La tcnica ms usada es la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC),

por su sensibilidad, fcil adaptacin a las determinaciones cuantitativas

exactas, su idoneidad para la separacin de especies no voltiles y su
aplicacin a sustancias de primordial inters en la industria, como son los
aminocidos, protenas, cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, entre
otros.

La HPLC se puede utilizar como tcnica preparativa y como tcnica analtica,

permitiendo la purificacin, identificacin y cuantificacin del analito
deseado. La eleccin de la fase estacionaria y la fase mvil, del flujo al que
se va a impulsar la fase mvil a travs de la fase estacionaria e incluso de la
temperatura a la que se va a realizar la cromatografa, permitirn una
correcta separacin del analito de otros compuestos. Cada componente de
una solucin tiene unas caractersticas determinadas bajo ciertas
condiciones cromatogrficas, y debe conseguirse que la migracin del
componente y de los contaminantes a travs de la columna sea lo
suficientemente distinta para que dicho compuesto sea separado de los
dems del extracto, para permitir su posterior identificacin y cuantificacin.
A este proceso se le denomina purificacin.
Campos de Aplicacin de HPLC
Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos
Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos
Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos, propulsores,
colorantes

Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB

Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos

Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina, estrgenos.

Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa

Separacin y purificacin de metabolitos

Separacin y purificacin de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras de

orina

Purificacin y separacin de enantimeros

Purificacin de compuestos naturales

Purificacin y caracterizacin de enzimas y protenas

Esta tcnica esta indicada para la separacin de compuestos orgnicos

semivlatiles. Hidrocarburos Poliaromticos (PAHs), Aminocidos: OTA, cido
Flico, Herbicidas, Vitaminas, Acido tenuazonico, Formaldehdoetc. Rango
de trabajo para muestras lquidas: g L-1 - mg L-1 Rango de trabajo para
muestras slidas: g Kg-1 - g g

Deteccin

La eficiencia de un detector cromatogrfico depende de la relacin entre la cantidad

fsica medida y la composicin del efluente, as como tambin de lascaractersticas
de las seal de transferida.
Los detectores en cromatografia de lquidos son de dos tipos bsicos. Los detectores
basados en una propiedad de la disolucin responden a una propiedad de la fase
mvil, tal como el ndice de refraccin, la constante dielctrica, o la densidad, que
se modifica por la presencia de los analitos. Por contraste, los detectores basados
en una propiedad del soluto responden a alguna de las propiedades del soluto,
como la absorbancia UV, fluorescencia, o intensidad de difusin, que no son propias
de la fase mvil.
Detectores de absorbancia de infrarrojo
Una de las mayores limitaciones al uso de los detectores de infrarrojo se debe a la
baja transparencia de muchos de los disolventes que se utilizan. Por ejemplo, las
bandas anchas de absorcin infrarroja del agua y de los alcoholes impiden
prcticamente el uso de este detector para muchas aplicaciones.
Detectores de fluorencia
Una ventaja inherente a los mtodos de fluorescencia es su alta sensibilidad, que
resulta ser ms de un orden de magnitud mayor que la de los sistemas de
absorbancia. En cromatografa de lquidos se ha aprovechado esta ventaja para la
separacin y determinacin de los componentes fluorescentes de las muestras.
Detector ndice de refraccin
Los detectores de ndice de refraccin tienen la ventaja de que responden a casi
todos los solutos. Es decir, son detectores universales anlogos a los detectores de
llama en cromatografia de gases. Adems, son fiables y no dependen del caudal.
Sin embargo, son muy sensibles a los cambios de temperatura, y se han de
mantener a una temperatura constante en unas pocas milsimas de grado
centgrado.
Detectores electroqumicos
Los fabricantes de instrumentos proporcionan en la actualidad varios tipos de
detectores electroqumicos. Estos dispositivos se basan en cuatro mtodos
electroanalticos que incluyen la amperometra, la voltamperometra, la
coulombimetra y la conductimetra.
Una de las mayores ventajas de este tipo de detector es que su respuesta resulta
ser aproximadamente la misma para todos los solutos no voltiles. Adems es
notablemente ms sensible que el detector de ndice de refraccin
En la cromatografa de lquidos no hay detectores tan aplicables universalmente ni
tan fiables como los detectores de ionizacin de llama y de conductividad trmica.
Uno de los mayores retos en el desarrollo de la cromatografa de lquidos ha sido el

perfeccionamiento de los detectores. Un detector ideal para cromatografa de

lquidos debera poseer todas las propiedades listadas en relacin con la
cromatografa de gases, con la excepcin de que un detector para cromatografa de
lquidos no es necesario que sea sensible en un intervalo tan grande de
temperaturas. Adems, un detector de HPLC debe tener un volumen interno mnimo
a fin de reducir el ensanchamiento de banda. Los detectores en cromatografia de
lquidos son de dos tipos bsicos. Los detectores basados en una propiedad de la
disolucin responden a una propiedad de la fase mvil, tal como el ndice de
refraccin, la constante dielctrica, o la densidad, que se modifica por la presencia
de los analitos. Por contraste, los detectores basados en una propiedad del soluto
responden a alguna de las propiedades del soluto, como la absorbancia UV,
fluorescencia, o intensidad de difusin, que no son propias de la fase mvil.