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A HERBICIDAS EN EL MUNDO
Bernal E. Valverde1,2 y Ian M. Heap3
Investigacin y Desarrollo en Agricultura Tropical (IDEA Tropical)
P.O. Box 2191, Alajuela 4050, Costa Rica. E-mail: ideatrop@ice.co.cr
2
Faculty of Life Sciences, The University of Copenhagen
Hojebakkegaard All 13, Taastrup, DK-2630, Denmark. E-mail: bev@life.ku.dk
3
Weedsmart, P.O. Box 1365, Corvallis, OR 97339, U.S.A. E-mail:
IanHeap@weedsmart.com
1
having resistant weeds. The newest herbicide mode of action was introduced 18 years
ago and no new modes of action are in the pipeline of agrochemical companies for near
future introduction. More stringent registration also limits the availability of herbicides
with alternative modes of action to combat resistance. Major efforts should be devoted to
preserve available herbicides and to prevent and contain the spread of herbicide resistant
weeds.
Keywords: cross resistance, mode of action, multiple resistance, resistant weeds,
selection pressure.
Introduccin
Los herbicidas constituyen el 45% del mercado de plaguicidas valorado en USD 35.000
millones (UTTLEY, 2009). Sin duda alguna estos agroqumicos, entre cuyos primeros
representantes selectivos estuvieron el 2,4-D y MCPA introducidos a mediados de los
1940s, revolucionaron el control de malezas y han contribuido aumentar el rendimiento
de las cosechas y a acrecentar el bienestar general. En la actualidad, unos 260
ingredientes activos, pertenecientes a 70 familias qumicas, con unos 13 modos de accin
reconocidos, contribuyen a la produccin agrcola (QUADRANTI, comunicacin
personal). Su uso generalizado y gran dependencia para el control de malezas, sin
embargo, no ha estado exento de problemas, en particular por la seleccin de malezas
resistentes. En este trabajo se documenta la situacin actual de las malezas resistentes a
herbicidas en el mundo.
Resistencia a herbicidas
La definicin de resistencia ha sido objeto de mucha discusin. Se entiende por
resistencia la capacidad evolucionada de una poblacin de una maleza anteriormente
susceptible a un herbicida de soportarlo y completar su ciclo de vida cuando el herbicida
se emplea a su dosis normal en una situacin agrcola (HEAP and LEBARON, 2001).
Esta definicin tiene un carcter general y de uso prctico que sirve de base para la
inclusin de casos de resistencia en el Registro Internacional de Malezas Resistentes a
Herbicidas (International Survey of Herbicide-Resistant Weeds) disponible en
www.weedcience.org. La Weed Science Society of America define resistencia como la
capacidad hereditaria de una planta de sobrevivir y reproducirse despus de ser expuesta
a una dosis de herbicida que normalmente es letal para el tipo silvestre. En una planta, la
resistencia puede ocurrir de forma natural o inducida por tcnicas como la ingeniera
gentica o la seleccin de variantes producidas por cultivo de tejidos o mutagnesis
(WSSA, 1998).
Con mucha frecuencia se emplean los trminos resistencia y tolerancia indistintamente.
Sin embargo, es pertinente hacer la distincin. De nuevo, la Weed Science Society of
America define tolerancia como la capacidad hereditaria de una especie de sobrevivir y
reproducirse despus del tratamiento con un herbicida. Esto implica que no hubo
seleccin o manipulacin gentica para hacer la planta tolerante; la planta es
naturalmente tolerante (WSSA, 1998). La tolerancia tiene una relacin directa con la
selectividad de los herbicidas. En el desarrollo de estos agroqumicos se procura
seleccionar compuestos que no afecten a los cultivos pero que sean letales a las malezas.
Otros trminos relevantes son los de resistencia cruzada y resistencia mltiple. La
resistencia cruzada ocurre cuando un mecanismo de resistencia individual confiere
resistencia a varios herbicidas. La resistencia cruzada de sitio activo est conferida por
una modificacin en el sitio de acople comn (enzima o protena especfica) a varios
herbicidas, como en el caso de los herbicidas pertenecientes a las familias qumicas de las
sulfonilreas, imidazolinonas, triazolopirimidinas y piridinil benzoatos que inhiben la
enzima acetolactato sintasa (ALS). Dependiendo de la mutacin presente en la enzima
ALS, as se observarn distintos patrones de resistencia cruzada a estas familias de
herbicidas o a herbicidas individuales dentro de cada familia (LAPLANTE et al., 2009).
Tambin puede presentarse resistencia cruzada fuera del sitio activo en cuyo caso un
nico mecanismo confiere resistencia a diversos herbicidas con distintos modos de
accin. Estos mecanismos de resistencia usualmente no tienen relacin con el
mecanismo de accin del herbicida y ms bien dependen de la capacidad acrecentada de
la maleza para metabolizar al herbicida, por ejemplo a travs de citocromos P450 o
mediante la participacin de transferasas de la glutationa (GRAY et al., 1996;
SIMINSZKY, 2006). Aunque no se ha documentado todava, es probable que
mecanismos que involucren transportadores tipo ABC (BUSS and CALLAGHAN, 2008;
CABRITO et al., 2009; ITO and GRAY, 2006; YAZAKI et al., 2009) puedan conferir
resistencia cruzada fuera del sitio activo a diversos herbicidas sistmicos, tal como
sucede con la resistencia mltiple a medicamentos (LINTON, 2007; PORCELLI et al.,
2009). La resistencia mltiple se presenta cuando una planta o poblacin acumula dos o
ms mecanismos de resistencia. Cuantos ms mecanismos estn presentes, mayor
diversidad de familias qumicas y modos de accin resultarn ineficaces para controlar la
maleza. Por ejemplo, un biotipo de Lolium rigidum de Australia es resistente a glifosato
debido a que al transporte limitado de este herbicida en la planta y a herbicidas
inhibidores de la enzima acetil coenzima A carboxilasa (ACCasa) y ALS por
metabolismo acelerado de los herbicidas que involucra distintas enzimas del grupo de los
citocromos P450 (YU et al., 2009). En Oregon, EE.UU., se encontr un biotipo de
Bromus tectorum resistente a triazinas (por la mutacin Ser264Gly del sitio de accin,
protena D1) que tambin es resistente a herbicidas ALS (primisulfurn, sulfosulfurn,
propoxicarbazone-sodio e imazamox) por metabolismo acelerado. Este biotipo, adems,
fue moderadamente resistente etofumesate, cletodim, fluazifop, diuron, y terbacil (PARK
and MALLORY-SMITH, 2005; PARK et al., 2004; PARK and MALLORY-SMITH,
2004). Un caso extremo es el de otro biotipo de L. rigidum que evolucion resistencia a
nueve clases de herbicidas despus de ser tratado por 21 aos con cinco herbicidas
pertenecientes a distintas familias qumicas. Las plantas de este biotipo son resistentes a
reas sustituidas (diurn y clorotolurn), inhibidores de ALS (incluidos clorsulfurn,
triasulfurn, sulfometurn, imazaquin e imazapir), triazinas simtricas (atrazina, simazina
y ametrina) y la asimtrica metribuzina, e inhibidores de ACCasa (varios ariloxifenoxipropanoatos incluido el diclofop y ciclohexanedionas como tralkoxidim y
setoxidim). El biotipo tambin es resistente a metolaclor y propaclor (cloroacetamidas) y
ligeramente resistente a paraquat (bipiridilo) y a tridifano (BURNET et al. 1994;
aminocido en la -tubulina (ANTHONY et al., 1998), est controlada por nico gene
nuclear recesivo (ZENG and BAIRD, 1997).
Las plantas que son muy prolficas, de polinizacin cruzada y que ocupan grandes
extensiones a altas densidades son ms propensas a evolucionar resistencia a herbicidas.
Un ejemplo de una especie que rene estas caractersticas es L. rigidum, la cual ha
evolucionado resistencia a herbicidas en cinco continentes y presenta los problemas ms
serios de manejo por la evolucin de resistencias mltiples.
La presencia de un banco de semillas en el suelo es una caracterstica de las malezas que
afecta la tasa de evolucin de la resistencia y la dinmica de las poblaciones resistentes si
se deja de emplear el herbicida selector. Las semillas almacenadas en el suelo cumplen
una funcin amortiguadora por cuanto antes de la aplicacin recurrente del herbicida
corresponden predominantemente a plantas susceptibles. Plntulas susceptibles que
emerjan de este banco de semillas despus de aplicado el herbicida y perdido su efecto
(ausencia de persistencia) diluyen la frecuencia de individuos resistentes en la
poblacin. El manejo de los herbicidas en funcin de la dinmica del banco de semillas
es fundamental para la prevencin y mitigacin de la resistencia. En un estudio de cuatro
aos realizado en Canad con la maleza del trigo Thlaspi arvense, se comprob el
impacto de la mezcla y rotacin de herbicidas en la prevencin de la resistencia al
inhibidor de ALS etametsulfurn (BECKIE and REBOUD, 2009). Los tratamientos
consistieron en la aplicacin una vez por ao de etametsulfurn o una mezcla formulada
de bromoxynil ms MCPA en rotacin, considerando todas las posibles combinaciones
en el tiempo (desde la aplicacin del inhibidor de ALS en uno de los cuatro aos hasta en
tres de ellos complementado segn correspondiera en los otros aos con el la mezcla de
herbicidas alternativos). Adems se incluyeron los tratamientos correspondientes a
etametsulfurn y bromoxynil ms MCPA aplicados anualmente por cuatro aos (ausencia
de rotacin), ambos herbicidas en mezcla de tanque en cada uno de los cuatro aos
(tratamiento de mezcla) y dos testigos para comparaciones (absoluto y deshierbado
manualmente). El banco de semillas de T. arvense inicialmente tena un 5% de
individuos resistentes a etametsulfurn. El porcentaje de control de la maleza decreci de
un 92% con una aplicacin de la sulfonilrea (independientemente del ao en que se
aplic) a un 31% luego de la aplicacin consecutiva por cuatro aos. Cuando los
herbicidas se aplicaron en mezcla o slo se us el tratamiento alternativo se obtuvo un
control promedio del 96% al 97% por ao. La produccin total de semilla aument
conforme se increment el nmero de aplicaciones anuales de etametsulfurn y la
proporcin de plntulas resistentes proveniente de semilla producida por la maleza
expuesta a la sulfonilrea se increment de un 2% cuando no se utiliz el etametsulfurn
a 60% despus de una sola aplicacin y a 92% si se aplic dos o ms veces. Cuando se
aplic el etametsulfurn en mezcla con el tratamiento alternativo la proporcin de semilla
resistente a la sulfonilrea fue de un 3%; en ausencia de herbicidas, se mantuvo en el 5%
original. De manera similar pero reflejando un grado importante de amortiguamiento por
la semilla susceptible, la proporcin de individuos resistentes en el banco de semillas del
suelo aument con el incremento en el uso del etametsulfurn de un 29% a un 85%
despus de una o cuatro aplicaciones, respectivamente. El nivel de resistencia en el
banco de semillas permaneci invariable cuando se aplic la mezcla de los herbicidas o
solo el tratamiento alternativo por la duracin del experimento. Bajo las condiciones de
este estudio se demostr cun rpidamente puede evolucionar la resistencia a inhibidores
de ALS y se dedujo que las mezclas son ms tiles para mitigarla que las rotaciones.
La adaptabilidad al medio o fitness es la capacidad que tiene un genotipo de establecerse,
sobrevivir y reproducirse exitosamente en competencia con el biotipo normal o silvestre
en un ambiente particular (MENCHARI et al., 2008; GRESSEL, 2002). Esta
adaptabilidad est determinada por la distribucin de recursos a la supervivencia y
reproduccin a travs del ciclo de vida de la planta. En algunas malezas, la mutacin que
confiere resistencia acarrea efectos pleiotrpicos que pueden afectar su desempeo en el
campo en ausencia del herbicida. Los primeros estudios comparativos sobre fitness se
realizaron con malezas resistentes y susceptibles a las triazinas. Puesto que la mutacin
que confiere resistencia a estos herbicidas reduce la tasa de transferencia de electrones en
el Fotosistema II, los biotipos resistentes a triazinas poseen tasas fotosintticas reducidas
que los ponen en desventaja competitiva. Aunque la idea de que las mutaciones que
confieren resistencia causan prdida de adaptabilidad en las malezas se generaliz,
diversos estudios han demostrado que en muchos otros casos los efectos pleiotrpicos
asociados con la resistencia tienen poco significado prctico en el campo y que deben
estudiarse por separado en cada caso (HOLT and THILL, 1994). Tambin es importante
recalcar que en muchos estudios se mide la productividad de plantas que crecen
individualmente (en ausencia de competencia) y se infiere y generaliza sin el sustento
apropiado acerca de su adaptabilidad. Genes o mutaciones diferentes pueden asociarse
con costos de adaptabilidad diferentes y el nivel de dominancia de la resistencia como
atributo no est necesariamente relacionado con el nivel de dominancia de la posible
penalizacin en fitness (ROUX et al., 2004). En un trabajo reciente, (MENCHARI et al.,
2008) estudiaron los efectos pleiotrpicos asociados con tres alelos mutantes que causan
las sustituciones Ile1781Leu, Ile2041Asn y Asp2078Gly en la ACCasa de A.
myosuroides. Para lograr un fondo gentico homogneo se emplearon poblaciones
segregantes de la maleza. La biomasa, altura y produccin de semilla de las plantas con
ACCasa Leu-1781 y Asn-2041 fue similar a la de las plantas silvestres, mientras que las
plantas con ACCasa homozigota para Gly-2078 sufrieron notorias reducciones (42%, 6%
y 36%, respectivamente) en dichas caractersticas.
