4.

aplicacin y usos
Desinfectantes utilizados en la industria alimentaria: caractersticas, modo de
actuacin y aspectos que inciden en su eficacia

La desinfeccin de las superficies y ambientes en la industria alimentaria es

fundamental para garantizar la inocuidad de los alimentos, evitar que puedan causar
toxiinfecciones alimentarias y conseguir una mayor vida comercial del producto. Todos
los equipos y utensilios de las zonas de trabajo deben ser desinfectados para asegurar
que se alcanzan unas condiciones higinicas suficientes para lograr este objetivo. Por
ello, es importante conocer las materias activas biocidas disponibles y los diferentes
productos formulados con ellas, as como sus caractersticas e idoneidad de aplicacin
en cada caso concreto. Betelgeux, como empresa especializada en el diseo,
formulacin, fabricacin y aplicacin de desinfectantes en la industria alimentaria,
dispone en su catlogo de una amplia gama de formulados biocidas que cubren todas las
necesidades de sus clientes.
La accin biocida de los desinfectantes sobre las superficies de la industria alimentaria
est influida por numerosos factores, como tiempo de contacto, temperatura de
aplicacin, concentracin, tensin superficial de la solucin desinfectante, pH, nmero y
localizacin de los microorganismos o tipo de microorganismo objetivo. En la prctica,
adems de los factores enumerados, tambin influye enormemente la eficacia de la fase
de limpieza previa, en la separacin de la suciedad orgnica e inorgnica de las
superficies de trabajo que deben ser desinfectadas. La accin de los detergentes debe
conseguir la separacin de la suciedad y de gran parte de los microorganismos de las
superficies. El hecho de que un microorganismo sea separado de su soporte aumenta la
superficie de contacto con el desinfectante, e incrementa su eficacia biocida. Por si sola,
la limpieza es capaz de eliminar el 80% de la carga microbiana, la desinfeccin de las
superficies debe conseguir una reduccin de la contaminacin microbiana de alrededor
del 95%. No debe confundirse desinfeccin con esterilizacin, esta ltima puede
conseguir reducciones de un 99,999%.

El desinfectante tiene como objetivo atacar a los elementos vitales del microorganismo,
lograr su destruccin y, por tanto, causar la lisis de la clula. En la industria alimentaria,
debe conseguir la eliminacin de los microorganismos patgenos, y la reduccin hasta
niveles considerados aceptables de los microorganismos alterantes.
La clasificacin de los desinfectantes est basada, esencialmente, en la materia activa
biocida con la que se formulan. En ocasiones, en una misma formulacin pueden
encontrarse dos materias activas, por ejemplo, existen desinfectantes que combinan
glutaraldehido con amonios cuaternarios, como el DECTOCIDE SB5 desarrollado por
Betelgeux ; o perxido de hidrgeno y cido peractico, como el BETELENE OX150.

Tipos de microorganismos de inters en la industria alimentaria

Antes de desarrollar un plan de desinfeccin es conveniente definir el tipo de
microorganismos sobre los que se desea actuar, para prevenir o reducir su presencia en
las superficies, ambientes e instalaciones de las salas de trabajo. En muchos casos, el
desinfectante debe ejercer su accin sobre ms de un tipo de microorganismo.
En la industria alimentaria es posible encontrar cuatro grupos microbianos que pueden
causar toxiinfecciones en los consumidores:

Mohos y levaduras.

Micobacterias.

Virus (Encapsulados o no)

Bacterias (Gram +, Gram y en forma esporulada).

Cada uno de estos grupos de microorganismos tiene caractersticas biolgicas

especficas que influyen sobre su capacidad para adaptarse a la presencia de agentes
desinfectantes.
Los microorganismos: bacterias, micoplasmas, mohos y virus estn envueltos por una
membrana citoplasmtica. Esta membrana delimita al microorganismo del medio
externo, y tiene gran importancia en los intercambios moleculares entre el interior de la
clula y el exterior, adems de ejercer un efecto protector de la misma.
La membrana citoplasmtica est compuesta, fundamentalmente, por una doble capa
lipdica en la que se insertan protenas, y est formada por fosfolpidos. En la parte
central de la bicapa de lpidos se encuentra una zona hidrfoba y en la periferia presenta
una parte hidrfila. Estas caractersticas influyen sobre la resistencia a los principios
activos biocidas.

Caractersticas de los microorganisms

Bacterias

Las bacterias tienen capacidad de sintetizar una pared anexa a la membrana

citoplasmtica. Esta pared presenta diferencias entre distintos tipos de bacterias y
permite diferenciarlas en bacterias Gram + y bacterias Gram -. Una primera diferencia
entre ellas se aprecia al comparar el espesor de la pared en ambos tipos de bacterias, en
las bacterias Gram +, como en Estafilococos aureus, el espesor oscila entre 20-80 nm; en
tanto que en bacterias Gram -, como Escherichia coli, su espesor oscila entre 10-15 nm.

Sin embargo, la pared de las bacterias Gram es ms compleja que las de las bacterias
Gram +. Este mayor complejidad proporciona a la pared un mayor grado de
impermeabilidad a las sustancias, excepto para aquellas que pueden penetrar por los
poros de las clulas. Por tanto, las bacterias Gram son menos sensibles a los
desinfectantes que las bacterias Gram +.

Adems, ciertas bacterias, como Bacillus spp y Clostridios spp, son capaces de formar
esporas cuando el medio que les envuelve les es hostil. Las esporas constituyen, de este
modo, un medio de resistencia de las bacterias a los agentes antimicrobianos, y pueden
causar contaminaciones de los alimentos, resistir los tratamientos trmicos o de
conservacin y ocasionar toxiinfeccin alimentaria, puesto que cuando las condiciones
son favorables pueden volver al estado vegetativo con sus caractersticas iniciales y
tienen la posibilidad de multiplicarse de nuevo.

Mohos y levaduras

Las levaduras son hongos microscpicos, generalmente, unicelulares. Pueden provocar

alergias y en ciertos casos infecciones sistmicas. Su pared celular est formada por un
esqueleto de quitina que la protege de las agresiones fsico-qumicas
Los mohos son hongos microscpicos, presentes principalmente en medios hmedos.
Los principales problemas de salud que ocasionan son debidos a los compuestos
orgnicos voltiles que producen, las micotoxinas, y la contaminacin del aire por
esporas que pueden ser inhaladas. Tanto los mohos como las levaduras poseen una
resistencia a los compuestos biocidas intermedia entre las bacterias Gram + y las
bacterias Gram -.

