INTRODUCCION

ENZIMAS

Historia:
{

CAPITULO 4
{

INTRODUCCION

1700: estudios de la digestin de carnes

mediante secreciones del estmago.
1800: convertir almidn en azcar mediante
la saliva.
1810: comienzan estudios sobre
fermentacin.
1850: Louis Pasteur concluy estudios sobre
fermentacin de azcares en alcoholes por
levadura y catalizado por fermentos.

AGENTES CATALITICOS

Historia:
{

{
{
{

1897: Buchner descubri que los extractos

de levadura podan convertir el azcar en
alcohol. Fermentacin se llevaba a cabo
por la presencia de molculas.
Khne llam las molculas enzimas.
1926: ureasa fue aislada y cristalizada.
1930: pepsina, tripsina, y otras enzimas
digestivas fueron cristalizadas.

Cambian la velocidad de una reaccin

qumica.
Aceleran la reaccin en ambas direcciones
disminuyendo la energa de activacin.
Funcionan en reacciones que pueden
ocurrir sin su presencia (exergnica).
Permanecen inalterados al final de la
reaccin.

ESPECIFICIDAD
ENZIMATICA

ENZIMAS

CATALISIS ENZIMATICA
{

{
{

Las enzimas son los agentes catalticos de

los sistemas biolgicos.
Todas las enzimas son protenas excepto
las riboenzimas.
Aumentan la velocidad de una reaccin
hasta por un factor de 1014 .
Son altamente especficas.
La accin enzimtica es regulada.

La especificidad enzimtica puede

variar.
Pasos que ocurren durante la accin
enzimtica:
{
{

Sustrato se enlaza a la enzima.

Ocurren alteraciones qumicas que
incluyen rompimiento y formacin de
enlaces.
La enzima libera el producto de la
reaccin.

Teoras que explican la

actividad enzimtica:

Llave y cerradura: especfica; un sustrato y

una enzima.
Adaptacin inducida: menos especfica, el
centro activo se ajusta al sustrato que
interviene.
Teora de poliafinidad: enzima y sustrato
poseen por lo menos tres puntos de
contacto, slo uno de dos grupos idnticos
del carbono proquiral es orientado
correctamente.

Clasificacin enzimtica

1. Oxidoreductasas: transferencia de
electrones
2. Transferasas: transferencia de grupos
3. Hidrolasas: reacciones de hidrlisis
4. Liasas: adicin de grupos a dobles
enlaces
5. Isomerasas: transferencia de grupos
en la molcula
6. Ligasas: formacin de enlaces

Clasificacin enzimtica

De acuerdo al nmero de la Comisin

Enzimtica (Enzyme Commission number)
{
{

Primer #: tipo de reaccin catalizada.

Segundo #: indica la subclase; dice el tipo de
sustrato o el enlace que se rompe en forma mas
precisa.
Tercer #: indica la sub-subclase; nos dice el tipo
de aceptador de electrones (oxidoreductasas) o
el tipo de grupo que se remueve (liasas), etc.
Cuarto #: indica el nmero de serie de la enzima
en su sub-subclase.

Mecanismos de accin

Estado de transicin: forma activa de una

molcula en la cual la molcula realiza una
reaccin qumica parcial.
Energa libre: componente de la energa
total de un sistema que puede realizar
trabajo a temperatura y presin constante.
{
{
{

G reaccin = G productos G reactivos

Reaccin endergnica: G es negativo
G = H - TS

Mecanismos de accin

Energa de activacin: cantidad de

energa necesaria para convertir todas
las molculas de un mol de sustancia
reaccionando de su estado raso a su
estado de transicin.
Las enzimas aumentan la velocidad de
la reaccin disminuyendo la energa de
activacin, pero no afectan los
aspectos termidinmicos de las
reacciones.

Eficiencia enzimtica

Se describe con el turnover number:

nmero de moles de sustrato
transformado en producto por mol de
enzima por segundo.
{

Factores que determinan la

catlisis (eficiencia)

Unidades enzimticas

La concentracin de las enzimas se

expresa en trminos de su actividad:
{

Unidad enzimtica: cantidad de enzima

que produce la transformacin de un
micromol de sustrato por minuto bajo
condiciones definidas.
Actividad especfica: nmero de unidades
por miligramo de protena total.
Actividad total: nmero total de unidades
enzimticas.