En muchos casos de resistencia a inhibidores de la ALS, la penalizacin en adaptabilidad
al medio resultante es mnima (TRANEL and WRIGHT, 2002). Por tal razn no es
sorprendente que los alelos de resistencia persistan en las poblaciones que dejan de
exponerse al herbicida. Tal es el caso del Ixophorus unisetus que evolucion resistencia
a imazapir a finales de los 1980s en Costa Rica (VALVERDE et al., 1993). Estudios en
proceso indican que las poblaciones resistentes conservan dichos alelos despus de ms
de 15 aos de que se dej de emplear el herbicida (VALVERDE, datos no publicados).
En contraste, una penalizacin severa en adaptabilidad al medio puede anular la ventaja
conferida por la mutacin responsable por la resistencia en la persistencia del alelo
resistente (PARIS et al., 2008). El impacto de la resistencia a herbicidas sobre la
adaptabilidad de las malezas es tratado en detalle por (VILA-AIUB et al., 2009).
Todos los factores que determinan la resistencia discutidos en esta seccin interactan de
manera compleja en el campo dictando la direccin que sigue el proceso evolutivo. Un
modelo reciente predice que el tiempo requerido para que una poblacin evolucione
resistencia depende del tipo de reproduccin y de la dominancia del alelo de resistencia
en presencia del herbicida, as como del costo en adaptabilidad al medio y la dominancia
de este costo (ROUX et al., 2008).
Resistencia sin presin de seleccin impuesta por el herbicida
En la evaluacin del riesgo como requisito previo a la introduccin de cultivos resistentes
a herbicidas o con otros atributos novedosos, uno de los temas que ha acaparado la
discusin es la posible diseminacin de estos genes novedosos, particularmente los
transgenes (los cultivos resistentes a herbicidas producidos por induccin de mutaciones
estn exentos de este anlisis de riesgo en la mayora de los pases) a especies
emparentadas compatibles (malezas y silvestres e incluso otras variedades del cultivo).
Diversas publicaciones tratan el tema del flujo de genes (WARWICK et al., 2009;
CHANDLER and DUNWELL, 2008; CHAPMAN and BURKE, 2006; ELLSTRAND,
2003; POPPY and WILKINSON, 2005), el cual est fuera de alcance de este trabajo. De
hecho, el factor principal que ha limitado la liberacin de arroz transgnico resistente a
herbicidas (ntese que el arroz resistente a imidazolinonas comercializado bajo el nombre
de arroz Clearfield se origina de induccin de mutaciones) es el riesgo de que tales
genes se diseminen al arroz maleza que es conespecfico con el arroz cultivado
(GRESSEL and VALVERDE, 2009a). Muchas de estas malezas conespecficas son
formas no completamente domesticadas o cultivos que se de-domesticaron a sus formas
ferales (GRESSEL, 2005). Los casos de resistencia en malezas emparentadas con
cultivos que se originan del flujo de genes desde cultivos resistentes o estas malezas
como puente para transferir el gene a otras no directamente expuestas al cultivo resistente
no se incluyen en el Recuento. Sin embargo, es pertinente mencionar que hay casos de
relevancia comercial, en particular, el flujo de genes del arroz Cleafield al arroz maleza
(OLOFSDOTTER et al., 2000; MADSEN et al., 2002; VALVERDE and GRESSEL,
2005; GRESSEL and VALVERDE, 2009a; GRESSEL and VALVERDE, 2009b;
SHIVRAIN et al., 2007; BURGOS et al., 2008).
El flujo de genes tambin puede contribuir a la aparicin y diseminacin de la resistencia
en malezas en ausencia de la presin de seleccin impuesta por el herbicida y no puede
descartarse a priori aun en malezas que crecen en cultivos tratados con herbicidas
(ASHIGH et al., 2008). Por ejemplo, se determin que los genes de resistencia de L.
rigidum se pueden mover hasta 3 km a plantas receptoras de la misma especie (BUSI et
al., 2008). Esto podra contribuir a la aparicin de plantas con resistencia mltiple o con
resistencia a herbicidas nunca antes usados en ese lote o predio en particular. Otro caso
muy interesante es el de A. tuberculatus. Esta especie que hasta hace pocos aos pasaba
desapercibida se ha convertido en un serio problema en reas productoras de soya en
EE.UU. Hay poblaciones de A. tuberculatus con resistencia mltiple por acmulo de
varios mecanismos de sitio activo, incluida la ya mencionada resistencia a herbicidas
Protox (PATZOLDT et al., 2005). Se ha propuesto que A. tuberculatus puede obtener
genes de resistencia de otras especies de Amaranthus con las cuales establece un
intercambio de genes unidireccional. As, A. hybridus puede fcilmente transferirle
10
Cdigo
de
HRAC1
Ejemplo
Biotipos resistentes
Dicot.
Monocot.
Total
No. de
pases
Clorsulfurn
65
37
102
34
C1
Atrazina
47
21
68
26
A
O
D
C2
G
K1
N
Diclofop-metilo
2,4-D
Paraquat
Clorotolurn
Glifosato
Trifluralina
Trialato
0
21
16
8
9
2
0
36
7
8
13
7
8
8
36
28
24
21
16
10
8
30
15
13
27
14
6
6
F3
Amitrol
E
K3
Oxifluorfn
Butaclor
3
0
0
3
3
3
2
5
F1
Flurtamone
Flamprop-metilo
C3
K2
Bromoxinil
Profam
1
0
0
1
1
1
1
1
Diclobenilo
Z
Z
(cloro) - flurenol
MSMA
0
1
1
0
1
1
2
1
175
157
332
Clasificacin de los herbicidas segn el Herbicide Resistance Action Committee. Disponible de HRAC:
www.hracglobal.com/Publications/ClassificationofHerbicideModeofAction/tabid/222/Default.aspx.
2
Un mismo pas puede ser contado en ms de un grupo de herbicidas por lo que esta columna supera los
60 pases indicados en el texto en los que ha evolucionado la resistencia a herbicidas.
11
Nueve pases (Alemania, Australia, Brasil, Canad, Espaa, Estados Unidos, Francia,
Israel, y el Reino Unido) contribuyen el 60% de los casos de resistencia registrados. Slo
los Estados Unidos, Australia y Canad, con la mayor incidencia de casos, contribuyen el
35% de los registros (Cuadro 2). Esta misma proporcin exista en 1995, excepto que
Brasil, el pas latinoamericano que tiene el mayor nmero de casos de resistencia, no
figuraba entre los pases con ms casos (HEAP, 1997).
El incremento cronolgico en el nmero de casos de resistencia a herbicidas en el mundo
se ilustra en la Figura 1. Despus del descubrimiento de resistencia a triazinas en S.
vulgaris y hasta finales de la dcada de los 1970s se reportaba en promedio un caso por
ao. Desde entonces el incremento promedio ha sido de 10 casos anuales pero su
composicin ha variado puesto que a partir de 1998 la supremaca de la resistencia a las
triazinas fue cedida a los inhibidores de ALS y otros grupos tambin se hicieron ms
notorios (Figura 2).
Cuadro 2. Distribucin de casos de resistencia a herbicidas por pas.
Pas
No
Pas
No
Pas
No
Pas
No
Alemania
Arabia Saudita
Argentina
Australia
Austria
Blgica
Bolivia
Brasil
Bulgaria
Canad
Chile
China
Colombia
Corea del Sur
Costa Rica
21
1
3
53
2
18
3
21
4
46
7
9
6
10
5
Dinamarca
Ecuador
Egipto
El Salvador
Eslovenia
Espaa
Estados Unidos
Etiopia
Fiji
Filipinas
Francia
Grecia
Guatemala
Holanda
Honduras
3
1
1
1
1
31
126
1
1
3
32
6
1
7
1
Hungra
India
Indonesia
Irn
Irlanda
Israel
Italia
Japn
Kenya
Malasia
Mxico
Nicaragua
Noruega
Nueva Zelanda
Panam
1
3
1
7
1
23
19
16
1
16
3
1
5
10
1
Paraguay
Polonia
Portugal
Reino Unido
Repblica Checa
Sri Lanka
Sudfrica
Suecia
Suiza
Tailandia
Taiwn
Tnez
Turqua
Venezuela
Yugoslavia
2
10
2
24
16
2
14
2
14
5
1
1
3
1
6
350
300
250
200
150
100
50
0
1960
1970
1980
1990
2000
2010
Ao
13
crecimiento exponencial del nmero de casos de resistencia es muy notorio (Figura 2),
superando el centenar y abarcando 34 pases, entre los que se destacan los EE.UU. con
126 casos, Australia con 53 y Canad con 46. La resistencia a inhibidores de ALS ha
ocurrido en cereales, rotaciones de maz/soya, arroz, bordes de carretera y plantaciones
forestales. En Amrica Latina es uno de los principales grupos a los que las malezas han
evolucionado resistencia, con 16 especies confirmadas.
120
100
80
60
Inhibidores de ACCasa
Inhibidores de ALS
Triazinas
Ureas, Amidas
Bipiridilos
Glicinas
Dinitroanilinas
Auxinas sintticas
102
68
40
36
28
24
21
16
10
20
0
1960
1970
1980
1990
2000
2010
Ao
15
16
17
18
19
Pas
Ao1
Cultivo o condicin
Poceas
Especie
Pas
Ao
Cultivo o condicin
Dicotiledneas
Digitaria insularis
Paraguay
Brasil
2006
2008
soya
soya
Amaranthus palmeri
EE.UU.
2005
Algodn, soya,
maz, huertos
Echinochloa colona
Australia
2007
Barbechos qumicos
EE.UU.
2005
Maz, soya
Eleusine indica
Malasia
Colombia
Bolivia2
Costa Rica2
1997
2006
2007
2007
Palma de aceite)
Caf
Soya
Pejibaye para palmito
Ambrosia artemisiifolia
EE.UU.
2004
Soya
A. trifida
EE.UU.
2004
Soya, algodn
Conyza bonariensis
Chile
2001
Sudfrica
Espaa
Brasil
2003
2004
2005
Brazil
EE.UU.
Espaa
Argentina
2003
2004
2006
2007
Viedos, barbecho
qumico (trigo)
Huertos, soya
Huertos, soya, algodn
Huertos
Barbecho qumico
Colombia
EE.UU.
2006
2007
Huertos y viedos
Huertos
Maz, frutales, soya,
trigo, huertos
Caf
Bordes de carretera,
viedos
Australia
1996
EE.UU.
2000
EE.UU.
Sudfrica
Francia
1998
2001
2005
Brasil
2005
Espaa
Italia
2006
2007
China
Espaa
Rep. Checa
2006
2006
2007
Paspalum paniculatum
Costa Rica2
2007
Brasil
2006
Soya
Sorghum halepense
Argentina
EE.UU.
2005
2007
Soya
Soya
Parthenium hysterophorus
Colombia
2004
Frutales
Australia
2008
Sorgo, trigo
Plantago lanceolata
Sudfrica
2003
Huertos y viedos
Lolium multiflorum
L. rigidum
Urochloa panicoides
1
2
C. canadensis
No. de biotipos
No. de especies
Trigo
Maz
Soya
Arroz
Huertos
Pasturas
Hortalizas
96
76
60
51
50
33
30
53
53
41
35
35
24
21
No agrcola
45
32
Familia
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Poaceae
Poaceae
Poaceae
Amarantaceae
Asteraceae
Amarantaceae
Amarantaceae
Poaceae
Chenopodiaceae
Chenopodiaceae
Lolium rigidum
Avena fatua
Echinochloa crus-galli
Amaranthus palmeri
Conyza canadensis
Amaranthus rudis
Amaranthus retroflexus
Eleusine indica
Chenopodium album
Kochia scoparia
Perspectivas
Est demostrado que las malezas tienen la capacidad de evolucionar resistencia a
herbicidas, sin importar su modo de accin, cuando se someten a suficiente presin de
seleccin bajo condiciones apropiadas. Sin embargo, tambin es claro considerando la
prevalencia de algunos modos de accin sobre otros en la evolucin de resistencia que
hay algunos que tienen un menor riesgo. Por ejemplo, dos de los grupos ms antiguos de
herbicidas, las triazinas y los auxnicos, se han empleado comercialmente en millones de
ha de maz y cereales por ms de medio siglo, muchas veces en ausencia de rotacin. Sin
embargo, 68 especies evolucionaron resistencia a triazinas y solo 23 lo ha hecho a las
auxinas sintticas (excluido el quinclorac). Pocas especies han evolucionado resistencia a
cloroacetamidas y inhibidores de Protox. Sin embargo, una especie que evolucion
resistencia al segundo grupo, lo hizo por un mecanismo que no se conoce en organismo
alguno resistente a un xenobitico: prdida por completo de un codn (PATZOLDT et
al., 2006; GRESSEL and LEVY, 2006). La resistencia a glifosato que se consideraba
improbable ahora ocupa la atencin de decenas de cientficos y nos ensea formas
novedosas de evitar el dao por un herbicida. Hasta ahora, ninguna maleza ha
evolucionado resistencia al glufosinato de amonio.
22
Los agricultores han sido muy afortunados hasta ahora por contar con herbicidas
alternativos que les permite controlar las malezas resistentes. Sin embargo, las
perspectivas de que en los prximos aos se comercialicen herbicidas con modos de
accin totalmente novedosos son nfimas. De hecho, el ltimo modo de accin
descubierto que permiti la comercializacin de herbicidas novedosos se introdujo en
1991 con los inhibidores de la hydroxifenil piruvato dioxigenasa (HPPD) entre los que se
encuentran la sulcotriona y mesotriona (RUEGG et al., 2007). La tendencia de la
agroindustria en aos recientes ha sido la de desarrollar productos similares a los ya
existentes (los llamados me too) que imponen presin de seleccin adicional sobre
sitios de accin sujetos a ella por aos. El aumento en la regulacin de los plaguicidas,
principalmente en Europa, hace disminuir la disponibilidad de herbicidas y con ello
limita las posibilidades de rotacin y mezcla de herbicidas con modos de accin
diferentes.