Virus

En los virus, su membrana est formada fundamentalmente por protenas. Una primera
distincin entre los virus est basada en la presencia o no de una envoltura lipdica. Los
que la poseen se denominan virus encapsulados, frente a los virus no encapsulados que
carecen de esta envoltura. Paradjicamente, la resistencia a las materias activas biocidas
es mayor en los virus no encapsulados, pues los agentes qumicos alteran la envoltura
lipdica y los vuelve ms sensibles a su accin. Los virus no encapsulados se adaptan
mejor a los desinfectantes al carecer de esta envoltura, ser fisiolgica y
morfolgicamente ms sencillos, y por tanto ms flexibles.

Micobacterias

Las micobacterias son organismos ubicuos que se pueden encontrar en la tierra, aguas,
alimentos, en la superficie de suelos y maquinaria. Algunas son muy conocidas, como el
Mycobacterium tuberculosis, causante de la tuberculosis. Las micobacterias, adems de
poseer una pared compleja, producen una pared de naturaleza crea, que proporciona
gran resistencia a la desecacin, y por tanto la posibilidad de sobrevivir en el medio
ambiente durante aos, adems de incrementar su resistencia a los desinfectantes.

Factores de resistencia de los microorganismos a los desinfectantes

El factor de mayor incidencia en la resistencia de los microorganismos a las materias
activas biocidas es la composicin de la pared celular. Esta resistencia tiene un carcter
innato y determina el espectro de actividad de los desinfectantes. En funcin de las
caractersticas morfolgicas de los microorganismos, descritas en el punto anterior, cada
grupo microbiano reacciona de distinto modo a los desinfectantes. Russel (1997) estudia
esta diferencia entre diferentes microorganismos, observando que los virus
encapsulados son muy sensibles a los desinfectantes, en tanto que las esporas son
extremadamente resistentes. Despus de los virus encapsulados, la mayor sensibilidad
es, por este orden, para las bacterias Gram +, mohos, bacterias Gram - , virus no
encapsulados, y micobacterias.
Adems de la resistencia innata en funcin de los factores morfolgicos, los
microorganismos pueden desarrollar resistencia a los productos biocidas, denominada
resistencia adquirida. La incidencia de este tipo de resistencia a los desinfectantes es
muy inferior a la que se presenta frente a los antibiticos, debido a que la actividad
antimicrobiana que realizan estos ltimos se ejerce sobre una zona objetivo de la clula,
en tanto que la accin biocida de los desinfectantes es ms difusa y no puede sealarse
un nico punto de actuacin, lo que minimiza en cierto modo la presencia de
microorganismos resistentes a los principios activos desinfectantes.
La resistencia adquirida es el resultado de un cambio a nivel del genoma, que provoca
una mutacin y posterior seleccin de los microorganismos por el desinfectante, es
decir, se produce una seleccin natural de los microorganismos que han adquirido el
nuevo carcter gentico. Una mutacin espontnea a nivel de un cromosoma puede
otorgar a un organismo un carcter que le proporcione resistencia a una materia activa
biocida, posteriormente, al multiplicarse transmite el gen de la resistencia, este carcter
ser cada vez ms dominante en la poblacin presente en la industria, siempre que se
efecte la desinfeccin de sus instalaciones con el mismo principio activo, y se vayan
eliminando los microorganismos que no posean la mutacin.

Las modificaciones en el material gentico que permiten a los microorganismos

adaptarse, actan a distintos niveles: produccin de nuevos enzimas resistentes, cambios
en la estructura interna de la clula, modificacin de la permeabilidad de la membrana
citoplasmtica y modificacin de la estructura de la pared celular. Estos cambios
producen un incremento de la resistencia de los microorganismos, a las concentraciones
usuales de empleo de los desinfectantes. En ocasiones, adems, una disminucin de las
dosis utilizadas del producto desinfectante puede comportar una mayor supervivencia de
las bacterias. En este sentido, se ha demostrado que la utilizacin sistemtica de
concentraciones

subletales

de

desinfectantes

puede

potenciar

este

problema

(Underwood et al, 2007), facilitando en ciertos casos la formacin de esporas. Con el

objetivo de mantener una concentracin efectiva del desinfectante, es importante
corregir las causas que pueden disminuir su eficacia: presencia de materia orgnica y
suciedad sobre las superficies a tratar, la caducidad del producto (ej. Clorados) con la
consiguiente prdida de concentracin y eficacia, reducido tiempo de actuacin antes
del enjuague final, utilizar las dosis recomendadas por el fabricante, monitorizar
peridicamente las dosis reales aplicadas, etc. Todo ello justifica, en ocasiones, la
necesidad de efectuar rotaciones entre las desinfectantes con distintas materias activas.
A continuacin se hace una revisin de materias activas que se utilizan en la
formulacin de los desinfectantes, y su modo de accin sobre los microorganismos.

Tipos de desinfectantes y accin frente a los microorganismos.

Desinfectantes clorados

La accin microbiocida la realiza el cloro, que es un gas que no puede utilizarse en la

formulacin de los compuestos, por ello un medio para utilizarlo es mediante la reaccin
con productos custicos, lo que da lugar a la formacin de hipoclorito de sodio, que es la
base de numerosos desinfectantes (BETELCHLOR 35, BETELCHLOR 65,
BETELCHLOR 55 EC). Su poder desinfectante proviene de sus propiedades oxidantes
debido a la presencia del ion ClO-, que ataca la membrana citoplasmtica. El hipoclorito
de sodio NaClO es una sal del cido hipocloroso HOCl. En solucin, el hipoclorito de
sodio se disocia en iones sodio Na+ y ClO-.

La forma biocida ms eficaz, el cido hipocloroso (HOCl), necesita la adicin de

un tomo de hidrgeno (H) que toma del agua. Para preservar su eficacia biocida
es necesario mantener las superficies hmedas, pues a medida que estas se secan,
el agua desaparece, y la reaccin se desplaza hacia la forma menos eficaz (OCl -).
Por ello, es necesario conservar las superficies hmedas durante el tiempo de
contacto previsto para lograr la mxima eficacia biocida y esporicida, en caso
contrario no se producirn ms que vapores de cloro, sin el efecto desinfectante
deseado. Los desinfectantes clorados son efectivos frente a todas las bacterias
vegetativas, virus, y, a mayores concentraciones, esporas bacterianas, levaduras y
mohos.
La principal ventaja de los productos clorados es su bajo coste y que poseen un amplio
rango de actuacin frente a los microorganismos. Son eficaces a baja temperatura y,
generalmente, no tienen actividad residual. Su principal desventaja es su inestabilidad,
tanto frente a las condiciones ambientales (luz y calor) como en presencia de materia
orgnica, inconvenientes que se intenta minimizar en los formulados desinfectantes.

