DESENVOLVIMENTO FOLICULAR, ONDAS

FOLICULARES E MANIPULAO*
Introduo
A funo ovariana nos bovinos tem incio ainda no perodo fetal e estende-se aps
a puberdade, at idades que podem atingir aos 15 anos. Durante o desenvolvimento fetal
sob a influncia dos hormnios maternais os ovrios do feto apresentam crescimento e
atresia folicular. Do nascimento puberdade, na ausncia de funo do hipotlamo e da
hipfise, as gnadas femininas permanecem em repouso. Aps a puberdade quando o
sistema nervoso central e a hipfise iniciam a liberao do GnRH e das gonadotrofinas
(FSH e LH), respectivamente os ovrios passam a funcionar realizando um conjunto de
atividades, as quais denominamos de ciclo ovariana. Nas diferentes fases do ciclo estral
existem nos ovrios um nmero de folculos entre 200 e 400 que encontram-se em fase de
crescimento, destes 25 a 50 so folculos tercerios, dos quais 1 ser selecionado como
folculo dominante, adquirindo as caractersticas para realizar a maturao e a ovulao.

Ciclo estral
O ciclo estral o ritmo funcional dos rgos reprodutivos femininos que se
estabelece a partir da puberdade. Compreende as modificaes cclicas na fisiologia e na
morfologia dos rgos genitais e tambm no perfil dos hormnios relacionados.
Didaticamente o ciclo pode ser dividido em 4 fases que so limitadas por eventos
reprodutivos coordenados pela secreo de hormnios. As fases so:

Seminrio apresentado na disciplina de Endocrinologia da Reproduo (VET00169) do Programa de PsGraduao em Cincias Veterinrias da UFRGS, pela aluna CLAUDIA BRIANI ANTONIOLLI, no
segundo semestre de 2002. Professor da disciplina: Flix H. Daz Gonzlez.

(1) Pr-estro: fase que antecede o estro ou o cio. Esta fase marcada por um
aumento gradativo circulantes de estrgeno, devido ao incio do desenvolvimento
folicular. Os achados principais so decorrentes desse perfil hormonal: ocorre um
aumento gradativo na vascularizao e tnus muscular dos rgos genitais edemaciao
inicial da vulva, proliferao do epitlio vaginal e relaxamento das crvix. Tem durao
mdia de 2 a 3 dias, termina quando a fmea passa a aceitar o macho.
(2) Estro: caracteriza-se pela aceitao do macho. a fase de mais fcil definio.
Nesta fase os nveis circulantes de estrgeno so elevados, os achados decorrem desta
alta taxa. O tero e as tubas se encontram trgidos, a crvix relaxada, vagina e vulva com
sinais de hiperemia e edema com corrimento de muco. Esta fase tem durao variada
entre 12 a 18 horas na vaca, assim terminando quando a fmea deixa de aceitar o macho.
(3) Metaestro: fase de mais difcil caracterizao. O corpo lteo formado aps a
ovulao, secreta quantidades crescentes de progesterona at atingir sua produo
mxima. A ovulao na vaca ocorre nesta fase. Com a produo inicial de progesterona, a
genitlia tende a ficar com menor tnus, menos vascularizadas e edemaciada. Em bovinos
pode ocorrer uma pequena hemorragia caruncular, decorrente das alteraes hormonais.
Dura em mdia 2 ou 3 dias e termina quando o corpo lteo atinge sua plena capacidade
de produo de progesterona.
(4) Diestro: fase de maior durao, que ocorre sob predomnio da progesterona.
Devido a presena deste esteride, o endometro fica mais espesso e com maior atividade
das glndulas, a crvix se fecha, a musculatura do genital relaxa e ocorre uma diminuio
da vascularizao e hipotrofia do epitlio vaginal. Dura cerca de 13 a 15 dias, terminando
quando ocorre a regresso fisiolgica do corpo lteo, tendo incio a outro ciclo.