Las reas dedicadas a la produccin de cultivos transgnicos resistentes a glifosato
continan en aumento (James, 2008) y no se vislumbra la introduccin de cultivos
resistentes a herbicidas novedosos. Como se ha discutido, las reas dedicadas a la
siembra de cultivos transgnicos resistentes a glifosato, en especial aquellas donde la
produccin adems se realiza en regmenes de labranza de conservacin, han brindado las
condiciones adecuadas para que evolucione la resistencia a glifosato. La resistencia a
glifosato, sin embargo, ha estimulado a las compaas de agroqumicos a posicionar
productos con antiguos modos de accin alternativos como opciones para el combate de
la resistencia en mezcla con otros herbicidas y hasta con el mismo glifosato o en nuevas
formulaciones o presentaciones. En un afn por descubrir nuevos productos, las
compaas de agroqumicos hacen ahora un mayor uso de las herramientas que provee la
biotecnologa y de sistemas de escrutinio de alta capacidad. De su xito va a depender la
posibilidad de que se ponga a disposicin de los agricultores herbicidas con nuevos
modos de accin; pero es en los agricultores en quienes recae la responsabilidad de hacer
un uso racional de los productos existentes y de los nuevos que logren ingresar al
mercado para no agravar aun ms los problemas causados por las malezas resistentes.
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P. J. Christoffoleti
ESALQ Universidade de So Paulo Brasil, Av. Pdua Dias, 11 CEP 13.418-900
Piracicaba SP Brasil. e-mail: pjchrist@esalq.usp.br
Resumo: O cultivo de culturas resistentes ao glifosate (CRG) no Brasil foi feito em 15,8
milhes de hectares com sementes de soja e algodo transgnico em 2008, com um
crescimento de 5,3% em relao ao ano anterior. bem provvel que com a liberao do
milho resistente a glifosate no pas, que ocorreu em 2008, a tendncia que o Brasil
ultrapasse em rea cultivada com transgnicos a Argentina, ficando apenas atrs dos Estados
Unidos da Amrica do Norte. Apesar dos constantes debates acalorados, os cultivos
denominados transgnicos so uma realidade, e no possuem retorno, dada a gama de
vantagens que podem proporcionar aos produtores, consumidores e meio ambiente, desde que
tomados os cuidados inerentes a toda inovao tecnolgica. O sistema de produo agrcola
sustentvel no Brasil est baseado em sistemas de plantio direto, com CRG sendo o principal
componente. Dentre os benefcios sociais trazidos pelo uso do glifosate nos sistemas de
produo, inclui-se maior uso de cultivo conservacionista que reduz eroso do solo e carga de
pesticidas, nutrientes, e sedimento no ambiente. No entanto, a dependncia no glifosate e
sistemas de produo mais simples tm incrementado o risco de seleo de plantas daninhas
tolerantes ao glifosate (PDTG) atravs da mudana de flora, e de bitipos de PDRG. Delinear
estratgias com herbicidas ou sem herbicidas, que efetivamente retarda e/ou maneja a seleo
de PDRG e de PDTG em sistemas de produo baseados no uso recorrente de glifosate um
desafio no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram de (i) descrever alguns aspectos que
influenciam a seleo de PDRG e PDTG no Brasil; (ii) discutir a viabilidade da rotao de
culturas e/ou culturas de cobertura como medida integrada de sustentabilidade do sistema e
preveno e manejo da seleo de resistncia; (iii) sumarizar os resultados de uma pesquisa
feita sobre a percepo dos produtores brasileiros de soja sobre os problemas de PDRH e
PDTG, e o nvel de adoo de boas prticas agrcolas a fim de prevenir ou manejar estas
plantas.
Palavras clave: Glifosate, resistncia a herbicidas, mudana da populao, culturas resistentes
a herbicidas.
Resumen: La experiencia de los cultivos trangnicos resistentes a glifosato y su impacto en la
agricultura brasilea. En 2008 la superficie con cultivos resistentes a glifosato (CRG) en Brasil
alcanz a 15.8 millones de hectreas de soya y algodn, lo que representa un incremento de
5,3% con respecto al ao anterior. Es muy probable que con la liberacin del maz resistente a
glifosato, lo que ocurri en 2008, la superficie cultivada con trangnicos en Brasil sea superior
a la de Argentina, y slo levemente inferior a la de EE.UU. A pesar de los constantes debates
en torno a los cultivos denominados trangnicos, esto es una realidad sin retorno, debido a
las numerosas ventajas que pueden proporcionar a los productores, consumidores y al medio
ambiente, aunque deberan considerarse los cuidados inherentes a cualquier nueva tecnologa.
Introduo
As plantas daninhas so organismos evolutivos em resposta a mudanas no ambiente e/ou
stress. Sendo assim, o intenso uso de herbicidas na agricultura, sendo um processo intensivo
de distrbio, proporciona presso de seleo nas comunidades de plantas daninhas, resultando
em seleo intra-especfica de bitipos de plantas daninhas para produzir plantas daninhas
resistentes aos herbicidas (PDRH) e seleo inter especfica para causar mudana de flora
entre espcies, weed shift (WS) devido ao controle efetivo e seletivo. Outras importantes
foras seletivas so a escolha do herbicida, sistemas de cultivo, escolha da cultura, padres de
mudanas climticas e a introduo de novas espcies de plantas daninhas (CARDINA et. al.,
2002; SHANER, 2000).
Para a prtica de agricultura em plantio direto, o herbicida glifosate uma ferramenta
fundamental para promover a proteo do solo atravs da palhada obtida da vegetao nativa
ou de culturas de cobertura cultivada durante o perodo invernal (TRIGO y CAP, 2003). Esta
prtica tem sido adotada por muitos dos produtores brasileiros conscientes da conservao dos
recursos naturais. No entanto, alguns problemas com o uso intensivo e repetitivo do glifosate
tm ocorrido tais como a seleo de PDRG e WS para espcies tolerantes ao glifosate, que
pode impor certas limitaes no uso da tecnologia. Portanto, os produtores devem prestar
ateno para fatores que impe esta presso de seleo, e delinear estratgias herbicidas e no
herbicidas que efetivamente retarda ou maneja as PDRG e WS na comunidade de planta
daninha.
Pesquisas esto sendo desenvolvidas com o objetivo de melhor entender os fatores que
impem a seleo para fazer recomendaes para retardar a emergncia de PDRG e WS
(SEVERINO et al., 2005; JAKELAITIS et al., 2005). Dentre as propostas est a integrao
lavoura-pecuria de rotao de cultura e intercalar com culturas forrageiras, aumentando
assim a diversidade do sistema, portanto minimizando as mudanas para espcies tolerantes
ao glifosate e a evoluo de bitipos de PDRG, e assim tornando o glifosate e culturas
resistentes ao glifosate viveis aos produtores por mais tempo.
Existe uma grande preocupao a nvel mundial em relao ao uso intensivo do glifosate e de
culturas resistentes ao glifosate (CRG) e seus efeitos na WS e especialmente na evoluo de
PDRG (OWEN, 2001). H preocupao tambm para os impactos no uso de glifosate alm
das CRG. Extensionistas, cosultores agrcolas e produtores esto todos interessados em saber
como ser a evoluo futura de PDRG pode afetar a sustentabilidade do glifosate na
agricultura brasileira.
Um outro fator que influencia a resposta dos produtores de reas pequenas de soja a
porcentagem de rea na propriedade que semeada com CRG, que muito maior em
produtores que cultivam > 1000 ha que pequenos produtores (Tabela 4).
Tabela 4. rea cultivada com CRG de acordo com o tamanho da propriedade no Brasil.
rea de soja cultivada de
% de soja cultivada com CRG
acordo com o tamanho da
0
<10 10-20 20-50 50-70 70-100
propriedade (ha)
<100
54,5
9,1
9,1
0,0
0,0
27,3
100 - 200
50,0
9,1
4,6
9,0
9,1
13,7
201 - 500
48,7
5,1
12,8
15,4
7,7
10,3
501 - 1000
37,1
7,4
14,8
29,7
0,0
11,1
>1000
4,2 16,7
20,8
25,0
12,5
16,7
* Porcentagem de produtores que recusaram a responder o questionrio.
Sem
resposta*
0,0
4,4
0,0
0,0
4,1
Uma outra questo perguntada foi sobre as razes para a medidas de no adoo de preveno
e manejo de bitipos de PDRH e/ou tolerantes ao glifosate (Tabela 6). Surpreendentemente
pequenos produtores responderam que eles adotam na taxa de 5,6% do total das propriedades,
e que somente 27,3% tem restries com relao ao custo, e que somente 9,1% no acredita
que em suas propriedades seriam selecionadas PDRG. Nenhum dos grandes produtores
responderam que eles adotam medidas de preveno ou manejo na propriedade com um todo
sendo que os altos custos a razo para isso, no entanto, surpreendentemente 20,8% dos
produtores que cultivam soja em reas de > 1000 ha no acreditam na possibilidade de seleo
de PDRG em suas propriedades, e isso evidencia o problema da falta de conscientizao que
deveria ser dada a fim de dar suporte aos produtores, e que requer aes efetiva dos servios
de extenso, consultores agrcolas que trabalham com manejo de plantas daninhas.
Tabela 6. Razes de no adotarem medidas de preveno em manejo de PDRG de acordo com
o tamanho da propriedade cultivada com soja no Brasil.
Tamanho da area da propriedade
1
2
3
4
5
6
cultivada com soja (ha)
<100
27,3
9,1
18,2
9,1
54,6
18,2
100- 200
22,7
40,9
18,2
0,0
0,0
18,2
201- 500
41,0
15,4
0,0
5,1
0,0
38,5
501 - 1000
51,8
14,8
7,4
3,7
0,0
22,2
>1000
50,0
20,8
8,3
8,3
0,0
12,5
1: Alto custo para a adoo.
2: Produtores no acreditam na possibilidade de seleo de PDRG em reas cultivadas.
3: Quando PDRG forem selecionadas na area, a indstria de agroqumicos e os services de
extenso encontraro maneiras para resolver o problema.
4: J adota medidas em parte para preverno e manejo em suas reas de soja.
5: J adota medidas em toda a propriedade.
6: Marcou mais de uma alternative.
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Resumen: En el sur de Chile, principal zona productora de trigo, cebada, avena, lupino y
canola (36 a 42 lat. Sur), el surgimiento de biotipos de malezas gramneas resistentes
a herbicidas ha sido un proceso muy frecuente a partir de la dcada del noventa,
inicialmente la resistencia fue a los inhibidores de ACCasa, posteriormente a los
inhibidores de ALS y ms recientemente a glifosato. A la fecha, se han descrito 50
biotipos de malezas gramneas resistentes a herbicidas, correspondientes a cuatro
especies, especficamente a ballica (Lolium multiflorum y L. rigidum), avenilla (Avena
fatua) y cola de zorro (Cynosurus echinatus). Todos los biotipos se originaron en
campos de agricultores ubicados en diferentes localidades de las regiones Del Bio Bio,
La Araucana, Los Rios y Los Lagos, cuyo sistema de cultivo se caracteriza por un uso
intensivo del suelo con cultivos anuales, principalmente trigo, siembra con labranza
cero y una alta dependencia del herbicida glifosato antes de la siembra y de los
herbicidas ACCasa y ALS despus de la siembra. En los biotipos de A. fatua la
resistencia es a herbicidas ACCasa, mientras que en los bitipos de C. echinatus y L.
rigidum la resistencia es a herbicidas ACCasa y ALS, y en los biotipos de L.
multiflorum la resistencia es a herbicidas ACCasa, ALS y glifosato.
Palabras claves: avenilla, ballica, cola de zorro, resistencia, biotipos.
Summary: Status of herbicide resistance in wheat and others extensive crops in South of
Chile. In the south of Chile, the main area for wheat, oat, barley, lupine and canola
cropping (36 a 42 lat. Sur), the presence of resistant weed to herbicide has become
frequent since de nineties. Initially the resistance was to the herbicides inhibitors of the
ACCasa, then to the inhibitors of the ALS and more recently to glyphosate. Up to day
more than 50 byotipes of gramineae resistant weed, belonging to four species,
specifically to ryegrass (Lolium multiflorum y L. rigidum), wild oat (Avena fatua) and
hedgehog (Cynosurus echinatus). All the biotypes have their origin in farms located in
the regions of Del Bio Bio, La Araucana, Los Rios y Los Lagos, that have a crop
system characterized by an intensive use of the soil with annual crops mainly wheat,
non-tillage and high dependency of glyphosate before seeding and ACCasa and ALS
herbicides after the seeding. In the biotypes of A. fatua the resistance is to ACCasa
herbicides, while in the biotypes of C. echinatus and L. rigidum the resistance is to
ACCasa and ALS herbicides, and in the biotypes of L. multiflorum the resistance is to
ACCasa, ALS and glyphosate.
Keywords: wild oat, ryegrass, hedgehog dogtail, resistance, biotypes.
