INSTITUTO TECNOLGICO

SUPERIOR DE POZA RICA

INGENIERA EN NANOTECNOLOGA 8 A
BIOPROCESOS
DOCENTE: DAVID CRUZ ALEJANDRE
INTEGRANTES:
PONCE LARA ESTHER GUADALUPE
TLLEZ CORTS ELVIA
REPORTE DE EXPOSICIN
MTODOS DE AISLAMIENTO Y DETENCCIN DE
ACIDOS NUCLEICOS

POZA RICA DE HIDALGO, VER.

LUNES 4 DE ABRIL DEL 2016

Mtodos de aislamiento y deteccin de ADN.

QU SON LOS CIDOS NUCLECOS?

cidos Nucleicos Definiciones DNA y RNA son polmeros que almacenan y transmiten
informacin del cdigo gentico, por otra parte los Nucletidos son subunidades de DNA o
RNA que consisten en un azcar, un grupo fosfato y una base A, G, C, T o U.
Las Bases se aparean y se mantienen unidas por puentes de hidrgeno C se une a G A
se une a T (slo DNA) A se une a U (slo RNA).

MTODOS DE AISLAMIENTO DE LOS CIDOS NUCLEICOS

AISLAMIENTO Y VISUALIZACIN DE CIDOS NUCLEICOS
Existen dos variedades qumicas de cidos nucleicos: el DNA (cido
desoxirribonucleico) y el RNA (cido ribonucleico). Generalmente, la informacin
gentica se almacena en forma de cromosomas de DNA y se expresa en forma de
mRNA (RNA mensajero). Las bacterias son procariontes (sin ncleo celular); por
tanto, todos sus cidos nucleicos se encuentran en el citoplasma.
El cromosoma de las bacterias es de doble cadena (dsDNA), circular y
superenrollado. El RNA generalmente se encuentra en forma de cadena sencilla,
aunque suele formar estructuras secundarias de doble hlice, por
autoapareamiento de regiones complementarias. Existen diversos tipos de RNA
ribosmico (rRNA), nombrados de acuerdo con su coeficiente de sedimentacin
Svedberg, que es una medida de su tamao (peso), conformacin y agregacin.
Una cantidad menor de RNA aunque muy importante para la clula, es el RNA
mensajero (mRNA), que existe en una amplia variedad de tamaos: de cientos a
miles de bases (b). El mRNA representa la expresin de algunos de los genes
contenidos en el DNA cromosmico.
UTILIDAD DE LA PURIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS
El aislamiento y purificacin de cidos nucleicos puede ser analtico o preparativo
y tiene diferentes objetivos. Existen diversos mtodos de purificacin de cidos
nucleicos. stos varan segn se desee aislar DNA o RNA, as como del grado de
pureza requerido. Otro aspecto importante a considerar es el uso de sustancias
txicas o inocuas.
Uno de los mtodos es por un aislamiento rpido por lisis celular. Despus se
procede a la separacin electrofortica en gel de agarosa y visualizacin de dichos

cidos nucleicos. Tambin se realiza un clculo aproximado de pesos moleculares

(tamaos) del material gentico obtenido.

El objetivo de este mtodo es visualizar las diferentes formas moleculares de los

mismos, as como determinar su tamao aproximado y posteriormente
desecharlos. Algunos protocolos de purificacin de plsmidos utilizan detergentes
(como el SDS) para romper las clulas, lcali (como NaOH) para desnaturalizar el
cromosoma bacteriano y las protenas y sal (como KCl) para favorecer la
precipitacin de las protenas y cromosomas.
Recientemente las investigaciones hechas acerca de los cidos nucleicos han
mejorado las tcnicas de hibridacin de molculas complementarias ADN-ADN y
ARN-ADN. La capacidad de hibridacin de los cidos nucleicos complementarios
es la base para desarrollar mtodos de diagnstico de viroides y virus.
Para facilitar la aplicacin del mtodo, el cido nucleico que debe detectarse se fija
a un soporte solido (filtro o membrana) para que la sonda en solucin pueda
hibridarse sobre ese cido nucleico ya fijado en la membrana. Por esta razn la
tcnica se conoce tambin como gota absorbida
ACIDOS NUCLEICOS: CUANTIFICACION

El ADN como el RAN absorben la luz ultravioleta con un pick de absorcin a

260 nm.

Mediante el uso de la ley de Lambert-Beer se puede cuantificar la

concentracin usando la relacin de su absorbancia a esa longitud de onda

LA TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE

La tecnologa del DNA recombinante es un conjunto de tcnicas que permiten
analizar y manipular la informacin gentica. Su aparicin revoluciono la forma de
estudiar la funcin y estructura de los genes. Tambin posibilito la comprensin de
la salud humana, al permitir el diagnstico preciso de las enfermedades
hereditarias.
Las herramientas moleculares y las numerosas tcnicas para manipular el DNA
permiten cortar y pegar fragmentos del material gentico, insertarlos en vectores
que los transportan a los hospedadores deseados y posteriormente localizar,
secuenciar y modificar esos fragmentos de cidos nucleicos.
El uso combinado de las herramientas permite obtener clones molecularespoblaciones de clulas con construcciones genticas homogneas que posibilitan

el estudio de los genes en distintos sistemas y la expresin de protenas

recombinantes especficas.