Controle endcrino do ciclo estral

O GnRH, secretado pelo hipotlamo, atravs do sisterma porta-hipotalmicohipofisrio, atinge esta glndula e estimula a liberao das gonadotrofinas, FSH e LH.
Existem 2 locais de secreo e produo de GnRH no hipotlamo: os centros
controladores de secreo tnica, que secretam GnRH de uma forma relativamente
contnua, e os centros controladores da onda pr-ovulatria que secretam grandes
quantidades de GnRH de uma s vez. As gonadotrofinas, alm de distriburem no
organismo via circulao sistmica, atingem o hipotlamo, pelo vaso de fluxo retrgrado,
onde causam um bloqueio parcial na liberao de GnRH (mecanismo conhecido como
feed back negativo). Via circulao, as gonadotrofinas chegam aos ovrios,
especificamente aos folculos, onde o FSH principalmente, estimula o desenvolvimento
dos mesmos. Com isto, os folculos iniciaro a produo de estrgeno, que via circulao
sistmica atingiram o hipotlamo provocando um efeito negativo na secreo tnica e um
efeito positivo, estimulando os centros controladores da onda pr-ovulatria, alm de um
efeito positivo na secreo de gonadotrofinas na hipfise. Quando a quantidade de
estrgeno na circulao chega em determinado nvel (devido a produo crescente pelos
folculos em desenvolvimentos) este sensibiliza reas superiores do sistema nervoso
central, fazendo com que a fmea manifesta sinais de aceitao do macho (estro) e age
tambm nos centros controladores da onda pr-ovulatria de GnRH, fazendo com que
uma grande quantidade deste hormnio seja liberada na circulao. Na etapa final de seu
desenvolvimento, os folculos secretam outro hormnio, a inibina, que via sistmica tem
a funo tem a funo de bloquear seletivamente a sntese de FSH na hipfise. Por este
motivo, acompanhando o pico de liberao de GnRH (onda pr-ovulatria) teremos um

pico maior de LH, j que a produo FSH encontra-se parcialmente bloqueada. Este pico
de LH responsvel pela ovulao dos folculos presentes nos ovrios que tem
desenvolvimento compatvel. As clulas remanescentes do folculo que ovulou sofreram
uma transformao chamada luteinizao, formando o corpo lteo, que produz
progesterona. Estes eventos tambm so coordenados pelo LH. A produo de
progesterona alcana seu limite por volta de 5 a 7 dias aps a formao do corpo lteo, e
enquanto permanecer em nveis elevados na circulao responsvel por bloquear a
liberao de GnRH e das gonadotrofinas hipofisrias, ou seja, o animal no apresenta
estro novamente enquanto estiver em concentraes circulantes elevadas, considerando
que a fmea no tenha ficado gestante no estro anterior, o corpo lteo, cerca de 10 a 15
dias aps a formao, iniciar a produo de ocitocina, que no endomtrio estimular a
produo de prostaglandina, responsvel pela regresso do corpo lteo, processo
conhecido como lutelise. Com isso, a concentrao plasmtica de progesterona diminui,
possibilitando aumentos gradativos na secreo de GnRH, FSH e LH, iniciando um novo
ciclo.
Caso o animal fique gestante, o corpo lteo no pode sofrer regresso pois a
principal fonte de progesterona no incio da gestao em todas as espcies domsticas. O
bloqueio da letelise feito por substncias produzidas pelo feto, que inibem a produo
e/ou acesso da prostaglandina ao ovrio. Estas substncias tem natureza diversa entre as
espcies. Foram identificadas protenas, esterides e outras com tal funo.