Introduccin
Las malezas son un continuo problema en la agricultura en el mundo. La introduccin
de los herbicidas selectivos a fines de la dcada del 40 facilit significativamente el
trabajo de los agricultores para controlarlas. Sin embargo, la alta dependencia de los
herbicidas se tradujo en cambios en la flora de malezas y en el surgimiento de biotipos
resistentes (DELYE, 2005). Se entiende por resistencia a la habilidad heredable de una
poblacin o biotipo de maleza para sobrevivir y reproducirse despus de la aplicacin
de un herbicida en la dosis a la que la poblacin original era sensible (POWLES et al.,
1997; GRESSEL, 2002). Desde que se report el primer caso de resistencia a herbicidas
en el mundo (RYAN, 1970), esta se ha expandido con rapidez. As, a la fecha, se han
confirmado 332 biotipos resistentes pertenecientes a 189 especies de malezas, de las
cuales 113 son dicotiledneas y 76 monocotiledneas (HEAP, 2009).
En el sur de Chile, el surgimiento de biotipos resistentes a herbicidas ha sido un proceso
muy frecuente a partir de la dcada de los noventa. Los primeros casos de resistencia se
confirmaron a los herbicidas ACCasa y en las malezas gramneas L. rigidum, L.
multiflorum y A. fatua (ESPINOZA y ZAPATA, 2000; ESPINOZA et al., 2003).
Todos estos biotipos fueron colectados en cultivos anuales extensivos, principalmente
trigo, en la zona sur. A partir de esta fecha la resistencia ha sido creciente, ya que se ha
expandido a otras reas y confirmado en otra especie gramnea como C. echinatus
(ESPINOZA et al., 2005; VALVERDE, 2007) y a otros herbicidas como los ALS y a
glifosato (ESPINOZA et al., 2008). En el presente trabajo se presenta el estado de la
resistencia a herbicidas ACCasa, ALS y glifosato en las 4 especies de malezas
gramneas antes sealas en el sur de Chile.
Las cuatro malezas gramneas que han desarrollado resistencia en el sur del pas,
corresponden a especies anuales de invierno, por lo que su presencia en los cultivos
sembrados en esta poca, es casi obligada, presentndose en algunos casos como nica
especie de maleza y en otros casos, asociadas, dependiendo de la localidad
(PEDREROS, 2001). Su presencia ao tras ao en los cultivos, se debe a que la
mayora producen una gran cantidad de semillas, lo que bajo las condiciones
edafoclimticas de la zona sur se ha estimado en 1.700 semillas por planta de ballica (L.
multiflorum), 600 semillas por planta de cola de zorro y 330 semillas por planta de
avenilla. La ballica (L. multiflorum y L. rigidum) (BOSQUE et al., 2002) y avenilla
(NAYLOR, 1983) presentan una amplia variabilidad gentica, lo que les permite una
mayor capacidad de adaptacin y supervivencia. Adems, ambas especies de ballica
presentan polinizacin cruzada (TERRELL, 1968), lo que implica que la resistencia
puede trasmitirse no slo a travs de la semilla sino que tambin mediante el polen
(WAKELIN, 2004). Esto no ocurre en avenilla (RUNZHI, 2007) y cola de zorro por
tratarse de especies de autofecundacin.
Tipo
Gramnea
Gramnea
Hoja ancha
Hoja ancha
Gramnea
Gramnea
Gramnea
Hoja ancha
Hoja ancha
Hoja ancha
N de biotipos
resistentes
36
37
36
42
15
26
14
33
41
23
100
90
80
Frecuencia(%)
70
60
50
40
30
20
10
0
Figura 2. Frecuencia con que se presentan diversas malezas gramneas en trigo y otros
cultivos extensivos en el sur de Chile. (DAZ y ESPINOZA, 2006). Los datos fueron
obtenidos de una encuesta realizada a agricultores con malezas gramneas resistentes en
sus campos de las regiones Del Bio Bio, La Araucana, Los Rios y Los Lagos.
La Araucana
38 a 39 lat S
A. fatua
C. echinatus
L. multiflorum
L. rigidum
Total/regin
2
5
0
4
11 (22%)
10
12
12
0
34 (68%)
Los Ros
39 a 40 lat S
0
0
1
0
1
Los Lagos
40 a 44 lat S
2
0
2
0
4 (8%)
Biotipos/
especie
14
17
15
4
50
dic
100
n.e
FOP
clo
71
100
hal
64
94
ALS
DIM
tep
7
94
DEN
pin
14
n.e.
SU
ST
iod+mes
0
n.e.
flu
0
94
dic: diclofop; clo: clodinafop; hal: haloxyfop; tep: tepraloxydim; pin: pinoxaden;
iod+mes: iodosulfuron+mesosulfuron; flu: flucarbazone; n.e: indica no evaluado.
A. fatua
Sensible
AF-2
AF-3
AF-14
C. echinatus
Sensible
CE-10
CE-17
CE-18
CE-19
clodinafop
DL50
IR
11
>216
> 20
>216
> 20
>216
> 20
DL50
IR
12,3
187
15
>216
>18
176
14
>216
>18
ACCasa
haloxyfop
tepraloxydim
DL50
IR
DL50
IR
18,1
9,8
71,4
3,9
42
2,2
84,8
4,7
14
1,4
90,6
5,0
12
1,2
DL50
IR
DL50
IR
18
32
198
11
150
4,7
265
14,7
448
14
252
14
269
8,4
254
14,1
307
9,6
pinoxaden
DL50
IR
11
29
2,6
14
1,3
18
1,6
DL50
IR
-
ALS
Flucarbazone
DL50
IR
7,3
7,7
1,1
6,2
0,8
6,4
0,9
DL50
IR
13,6
27,2
3
65,3
5,8
20,4
2,5
68,4
2,9
dic
85
100
FOPs
clo
92
75
hal
100
100
DIMs
tep
cle
57
60
50
50
DEN
pin
33
50
ALS
Sulfunilureas
iod
iod+mes
80
73
100
100
ST
flu
50
100
dic: diclofop; clo: clodinafop; hal: haloxyfop; tep: tepraloxydim; cle: clethodim; pin:
pinoxaden; iod: iodosulfuron; iod+mes: iodosulfuron+mesosulfuron; flu: flucarbazone.
n.e: indica no evaluado.
L. multiflorum
Sensible
LM-16
LM-19
LM-20
L. rigidum
Sensible
LR-10
LR-25
diclofop
DL50
IR
26,2
>3360
128
>3360
128
2470
94
DL50
IR
28
>3360
128
128
>3360
ACCasa
tepraloxydim
DL50
IR
7,08
6,3
0,9
5,6
0,8
4,8
0,7
DL50
IR
pinoxaden
DL50
IR
6,6
12,6
1,9
25,0
3,8
13,6
2,1
DL50
IR
Flucarbazone
DL50
IR
2,6
2,9
1,1
>632
>243
>632
>243
DL50
IR
Iod+mes
DL50
IR
2,5
2,76
1,1
21,4
8,6
96,6
39
DL50
IR
14,5
20,6
740
16,6
18,6
>300
1,2
18
37,2
130
>632
7,2
>144
37
ndice
de
resistencia;
DL50:
dosis
letal
media;
iodosulfuron+mesosulfuron.
1,4
51
IR:
ALS
3,5
17
5,1
20
iod+mes:
Resistencia a glifosato
Antes de la siembra de los cultivos, el herbicida ms utilizado durante muchos aos para
controlar malezas gramneas y hoja ancha, anuales y perennes, ha sido glifosato, un
inhibidor de la enzima 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintasa (EPSFs) introducido a
fines de los setenta. La inhibicin de la EPSFs reduce la sntesis de los aminocidos
aromticos (fenilalanina, tirosina y triptfano), lo cual altera la produccin de protenas
y previene la formacin de compuestos secundarios. Durante muchos aos se pensaba
que la resistencia a glifosato nunca iba a ocurrir, atribuible a sus propiedades nicas,
tales como mecanismo de accin, metabolismo, estructura qumica y falta de actividad
residual en el suelo (BRADSHAW et al, 1997). Sin embargo, desde que se confirm el
primer caso de resistencia a glifosato en Lolium rigidum, en Australia (PRATLEY et
al., 1996), se han reportado nuevos casos en 16 especies de malezas en diversos pases
(HEAP, 2009). En Chile, se han documentado siete biotipos resistentes a glifosato,
todos en ballica (L. multiflorum). Los primeros biotipos (dos) se detectaron en viedos
en la zona central (PREZ y KOGAN 2003) y en barbecho qumico (uno) para cereales
en la zona sur (ESPINOZA et al., 2005). Los otros biotipos (cuatro) se detectaron en
cultivos de trigo en la zona sur (ESPINOZA et al., 2008) (Tabla 7).
En la zona sur, el primer biotipo de L. multiflorum resistente a glifosato fue Vil-1,
detectado en la localidad de Vilcn, Regin de La Araucana, desde un sitio con un
historial de aplicaciones reiteradas de glifosato (12 veces durante el periodo 19892001), antes de sembrar trigo o avena con labranza cero y mnima. En bioensayos de
dosis respuesta este biotipo present resistencia a los herbicidas ALS iodosulfuron y
flucarbazone (ESPINOZA et al., 2005; VALVERDE, 2007). Los ltimos biotipos de L.
multiflorum resistente a glifosato corresponden al LM-30, LM-33, LM-45 y LM-54
(Tabla 7). En bioensayos de dosis respuesta realizados en LM-30, LM-33, LM-45, se
encontr que los tres biotipos fueron resistentes a haloxyfop, dos biotipos fueron
resistentes a tepraloxydim y un biotipo fue resistente a clethodim. Los tres biotipos
fueron resistentes al ALS iodosulfuron, aunque la resistencia fue baja, excepto en un
biotipo. Ninguno de los biotipos fue resistente a la mezcla de herbicidas ALS
imazamox+imazapyr. La resistencia mltiple a glifosato y a herbicidas con otros
Ubicacin
Vilcn, Regin de La
Araucana
Purranque, Regin de
los Lagos
San Juan de la Costa,
Regin de Los Lagos
Perquenco, Regin de
La Araucana
Lautaro, Regin de
La Araucana
Situacin
de colecta
Barbecho
qumico
Trigo
Ao de
colecta
2000
Ao de
confirmacin
2002
Nivel de
resistencia
4,6
2006
2008
> 68
Trigo
2006
2008
22
Cebada
2007
2008
Trigo
2007
2008
9,2
haloxyfop
DL50
IR
13,3
>248
71
>248
>19
5,4
>19
ACCasa
tepraloxydim
DL50
IR
14
63
15
134
4,5
1,1
9,6
ALS
clethodim
DL50
IR
18,4
205
20
140
11
1,1
7,4
iodosulfuron
DL50
IR
3.5
10.1
9.6
21.1
2,9
2,8
6
Imax+imar
DL50
IR
0.2
0.23
0.28
0.2
1,2
1,4
1,1
Principales causas
Sistema de cultivo. El sistema de cultivo practicado por los agricultores durante las dos
ltimas dcadas, se ha caracterizado fundamentalmente por un uso intensivo de cultivos
anuales, tendencia al monocultivo de cereales principalmente trigo y siembra con
labranza cero (Figura 5). Esto ha implicado una dependencia absoluta del herbicida
glifosato para controlar malezas antes de la siembra y de los herbicidas ACCasa y ALS
despus de la siembra. Lo anterior ha significado incrementar la frecuencia de uso de
los mismos herbicidas o con igual modo de accin para controlar malezas gramneas.
En Chile, el trigo es el cultivo anual ms importante, sin embargo la superficie
sembrada se concentra entre las regiones del Bio Bio y La Araucana (Figura 6),
cultivndose casi en su totalidad bajo condiciones de secano. En la actualidad, la
superficie sembrada alcanza las 280.00 ha (ODEPA, 2009).
10
100
90
80
Frecuencia(%)
70
60
50
40
30
20
10
0
Labranza
Cerolabranza
Mixto
Figura 5. Sistema de siembra ms utilizada en los ltimos 5-10 aos en el sur de Chile.
(DAZ y ESPINOZA, 2006). Los datos fueron obtenidos de una encuesta realizada a
agricultores con malezas gramneas resistentes en sus campos de las regiones Del Bio
Bio, La Araucana, Los Rios y Los Lagos.
Trigo
Avena
Cebada
Raps
Lupino
Superficieconcultivosanuales(Hectreas)
120000
100000
80000
60000
40000
20000
0
DelBoBo
LaAraucana
LosRios
LosLagos
Figura 6. Superficie sembrada con cultivos anuales en la zona sur. Cifras obtenidas del
VII Censo nacional agropecuario.
11
Caractersticas de los herbicidas ACCasa y ALS. En muchos casos, las malezas han
evolucionado resistencia a los herbicidas inhibidores de la enzima acetil-CoA
carboxilasa (ACCasa) e inhibidores de la enzima acetolactato sintasa (ALS), despus
de cinco e incluso menos aos de uso (MALLORY-SMITH et al., 1990; TARDIF,
1993). Durante los ltimos 27 aos se han reportado 36 especies de malezas gramneas
resistentes a herbicidas ACCasa en el mundo (HEAP, 2009). Por otra parte, en slo 22
aos, 102 especies desarrollaron resistencia a ALS, de las cuales 21 son gramneas. El
gran nmero de especies y la velocidad con que se ha desarrollado resistencia a los
ACCasa y ALS explican que estos herbicidas sean considerados de alto riesgo para el
desarrollo de resistencia (MOSS, 2007). Segn FISHER et al. (2008) la resistencia a
ACCasa y ALS es frecuente y rpida de seleccionar debido a que son posibles muchas
mutaciones.
