo de la terapia
gnica
Las aplicaciones de terapia gnica en gentica mdica son complejas y ese hecho
se debe fundamentalmente a dos causas. La primera se debe a las caractersticas
de la especialidad misma. Los cuadros que estudiamos en gentica mdica son
muy heterogneos y de expresin temprana en la mayora de los casos. La
patologa gentica podemos dividirla en tres grandes grupos.
El primero es de enfermedades cromosmicas. La base del trastorno es un defecto
en el nmero o estructura de los cromosomas. En conjunto estas alteraciones
afectan a 7 de cada 1.000 nacimientos. A medida que aumenta la edad materna y
paterna aumenta el riesgo de tener un nio con este tipo de enfermedades. Las
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Carrera de Medicina
enfermedades monognicas estn causadas por genes mutados con diferentes
patrones de herencia. El nmero de estas enfermedades es de alrededor de 5.000
cuadros descriptos. Las enfermedades multifactoriales son el resultado de factores
genticos
ambientales.
En
la
mayora
de
los
casos
se
expresan
con
malformaciones congnitas. La frecuencia de las malformaciones congnitas en los

recin nacidos es de 2-3%.
La terapia ex vivo se caracteriza por la extraccin al paciente de clulas con
genes alterados e incorporacin de copias normales, las que son retornadas al
organismo.
Se suelen utilizar clulas sanguneas. El problema es que las clulas corregidas
tienen vida limitada, desapareciendo poco a poco, por lo cual se deben realizar
tratamientos peridicos. Otra posibilidad es actuar sobre las clulas precursoras.
El segundo mtodo de terapia gnica en clulas somticas es el tratamiento in situ.
Implica la introduccin de genes correctores directamente en el tejido donde est
localizado el problema. Es ideal para la correccin de un defecto localizado. No
puede corregir problemas generalizados. El tratamiento in situ se aplica actualmente
en varias enfermedades. Una de las frecuentes aplicaciones es en la enfermedad
fibroqustica del pncreas, en forma de aerosoles sobre la mucosa nasal y
bronquial. La terapia in situ tiene an el inconveniente de la falta de vas seguras
y eficaces para la implantacin de genes correctores en ciertos rganos. No
siempre producen cantidades suficientes de protenas, y la vida de las clulas
portadoras de genes tiles es limitada.
Indicaciones para la atencin en un servicio de gentica
Las siguientes son las razones ms comunes por las que los pacientes acuden a
los servicios de gentica:
(a) Pacientes de cualquier edad que presentan sntomas o signos sugerentes de
alguna de las centenares de enfermedades genticas o defectos congnitos
conocidos (anomalas congnitas, retardo mental, trastornos de la diferenciacin
sexual, trastornos del crecimiento y desarrollo, displasias esquelticas, trastornos
neurolgicos, etc).
(b) Personas o parejas con riesgo aumentado de tener un hijo afectado con una
enfermedad gentica o defecto congnito por alguna de las siguientes razones:
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Carrera de Medicina
- portadores de genes recesivos

- afectados con una enfermedad dominante
- edad materna avanzada
- hijos previos con una enfermedad gentica o defecto congnito
- valores de marcadores bioqumicos en sangre materna (alfa-fetoprotena,
gonadotrofina corinica, estriol) que sugieren riesgo aumentado de sindrome de

Down durante la gestacin
- anomalas fetales ecogrficas
- abortos habituales, infertilidad
(c) Personas sanas con riesgo aumentado de desarrollar una enfermedad por
la probabilidad de haber heredado un gen determinstico (por ejemplo,
enfermedad de Huntington) o predisponente (por ejemplo, cncer de mama).
(d) Personas sanas que por historia familiar, o pertenencia a algn grupo tnico o
poblacional particular, tienen una probabilidad mayor de ser portadores de algn
gen recesivo, y por lo tanto tienen riesgo de tener un hijo afectado si el otro
progenitor tambin es portador (p. ej. fibrosis qustica, talasemia, enfermedad de
Tay-Sachs, etc).
(e) Mujeres que por historia familiar tienen una probabilidad mayor de ser
portadoras de un defecto en un gen ligado al sexo (p.ej. distrofia muscular
progresiva, hemofilia, sindrome X-frgil), y por lo tanto tienen riesgo de transmitir
enfermedad a sus hijos varones.
Diagnstico gentico precoz y preciso en pacientes afectados

El diagnstico precoz y preciso es un servicio esencial en el manejo de las
enfermedades
genticas,
pues
de
dependen
las
medidas
preventivas
teraputicas ulteriores. Se conocen centenares de enfermedades genticas y el

diagnstico puede ser complejo. La sospecha de una enfermedad gentica proviene
generalmente de un mdico general en base a signos y sntomas y/o historia
familiar (p.ej. defectos congnitos, retardo mental, trastornos de crecimiento y/o
diferenciacin
sexual,
signos
caractersticos
de
alguna
enfermedad
gentica
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Carrera de Medicina
conocida, etc). El diagnstico gentico especfico est usualmente a cargo del
genetista clnico en el servicio de gentica, al cual es referido el paciente en
consulta. Las herramientas diagnsticas bsicas son la gentica clnica (examen
fsico
clnico-gentico
especializado),
exmenes
auxiliares
(laboratorio
clnico,
radiologa, etc) orientados por la clnica e interconsultas con otros especialistas