Mayor el turnover number mayor la

eficiencia.
Equivale a: Vmax/[Et]

Proximidad y orientacin: debe existir una

interaccin entre el sustrato y el centro
activo.
Efectos electrostticos: constante
dielctrica baja lo que permite estabilizar
estados de transicin polares; mejor
interaccin.

Factores que determinan la

catlisis (eficiencia)

Factores de entropa: la prdida en entropa es

ms pequea que la de las reacciones en
solucin porque los reactivos, los estados de
transicin y los productos estn enlazados a la
enzima.
Distorciones: cambios en la conformacin
cuando se enlaza la enzima. Hay distorcin del
sustrato, se destabilizan los enlaces y se
forman o rompen con ms facilidad los enlaces.

Factores que determinan la

catlisis (eficiencia)

Catlisis cido-base: interaccin entre

grupos cidos y bsicos.
Catlisis covalente: interaccin entre
la enzima y el sustrato es inestable;
sustrato se convierte en producto con
ms rpidez.

Regulacin actividad
enzimtica

Puede llevarse a cabo por:

{

Control de la cantidad de enzima:

nmero actual de molculas de enzima
por clula en un tiempo dado.
Control de la actividad enzimtica:
efectividad actual de las molculas de
enzima en una clula determinada.

Control de la actividad
enzimtica

Propiedades de las enzimas:

{

{
{
{
{

Velocidad, concentracin y tiempo de

reaccin
pH
Temperatura
Cofactores, vitaminas y hormonas
Inhibidores

Control de la actividad enzimtica

Cintica de las enzimas

{
{
{
{

Estado raso
Michaelis-Menten
Medidas de actividad enzimtica
Inhibicin enzimtica

Tipos de enzimas
{
{
{
{

Formas inactivas
Isoenzimas
Sistemas multienzimticos
Enzimas reguladoras: alostricas y modificacin
covalente

Control de la actividad enzimtica:

propiedades de las enzimas

Velocidad de la reaccin: rapidez con la que

procede una reaccin. Cambio en
concentracin de producto (aparece) o
reactivo ( desaparece) por unidad de
tiempo.
Concentracin: hiprbola; mayor
concentracin de sustrato la enzima se
satura y la velocidad de reaccin es
mxima.
Tiempo de reaccin: la velocidad disminuye
con el tiempo.

Control de la actividad enzimtica:

propiedades de las enzimas

pH: ptimo

Temperatura: ptima

Control de la actividad enzimtica:

propiedades de las enzimas

Cofactores, vitaminas y hormonas:

Enzimas conjugadas: apoenzima y
cofactor forma la haloenzima.

Cofactores: grupo prosttico

Vitaminas: solubles en agua
Hormonas: pueden afectar la cantidad o la
actividad de las enzimas.

Ejemplos de metales usados

como cofactores
ENZYMES
(holoenzyme)
Apoenzyme
(amino acid portion)

Chemical component
(non-amino acid portion)

Cofactor

metals

coenzymes

prosthetic group

Cu+2
Fe+2 o Fe+3
K+
Mg+2
Mn+2
Mo
Ni+2
Se
Zn+2

oxidasa de citocromo
catalasa, peroxidasa
quinasa de piruvato
hexoquinasa
arginasa
dinitrogenasa
ureasa

peroxidasa de glutationa

dehidrogenasa de alcohol

Control de la actividad enzimtica:

propiedades de las enzimas

COENZIMAS
Coenzima

Reaccin

Vitamina

Biocitina

CO2

Biotina

Coenzima A

Grupo acil

Ac. Pantotenico

Coenz. B12

H y alquilos

Vitamina B12

FAD, FMN

Electrones

Riboflavin

NAD, NADP

Electrones

Fosfato de
Grupos aminos
piridoxal
Pirofosfato Tiamina Aldehidos
Tetrahidrofolato
Un carbono

Inhibidor competitivo

Inhibidores
{

Reversibles

Niacina
Piridoxina
Tiamina
Ac. folico

Competitivo: Compite con el sustrato por el centro activo. Se

parecen al sustrato. E + I EI (no catlisis)
No competitivo: el inhibidor no compite con el sustrato.
Inhibidor tiene un punto diferente de enlace. Puede enlazar la
E o el complejo ES. E + I EI + S EIS or E + S ES + I
EIS
De incompetencia: el inhibidor se enlaza directamente al
complejo enzima-sustrato y no a la enzima libre. E + S ES
+ I ---> EIS (no reaccion).