Desde su introduccin, a fines de los 70, los herbicidas ACCasa se han utilizado
ampliamente para el control pos-emergente de malezas gramneas en trigo, cebada,
lupino y canola en el pas (Tabla 9). Antes de que se confirmara la resistencia a ellos,
los ms utilizados en trigo fueron diclofop y clodinafof, y en cultivos de dicotiledneas
como canola y lupino fueron haloxyfop y fluazifop butil, entre otros ACCasa. Los
herbicidas ALS con accin de control de malezas gramneas en pos-emergencia y
recomendados en trigo y otros cereales, son de reciente introduccin, ya que el primero
fue iodosulfuron, introducido recin en 2001 (Tabla 10). Los ALS tambin se han
empleado masivamente desde su introduccin al pas debido a que representan una
alternativa para el control eficaz de biotipos de malezas gramneas resistentes a los
ACCasa. Lamentablemente, las malezas gramneas no slo han evolucionado resistencia
a ALS sino que tambin ms rpidamente. Al respecto, es importante sealar que en el
sur del pas tard aproximadamente 10 aos de uso continuado para que se desarrollara
resistencia a ACCasa en ballica y avenilla. Por el contrario, antes de la comercializacin
del ALS iodosulfuron, ya existian algunos biotipos de ballica resistentes a l.
Tabla 9. Herbicidas ACCasa utilizados en cereales y otros cultivos.
Nombre
comn
diclofop
haloxyfop
fluazifop
clodinafop
clethodim
tepraloxydim
pinoxaden
Nombre comercial
Cascabel 28 EC, Iloxan 28 EC
Galan Plus
Hache Uno 2000 175 EC
Topik 240 EC, Hummer 240 EC
Centurin 240 EC
Aramo
Axial 050 EC
Grupo
qumico
FOP
FOP
FOP
FOP
DIM
DIM
DEN
Ao de
introduccin
1978
1985
1987
1990
1998
2005
2007
12
Ao de
introduccin
2001
2002
2004
2008
2008
Agradecimientos
Parte de los trabajos realizados fueron financiados por el Proyecto FONDEF D04i1022.
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between the linking protein and the herbicide, or from an overexpression of that protein.
The second group of basic mechanisms belong to those in which the target site is not
involved, also called herbicide exclusion mechanisms, mainly because of an increase in
the metabolic detoxification of the herbicide in non toxic products and of a lack of
absorption/penetration of the herbicide and a subsequent loss of transport via the
xylem/phloem of the herbicide at the linking protein. In this chapter a review of the
mechanisms involved in the resistance of plants to herbicides is made, making a greater
reference to those not involved in the target site.
Key words: Resistance, herbicides, weeds, mechanisms, target sites.
Introduccin
Durante la dcada de 1940, la introduccin de los herbicidas auxnicos, mostr a los
agricultores el potencial de los herbicidas para controlar las malas hierbas de hoja ancha
en cultivos herbceos. El uso de estas auxinas sintticas indujo a las compaas de
agroqumicos, a invertir en investigacin para sintetizar nuevas molculas para distintos
cultivos y malas hierbas. La comprobada eficacia de los herbicidas modernos les
permite a los agricultores producir sus cultivos de forma reiterada y rentable en los
mismos terrenos y optimizar sus ingresos. Sin embargo, una de las desventajas del uso
de estos productos es la evolucin de malas hierbas resistentes a herbicidas.
Aunque existen un nmero de herbicidas generales o totales que resultan activos frente
a cualquier tipo de planta, no cabe duda que, hoy da, los ms importantes tanto
cualitativa como cuantitativamente, son los herbicidas especficos o productos capaces
de controlar un amplio espectro de malas hierbas sin afectar a los cultivos a los que se
aplican. La selectividad puede deberse a causas fsicas o, ms frecuentemente,
bioqumicas (JGER, 1983), siendo en este ltimo caso consecuencia de las diferencias
genticas existentes entre distintas especies vegetales. Tal accin selectiva supone que
determinadas especies de plantas cultivadas, y tambin de malas hierbas, son capaces de
vivir y crecer a las dosis recomendadas de aplicacin agrcola del herbicida, aunque
puedan ser controladas a dosis varias veces superiores. Este tipo de respuesta se conoce
generalmente como tolerancia natural y ha sido definida por la HRAC (Herbicide
Resistance Action Committee) como la habilidad/aptitud heredable de una especie
vegetal a sobrevivir y reproducirse despus de un tratamiento, pudiendo considerarse
como una caracterstica a nivel de especie. Sin embargo, la variabilidad gentica puede
darse de forma intraespecfica. Debido a este hecho y como consecuencia de la presin
selectiva impuesta por la aplicacin continuada de herbicidas que caracteriza a los
modernos sistemas de produccin agrcola, es posible el desarrollo de biotipos de malas
hierbas que dejan de ser controlados por un determinado producto al que originalmente
eran susceptibles. Tal respuesta se conoce generalmente como resistencia, siendo una
caracterstica adquirida por una poblacin (biotipo) de una especie que careca de ella y
ha sido definida por la HRAC como la habilidad/aptitud heredable de una especie
vegetal a sobrevivir y reproducirse despus del tratamiento de un herbicida a dosis
normalmente letales para la misma especie susceptible. En una planta, la resistencia
puede ocurrir de una forma natural o puede ser inducida por tcnicas como la
ingeniera gentica o seleccin de variantes resistentes obtenidas por cultivos de tejidos
o mutagnesis. Esta definicin, bastante completa en s, presenta el problema de que se
asume que la resistencia est asociada nicamente a factores de tipo fisiolgico y/o
morfolgico (MAXWELL y MORTIMER, 1994). A diferencia de las plantas tolerantes,
las resistentes suelen sobrevivir no slo a las dosis de aplicacin agrcola del herbicida
sino a otras bastante superiores (DE PRADO et al., 1996).
El trmino de tolerancia se usa frecuentemente no slo para referirse a variaciones
entre especies, sino tambin en relacin con la variabilidad dentro de una especie
(LEBARON y GRESSEL, 1982). En este caso, tolerancia y resistencia son expresiones
que denotan diferencias en intensidad de un mismo fenmeno, considerndose la
resistencia como un caso extremo y menos frecuente de tolerancia (HOLT y
LEBARON, 1990) o considerando la tolerancia un mecanismo polignico y la
resistencia uno monognico (GRESSEL, 1985).
El trmino resistencia suele ir adjetivado con diversos modificadores que hacen alusin
a la posible pluralidad existente tanto en los mecanismos de resistencia que posee un
individuo como en los herbicidas a los que ste es resistente. Surgen as los conceptos
de resistencia cruzada y resistencia mltiple. Dependiendo de los autores
consultados, estas definiciones se asociarn a mecanismos de resistencia (JUTSUM y
GRAHAM, 1995):
-
Cada especie tiene una constitucin gentica particular y se considera que los genes de
resistencia estn presentes en las poblaciones silvestres, aunque en una proporcin muy
baja. Si la presin de seleccin asociada a la frecuencia de uso es la misma para dos
herbicidas, entonces la frecuencia inicial de genes influir sobre el tiempo requerido
para que se detecten individuos resistentes. Se estima que la frecuencia de genes de
resistencia a las triazinas, que se heredan a travs del genoma de los plstidos, es de
aproximadamente 10-8 (GRESSEL, 1991), mientras que la de las sulfonilureas es de
alrededor 10-6 (CHALEFF y DAY, 1984). Esta proporcin se incrementa conforme la
presin de seleccin aumenta por el uso continuado del mismo herbicida o de
compuestos que pertenecen a la misma familia qumica o que comparten el mismo
modo de accin, o de herbicidas que son metabolizados de manera similar en la planta.
A medida que aumenta la tasa de mortalidad obtenida con el herbicida, aumenta
tambin la presin de seleccin. El tiempo requerido para que se reconociera la
resistencia a clorsulfurn y simazina en el campo fue de 3-5 aos y 10 aos,
respectivamente, lo que refleja la estimacin inicial de la frecuencia de genes
(MAXWELL y MORTIMER, 1994).
La ltima revisin realizada por HEAP (2009) (www.weedscience.com) seala 331
biotipos resistentes pertenecientes a 189 especies, de las cuales 113 son dicotiledneas y
76 monocotiledneas distribuidas en ms de 300.000 campos (Tabla 1).
Tabla 1. Resumen de malezas resistentes a herbicidas (HEAP, 2009).
Grupo de herbicidas
Modo de Accin
Inhibidores de la ALS
Inhibicin de la acetolactato
sintetasa ALS (acetohidroxicido
sintetasa AHAS)
Inhibicin de la fotosntesis en el
fotosistema II
Inhibicin de la acetil coenzima
carboxilasa (ACCasa)
Auxinas sintticas (como la accin
del cido indolactico AIA)
Desviacin del flujo electrnico en
el fotosistema I
Inhibicin de la fotosntesis en el
fotosistema II
Inhibicin de la EPSP sintasa
Inhibicin de la unin de los
microtbulos en la mitosis
Inhibicin de la sntesis de los
lpidos (no ACCasa)
Decoloracin: inhibicin de la
sntesis de los carotenoides (punto
desconocido)
Inhibicin de la protoporfiringeno
oxidasa (PPO)
Inhibicin de la divisin celular
Inhibidores del
Fotosistema II
Inhibidores de la
ACCasa
Auxinas Sintticas
Bipiridilos
Ureas y Amidas
Glicinas
Dinitroanilinas y
otros
Tiocarbamatos y
otros
Triazoles, Ureas,
Isoxazolidionas
Inhibidores de la PPO
Cloroacetamidas y
otros
Grupo
HRAC
B
Ejemplo de
Herbicidas
Clorsulfuron
Total
101
C1
Atrazina
68
36
Diclofopmetil
2,4-D
Paraquat
24
C2
Clorotoluron
21
G
K1
Glifosato
Trifluralina
16
10
Trialato
F3
Amitrol
Oxifluorfen
Butaclor
K3
28
Inhibidores de la
biosntesis de
Carotenoides
Acidos
arilaminopropinicos
Nitrilos y otros
Inhibidores de la
Mitosis
Inhibidores de
celulosa
Desconocido
Decoloracin: inhibicin de la
sntesis de los carotenoides a nivel
de la fitoeno desaturasa (PDS)
Desconocido
F1
Flurtamon
Inhibicin de la fotosntesis en el
fotosistema II
Inhibicin de la mitosis
C3
Flampropmetil
Bromoxinil
K2
Profam
Diclobenil
(cloro) flurenol
MSMA
Organoarsenicales
Desconocido
Nmero total de biotipos resistentes.
1
331
Fase I
Fase II
Fase III
Reacciones
Propiedades
iniciales
Compuesto inicial
Oxidacin,
hidrlisis,
reduccin
Conjugacin
Conjugacin
secundaria o
incorporacin a
biopolmeros
Solubilidad
Lipoflico
Anfoflico
Hidroflico
Hidroflico o
insoluble
Fototoxicidad
Txico
Modificado o
menos txico
Muy reducida o
no txico
No txico
Movilidad
Selectiva
Modificada o
reducida
Limitada o
inmvil
Inmvil
10
La conjugacin con glutatin est catalizada por una familia de enzimas glutatin-Stransferasas ms o menos especficas que se encuentran de manera constitutiva o
inducible en muchos tejidos vegetales (DEVINE et al., 1993) (Figura 5).
11
Fase III o deposicin. La ruta metablica seguida por un herbicida afecta de gran
manera el uso final de los metabolitos terminales y conjugados. Los conjugados
glicsidos son depositados en la vacuola donde quedan almacenados, mientras que los
conjugados de origen aminoacdico son excretados a la pared celular donde se integran
en el componente de lignina de stas, formando un residuo insoluble (PILLMOOR et
al., 1984) (Figura 7). Si bien estos procesos de deposicin no son completamente
irreversibles, la reentrada de los aglicones herbicidas o sus productos de conversin en
el pool de herbicida activo intracelular es muy lenta (DEVINE et al., 1993). Como
puede observarse en la figura el herbicida una vez que entra en la planta puede ser
metabolizado (activando o desactivando el herbicida) y posteriormente pasar a la
vacuola como material de deshecho o bien directamente pasar a la vacuola donde queda
secuestrado y lentamente degradado.
La resistencia a herbicidas por detoxificacin es un proceso muy frecuente. Sin
embargo, este mecanismo suele venir asociado a fenmenos de resistencia cruzada, lo
que implica que un mismo individuo tiene la capacidad de metabolizar molculas muy
diferentes pertenecientes a diversas familias qumicas. Esta moderada resistencia a un
amplio espectro de productos hace extremadamente difcil el control de estos biotipos
de malas hierbas mediante el slo uso de mtodos qumicos.
Resistencia asociada a procesos de secuestracin o compartimentacin. Los
fenmenos de compartimentacin entendidos como la secuestracin del herbicida o sus
metabolitos en un lugar especfico de la clula, son mecanismos de
resistencia/tolerancia poco conocidos debido a que las evidencias que los apoyan son en
muchos casos circunstanciales (COUPLAND, 1991; OWEN, 1991). Los escasos casos
en la bibliografa relacionan este tipo de mecanismos de resistencia con herbicidas de
accin hormonal e inhibidores del fotosistema I, justificando la resistencia tanto en
lneas de cultivos celulares como en plantas enteras como un incremento en la
capacidad de secuestrar el herbicida o los metabolitos potencialmente fitotxicos dentro
de la vacuola celular (Figura 7). Sin embargo, los procesos subyacentes a estos
mecanismos de secuestracin son todava desconocidos.
12
13
14
Agradecimientos
Este trabajo ha sido financiado por el M.E.C (proyecto AGL2007-0835). Parte de este
capitulo pertenece a la Tesis Doctoral de Don Jos L. De Prado Ruiz-Santaella.
Bibliografa
15
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19
Introduccin
Setenta aos de monocultivo continuo en California ha llevado a serias infestaciones de ciertas
malezas muy dainas de las cuales la Echinochloa phyllopogon (Stapf) Koss, E. oryzoides (Ard.)
Fritsch y E. crus-galli (L.) Beauv. var. crus-galli son las ms competitivas y difciles de controlar.