(neurlogos, oftalmlogos, hematlogos, etc).
Los diagnsticos clnicos se confirman con anlisis de laboratorio de citogentica,
gentica molecular (anlisis de ADN) o gentica bioqumica, de acuerdo a la
sospecha clnica.
Asesoramiento gentico
El asesoramiento gentico consiste en explicar al paciente o, si es un nio, a sus
padres, las caractersticas de la enfermedad que lo afecta, su pronstico y manejo,
y su modo de herencia. En casos de individuos con riesgos genticos en la
descendencia, la estimacin cuantitativa del riesgo en futuros hijos se basa en el
diagnstico
el
anlisis
minucioso
de
la
historia
familiar.
Adems
de
la
cuantificacin del riesgo, se asesora tambin sobre las opciones disponibles para
enfrentarlo. Estas opciones son siempre voluntarias por parte de la pareja y
incluyen alternativas tales como abstenerse de tener ms hijos, correr el riesgo
gentico o recurrir al diagnstico prenatal
6. Referencias
Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, and Walter P (2002).

Molecular Biology of the Cell, 4th edition. .
Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, Lewontin RC, and Gelbart WM (2000). An
Introduction to Genetic Analysis. New York: W.H. Freeman and Company. ISBN
0-7167-3520-2.
TURYK S. , APLICACIONES DE TERAPIA GENICA EN GENETICA MEDICA

MEDICINA (Buenos Aires) 2000; 60: 26-28 ISSN 0025-7680
Speicher, Michael (2010). Vogel and Motuskys Human Genetics. Problems and
Approaches. Springer.
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Carrera de Medicina
Nombres completos
Nmero de prctica
Fecha
Tema
Paralelo
Grupo
Tutor
Calificacin
Articulo 1 resumen
Anlisis
Articulo 2 resumen
Anlisis
Articulo 3 resumen
Anlisis
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Guías de Práctica de Laboratorio de Genética

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Ctedra de Gentica - Gua de prcticas de laboratorio

Estructura del ADN

y del genoma humano

3. Objetivo general / propsito

y los procesos de estructuracin del genoma

humano y del ADN.

4. Resultados del aprendizaje

ciclo celular y ADN, mitosis

Por parte del estudiante

Poner 500 microlitros de sangre total

en dos ependorff de 1,5

A cada tubo se aadir 1000 microlitros de

Mezclar vigorosamente en el vortex

Dejar incubar por

Mezclar vigorosamente en el vortex

Dejar reposar por 5 minutos

Mezclar vigorosamente en el vortex

Dejar reposar por 5 minutos

Mezclar vigorosamente en el vortex

Agitar por inversin

por 5 minutos a 10 minutos

con una pipeta Pasteur pasar el ovillo

(blanquecino) a otro ependorff

Visualizacin ADN mediante Corrido electrofortico

qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido.

conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones.

Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento

nitrogenadas en la cadena de nucletidos, es en esta secuencia de bases

limitado ( A-T; G-C ), implica que el orden o secuencia de bases de una

hlice del ADN, sugirieron tambin un posible mecanismo para la replicacin

que hemos postulado sugiere inmediatamente un mecanismo copiador para el

dos cadenas) de la molcula original Resumen corto del tema a conocer

repeticin de la clase terica.

Funciones del ADN

llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles compuestos

bases: adenina (abreviada

timina (T) y citosina (C).

la otra base de la otra

dos puentes entre tiamina y adenina, y tres entre

Una de las caractersticas comunes de la organizacin del material gentico

encontrado entre los nucleosomas para formar la estructura del

ADNA + octmero de histonas

para una protena o cido nucleico; es un segmento corto de ADN, que le

todos los genes constituye el material hereditario para el cuerpo humano y

Un gen es un subconjunto determinado de nucletidos de uno de los lados

posicin en cada cromosoma.

una secuencia de nucletidos del ADN determina la secuencia de

aminocidos de las protena

, - soma, cuerpo o elemento) a

forma de bastoncillos en que se organiza

Los seres humanos tenemos 23 pares de cromosomas: 22 de ellos se

Por lo general, al hablar de genoma en los seres eucariticos nos referimos

mayor parte del genoma

Estructura del ADN Nature 25-Abril-1953

9. Post-requisitos (informe posterior a la prctica)

Desarrollo del informe

1. Observe la imagen. Identifique las estructuras del cromosoma , ponga los

2. Qu tipo de ADN es y porque

3. Dibuje la estructura secundaria segn modelo de Watson y Crik

4. Indique las caractersticas del extracto de ADN obtenido

5. Haga un resumen del artculo de Watson y Crick Nature 25-Abril-1953 indicando:

Por qu el ARN es monocatenario