Folculognese

Refere-se ao crescimento dos folculos ovarianos. Envolve uma srie de mudanas

seqncias em componentes da parede folicular como clulas da teca, cludas da
granulosa e ovcito. At bem pouco tempo acreditava-se que os folculos ovarianos
iniciavam seu desenvolvimento continuamente de uma forma aleatoria, independente das
fases do ciclo estral ou gestao. Atualmente esse conceito se modificou. Hoje sabe-se
que grupos de folculos iniciam o desenvolvimento sincronicamente, em determinados
perodos do ciclo estral. Esses fenmenos so conhecidos como ondas de crescimento
folicular. Estas ondas provavelmente ocorrem em todos os animais domsticos e se
iniciam em perodos determinados, mesmo na ausncia de nveis elevados de
gonadotrofinas (ocorrem durante o ciclo estral e mesmo na gestao). Em um
determinado momento, durante a onda de crescimento folicular um ou mais folculos,
dependendo da espcie so selecionados para ovular. Este processo de seleo ainda no
est totalmente elucidado, mas envolve alm do desenvolvimento de um ou mais
folculos, chamados de dominantes, e atresia dos demais permanecentes a mesma onda.
Quando o folculo dominante se desenvolve at um tamanho em condies de ovular, na
presena de altas taxas de progesteronas este no sofre tal processo, entra em atresia e
uma nova onda tem incio.

Fases do crescimento dos folculos

Existem duas fases nas quais o crescimento do folculo pode ser didaticamente
dividido. O tempo total do incio do desenvolvimento, quando ele retirado da reserva
existente dos ovrios, at a ovulao longo, dura aproximadamente trinta dias que
envolvem duas fases:

(1) at a formao do antro: depende de fatores ovarianos intrnsecos (regulado

pelo prprio ovrio, ou seja, substncias e mecanismos que atuam na prpria gnada). a
fase mais longa e a que menos se conhecem os mecanismos.
(2) aps a formao do antro: depende principalmente da presena de
gonadotrofinas (regulado pela hipfise) principalmente FSH e LH alm de uma
participao de estrgeno, que produzido pelo prprio folculo. Uma onda de
desenvolvimento folicular termina e a subsequente tem incio quando o folculo
dominante da onda anterior ovula ou inicia o processo de atresia.
O antro definido como a cavidade preenchida por lquido, presente nos folculos
a partir de certa fase de desenvolvimento, formado atravs de presso exercida pelo
lquido de transudaso produzido pelas clulas da teca e da granulosa. A composio e
quantidade do fluido se modifica com o desenvolvimento do folculo. Os principais
constituintes do lquido folicular so: estrgeno (quantidades crescentes com o
desenvolvimento), progesterona (presente em folculos e atresia e prximos a ovulao),
OMI (fator inibidor da maturao do ovcito) e inibina (quantidades crescentes no final
do desenvolvimento). O fluido folicular possui vrias funes tendo como principais:
controlar o crescimento do folculo (E2 e P4), regular a maturao do ovcito (OMI),
facilitar a captao do ovcito e acelerar o metabolismo dos espermatozides. O
crescimento dos folculos aps a formao do antro dependente principalmente da ao
de estrgeno e das duas gonadotrofinas, FSH e LH. Estas agem sempre em conjunto, mas
dependendo da funo pode haver predomnio de estmulo por uma delas.
A ao do FSH predomina nas seguintes funes: inicio da formao do antro e
fluido folicular, multiplicao das clulas da granulosa e da teca, formao de receptores
para LH e estmulo da esteroidognese.

A LH atua na modificao na esteroidognese (estrgeno para progesterona),

promove a ovulao e a formao do corpo lteo e inicia a secreo de progesterona.
O mecanismo de produo hormnios esterides, tanto na gnada feminina como
na gnada masculina, ocorre de forma semelhante e chamado de mecanismo de duas
clulas e duas gonadotrofinas. Para a produo dos esterides sexuais predominantes do
macho e na fmea, so necessrias as duas gonadotrofinas, LH e FSH, e dois tipos
celulares. No caso da fmea participam as clulas de sertoli e de leydig. O LH age nas
clulas da teca ou de leydig, induzindo a transformao de colesterol em testosterona.
Esta testosterona, principalmente na fmea, passa para as clulas da granulosa,onde sob
efeito do FSH, transformada em estrgeno. Isto tambm ocorre no macho, porm em
menor escala na clula de Sertoli.