El control de malezas en arroz ha dependido fuertemente en el empleo repetido de los pocos
ingredientes activos disponibles, lo cual ha llevado a la evolucin de resistencia en la mayora de
las especies problemticas. La resistencia de E. phyllopogon hacia la mayora de los herbicidas que
la pueden controlar representa uno de los problemas ms graves para la produccin de arroz en
California (FISCHER et al., 2000). Varios niveles de resistencia son observables y bajos niveles de
resistencia son frecuentes con clomazone que mata a las plantas al exponer a los cloroplastos a
dao fotoactivo (tal como el que causan las formas de oxgeno reactivo, FOR) (FERHATOGLU y
BARRETT, 2006). Recientemente se ha documentado resistencia de bajo nivel a la atrazina (cuya
toxicidad es generada por dao de FOR) en Chenopodium album L. (PAVLOVIC et al., 2008), lo
cual podra sugerir elementos en comn con el caso de E. phyllopogon. Discutiremos aqu (a)
mecanismos de resistencia ajenos al sitio activo (ASA) en E. phyllopogon proveniente de arrozales
de California b) resistencia a herbicidas generadores de FOR en E. phyllopogon y C. album, y c) la
hiptesis de que la resistencia tipo ASA y la tolerancia a estreses ambientales puede estar
relacionada y tener implicancias para el manejo de la resistencia a herbicidas.
Generacin de la informacin
Se investigaron mecanismos de resistencia en E. phyllopogon mientras se realizaban estudios
paralelos relacionando caractersticas morfo-fisiolgicas con sensibilidad a la atrazina en un biotipo
de Chenopodium album con tolerancia a atrazina colectado en campos de maz en Serbia. Estos
trabajos involucraron estudios de anlisis de crecimiento, cuantificacin de absorcin y
translocacin de herbicidas marcados con 14C, estudios de respuesta a dosis en plantas, ensayos
enzimticos de sensibilidad en el sitio activo (ALS, ACCasa) y de metabolismo de herbicidas
(actividad y contenido de citocromo P450, perfiles metabolmicos). La diseminacin de biotipos de
E. phyllopogon con resistencia a mltiples herbicidas en California se estudi usando marcadores
AFLP. Para estudiar la resistencia a herbicidas fotooxidativos se cuantificaron niveles de pigmentos
foliares y la emisin de fluorescencia cloroflica (Fv/Fm). Los procedimientos detallados de estos
estudios aparecen en la bibliografa oportunamente citada en este trabajo.
al., 2007; RUIZ-SANTAELLA et al., 2006). Resistencia a nivel del sitio de accin (SA) an no se
haba encontrado, pero recientes estudios con quinclorac sugieren que R-E. phyllopogon tiene poca
elevacin de la biosntesis de etileno en respuesta a quinclorac. Esto puede estar relacionado con
alteracin de la percepcin y transduccin de la seal auxnica de este herbicida; R-E phyllopogon
tambin tiene elevada actividad de la enzima -cianoalanina sintetasa encargada de detoxificar al
cianuro resultante de la biosntesis de etileno y tambin una elevada capacidad de detoxificar
quinclorac via P450. Es decir R-E. phyllopogon exhibe una verdadera resistencia multifactorial tipo
ASA hacia este herbicida (MILAN et al., 2009). El metabolismo de tiocarbamatos involucra
bioactivacin mediatizada por P450 hacia una forma ms txica previa detoxificacin final de este
herbicida via conjugacin (USUI, 2001). Estudios metabolmicos sugieren importantes diferencias
fisiolgicas entre biotipos R y S (Figura 1) (YASUOR y FISCHER, 2008). Dado que los biotipos
R-E. phyllopogon se habran originado de una nica introduccin fundacional de acuerdo a un
estudio efectuado usando marcadores AFLP (TSUJI et al., 2003), todas esas plantas exhiben los
mismos patrones de resistencia conferidos por esos diversos mecanismos enzimticos
mencionados, entre las que se destaca la actividad inducible de diversas isoenzimas P450 altamente
activas y con especificidad hacia mltiples sustratos que son capaces de detoxificar a diversos
herbicidas (YUN et al., 2005) (Tabla 1). Los bajos niveles de resistencia a clomazone en R-E.
phyllopogon (Figura 2) reflejan de forma similar su baja sensibilidad al paraquat ( Figura 3) lo que
resultaba en menores daos cloroplsticos en plantas R comparadas con plantas S (YASUOR et al.,
2008). La presumible falta de metabolismo de paraquat en plantas no puede explicar estas
respuestas. La adicin de glutatin aliviaba el dao de paraquat en las plantas S mucho ms que en
las R, lo cual sugera que proteccin contra fotooxidacin por FOR lograda a travs del ciclo
acorbato/glutatin podra estar involucrada en la baja sensibilidad al paraquat del biotipo R
(FISCHER et al., 2008). La menor efectividad del propanil sobre R-E. phyllopogon ciertamente
involucra mayor actividad P450 dado su participacin en el metabolismo parcial de este herbicida y
sera lgico tambin pensar que los sistemas de proteccin elevada contra FOR podran estar
tambin operando en este caso tambin.
malezas, con menor dependencia en herbicidas, para retrasar la evolucin de biotipos de malezas
con resistencia a herbicidas.
Biotipo
N de hojas
planta-1
rea foliar
(cm2 plant-1)
MRD
(s cm-1)
Tasa de traspiracin
(micro g cm-2 s-1)
S
VC
R
8.250.96 a a
6.500.58 b
7.500.31 ab
24.502.52 a
18.001.63 b
23.001.18 a
0.630.14 b
2.821.26 a
0.670.04 b
8.771.67 b
5.981.32 c
17.150.63 a
P>F
0.038
0.011
0.003
<0.0001
Error estndar
0.400
1.230
0.367
0.767
G.L. del error= 9
a
Medias (ES) seguidas por una misma letra no difieren estadsticamente segn contrastes
ortogonales efectuados para P = 0.05, los cuales se condujeron solamente cuando el efecto del
factor biotipo result significativo (P 0.05) en la prueba del anlisis de varianza.
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Introduccin
En los sistemas de cultivos de altos insumos alrededor del mundo, generalmente los
agricultores no adoptan medidas preventivas para evitar o retrasar el desarrollo de
resistencia a herbicidas. Comnmente, stas son adoptadas slo despus que la
resistencia se ha desarrollado (BECKIE y GILL, 2006). Lo anterior es debido a que los
costos y esfuerzos para prevenir o retrasar el desarrollo de la resistencia a herbicidas son
percibidos como similares a los relacionados con el manejo de una resistencia ya
confirmada. Tambin puede deberse al inters por parte de los agricultores de optimizar
en el corto plazo el retorno econmico o simplemente por la incapacidad para evaluar
los riesgos asociados con las malezas resistentes (ROTTEVEEL et al., 1997). La baja
adopcin de prcticas de manejo tambin puede deberse a la ausencia de herbicidas
alternativos o con diferente mecanismo de accin o de diferentes grupos qumicos, para
controlar las malezas problemas o por expectativas poco realistas en el sentido de que
nuevas tecnologas de herbicidas podran estar disponibles en el futuro (LLEWELLYN
et al., 2002). El costo de prevenir la resistencia es significativamente menor al costo de
manejarla una vez que se ha desarrollado totalmente, principalmente cuando la
resistencia se presenta a diferentes grupos de herbicidas o cuando quedan pocos
herbicidas disponibles para controlar las malezas resistentes (ORSON, 1999). El
principal costo directo de la resistencia puede ocurrir durante el primer ao de
deteccin, debido al deficiente control de la maleza resistente y la consecuente prdida
de rendimiento del cultivo (PETERSON, 1999). Malezas con alto potencial para
producir semillas como ballica (L. rigidum, L. multiflorum) (BOSQUE et. al., 2002),
pueden incrementarse rpidamente en el campo como consecuencia de un deficiente
control debido a la resistencia y, por lo tanto, ocasionar prdidas importantes en el
rendimiento de trigo. La resistencia dificulta el manejo adecuado de las malezas y
adems de incrementar los costos de produccin, aumenta la carga ambiental de
herbicidas cuando el deficiente control de la maleza resistente obliga a usar dosis ms
altas o repetir la aplicacin.
En el sur de Chile, principal zona productora de trigo, avena, cebada, raps canola y
lupino, el desarrollo de resistencia en malezas gramneas como ballica (Lolium
multiflorum y L. rigidum), avenilla (Avena fatua) y cola de zorro (Cynosurus echinatus)
hacia los herbicidas ACCasa y ALS ha sido creciente a partir de la dcada del 90. Por
otra parte, en los ltimos aos tambin se ha confirmado la resistencia en L. multiflorum
al herbicida glifosato (Espinoza et al 2005; Espinoza et al 2008). En el presente trabajo
se analizan los factores de riesgo para el desarrollo de resistencia a herbicidas y las
estrategias para prevenirla o atrasarla, con nfasis en el manejo de herbicidas para la
agricultura con cultivos extensivos del sur del pas.
Biologa de la maleza
Ciclo de vida. La resistencia de los herbicidas aparece ms frecuentemente en malezas
anuales. Debido a que las malezas anuales slo se reproducen por semillas el potencial
para transferir la resistencia a la prxima generacin es relativamente alta (OWEN,
2001). Las malezas anuales se caracterizan tambin por producir un elevado nmero de
semillas por planta, lo que aumenta el material gentico que est presente en el banco de
semillas y, por lo tanto, la probabilidad a que aparezca un gen mutado).
Longevidad de la semilla. Si el suelo es cultivado, las semillas de vida larga de
poblaciones susceptibles que estaban enterradas diluirn la poblacin de semillas
resistentes y la resistencia podr ser atrasada. Por otra parte, las semillas que
permanecen en la superficie del suelo y tienen una vida corta (con o sin dormancia)
morirn o germinarn dentro de unos pocos aos. Por esta razn, en los sistemas con
cero labranza que dejan semillas de malezas en la superficie del suelo, estas
corresponden principalmente a semillas resistentes, ya que las susceptibles germinan y
son controladas con el herbicida.
Riesgo de resistencia
Bajo
Moderado
Alto
Con ms de 2
Con 2
Con 1
mecanismos de mecanismos de mecanismo de
accin
accin
accin
Cultural*,
mecnico y
qumico
Cultural y
qumico
Solamente
qumico
Una vez
Ms de una vez
Varias veces
Rotacin
amplia
Rotacin
limitada
Monocultivo
Limitada
Frecuente
Moderado
Alto
Disminuyendo
Deficiente
Bueno
* El control cultural puede implicar labranza del suelo, quema de restrojos, cultivos competitivos, semilla
certificada, etc.
Tabla 2. Herbicidas disponibles para controlar malezas gramneas en trigo y otros cultivos extensivos agrupados segn mecanismo de accin.
TRIGO
diclofop metil
clodinafop propargil
pinoxaden
CEBADA
AVENA
TRITICALE
diclofop metil
pinoxaden
LUPINO
Clethodim
fluazifop-p-butil
haloxyfop metil
propaquizafop
quizalofop-p-etil
trepaloxydim
RAPS CANOLA
clethodim
fluazifop-p-butil
haloxyfop metil
propaquizafop
quizalofop-p-etil
trepaloxydim
idosulfuron metil-Na
idosulfuron metil-Na
idosulfuron metal-Na+
mesosulfuron metil
idosulfuron metil-Na+
mesosulfuron metil
flucarbazone sdico
imazamox + imazapyr
pyroxulam
GRUPO N (Pre-emergentes)
prosulfocarb
prosulfocarb+(metribuzina, C1)
prosulfocarb
GRUPO C1 (Pre-emergentes)
simazina
GRUPO C2 (Pre-emergentes)
diuron
isoproturon
diuron
diuron
GRUPO K1 (Pre-emergentes)
trifluralina (pre)
pendimetalina
GRUPO K3 (Pre-emergentes)
flufenacet+(metribuzina, C1)
flufenacet+(metribuzina, C1)
pre: recomendado en pre-emergencia; pos: recomendado en pos-emergencia; psi: recomendado en pre-siembra e incorporado en el suelo.
trifluralina (pre)
pendimetalina
metazachlor (pos)
Grupo
qumico
Nombre comn
Nombre comercial
Cultivo
Clodinafop-propargil
Topik 240 EC
Trigo
Clodinafop-propargil
Hummer 240 EC
Trigso, cebada
Diclofop-metil
Cascabel 28 EC
Trigo, cebada
Diclofop-metil
Iloxan 28 EC
Trigo, cebada
Fluazifop -p-butil
Canola, lupino
Haloxyfop-metil
Galant Plus
Canol, lupino
Propaquizafop
Agil 100 EC
Canola, lupino
Clethodim
Centurin 240 EC
Canola, lupino
Clethodim
Centurin Super
Canola, lupino
Tepraloxydim
Aramo
Canola, lupino
Pinoxaden
Axial 050 EC
Trigo
Iodosulfuron metil-Na
Hussar 20 WG
Iodosulfuron metil-Na
Ovassion 5.26 WP
Iodosulfuron metil-Na+
mesosulfuron metil
Cossack 150 WG
Trigo, triticale
Flucarbazone
Vulcano 70% WG
Trigo
Flucarbazone
Everest
Trigo
IMI
Imazamox + Imazapyr
Eurolightning
TP
Pyroxulam
Admitt
Trigo, cebada
FOP
ACCasa
DIM
DEN
SU
ALS
SCT
Herbicidas ACCasa y ALS. Se observa que todos los herbicidas ACCasa controlan
eficazmente la avenilla y ballica, y la mayora controla eficazmente cola de zorro y
tembladerilla (Tabla 4). Por otra parte, la mayora de los herbicidas ACCasa no
controlan vulpia. Respecto a los ALS (Tabla 5), todos controlan eficazmente avenilla y
ballica, sin embargo, slo algunos herbicidas controlan eficazmente cola de zorro y
vulpia.