Glutaraldehido

Los productos formulados con glutaraldehido (DECTOCIDE VA15, DECTOCIDE

SB5) son biocidas de amplio espectro, con eficacia frente a bacterias, mohos, virus, y
tambin frente a micobacterias; adems, cuando la solucin es alcalina (pH 7,5 a 8,5) se
activa y posee actividad esporicida. Actan mediante la alquilacin de los grupos
qumicos de las protenas y cidos nucleicos de las bacterias, virus y hongos. El
glutaraldehido acta sobre las protenas por desnaturalizacin, y sobre los cidos
nucleicos y las protenas por alquilacin. A nivel de los cidos nucleicos, la reaccin es
irreversible. Sobre la pared celular, el glutaraldehdo acta a nivel de los puentes
cruzados del peptidoglicano. La reaccin con nucletidos receptivos tiene lugar
rpidamente y el equilibrio se inclina hacia la hidroximetilacin.

Frmula
glutaraldehido

del

Sales de amonios cuaternarios

Los productos de reaccin de las aminas terciarias con haluros de alquilo se conocen con
el nombre de sales de amonio cuaternarios. Estos compuestos tienen cuatro tomos de
carbono unidos a un nitrgeno mediante enlaces covalentes o tres tomos de carbono de
los que uno de ellos est unido al nitrgeno mediante un enlace de naturaleza
electrosttica. Cuando uno de los radicales es una cadena alqulica grasa,
estos compuestos poseen carcter tensioactivo y pertenecen al grupo conocido como
tensioactivos catinicos. Los compuestos de amonios cuaternarios son bactericidas,
fungicidas y virucidas. Su actividad la desarrollan tanto sobre el medio cido como
alcalino, aunque en ste ltimo muestra mejores acciones. De los derivados del amonio
cuaternario, el cloruro de benzalconio fue el primer compuesto de este tipo introducido
en el mercado, con buena actividad bactericida (DEXACIDE B10 es una formulacin
de Betelgeux basada en cloruro de benzalconio). Los compuestos de amonio cuaternario
poseen una buena actividad como detergente y permanecen activos incluso en presencia
de agua dura. Su eficacia biocida se consigue por su capacidad de penetracin en las
membranas de los microorganismos gracias a las cadenas carbonadas (hidrfobas). A
travs del nitrgeno catinico (hidrfilo) interaccionan con los fosfatos de los
fosfolpidos, causando la salida al exterior del material vital citoplasmtico, tambin
inhiben la cadena respiratoria e inactivan enzimas celulares esenciales para el
crecimiento, produciendo la lisis celular.

La longitud de las cadenas alqulicas es determinante del poder microbiocida de una sal
de amonio cuaternario. Sin embargo, los resultados no son extrapolables de unos
compuestos a otros. Mientras que, por ejemplo, en los cloruros de benzalconio las
cadenas entre 14 y 16 tomos son las ms efectivas, en las sales dialqulicas son las
cadenas de menos atmos de carbono las que presentan mayor comportamiento
microbiocida. Combinaciones sinrgicas de distintos amonios cuaternarios (como
QUACIDE MC7 formulado por Betelgeux) pueden incrementar la actividad biocida
del formulado e incrementar su espectro de actuacin.

Frmula de cloruro de benzalconio

Alcoholes

Los alcoholes han sido conocidos desde la antigedad y usados en Medicina, aunque la
sntesis del etanol no se realiz hasta mediados del siglo XIX (1855). Sus principales
caractersticas, adems de las antimicrobianas, es la de ser buenos solventes de otros
productos, entre ellos muchos antispticos y desinfectantes, potencindolos en su
actividad. Al aumentar el nmero de carbonos se incrementa su eficacia antimicrobiana,
pero tambin su toxicidad, por lo que slo se emplean los de bajo peso molecular: etanol
o alcohol etlico e isopropanol o alcohol isoproplico. La actividad depende de la
concentracin, pero su grfica es una V invertida, por lo que el mximo de eficacia lo
obtienen los que poseen una concentracin entre el 60-80%. Las concentraciones ms
usuales varan entre el 70% y el 96% para el alcohol etlico y entre el 70% y el 100%
para el alcohol isoproplico.
Los alcoholes poseen una rpida accin, incluso desde los 15 segundos, aunque no tienen
efecto persistente, y un amplio espectro de actividad, actuando sobre bacterias gram
negativas y gram positivas, incluyendo micobacterias, hongos y virus (hepatitis B y VIH).
La accin microbicida se atribuye a la entrada a travs de la pared, membrana celular y
con la inactivacin de enzimas, mediante rotura de esas barreras y desnaturalizacin, en
el citoplasma, de protenas esenciales para el microorganismo. Su eficacia est
relacionada con la presencia de agua, ello se debe a que estos compuestos acuosos
penetran mejor en las clulas y bacterias permitiendo as el dao a la membrana y la
rpida desnaturalizacin de las protenas, con la consiguiente interferencia con el
metabolismo y lisis celular.

Los alcoholes asociados a otros productos como amonios cuaternarios, potencian el

efecto de accin caracterstico de estos compuestos, como ocurre en el formulado
desarrollado por Betelgeux, DECTOCIDE H21, combinacin sinrgica entre amonios
cuaternarios y alcohol isoproplico; en algunas formulaciones, como DECTOCIDE
H24 LB, se encuentra una combinacin de alcohol isoproplico y aditivos alimentarios.