Inhibidor competitivo

10

Inhibidor no-competitivo

Inhibidor no-competitivo

11

Inhibidor de incompetencia

Control de la actividad enzimtica:

propiedades de las enzimas

Inhibidores
{

Irreversibles: se combina con o destruye un

grupo funcional necesario para la actividad
enzimtica. Se forma un enlace covalente.

Ejemplo: Inhibidores de acetilcolinesterasa.Interfiere

con la secuencia del impulso nervioso.
{ Diisopropylphosphofluoridate, tabun and sarin
(nerve gases)
{ Parathion and malathion

Control de la actividad enzimtica:

cintica de las enzimas

Estado raso (steady state):

{

Velocidad de formacin = Velocidad de

desaparicin

Ecuacin Michaelis-Menten
{

{
{

El modelo de Michaelis-Menten presenta la

formacin del complejo enzima-sustrato.
La concentracin del complejo es baja, pero
permanece constante durante la reaccin.
El sustrato se convierte en producto.
E + S ES E + P

12

Control de la actividad enzimtica:

cintica de las enzimas

Ecuacin Michaelis-Menten

V=

Ecuacin Michaelis-Menten
{

V max[S ]
KM + [S ]

Km = [S ], cuandoVo=

Control de la actividad enzimtica:

cintica de las enzimas

V max
2

KM es igual a la concentracin de
sustrato cuando 50% de los centros
activos de la enzima estn ocupados.
Tambin representa cun fuerte la
enzima se enlaza al sustrato.
VMAX est relacionado con el turnover
number
Grfica Lineweaver-Burk

13

Control de la actividad enzimtica:

cintica de las enzimas

Medidas de la actividad enzimtica

{

Ks: mayor la afinidad de la enzima por el

sustrato, mayor la concentracin [ES] y
menor el Ks.
Constante de velocidad cataltica:
Vmax/[E], mide la eficiencia de la enzima
cuando la enzima est saturada con
sustrato.
Constante de especificidad: kcat/Km,
ayuda a medir la eficiencia de la enzima.

Control de la actividad enzimtica:

cintica de las enzimas

Inhibicin enzimtica
{
{
{

Inhibidor competitivo
Inhibidor no-competitivo
Inhibidor de incompetencia

14

Control de la actividad enzimtica:

tipos de enzimas

Formas inactivas

Isoenzimas

Zimgeno
Catalizan la misma reaccin pero varan
en estructura y propiedades

Sistemas multienzimticos
{

Grupo de enzimas que catalizan una

reaccin en secuencia

Control de la actividad enzimtica:

tipos de enzimas

Enzimas reguladoras
{

Son clave en la regulacin de una ruta

metablica.

Mecanismos de retroalimentacin

Modificacin covalente

Una enzima acta sobre un paso determinado.

Formacin o rompimiento de un enlace
covalente.

Modificacin alostrica
{

Enlace de un efector positivo o negativo.

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Control de la actividad enzimtica:

tipos de enzimas

Enzimas alostricas
{

Sufren cambios conformacionales en

respuesta a enlace de efectores o
moduladores.
Ejemplos:

inhibidores
activadores

Accin de las enzimas alostricas

Modelo secuencial
{
{

La enzima contiene subunidades.

Cuando se enlaza el sustrato cambia la
conformacin de la subunidad.
Enlace cooperativo

16

Accin de las enzimas alostricas

Modelo concertado
{

La enzima existe en equilibrio entre dos

conformaciones o estados: relajado (R) o
tenso (T).
En el estado R se enlaza el sustrato y el
activador.
En el estado T se enlaza el inhibidor.

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