Tabla 4. Eficacia de algunos herbicidas ACCasa en distintas malezas gramneas.
Herbicidas ACCasa
Maleza
gramnea
FOP
DIM
DEN
clod
dicl
flua
halo
prop
clet
tepr
pino
Avenilla
S
S
S
S
S
S
S
S
Ballica
MS-S
S
S
S
S
S
S
S
Cola zorro
S
T
S
S
S
S
S
T
Vulpia
T
T
T
T
T
MSS
MS-S
T
Tembladerilla
T
MS
S
S
S
S
S
MS-S
clod: clodinafop; dicl: diclofop; flua: fluazifop; halo: haloxyfop; prop: propaquizafop; clet: clethodim;
tepr: tepraloxydim; pino: pinoxaden; FOP: ariloxifenoxipropionatos; DIM: ciclohexanodionas; DEN:
fenilpirazolines.
S = susceptible, 91 a 100% control.
MS = moderadamente susceptible, 71 a 90% de control.
MT = moderadamente tolerante, 50 a 70% de control.
T = tolerante, control inferior a 50% o sin control.
SU
ST
IMI
TP
iodo
iodo+meso
flua
imaz+imar
pyro
Avenilla
MS-S
S
S
S
S
Ballica
S
S
MS-S
S
S
Cola zorro
T
T-MT
MS-S
MS-S
MS-S
Vulpia
T-MT
MS-S
MT
S
MT-MS
Tembladerilla
MS
S
MT-MS
S
MS
iodo: iodosulfuron; iodo+meso: iodosulfuron+mesosulfuron; flua: flucarbazone; imaz+imar:
imazamox+imazapyr; pyr: pyroxulam; SU: sulfonilureas; ST: sulfonil-aminocarbonil-triazolinona IMI:
imidazolinonas; TP: triazolopirimidinas.
S = susceptible, 91 a 100% control.
MS = moderadamente susceptible, 71 a 90% de control.
MT = moderadamente tolerante, 50 a 70% de control.
T = tolerante, control inferior a 50% o sin control.
10
diur
isop
fluf+
metr
meta
pend
pros
pros+
meto
sima
trif
MT-MS
Ballica
T-MT
MS
MT-MS
MS
MS-S
MT-MS
MS-S
Cola zorro
T-MT
MS
MT-MS
MT-T
MT-MS
MT-MS
MS-S
MS-S
MS-S
Avenilla
Vulpia
11
bien mojadas con el producto y ser tratadas preferentemente antes del estado de
macolla, de lo contrario el control de las plantas no es total.
El grupo de trabajo para la continuidad de glifosato de Australia (GSWG) recomienda la
rotacin de glifosato y paraquat antes de la siembra de los cultivos o el uso de la tcnica
del doble golpe, es decir, la aplicacin en secuencia de glifosato primero y paraquat
despus, durante la misma temporada. Lo anterior ha permitido controlar eficazmente
malezas resistentes a glifosato en Australia y a otros herbicidas comnmente utilizados
(WEERSINK et al., 2005).
Retraso en la siembra. El retraso en la fecha de siembra hace posible que exista ms
tiempo para la emergencia de plantas de ballica resistentes y poder controlar ms de una
vez, ya sea con herbicidas y/o mecnicamente.
Cultivacin el suelo. Permite una mayor y ms rpida emergencia de las malezas y por
lo tanto, aumenta la posibilidad de poder controlarlas antes de la siembra.
Despus de la siembra
Herbicidas pre-emergentes. En los ltimos aos, este tipo de herbicidas ha tenido una
amplia aceptacin entre los agricultores. Los resultados de trabajos recientes indican
que todos los herbicidas pre-emergentes recomendados en trigo y otros cultivos
extensivos y, que naturalmente poseen accin de control de Lolium, pueden controlar
los biotipos resistentes a glifosato (Tabla 7). En esta investigacin, se utilizaron los
biotipos de L. multiflorum resistentes aglifosato LM-30, LM-33 y LM-45 y diversos
herbicidas pre-emergentes recomendados en trigo, tales como diuron, isoproturon,
flufenacet+metribuzina y prosulfocarb, cada uno aplicado en la dosis tcnica y en otra
dosis un 50% ms alta. Se encontr que todos los herbicidas disminuyeron
significativamente el peso verde de la parte area de los diferentes biotipos de ballica en
relacin al tratamiento testigo sin herbicida, exceptuando diuron. El deficiente control
de los biotipos con diuron, no debera atribuirse a resistencia, ya que tambin control
deficientemente el biotipo sensible incluido como referencia.
Tabla 7. Disminucin (%) del peso verde de los biotipos LM-30, LM-33 y LM-45 con
herbicidas aplicados en pre-emergencia en la dosis tcnica y otra dosis un 50% mayor.
Diuron
Isoproturon
Flufenacet +
Prosulfocarb
Metribuzina
Biotipo de
1.000
g ha-1
1.500
g ha-1
2.000
g ha-1
3.000
g ha-1
120+88
g ha-1
180+132
g ha-1
4.000
g ha-1
6.000
g ha-1
Sensible
29
28
100
96
72
85
79
76
LM-30
30
100
100
80
90
69
65
LM-33
15
33
96
100
64
96
74
76
LM-45
24
74
99
100
81
89
87
92
ballica
Agradecimientos
Parte de los trabajos realizados fueron financiados por el Proyecto FONDEF D04i1022.
12
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13
14
Resumen:
Los herbicidas constituyen la principal herramienta de control de malezas en los cultivos
extensivos, sin embargo, la variabilidad gentica y presin de seleccin por la continua
aplicacin tiene como consecuencia el desarrollo de malezas resistentes (biotipos R). Este
fenmeno de caractersticas evolutivas, estara afectando en diferentes magnitudes a unas
100.000 ha en Chile con biotipos R de ballicas (Lolium multiflorum Lam., L. rigidum
Gaudin), avenilla (Avena fatua L.) y cola de zorro (Cynosurus echinatus L.). Los
herbicidas a los que se est generando resistencia son a diclofop y clodinafop (inhibidores
de ACCasa), iodosulfuron y flucarbazone (inhibidores de ALS) y glifosato (inhibidor de
EPSFs). La prevencin mediante una precisa y oportuna deteccin es el primer y ms
importante paso en el manejo de los biotipos R, orientando las estrategias de control y
evitando su diseminacin. Diversas metodologas han sido desarrolladas, las que
consideran evaluaciones de la planta entera, pasando por determinadas estructuras
vegetativas y reproductivas, midiendo la actividad de la enzima blanco del herbicida hasta
modernas tcnicas biotecnolgicas, todas ellas con el fin de agilizar el diagnstico de
biotipos R. En este trabajo, se discuten y comparan las principales bondades de cada uno
de los mtodos, prestando especial atencin a bioensayos que utilizan semilla. Este ltimo
ha permitido detectar respuestas diferenciales entre biotipos sensibles y resistentes en un
perodo corto para varios grupos de herbicidas. Se describen los principales aspectos en el
desarrollo y puesta punto de un test de germinacin in vitro para ballicas, avenilla y cola de
zorro. Los factores considerados fueron viabilidad, dormancia, condiciones de germinacin
de la semilla, y su respuesta a concentraciones de herbicidas y su correlacin con la
respuesta en planta. Finalmente, se concluye que el test cumple con ser preciso, rpido,
simple de ejecutar y evaluar, caractersticas apropiadas para constituirse como un servicio
de deteccin de biotipos R en un nmero importante de herbicidas inhibidores de ACCasa,
ALS y EPSFs.
Palabras clave: bioensayo, biotipos R, ballica, avenilla, cola de zorro.
Summary: Seed testing for detect weeds resistant to herbicides.
Herbicide constitutes the main tool of weed control in the cereal crops, nevertheless, the
genetic variability and pressure of selection by the continuous application has consequently
developed resistant weeds (biotypes R). This phenomenon of evolutionary characteristics,
is affecting in different magnitudes around 100,000 has in Chile with biotypes R of
ryegrass (Lolium multiflorum Lam., L. rigidum Gaudin), wildoat (Avena fatua L.) and
crested dogtailgrass (Cynosurus echinatus L.). The herbicides to which resistance is being
generated are diclofop and clodinafop (inhibiting of ACCasa), iodosulfuron and
flucarbazone (inhibiting of ALS) and glyphosate (inhibiting of EPSFs). The prevention by
early detection is the first and more important stage of biotypes R management, orienting
the control strategies and avoiding its dissemination. Diverse methodologies to detect its
presence have been developed, those that consider evaluations of the whole plant,
vegetative and reproductive structures; others that determined the activity of target enzyme
Mtodos de Deteccin
Uno de los mtodos ms empleado consiste en medir las diferencias en el desarrollo de las
plantas sometidas a diferentes dosis de herbicidas. Estos estudios de dosis-respuesta han
representado, en muchos casos, el paso inicial en la determinacin de biotipos resistentes.
El estudio se inicia con la colecta de semilla, para luego obtener plantas que se hacen
crecer bajo condiciones de invernadero o campo, cuantificando el efecto del herbicida
varias semanas despus de su aplicacin (MOSS, 1995; BECKIE et al., 2000). Si bien es
un mtodo preciso tiene como principales desventajas el largo tiempo de respuesta, altos
requerimientos de espacio fsico, muy demandante en mano de obra, y consecuentemente
de alto costo.
biotipo sensible (S) del biotipo R, de los parmetros de medicin y tiempos de respuesta
que no superan las dos semanas (Cuadro 1). En el caso de los inhibidores de ALS, grupo
conformado por 47 productos tcnicos (HRAC, 2000), la informacin para especies del
gnero Lolium, indican las concentraciones que permiten discriminar entre biotipo S y R
para 3 productos, los parmetros de medicin, y tiempos de respuesta que no superan los
10 das (Cuadro 2). Para L. multiflorum y el herbicida glifosato (Cuadro 3), tambin se
cuenta con antecedentes de las concentraciones del herbicida, parmetros y tiempos de
respuesta que permiten discriminar entre un biotipo R del S. Es importante destacar que en
relacin a los tiempos de respuesta, no est sealado o considerado tratamientos para la
ruptura de dormancia de la semilla.
Cuadro 1. Principales caractersticas de bioensayos con semilla para detectar resistencia de
malezas gramneas a herbicidas inhibidores de la ACCasa
HERBICIDA
Fenoxaprop-p
Setoxidim
Clethodim
Clodinafop
Tralkoxidim
Clodinafop
Pinoxadem
Clethodim
Fenoxaprop-p
Diclofopcido.
MALEZA
A. fatua
A. fatua
A. fatua
A. fatua
A. fatua
A. sterilis
A. sterilis
A. sterilis
Avena spp
L. rigidum
CONCENTRACIN
DISCRIMINATORIA
Cantidad
Basado en
(M)
10
DL biotipo S
5
DL biotipo S
1,5
>80% inh. biotipo S
3
>80% inh. biotipo S
5
>80% inh. biotipo S
1
CL50
0,5
CL50
0,25
CL50
21
No indica
31
Umbral de 20 mm
Parmetro
Tiempo
respuesta
Sobrevivencia
Coleoptilo
Coleoptilo
Coleoptilo
Coleoptilo
Raz
Raz
Raz
Brote
Coleoptilo
S/I
S/I
S/I
S/I
S/I
13 das
13 das
13 das
14 das
S/I
L. rigidum
29,1mg/L CL50
Raz y brote
Diclofopcido.
L. rigidum
0,06 mg/L CL50
Raz y brote
Clodinafopcido
L. rigidum
1,15 mg/L CL50
Raz y brote
tralkoxidim
L.
multiflorum
32
No
especifica
Brote > 1 cm
Diclofop
Lolium
spp
1
CL
Sobrevivencia
Clodinafop
50
Lolium spp
0,2
CL50
Sobrevivencia
Pinoxadem
Lolium
spp
0,05
CL
Sobrevivencia
Clethodim
50
DL: Dosis Letal; CL50: Concentracin Letal media; S/I: sin informacin
REFERENCIA
S/I
S/I
S/I
14 das
10 das
10 das
10 das
MALEZA
CONCENTRACIN
DISCRIMINATORIA
Cantidad (M)
Sulfometuron
L. rigidum
Iodosulfuron
Flucarbazone
L. multiflorum
L. multiflorum
0,027
0,9 mg /L
3,6 mg /L
Parmetro
Tiempo
respuesta
No indica
Coleoptilo
Coleoptilo
6-10 das
6-10 das
REFERENCIA
Basado en
>DL biotipo
S
CL50
CL50
Burnet et al.,
1994.
Daz et al, 2005
Daz et al, 2005
PARMETRO
Tiempo
respuesta
Longitud Brote
Longitud hoja
Germinacin
8 das
6-10 das
7 das
REFERENCIA
Prez y Kogan, 2002
Daz et al, 2005
Prez-Jones et al, 2007
Figura 1. Curvas de dosis-respuesta del biotipo R de ballica (LM-20) y sensible (cv. Tama).
Estudios en semilla. Para estos estudios se requiere de semilla viable y sin dormancia.
Una semilla es dormante cuando no tiene la capacidad para germinar en un periodo
especfico de tiempo bajo cualquier combinacin de factores fsicos ambientales normales
que sean favorables para su germinacin. La semilla de malezas no escapan a esta
situacin y es conocida la dormancia innata de duracin variable en especies del gnero
Avena y Lolium. En la literatura se describe varios tipos de dormancia, como fisiolgica,
morfolgica, morfofisiolgica y fsica (FINCH-SAVAGE & LEUBNER-METZGER,
2006), y para lo cual existen diversos tratamientos qumicos y fsicos con el fin de
incrementar la germinacin (ISTA, 1976; ELLIS et al., 1985; CFIA, 1997; DAZ et al.,
2007).