Perxido de hidrgeno

El perxido de hidrgeno, conocido tambin como agua oxigenada, es un agente

qumico lquido, incoloro a temperatura ambiente, con sabor amargo, y que posee
propiedades antispticas. El perxido de hidrgeno tiene efectos oxidantes por producir
OH-

y radicales libres, los cuales atacan a los componentes esenciales de los

microorganismos como lpidos, protenas y ADN. Se degrada rpidamente en oxgeno y

agua, y es un agente oxidante de efecto fugaz por ser descompuesto por las catalasas de
los tejidos celulares. Es activo frente a bacterias y virus, segn la concentracin y
condiciones de utilizacin. Estudios in vitro de soluciones de perxido de hidrgeno al
3% han mostrado amplio espectro de eficacia, con mayor actividad frente a bacterias
gram positivas. En ocasiones, se presenta en formulaciones combinado con cido
peractico (BETELENE OX50 y BETELENE OX150), aunque tambin se puede
encontrar slo (BETELENE ALCOX), aadiendo a su carcter biocida un efecto
blanqueante de las superficies, o coadyuvante en soluciones alcalinas de limpieza en
circuitos CIP.

cido peractico

El cido peractico es un antisptico de tipo oxidante, mezcla de cido actico y

perxido de hidrgeno en solucin acuosa. Se obtiene por oxidacin a partir de
acetaldehdo y oxgeno en presencia de acetato de cobalto. Tambin puede obtenerse
tratando anhdrido actico con perxido de hidrgeno. La actividad desinfectante del
cido peractico radica en su capacidad oxidante sobre la membrana externa de las
bacterias, endosporas y levaduras. El mecanismo de oxidacin consiste en la
transferencia de electrones de la forma oxidada del cido a los microorganismos,

provocando as su inactivacin o incluso su muerte. Ejerce su actividad al

descomponerse en cido actico, perxido de hidrgeno y oxgeno
A bajas concentraciones (0,1-0,2%) posee una rpida accin biocida frente a todos los
microorganismos. Es activo frente a bacterias, hongos, levaduras, endosporas y virus. A
concentraciones inferiores a 100 ppm inhibe y mata a bacterias Gram positivas, Gram
negativas, micobacterias, hongos y levaduras en 5 minutos o menos. Algunos virus son
inactivados por 12-30 ppm en 5 minutos, mientras que otros requieren 2.000 ppm
durante 10-30 minutos. La Concentracin Mnima Esporicida (CME) del cido
peractico es de 168-336 ppm (son necesarias 1-2 horas de contacto). Es ms activo
sobre las esporas cuando se combina con perxido de hidrgeno. Se ha demostrado que
la combinacin de 21 ppm de cido peractico (que ya contiene aproximadamente un
5% de perxido de hidrgeno en su composicin) y 2813 ppm de perxido de hidrgeno
elimina todos los microorganismos de fibras porosas tras 2-3 horas de contacto.
Debido a su carcter no espumante, son muy utilizados en la desinfeccin de circuitos e
instalaciones cerradas. Generalmente, se presenta en formulaciones con 15% de cido
peractico (BETELENE OX150) y 5% de cido peractico (BETELENE OX50).

Frmula del cido peractico

Biguanidas polimricas (PHMB)

Las biguanidas son principios activos que poseen un amplio espectro de actividad y son
muy efectivas frente a Pseudomonas spp, por ello se recomienda su uso, especialmente,
para industrias de envasado de agua. El mecanismo de accin de PHMB ha sido descrito
en numerosos artculos. Se ha demostrado que su mxima actividad biocida se produce a
pH entre 5-6, e inicialmente el biocida interacciona con la superficie de la bacteria, y es
transferido a la membrana citroplasmtica y el citoplasma, donde reacciona con los
fosfolpidos, provocando un aumento de la permeabilidad, con liberacin de
lipopolisacridos, iones potasio y causa la muerte de la clula. Betelgeux utiliza esta
materia activa en la formulacin de desinfectantes, como QUACIDE P20.

Aminas terciarias

Presentan una elevada accin mojante, solubilizante y emulsionante. Poseen un elevado

espectro de actividad biocida, especialmente a pH alcalinos. Su modo de accin es
mediante interaccin con las cargas negativas de la pared celular, afectando a las
protenas tanto estructurales como enzimticas, afecta a las reacciones metablicas de
las clulas y altera su permeabilidad causando finalmente su muerte. Las aminas
terciarias pueden formularse junto a otros principios activos, como biguanidas
polimricas, consiguiendo un efecto sinrgico (como en el desinfectante QUACIDE
PQ60 EC), de amplio espectro de actuacin y que, dado su bajo nivel de formacin de
espuma, puede utilizarse en desinfeccin de circuitos e instalaciones CIP.

cidos y lcalis

Las soluciones alcalinas y cidas son altamente bactericidas. Los cidos orgnicos dbiles, como el
cido lctico (utilizado en la formulacin de productos como QUACIDE DA80 y BETELENE
SP20), ejercen un efecto mayor del que sera explicable por su pH: la presencia de molculas
altamente permeables y no disociadas promueven la penetracin del cido en la clula. La eficacia de
los agentes cidos y alcalinos est ligada a la concentracin de iones H + y OH-. Los iones H+
destruyen los aminocidos que estn enlazados con los cidos nucleicos, modifican el pH
citoplasmtico y precipitan las protenas. Los iones OH - saponifican los lpidos de la membrana,
ocasionando la destruccin de la estructura superficial. A pH elevados se desorganiza la estructura de
pptidoglucano y se produce la hidrlisis de los nucletidos.

5. Aplicacin y usos
La industria alimentaria
El reglamento comunitario 852/2004 de 29 de abril de 2004 sobre higiene de los productos alimenticios
establece la obligatoriedad de las empresas alimentarias de crear, aplicar y mantener un sistema de
autocontrol basado en el Anlisis de Peligros y Puntos de Control Crtico (APPCC). Uno de los
aspectos esenciales del sistema APPCC es la higiene, ya que la calidad del producto depende de la
limpieza que presenten los equipos y utensilios, as como las instalaciones.
Un programa de higienizacin debe establecer prioridades en funcin de si se trata de superficies que
contactan con alimentos (incluyendo manos de manipuladores), superficies de contacto espordico o
superficies que nunca contactan.

Adems, tiene que garantizar:

Que los locales estn limpios a la hora de comenzar a trabajar.

Que el equipo y los utensilios de trabajo estn limpios al inicio de la jornada y que se limpien
durante su utilizacin, cuando se contaminen y al finalizar la produccin.

Que los productos alimentarios no se contaminen durante la limpieza.