Maturao do ovcito
Refere-se as transformaes ocorridas no ovcito durante o desenvolvimento
folicular e podem ser divididas em duas fases:
(1) Fase de crescimento que ocorre a partir do incio do desenvolvimento
folicular. Nesta fase ocorre um ligeiro aumento do volume do ovcito, cujo metabolismo
suprimido por nutrientes obtidos de projees das clulas do cumulus oophorus, que so
clulas da granulosa em ntimo contato com o ovcito. As clulas sanguneas da fmea
no entram em contato direto com o ovcito. Durante esta fase tambm formada a zona
pelcida.
(2) Preparao para a fertilizao: fase que ocorre simultaneamente com o final da
fase de crescimento folicular .A partir desta fase o ovcito ter condies para ser

fecundado. Ela envolve principalmente modificaes no ncleo das clulas, devido a

complementao do processo de meiose. Quando o folculo formado, o ovcito se
encontra no estgio de prfase 1 (2n), da primeira sub-fase da meiose desde a sua
formao no embrio, e assim permanece at a onda pr ovulatria de gonadotrofinas.
Provavelmente um dos fatores que fazem com que o folculo permanece com a meiose
bloqueada, o OMI (fator inibidor da maturao do ovcito) encontrado no fludo
folicular. A partir da onda de gonadotrofinas, que tambm provoca a ovulao, o ovcito
retoma a meiose e se desenvolve at o estgio de metfase 1 (2n) ou metfase
2(2n),sendo liberado do folculo em um destes estgios, dependendo da espcie. A
meiose somente se completar se o ovcito entrar em contato com o espermatozide.
Finalmente a ovulao o processo pelo qual o ovcito liberado do folculo. A
partir de uma onda de crescimento folicular o folculo que vai ovular selecionado por
processos ainda no totalmente elucidados. Os que no vo ovular, pertencentes a mesma
onda, sofrem atresia.

Padres de ondas foliculares

So estabelecidos padres de 2 ondas foliculares, onde a primeira tem incio no
dia zero (dia da ovulao) e a segunda no dia 10 e padro de 3 ondas, onde a emergncia
destas ocorre entre os dias 0, 9 e 16, do ciclo estral, sendo a as duas primeiras
anovulatrias.
Existem trabalhos que demonstram dados obtidos atravs de ultra-sonografia, que
indicam que em vacas Nelore ocorre predominncia (90%) de duas ondas de crescimento
folicular, enquanto que em novilhas apresentam maior freqncia de trs ondas (67%).

O mecanismo que regula a dinmica folicular est baseado nas diferentes

respostas ao FSH e LH, os aumentos peridicos de concentraes de FSH circulante so
responsveis pela emergncia das ondas foliculares, portanto vacas com duas ondas tem 2
aumentos e vacas com trs ondas tem 3 aumentos de FSH. A supresso peridica do FSH
circulante pelo mecanismo de feed-back negativo favorece a reserva do ovrio
prevenindo o recrutamento contnuo de folculos antrais grandes, j que 99% destes iro
sofrer atresia. O aumento de FSH permite o crescimento folicular suficiente para que
alguns (no todos os folculos adquiram a capacidade de responder ao LH), ao mesmo
tempo que permite o crescimento do folculo dominante os subordinados comeam a
diferenciar-se (momento da seleo) o FSH tem um declnio rpido por volta do 2 dia da
emergncia da onda.
O folculo destinado a ser dominante aparentemente tem mais receptores para LH,
estabelecendo assim uma vantagem competitiva sobre os outros folculos destinados a
serem subordinados que lhe permitem sobreviver sem o FSH.
Existem pesquisadores que defendem a predominncia de ciclos de duas ondas,
como existem os que defendem os de trs ondas e ainda os que dizem que os de duas e
trs tem distribuio igual, assim como pesquisas demonstram ciclos de at quatro ondas
em Bos indicus.
Existem fatores que afetam o desenvolvimento folicular tais como: nvel
nutricional, estresse calrico e anestro lactacional, que podem modificar o padro de
desenvolvimento. Um nvel nutricional baixo estaria associado a uma proporo mais alta
de ciclos de trs ondas foliculares, estes fatores tem sido muito discutidos e
aparentemente a fertilidade das vacas no demonstra diferena entre animais com duas ou
trs ondas de desenvolvimento folicular.