La viabilidad de la semilla se determin mediante el test de tetrazolium (ISTA, 1976;
AOSA, 2000). Los resultados indicaron ndices de viabilidad de 92 a 100% para la semilla
de ballica, avenilla y cola de zorro. La Figura 2 presenta una semilla de avenilla viable
(embrin coloreado) y otra inviable (embrin no coloreado). Posteriormente, se evalu la
germinacin, determinndose que en semilla colectada durante la temporada fue la que
present los mayores porcentajes de dormancia. Para la ruptura de la dormancia de la
semilla se evaluaron diferentes tratamientos fsicos (fro y descascarado) y qumicos
(KNO3 y cido giberlico) (ISTA, 1976; ELLIS et al., 1985; CFIA, 1997). Se lograron
adecuadas respuestas para todas las especies, cuando se utiliz una combinacin ptima en
base a un pre-tratamiento fsico seguido de otro qumico que fue coaplicado durante la
prueba de germinacin. Estos ensayos se realizaron en una cmara de germinacin
calibrada con ciclos trmicos, fotoperiodo y humedad, descritos en la literatura para
ballicas y avenilla; y para cola de zorro se utilizaron los de ballica (ISTA, 1976; CFIA,
1997).
Figura 2. Test de tetrazolium en avenilla, mostrando semilla (caripside) viable con embrin de
color rojizo (izquierda) e inviable con embrin sin coloracin (derecha).
Figura 3. Flujo del test de germinacin in vitro: pre-tratamiento de fro (1); cmara de germinacin
con semilla de biotipo R y S en placas petri (2); evaluacin (H: hoja; C: coleoptilo) (3) y anlisis
estadstico (4).
Diclofop
FR (P) FR (S)
7,3
1,6
14,5
2,4
20,6
3,6
7,2
11,2
20,6
4,0
2,1
2,1
5,0
4,9
5,3
27,6
Clodinafop
FR (P)
FR (S)
28,5
8,9
88,2
7,7
20,7
7,7
33,8
7,7
3,8
8,3
5,9
3,9
2,7
188,0
Iodosulfuron
FR (P) FR (S)
1,5
1,6
21,0
3,4
22,4
4,4
6,0
4,7
2,0
9,5
2,3
2,1
1,5
1,8
5,7
2,0
Glifosato
FR (P)
FR (S)
17,0
68,0
102,0
22,0
1.680
9,0
1.520
9,2
-
Diclofop
FR (P)
10,6
8,2
Clodinafop
FR (S)
2,7
3,3
FR (P)
2,7
2,2
FR (S)
14,9
10,7
Diclofop
FR (P)
FR (S)
17,2
14,9
12,9
17,4
9,2
6,8
Clodinafop
FR (P)
FR (S)
1,8
11,9
7,8
81,0
3,2
71,0
Flucarbazone
FR (P)
FR (S)
1,5
1,8
Conclusiones
Para los biotipos de ballicas, avenilla y cola de zorro y herbicidas evaluados, se comprob
que existe una buena correlacin entre la respuesta de germinacin in vitro con la
respuesta en planta para la identificacin de resistencia. El test con semilla tiene un
adecuado nivel de sensibilidad, dado que detecta biotipos con bajos niveles de resistencia
en planta. Tambin se comprob la rapidez de respuesta, ya que se pudo identificar la
resistencia en un plazo de 14, 19 y 25 das para ballicas, avenilla y cola de zorro,
respectivamente. En consecuencia, se considera que este test cumple con las caractersticas
de precisin, rapidez, simplicidad de ejecucin y evaluacin, y bajo requerimiento de
espacio fsico en comparacin al bioensayo con planta. Todo lo anterior revela que este test
incorpora caractersticas apropiadas para implementarse como servicio rutinario en la
deteccin de ballicas, avenilla y cola de zorro resistentes a un nmero importante de
herbicidas inhibidores de ACCasa, ALS y EPSFs.
Agradecimiento
Este trabajo fue financiado por el Proyecto FONDEF D04I1022.
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Introduccin
La agricultura moderna se ha hecho dependiente de los herbicidas por las reconocidas y
diversas ventajas que ofrecen. Sin embargo, el uso continuo a travs de los aos, propio de
una condicin de monocultivo, se traduce normalmente en la aparicin de biotipos
resistentes (biotipos R). Lo anterior se considera particularmente cierto, para aquellos
herbicidas en que su selectividad depende de un blanco nico en la planta, como aquellos
que inhiben la enzima Acetilcoenzima A carboxilasa (ACCasa) y la enzima acetolactato
sintasa o cido acetohidroxi sintasa (ALS o AHAS). Herbicidas graminicdas
comercialmente muy importantes y muy efectivos se caracterizan por ser potentes
inhibidores de la ACCasa y ALS.
La aparicin de biotipos R ha tenido un crecimiento exponencial durante estas ltimas
dcadas. Del total de biotipos R descritos a la fecha, que alcanza a 332 (HEAP, 2009,
http://www.weedscience.com), alrededor de un 31 % presentan resistencia a herbicidas
inhibidores de la ALS y un 11% a inhibidores de la ACCasa. Estos biotipos se encuentran
distribuidos en 60 pases, concentrndose mayoritariamente en Estados Unidos, Australia,
Canad, Francia y Espaa (HEAP, 2009). La situacin en Chile pareciera no ser diferente.
Datos generados estos ltimos 3 aos han permitido confirmar, la existencia de al menos
47 biotipos R de gramneas (ballicas, avenilla y cola de zorro) a herbicidas empleados
normalmente en el control de malezas en trigo.
A nivel mundial y de manera simultnea a la aparicin de biotipos R, se ha ido acumulando
conocimiento de los diversos mecanismos bioqumicos y moleculares asociados al
fenmeno de la resistencia. Entendiendo que los mecanismos que gobiernan la resistencia
pueden ser mltiples, aqu se revisa y describen aquellos conocidos como asociados al sitio
activo, para diferentes malezas gramineas a nivel mundial y lo que se ha logrado determinar
en Chile en torno a biotipos R de ballicas en trigo. Simultneamente, se describe un test
molecular que est diseado para identificar rpidamente los biotipos R de ballicas respecto
a los sensibles, de tal forma de apoyar al agricultor, idealmente dentro de la misma
temporada del cultivo para minimizar su impacto y reducir su dispersin.
Cuadro 1.
Sustituciones aminoacidicas en la ACCasa plastdica, descritas a nivel
mundial en diferentes malezas gramneas y que estn asociadas a resistencia para uno o
ms herbicidas inhibidores de la ACCasa, determinadas mediantes bioensayos con plantas
completas.
Aminocido
y posicin1
Sustitucin
Especies de
maleza
Herbicidas
Gln-1756
Leu
L. rigidum
FOP y DIM
Leu
A. myosuroides
FOP y DIM
Leu
A. fatua
FOP y DIM
Leu
S. viridis
FOP y DIM
L. rigidum
FOP y DIM
Asn
Asn
L. multiflorum
A. sterilis
A. myosuroides
L. rigidum
A. sterilis
A. myosuroides
A. sterilis
Asn
L. rigidum
FOP y DIM
FOP
FOP
DIM
FOP
FOP
FOP
FOP
ILe-1781
Trp-1999
Trp-2027
ILe-2041
Val
L. rigidum
FOP
Gly
L. rigidum
DIM
Gly
A. sterilis
FOP y DIM
Gly
A. myosuroides
FOPs y DIMs
Gly
L. rigidum
DIM
Cys-2088
Arg
L. rigidum
DIM
Gly-2096
Ala
A. myosuroides
FOPs
Posicin aminoacidica de acuerdo a la secuencia de A. myosuroides
Asp-2078
Leu
Leu
Cys
Cys
Cys
Referencias
Cuadro 2.
Sustituciones aminoacidicas descritas a nivel mundial en diferentes malezas
gramneas y que conducen a un fenotipo de resistencia en uno o ms herbicidas inhibidores de
la ALS.
Aminocido
y posicin1
Pro 197
Trp 574
Ser 653
Gly 654
Sustitucin
Especie de maleza
SU
IMI
PTB
SC
T
Ser
His
Ser
Leu
Ser
Ser
Ala
Leu
Gln
Thr
Arg
Leu
Leu
Leu
Ile
Asn
Thr
Bromus tectorum
Scirpus juncoides
Scirpus juncoides
Scirpus juncoides
Hordeum leporinum
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Alopecurus myosuroides
Lolium rigidum
Lolium rigidum
Scirpus juncoides
Alopecurus myosuroides
Setaria viridis
Setaria viridis
Setaria viridis
Setaria viridis
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
R
r
r
r
r
S
S
S
S
S
S
S
S
S
ND
S
R
R
ND
R
R
R
R
ND
S
S
S
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
R
ND
R
R
S
S
R
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
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Resumen
Se describen las principales etapas de los test de deteccin molecular y de germinacin in
vitro, y una base de datos con herbicidas alternativos para el control de biotipos R, los
cuales conforman un servicio de deteccin de malezas gramneas resistentes a herbicidas
(SEDBIR).
Palabras claves: test molecular, test de germinacin in vitro, ballica, avenilla, cola de zorro.
Summary
It describes the main steps of molecular and in vitro germination test, and a database of
alternative herbicides to control biotypes R, which form a detection service of resistant
grass weeds (SEDBIR).
Key words: molecular test, in vitro germination test, ryegrass, wildoat, crested
dogtailgrass.
Introduccin.
La resistencia a herbicidas es un problema cada vez ms creciente, estimndose que del
total de la superficie sembrada con trigo, cebada, avena, lupino y raps en el pas,
aproximadamente 75 mil hectreas estn infestadas con biotipos resistentes (biotipos R) de
ballicas, 40 mil ha con biotipos R de avenilla y 25 mil ha con biotipos R de cola de zorro.
Enfrentar el problema de la resistencia exige de herramientas que permitan detectar
biotipos R en forma rpida y precisa, de manera de implementar medidas oportunas de
control. Las herramientas que conforman un Servicio de Deteccin de Biotipos R
(SEDBIR) son un test molecular, que en un plazo no mayor a 48 horas entregar
informacin sobre la existencia o no de ballicas resistentes, un test de germinacin in vitro
para ballicas, avenilla y cola de zorro, con un tiempo de respuesta de 2 a 4 semanas, y una
base de recomendacin con herbicidas alternativos para el control de biotipos R
detectados. Los usuarios directos de este servicio sern los productores de trigo y de otros
cultivos extensivos, tcnicos, profesionales y empresas que proveen de insumos a estos
rubros productivos.
Descripcin de los test.
Test molecular. La aplicacin de este test, diseado hasta el momento slo para ballicas
(L. muliflorum y L. rigidum), incluye las siguientes etapas: colecta de plantas en campo,
envo a laboratorio, recepcin de la muestra para su procesamiento, anlisis molecular e
informe final.
Colecta de plantas: Dos procedimientos de colecta son sugeridos. Para una situacin de
campo donde existen focos o manchones de plantas sobreviviendo a una aplicacin, se
recomienda la toma directa en ese sector (Figura 1A). En una situacin previa a un
tratamiento de control donde existe una distribucin amplia de malezas, se sugiere realizar
un muestreo aleatorio y que sea representativo del potrero. Se recomienda tomar plantas
frescas individuales. Se requieren 100 plantas/ha, las que deben ser colectadas en grupos
110
de 10. Una vez realizada la colecta se recomienda enviar la muestra lo ms pronto posible
y dentro de bolsas de papel. Si no es posible su envo inmediato, almacenar a 4 0C hasta su
despacho.
Envo a laboratorio: La muestra debe ir acompaada con una hoja de ingreso que contenga
informacin bsica como el historial de manejo del potrero (cultivos, herbicidas usados,
frecuencia, dosis, niveles de control) y breve opinin del agricultor sobre la eficacia de los
tratamientos en temporadas anteriores (Figura 1B).
Recepcin y anlisis: Una vez en el laboratorio, las plantas se sometern a extraccin de su
ADN (Figura 1C), para efectuar los rondas de amplificacin PCR, digestin con enzimas
de restriccin y revelado en gel de agarosa de mutaciones especficas asociadas a
resistencia a herbicidas inhibidores de la ACCasa y ALS (Figura 2).
Informe final: Se entregarn los resultados de presencia de mutaciones especficas y su
frecuencia, indicando una recomendacin de control con herbicidas alternativos dentro de
48 h de recibida la muestra.
Figura 1. Colecta de plantas (A), envo a laboratorio (B) y extraccin de ADN (C).
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Figura 2. Reaccin PCR, digestin con enzimas, corrida electrofortica y revelado en gel
de agarosa (planta 3, 7 y 8 presentan una mutacin especfica).
111
C
Figura 3. Recorrido del sitio (A); punto de muestreo (B) y toma de muestra (C).
112
113
Tabla 1. Ejemplo de base de datos con las principales caractersticas del biotipo resistente
(X) y las alternativas de control.
Biotipo
X
Ao
Deteccin
2006
Regin
La Araucana
Situacin de
colecta
Trigo
Sistema de
siembra
Cero labranza
Rotacin de
cultivos
Trigo-avena
Continuacin Tabla 1.
Biotipo
Resistente a
ACCasa
ALS
diclofop,
flucarbazone
clodinafop,
Sensible a
ACCasa:
tepraloxydim
EPSFs: glifosato
Otras alternativas de
control
ALS: iodosulfuron +
mesosulfuron, imazamox +
imazapyr
114