Que los detergentes y desinfectantes (o sus restos) no entren en contacto directo o indirecto con
el alimento y, adems, que no se produzca la recontaminacin de superficies.
El personal de limpieza debe conocer exactamente cul es su funcin y cmo realizarla ptimamente
(manejo de los equipos y aplicacin de los detergentes y desinfectantes apropiados), adems de tener
asignadas unas funciones concretas que sern supervisadas por un responsable.
OBJETIVOS DE LA LIMPIEZA Y DESINFECCIN
La limpieza y desinfeccin son operaciones dirigidas a combatir la proliferacin y actividad de los
microorganismos que pueden contaminar los alimentos y ser causa de su deterioro.
La limpieza es la ausencia de suciedad y su propsito es disminuir o exterminar los microorganismos.
Desinfectar, por su parte, puede definirse como eliminar en parte el nmero de bacterias que se
encuentran en un determinado ambiente o superficie, de tal forma que no sea nocivo para las personas.
Si tratamos de eliminar todas las bacterias, microorganismos y formas vivas posibles, estaramos
hablando de esterilizacin.
Los programas de limpieza y desinfeccin debern asegurar que todas las partes de las instalaciones
estn debidamente limpias, incluido el equipo de limpieza.

Deber vigilarse de manera constante y eficaz, y cuando se preparen por escrito programas de limpieza,
deber especificarse lo siguiente: superficies, elementos del equipo y utensilios que han de limpiarse,
responsabilidad de tareas particulares, mtodo y frecuencia de la limpieza y medidas de vigilancia.
Cuando sea preciso, los programas se redactarn junto con los asesores especializados.

OPERACIONES PRELIMINARES
Antes de manipular cualquier superficie o alimentos, y siempre que se considere necesario, los
operarios se lavarn las manos con un producto bactericida. Es conveniente secarlas con toallas de un
solo uso.
El personal debe ir siempre equipado con gorro y uniforme limpio y adecuado para las tareas que
desempea. Se recomienda utilizar una mascarilla en caso de riesgo de contagio.
Las Administraciones Pblicas, como, por ejemplo, la Generalitat de Catalunya, publican catlogos o
guas en las que describe el contenido que debe tener el protocolo a elaborar por las empresas y que
pueden usarse de guin a la hora de redactarlo.
PROCEDIMIENTOS Y MTODOS DE LIMPIEZA
La limpieza puede realizarse utilizando varios mtodos, fsicos y qumicos. Los procedimientos de
limpieza consistirn en:

Eliminar los residuos grandes de las superficies.

Aplicar una solucin detergente para despegar la capa de suciedad y de bacterias.

3

Aclarar con agua, para eliminar la suciedad adherida y los restos de detergente.

Desinfectar en profundidad si la zona o equipo lo requiere.

TIPOS DE SUCIEDADES
Suciedades grasas, residuos no grasos, incrustaciones calcreas y aparicin de flora bacteriana son las
ms comunes con las que nos encontramos en cualquier rea donde se traten o elaboren alimentos, y
pueden dar lugar a contaminaciones como salmonella, estafilococo, escherichia, coli y otras bacterias.
Este problema se presenta principalmente en los denominados puntos crticos, para los que
seguidamente se describen las operaciones de limpieza adecuadas:

Superficies, pavimentos y paredes. Se debe realizar la limpieza a diario, primero eliminando los
residuos y, a continuacin, aplicando un eficaz detergente.

Campanas extractoras, planchas, freidoras y filtros. Se deben limpiar diariamente con un

producto desengrasante especfico para superficies en contacto con los alimentos. Asimismo, se debe
realizar peridicamente la eliminacin de grasas carbonizadas.

Cmaras frigorficas. Se debe desconectar los equipos, en la medida de lo posible, retirar todas
las partes mviles y limpiarlas con detergente. Este producto tambin se aplica en las paredes e interior
de la cmara y, una vez que haya actuado, se aclara para eliminar restos del detergente. Se debe dejar
secar con las puertas de la cmara abiertas. Peridicamente, se realizar una desinfeccin.

tiles de trabajo y mquinas desmontables. Al final de cada turno de trabajo, se realizar una
limpieza de utensilios y mquinas, aplicando detergente higienizante. Es conveniente el uso de
desinfectantes regularmente.

Lavadero. La limpieza se realizar diariamente con un detergente desinfectante.

Cubos de basura. Se deben limpiar a diario y realizar una desinfeccin semanal.

La tarea diaria garantiza eficacia en la higiene de los establecimientos, aunque lo habitual es aplicar un
sistema especfico y personalizado para cada industria.
Mediante el R.D. 2207/1995, se establece la obligatoriedad de realizar controles en aquellas reas que
comporten riesgos de falta de higiene en el tratamiento de los alimentos, no solo para el producto
acabado, sino para el conjunto de procesos que intervienen en la cadena de produccin.

SISTEMAS DE LUCHA CONTRA LAS PLAGAS

Las plagas constituyen una seria amenaza para la inocuidad y la aptitud de los alimentos. Pueden
producirse infestaciones de plagas cuando hay lugares que favorecen la proliferacin y alimentos
accesibles. Por este motivo, debern adoptarse buenas prcticas de higiene para evitar la formacin de
un medio que pueda conducir a la aparicin de plagas. Segn seala la Organizacin de las Naciones
Unidas para la Alimentacin y la Agricultura (FAO) en el Cdigo Internacional Recomendado de
Prcticas - Principios Generales de Higiene de los Alimentos, se pueden reducir al mnimo las
probabilidades de infestacin mediante un buen saneamiento, la inspeccin de los materiales
introducidos y una buena vigilancia, limitando as la necesidad de utilizar plaguicidas.
La disponibilidad de alimentos y de agua favorece el anidamiento y la infestacin por plagas. Las
posibles fuentes de alimentos para stas debern guardarse en recipientes a prueba de plagas y/o
almacenarse por encima del nivel del suelo y lejos de las paredes. Debern mantenerse limpias las
zonas interiores y exteriores de las instalaciones de alimentos. Cuando proceda, los desperdicios se
almacenarn en recipientes tapados a prueba de plagas.
Tanto las instalaciones como las zonas circundantes deben examinarse de forma peridica para detectar
posibles infestaciones. Si esto ocurriese, debern combatirse de manera inmediata y, por supuesto, sin
perjuicio de la inocuidad o la aptitud de los alimentos.