LA DETECCIN DE LOS CIDOS NUCLECOS

Reaccin de la polimerasa en cadena en tiempo real
Fluorescencia guiada por luz angulada RITF-LA
Hibridacin de las cadenas de DNA
REACCIN DE LA POLIMERASA EN CADENA
La tcnica de reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) supuso un gran avance y
permiti introducir la biologa molecular de forma generalizada en los laboratorios
asistenciales. Se trata de una reaccin enzimtica sencilla, rpida y susceptible de ser
automatizada. El hecho que complica y alarga extraordinariamente el proceso es la
visualizacin del producto una vez amplificado, que debe hacerse por hibridacin en
solucin o en fase slida (southern blot). De esta manera, y segn nuestra experiencia, se
tarda entre 2 a 4 das en poder informar un resultado.
La mayora de estos inconvenientes se han solucionado con la introduccin de la PCR
realizada en tiempo real (PCR-RT), que elimina cualquier proceso post-PCR puesto que
monitoriza la progresin de la amplificacin en el momento en que ocurre. A diferencia de
la PCR convencional (en punto final), que mide la acumulacin ADN al final de un nmero
predeterminado de ciclos, con PCR-RT esto se hace durante el proceso de amplificacin
usando fluorescencia, de forma que su aumento es proporcional a la cantidad de ADN
formada. El proceso se puede automatizar fcilmente usando un sistema que realice la
amplificacin (termociclador) y que a su vez sea capaz de leer fluorescencia.
La incorporacin de fluorescencia al proceso de PCR se puede hacer de muy diversas
maneras, pero las ms utilizadas son colorantes intercalados o bien sondas marcadas. La
modalidad ms sencilla y econmica, si bien la menos especfica, es el colorante SYBR
Green. Las sondas fluorescentes ms usadas son de tres tipos: sondas con actividad 5'
nucleasa (TaqMan), molecular beacons y sondas FRET. Las tres se pueden aplicar en
microbiologa clnica, aunque las sondas FRET son conceptualmente las ms complejas.

FLUORESCENCIA GUIADA POR LUZ ANGULADA RITF-LA

El sistema diseado integra tecnologa de punta en las reas de biologa molecular,
ptica, electrnica y software embebido en un equipo porttil. La tecnologa se vale del
empleo de la reflexin interna total de fluorescencia guiada por luz angulada (RITF-LA)
que genera una onda evanescente guiada por una luz angulada incidente en un
portaobjetos para detectar cadenas de cidos nucleicos, empleando sondas de
oligonucletidos en forma de faros moleculares (FM) impresos sobre vidrios a manera de
microarreglos. El equipo es porttil, lo que permite que este se emplee en hospitales,
centros de salud, aeropuertos y otras reas de concentracin humana en los que se

requiera diagnstico inmediato. Revela la presencia de cidos nucleicos de inters en el

rango de segundos.
El mercado de la biomedicina est necesitado de nuevos sistemas de deteccin que
posibiliten su utilizacin masiva en la prctica sanitaria, dando pasos hacia la medicina
personalizada. La investigacin en genmica y farmacogenmica precisa de tecnologa
para la deteccin de ADN de elevada sensibilidad y fiabilidad a un costo razonable.

HIBRIDACIN DE LAS CADENAS DE ADN

La hibridacin del ADN (unin de dos hebras complementarias de ADN) es el proceso
ms comn para analizar y detectar un gen particular o un segmento de un cido
nucleico. Dentro de los mtodos basados en hibridacin, los bo-sensores (instrumento
para la medicin de parmetros biolgicos) de ADN.
El acoplamiento entre estos bo-sensores de ADN y las tcnicas de amplificacin por
PCR pueden proporcionar una gran sensibilidad para la deteccin de secuencias de
cidos nucleicos (ADN y ARN).

Bibliografa

http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologiaclinica-28-articulo-utilidad-diagnostica-deteccion-acidos-nucleicos-13093871
http://www.hemobaires.org.ar/pdfs/7-Aplicaciones%20de%20diagnostico
%20molecular%20-%20Dra%20Liliana%20Di%20Tullio%20Budassi%201808-2010.pdf
http://www.innovacion.unam.mx/images/trans_fichas/medicina/Metodo_y_a
parato.pdf
https://books.google.com.mx/books?
id=NVVtJcqvVxgC&pg=PA49&lpg=PA49&dq=aislamiento+de+acidos+nuclei
cos&source=bl&ots=OIZJXCz1LH&sig=DSblK9Kecx_cBnt9a5CZukCa4s&hl=es419&sa=X&ved=0ahUKEwjwwIf2vrrLAhXGlIMKHXIEBVoQ6AEIJzAC#v=on
epage&q=aislamiento%20de%20acidos%20nucleicos&f=false
http://eduardo-pastrana.blogspot.mx/2010/04/los-acidos-nucleicos-temapara-el-14-de.html
http://www.uv.es/tunon/pdf_doc/AcidosNucleicos_veronica.pdf