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Os folculos subordinados podem converter-se em folculos dominantes se este for

removido. A capacidade de um folculo subordinado em tornar-se dominante observado
em animais superovulados com altas doses de FSH, estes folculos alcanam um dimetro
mximo menor comparado ao de um folculo originalmente dominante (Figura 1).

Figura 1. Modelo proposto para explicar a dinmica folicular em ondas durante intervalos
ovulatrios de duas ondas do lado esquerdo e trs ondas do lado direito. Na parte superior
demonstra concentraes plasmticas de progesterona (ng/ml), e pulsos de LH esquemticos que
indicam a freqncia e a amplitude dos pulsos reais. Na parte central representam os produtos
foliculares (valores relativos) e o FSH. Nos grficos inferiores est representado um esquema do
desenvolvimento folicular dos folculos dominantes e subordinados.

Desenvolvimento folicular no perodo ps-parto

O reincio da dinmica folicular em vacas leiteiras e de corte ocorre no comeo do

perodo ps-parto. Para que a ovulao ocorra, o folculo dominante deve estar exposto
correta freqncia de pulsos de LH (Figura 2).

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Punes foliculares
Histrico
A tcnica de puno folicular transvaginal utilizando o auxlio de ultrassonografia
foi primeiramente desenvolvida para o uso para a medicina humana sendo adaptada em
1988 por Pieterse et al. para uso em medicina veterinria.

Figura 2. Esquema proposto para demonstrar o desenvolvimento do folculo dominante e o incio da

ciclicidade durante o perodo ps-parto em vacas leiteiras e de corte em lactao sem estresse
nutricional. A freqncia dos picos de LH est demonstrada em perodos de oito horas (Adaptado de
Roche et al., 1992).

Objetivo
Recuperar ocitos repetidamente de animais vivos previamente selecionados de
alto valor gentico diminuindo assim o intervalo entre geraes e possibilitando o
nascimento de um maior nmero de descendentes por produo conhecida por fmea.
Utilizao

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Pode ser empregada em animais jovens, senis, gestantes, lactantes e em animais

com problemas de infertilidade adquiridos.
Material
O sistema composto por trs componentes: aparelho de ultrassonografia com
transdutor setorial de 7,5 MHz, bomba de aspirao e sistema condutor da agulha.

Mtodo
Sedao dos animais, anestesia epidural, limpeza e desinfeco da rea (perneo),
introduo do transdutor conectado ao sistema condutor da agulha. O ovrio
posicionado (atravs da manipulao retal) na extremidade do transdutor, e os folculos
so visualizados na tela do aparelho. A introduo da agulha por um segundo operador,
pode ser acompanhada na tela e a aspirao do contedo folicular tambm (a linha de
bipsia programada para aparecer na tela e servir de ajuda). A agulha ligada bomba
de suco que aspira o fludo folicular e o ocito em um recipiente contendo PBS
modificado acrescido de 1% de soro fetal bovino e aproximadamente 0,1% de heparina.
Subseqentemente, os ocitos so identificados e passados para placas de maturao,
posteriormente fecundao e por ltimo o cultivo.
Entre os fatores que influenciam o sucesso das punes foliculares, esto:
tratamentos hormonais, freqncia das aspiraes, nvel de vcuo e experincia do
operador.
No Brasil as aplicaes utilizando aspiraes foliculares tinham como objetivo a
pesquisa e a produo de embries de vacas com problemas reprodutivos adquiridos
(Tabela 1). Atualmente, j existem condies que viabilizam a produo de embries
utilizando esta tecnologia como: melhoria dos sistemas de maturao, fecundao e

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cultivo, reduo nos custos da tcnica, acesso aos meios de cultura, aquecimento do
mercado de gado de elite e necessidade dos criadores em aumentar seus rebanhos em
curto espao de tempo.