TRATAMIENTO DE LOS RESIDUOS

La FAO tambin apunta que se adoptarn las medidas apropiadas para la remocin y el
almacenamiento de los desechos. No deber permitirse la acumulacin de desechos en las reas de
manipulacin y de almacenamiento de los alimentos o en otras reas de trabajo ni en zonas
circundantes, salvo en la medida en que sea inevitable para el funcionamiento apropiado de las
instalaciones.
Los almacenes de residuos debern mantenerse debidamente limpios.
Cabe sealar que la industria de procesamiento de alimentos requiere una enorme cantidad de agua,
que es usada como ingrediente, agente de limpieza, para hervir y enfriar, para transportar y
acondicionar las materias primas... Y precisamente uno de los principales problemas es la cantidad de
agua residual continuamente producida en las plantas de alimentacin.
Es fundamental tambin vigilar la eficacia de los sistemas de saneamiento, verificarlos de forma
peridica, ya sea mediante inspecciones de revisin previas o tomando muestras microbiolgicas del
entorno y las superficies que entran en contacto con los alimentos, y examinarlos con regularidad para
adaptarlos a posibles cambios de condiciones.

Tecnologa
Desarrollan detergentes y productos de limpieza ms eficientes y ecolgicos
En su elaboracin se emplean hongos y bacterias y se aplican mtodos biotecnolgicos
En la actualidad, gran parte de los detergentes y otros productos de limpieza se fabrican a partir de
aceite crudo, un combustible fsil no renovable. Y aunque se ha intensificado el uso de detergentes
elaborados a partir de recursos sostenibles, gran parte de ellos an requieren compuestos producidos
qumicamente. Un desarrollo llevado a cabo por un grupo de ingenieros de la organizacin alemana
Fraunhofer-Gesellschaft permitir la produccin de detergentes ms respetuosos con el medio
ambiente. En su elaboracin se emplean recursos renovables generados a partir de la actividad de
hongos y bacterias, a travs de mtodos biotecnolgicos. Por Pablo Javier Piacente.

Una investigadora trabaja en los cultivos experimentales con un biorreactor. Fuente: Fraunhofer
IGB/Frank Kleinbach.
Los productos de limpieza, como detergentes, lavavajillas o cremas y geles de uso personal, podrn
desarrollarse con tcnicas 100% ecolgicas, empleando hongos y bacterias y haciendo uso de
diferentes mtodos biotecnolgicos. Esto ser posible gracias a un avance llevado a cabo por un
grupo de especialistas de la organizacin alemana Fraunhofer-Gesellschaft. El sistema supondr una
alternativa superadora en este campo, tanto con respecto a los detergentes elaborados con
compuestos qumicos como a los producidos mediante aceite crudo. Hasta el momento, gran parte
de la produccin de detergentes y otros artculos de limpieza depende del aceite crudo para su
desarrollo, y aunque los productores recurren cada vez ms a los detergentes elaborados a partir de
recursos sostenibles, se trata generalmente de tensioactivos producidos qumicamente. El problema
de esta alternativa es que, aunque se elimina la dependencia de un combustible fsil como el aceite
crudo, las sustancias producidas mediante procesos qumicos son adecuadas solamente para un
pequeo nmero de aplicaciones, debido a las limitaciones de su estructura molecular. Asimismo, su
carcter qumico tampoco resulta del todo respetuoso con el medio ambiente. La investigacin de la
Fraunhofer-Gesellschaft parece resolver este problema, ya que hace uso de hongos, bacterias y
procesos biotecnolgicos, incrementando la eficacia, empleando recursos renovables y bajo un
mtodo totalmente ecolgico. Este desarrollo ha sido difundido mediante una nota de prensa de la
Fraunhofer-Gesellschaft y a travs de un artculo publicado en el medio especializado Science Daily.
Biodegradables y eficientes
El enfoque de los especialistas del Fraunhofer Institute for Interfacial Engineering and
Biotechnology incluye la produccin de biosurfactantes microbianos, basados en recursos
sostenibles como el azcar y el aceite vegetal. Se utilizan los lpidos celobiosa (CL) y
mannosylerythritol (MEL), ya que las pruebas han demostrado que estas variedades son
prometedoras

para

su

aplicacin

industrial.

Se producen en grandes cantidades gracias a la accin de ciertos tipos de hongos, y adems la

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variedad celobiosa (CL) tambin tiene propiedades antibacterianas. Lo que diferencia a estos
tensioactivos biolgicos de sus competidores sintticos es su mayor diversidad estructural. Adems,
son biodegradables, son menos txicos y son tambin muy eficientes para aflojar las grasas.
A pesar de todas estas ventajas, hasta la fecha se utilizan solamente en unos pocos productos para el
hogar y cosmticos. La razn es que son costosos y difciles de producir, con bajos rendimientos en
este punto. De esta forma, los propios responsables de la investigacin desarrollada en FraunhoferGesellschaft creen que esta condicin es uno de los desafos a superar. Segn Suzanne Zibek, una de
las responsables del estudio, para que los surfactantes naturales puedan conquistar el mercado es
necesario aumentar los rendimientos de la fermentacin. Para ello, los cientficos estn optimizando
el proceso de produccin con el fin de reducir los costes de fabricacin.
Prximos pasos
Los especialistas estn cultivando actualmente los microorganismos en un biorreactor, donde crecen
en un medio de cultivo que se agita continuamente y que contiene azcar, aceite vegetal, vitaminas y
sales minerales. El objetivo es alcanzar altas concentraciones en el menor tiempo posible.
Para ello, es necesario alentar el crecimiento de los microorganismos, logrando el mayor nmero
posible de ellos. Existen numerosos factores que influyen en el resultado, como por ejemplo el
suministro de oxgeno, el valor del pH, la condicin de las clulas y la temperatura alcanzada.
La composicin del medio de cultivo tambin es crucial. Esto no tiene que ver nicamente con la
cantidad de azcar o aceite vegetal que se utiliza en la mezcla, sino tambin con la velocidad a la
que se aaden. Ya se han alcanzado concentraciones de 16 gramos por litro para la celobiosa (CL) y
de 100 gramos por litro para el mannosylerythritol (MEL), nmeros ms que auspiciosos.
El siguiente paso ser separar los compuestos biotensioactivos desde el medio de fermentacin,
adaptndolos con la ayuda de socios industriales para su uso en lquidos lavavajillas, productos
de limpieza o cosmticos. Las sustancias tambin pueden ser modificadas o mejoradas a nivel
enzimtico, para lograr condiciones especiales de acuerdo a cada producto. Otro avance incluye la
produccin de tensioactivos biolgicos a partir de productos de desecho.

5. Eco toxicidad
IMPACTO AMBIENTAL DE JABONES Y DETERGENTES

La actividad diaria en las casas y en las industrias da lugar a vertidos y escapes de estas sustancias
como consecuencia de errores humanos, errores mecnicos, descuidos y falta de inters e
informacin por cuidar el medioambiente.
Cabe destacar que, aunque ambos agentes son biodegradables, esta propiedad se ve muy
limitada si estos compuestos se encuentran en exceso en las aguas.
Hay que tener en cuenta que en la mayora de las ocasiones, el agua contaminada se filtra en el
suelo dejando en l parte de los contaminantes; otras veces, sin embargo, esos contaminantes no
quedan atrapados en los suelos y pasan a las aguas subterrneas. De esta forma, pueden resultar
afectadas extensas reas superficiales y subterrneas adems del agua marina.
Las aguas residuales no siempre salen completamente limpias de los procesos de tratamiento,
como puede verse en la figura.
El problema de los jabones
Por su parte, los jabones presentan la desventaja de que, si se usan en aguas duras, tienden a formar
sales con los cationes de los metales dando lugar a natas que neutralizan su accin. Esas sales,
tambin pueden ser insolubles, acumulndose como precipitados. El exceso de jabn utilizado
precipita en forma de sales clcicas de los cidos grasos, arrastrando consigo la parte de la suciedad
no soluble y formando emulsiones.
Otro aspecto contaminante de los jabones est basado en la lenta biodegradacin de
algunos de los compuestos que los constituyen, como los alquilbencenosulfonatos de
cadena ramificada.
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El problema de los detergentes

Debido a su gran utilidad tanto en la industria como en los hogares, se usan en gran cantidad
constituyendo una fuente contaminante del agua muy importante.
A finales de la dcada de 1960, debido al aumento de la preocupacin por la contaminacin del
agua, se estudi la composicin de los detergentes llegando a la conclusin de que contenan
compuestos qumicos dainos, como los fosfatos y, por tanto, no deban estar presentes en los
mismos. En su lugar, se propuso el uso de agentes biodegradables fcilmente eliminables y de
fcil asimilacin por algunas bacterias.
Los problemas ambientales que causan los detergentes radican, fundamentalmente, en los aditivos
que contienen como los blanqueadores, abrillantadores pticos, perfumes, bactericidas y agentes
espumantes. Los aditivos que contienen en mayor proporcin son los sulfatos (tripolifosfato de
sodio).
Efectos de los detergentes en el agua
Forman espumas: son ms abundante en presencia de sales de calcio y tambin de protenas en el
medio. Pueden contener bacterias y virus. Dificultan el tratamiento de las aguas por problemas de
operacin en las plantas depuradoras.
Inhiben la oxidacin.

Alteran de la transferencia y disolucin del oxgeno entre la superficie y el aire,

dificultando la autodepuracin de las corrientes de agua. Perturban la sedimentacin.
Impiden el desarrollo de las algas.Alteran el olor y sabor de las aguas potables
Efectos txicos que dependen del tipo de detergente, sensibilidad de los microorganismos y
condiciones del medio acutico.
Efectos de los detergentes en el suelo
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Alteran la permeabilidad del suelo facilitando la penetracin de microorganismos en las aguas

subterrneas. Efectos txicos en los cultivos debido a la presencia de detergentes en las aguas de
regado.
Detergentes con fosfatos: Eutrofizacin
Cuando se ha desechado un detergente fosfatado, los fosfatos son arrastrados por el drenaje; la mayor
parte de las plantas de tratamiento de aguas no estn diseadas para eliminar fosfatos, por tanto, stos
pasan al agua a travs del efluente.
Los fosfatos actan como nutriente para las algas y plantas acuticas, provocando la degradacin de
las aguas naturales.

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En los lagos, al aumentar la cantidad de flora acutica, se dificulta o impide el intercambio de

oxgeno y dixido de carbono. Se acumula, pues, gran cantidad de material vegetal en
descomposicin en el fondo que da lugar a hacer menos profundo el lago aumentando as su
temperatura y cantidad de nutrientes. Puesto que la descomposicin se da en ausencia de oxgeno, se
obtienen productos secundarios como metano, amonaco y sulfuro de hidrgeno que dan mal olor al
agua. Los peces tambin requieren oxgeno disuelto para sobrevivir y, como se ha consumido,
mueren. A largo plazo el lago se convierte en un pantano y ms a largo plazo, en un prado o en un
bosque. Este proceso natural se ve acelerado por la presencia de fosfatos.
A todo el proceso anterior se le denomina como eutrofizacin del agua. Este problema no es tan
importante en las aguas corrientes, aunque tambin se da en embalses, ros y mares litorales.
Detergentes sin fosfatos: Toxicidad
El nitrilo del cido triactico (NTA) posee biodegradacin cambiante que requiere oxgeno para
ello. Se liberan productos con alto contenido en nitrgeno que, adems de facilitar la
eutrofizacin del agua por ser nutrientes para las plantas, resultan txicos debido a la formacin
de compuestos con iones metlicos venenosos.
El NTA no se degrada en condiciones anaerobias como las existentes en las fosas spticas.
Descontaminacin de Aguas

En las zonas montaosas con desniveles adecuados, se usan canalizaciones en anillo en las
que se recolectan los desages de las poblaciones del entorno y se llevan fuera de los lagos. A
la salida de los mismos se purifica el agua mecnica y biolgicamente.

 Donde no es posible la canalizacin en anillo se purifican las aguas de desage. Durante la

etapa de limpieza biolgica, para eliminar los nitratos y fosfatos, se utilizan sales de hierro y
aluminio en lechada de cal que precipitan los compuestos anteriores, siendo ms fcil su
eliminacin. As se evita la eutrofizacin.

Descontaminacin de suelos
No hay tcnicas de descontaminacin especficas para suelos contaminados con detergentes y
jabones, de hecho, en algunas de ellas se utiliza agua que los contiene para tratar suelos y aguas
subterrneas contaminados por otras sustancias.
Los tratamientos dependen de la naturaleza y geometra de la contaminacin, teniendo un peso
importante el factor econmico.
Cabe destacar que ninguna de las soluciones suele resolver al 100% los problemas planteados por la
polucin, a veces porque el problema queda parcialmente resuelto y, en otras ocasiones, porque se
producen efectos indeseados sobre el suelo o agua, aunque de menor envergadura que el problema
inicial.
Condicionantes

El foco puede ser puntual o difuso.