Tabela 1. Dados obtidos por uma empresa privada brasileira referente aos dezoito
primeiros meses de atividades comerciais utilizando punes foliculares.

Total de fazendas

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Total de raas (B. taurus x B. indicus)

9 (5 x 4)

Total de vacas

321

Total de OPU

937

Total de ocitos

12.440

Total de ocitos qualidade I

1.953

Total de ocitos qualidade II

2.812

Total de ocitos qualidade III

4.539

Total de ocitos viveis (I, II e III) (%)

9.304 (74,8)

Total de touros utilizados

98

Total de embries clivados (%)

7.068 (75,9)

Total de blastocistos (%)

3.930 (42,2)

Total de embries transferidos

3.270

Total de prenhezes (%)

840 (35,4)

Total macho/fmea (%)

75/59 (56/44)

Embries/OPU/vaca

4,2

Abortos

28/840 (3%)

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Outro fator muito importante a oferta que o Brasil dispe em relao as

receptoras a um custo mais baixo, reduzindo em 50% comparado aos pases
desenvolvidos.
Tendo em vista que a aspirao pode ser feita a campo, enquanto a FIV requer
laboratrio adequado, a tendncia que ocorra no Brasil o mesmo que em outros pases
como a Alemanha, Frana e Canad, onde existem laboratrios regionais que recebem os
ocitos aspirados por mdicos veterinrios que atuam em fazendas. No laboratrio
produzido o embrio in vitro que entregue ao veterinrio que o transferir para vacas
receptoras que levaro a gestao a termo.

Concluses
-

Apesar dos perodos sem uma atividade cclica regular (pr-pbere, prenhez e anestro
ps-parto), constituem a parte mais importante da vida de uma fmea bovina, a maior
ateno tem sido atribuda aos perodos de atividade cclica. Este o perodo onde o
homem tem a possibilidade de intervir com mais frequncia como na sincronizao
dos ciclos estrais, inseminao artificial com tempo fixo, entre outros.

Muito j foi descoberto atravs do auxlio de aparelhos de ultra-sonografia que

demonstram a imagem em tempo real, podendo assim determinar o padro de
desenvolvimento folicular simulando ondas. Muito ainda tem a ser elucidado, como
por exemplo a eleio do folculo dominante de cada onda. O que leva a sua escolha?

O homem tem caminhado em prl destas descobertas e vem criando meios e

adaptando tcnicas para que se obtenha uma maior eficincia e aproveitamento do que
a natureza j lhe oferece, como no caso das punes foliculares onde se torna possvel

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o aproveitamento na reproduo de animais com problemas reprodutivos adquiridos.

O que ainda hoje est obscuro, amanh ser esclarecido e surgiro novas dvidas. Este
o nosso desafio!

Referncias bibliogrficas
BARUCELLI, P. Controle farmacolgico do ciclo estral em ruminantes. Faculdade de
Medicina Veterinria e Zootecnia, Departamento de Reproduo Animal, Universidade
de So Paulo. 2000.
CUPPS, T.P. Reproduction in Domestic Animals. 4.ed. Department of Animal Science,
University of California. Davis. 1991.
FERNANDES, C.A. Fisiopatologia
Universidade de Alfenas. 2000.

Biotecnologia

da

Reproduo

Animal.

MIES FILHO, A. Reproduo dos Animais. 6 ed. Editora Sulina, Porto Alegre. 1987.
THIBAULT, C., LEVASSEUR, M.C., HUNTER, R.H. Reproduction in mammals and
man. Paris: Ellipses. 1993.