El mecanismo puede ser un acceso directo del contaminante al acufero o un acceso difuso a
travs de una infiltracin del contaminante en el suelo. El primer caso es el ms problemtico a
simple vista, puesto que afecta ms rpida y completamente a las aguas subterrneas, pero es ms
sencillo de solucionar a mediolargo plazo porque la solucin consiste en impedir ese acceso. La
infiltracin implica menos grado de afectacin a las aguas subterrneas debido a la capacidad de
atenuacin del suelo, pero a su vez esto hace que el suelo quede afectado. Esto suele prolongar el
problema en tiempo y espacio.
El tipo de contaminante:
Sales en disolucin. los compuestos aninicos y catinicos que el agua lleva en disolucin
pueden ser captados en grado variable por los mecanismos naturales de depuracin del suelo.

Unos son ms problemticos que otros, por lo que la gama de soluciones para su eliminacin
es muy variada. Las ms tiles son la extraccin y tratamiento de las aguas contaminadas.
Contaminantes fsicoqumicos. la presencia de sales en disolucin (anteriormente visto)
frecuentemente
va acompaada de acidez, alcalinidad, condiciones redox,... La infiltracin a travs del suelo o la
naturaleza de la roca que constituye el acufero, a menudo mitiga el problema, pero ste puede
admitir diversas alternativas para remediarlo.
Otros factores a tener en cuenta con la localizacin concreta del problema (proximidad de
poblaciones, proximidad a cuencas hidrogrficas importantes) y la clase y propiedades de los suelos
afectados, que puede influir en la evolucin de la contaminacin, condicionando la aplicacin de las
formas de descontaminacin.
Contaminacin Generalizada: afecta por igual a todo un acufero o a un suelo. Suele ser
consecuencia de contaminacin difusa o directa y, por lo general, corresponde a sales en disolucin
con un potencial de difusin elevado.
Contaminacin Puntual: afecta solamente a un rea de extensin limitada y suele estar constituida
por un contaminante qumico con baja capacidad de infiltracin.
Contaminacin por Plumas: las plumas derivan de la contaminacin puntual cuando sta
persiste durante largos perodos de tiempo, o est constituida por un volumen importante de
contaminantes.

A continuacin se exponen las tcnicas ms importantes para el tratamiento de suelos y aguas

subterrneas contaminadas con detergentes y jabones, brevemente descritas.
Tcnicas de confinamiento (in situ)
Se basan en el aislamiento de las aguas o suelos contaminados para evitar que la contaminacin se
transfiera lateralmente. Se aplican cuando la contaminacin est muy localizada y no es viable
ninguna otra alternativa.
Barreras de lodo: Esquema de una seccin de sistema de barreras de lodo, en la que la barrera queda
anclada en un sustrato de baja permeabilidad.
Lechada de cemento: Esquema del proceso de inyeccin de lechada de cemento bajo una
mancha de contaminacin.

Barreras qumicas: Esquema de una barrera qumica, consistente en un producto (color verde en la
figura) que se inyecta bajo la zona contaminada.

Barreras de paneles: Instalacin de una barrera de paneles cuyas uniones quedan selladas
mediante un dispositivo mecnico.

Membranas sintticas: Extensin de una geomembrana en una zanja perimtrica respecto al rea a
aislar.

Vitrificacin in situ: Esquema de funcionamiento de un sistema de vitrificacin, sobre la base de una

corriente de alto voltaje y un sistema de recuperacin de los gases emitidos, para su tratamiento.

Tcnicas de tratamiento in situ de carcter fsicoqumico

Se aplican sin necesidad de trasladar el suelo o el agua subterrnea afectados por el problema.
Atenuacin natural controlada (MNA): se basa en el aprovechamiento y la potenciacin de los
procesos naturales para eliminar o reducir la contaminacin de suelos y aguas subterrneas. El
subsuelo se trata para que la atenuacin sea efectiva y suficientemente rpida. Incluye cuatro
formas:

Accin bacteriana: las bacterias que viven en el suelo y en las aguas subterrneas utilizan
algunas sustancias qumicas como alimento. Cuando las sustancias qumicas estn
completamente digeridas, las transforman en agua y en gases inofensivos.

 Sorcin: Las sustancias qumicas se pegan o sorben al suelo, que las fija al lugar. De ese modo no
se eliminan las sustancias qumicas pero s se impide que contaminen las aguas subterrneas y que
escapen del lugar, al menos mientras las condiciones fsicoqumicas del suelo permanezcan
estables.

 Mezcla y dilucin: Al pasar las aguas subterrneas a travs del suelo, la contaminacin se puede
mezclar con el agua limpia. De ese modo se diluye la contaminacin.

Evaporacin: Algunas sustancias qumicas, como el petrleo y los solventes, se evaporan, lo que
significa que se convierten de lquidos a gases dentro del suelo. Adems, si esos gases escapan al
aire en la superficie del terreno, la luz del sol puede destruirlos.

Barreras selectivas permeables: Se instalan donde se ha identificado un flujo de aguas

subterrneas contaminadas para su depuracin.

Extraccin de vapores del suelo y aireacin del suelo: Son dos tcnicas que suelen ir ligadas. Se
emplean para extraer contaminantes qumicos del suelo vaporizndolos.

Tcnicas ex situ
Consisten en extraer la parte de suelo contaminada, tratarla para eliminar el
contaminante y devolver el suelo a su lugar original si est totalmente descontaminado.
Desorcin trmica: Calentamiento del suelo en una
unidad de desorcin. Extraccin con solventes:
Empleo de productos disolventes.
Si no hay alternativa para descontaminar un suelo, ste se extrae mediante
excavacin y se lleva a un almacenamiento de residuos.

Conclusin
Se ha realizado una revisin de los factores que pueden influir en la desinfeccin de
superficies y ambientes de la industria alimentaria. en la aplicacin industrial, adems
de los parmetros ya mencionados, tambin es importante conocer determinados
aspectos que pueden incrementar la persistencia de los microorganismos en los equipos
e instalaciones de las industrias, como la formacin de biofilms, diseo de la
maquinaria, rugosidad de las superficies, etc. Por ello, debern implementarse
protocolos que contemplen todos estos factores con el fin de alcanzar el mayor grado de
higiene posible que garantice la seguridad de los alimentos y su mayor vida comercial.

Bibliografa
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