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DESCRIPCIN
Un citmetro de flujo tiene tres sistemas principales:
1. Sistema hidrulico
Se compone de un conjunto de controles neumticos y fludicos
necesarios para establecer un flujo laminar que permita a la suspensin
celular atravesar la cmara de flujo de forma estable e individualizada.
2. Sistema ptico
Consta de: lser, filtros, lentes.
La fuente de luz es producida normalmente por un o varios lser. En la
mayora de los citmetros se instala un lser de gas (comunmente
argn) refrigerado por aire, que produce una luz monocromtica de 488
Separacin celular
Ensayos multiplexados (Beads Arrays
7. CITOMETRA DE FLUJO.
7.1. FUNDAMENTO
La Citometra de Flujo (CMF) es una tcnica de anlisis celular multiparamtrico
cuyo fundamento se basa en hacer pasar una suspensin de partculas
(generalmente clulas) alineadas y de una en una por delante de un haz de
lser focalizado. El impacto de cada clula con el rayo de luz produce seales
que corresponden a diferentes parmetros de la clula y que son recogidos por
distintos detectores. Estos convierten dichas seales en seales electrnicas
que posteriormente sern digitalizadas para permitir la medida simultnea de
varios parmetros en una misma clula.
En el momento de realizar las mediciones en el citmetro de flujo, las clulas
pueden estar vivas o fijadas, pero obligadamente en suspensin celular y en
forma de clula nica. Al obligarlas a pasar alineadas una a una frente a un haz
lser mediante un flujo continuo, cada clula, a la vez que dispersa la luz,
emite luz fluorescente como consecuencia de la excitacin lser a la que es
sometida. Los parmetros que tpicamente se miden de forma simultnea por
cada clula son:
1. Dispersin frontal de la luz a 2 (forward scatter), valor proporcional al
tamao celular.
2. Dispersin de la luz ortogonal (side scatter), proporcional a la cantidad de
estructuras granulares o complejidad de la clula.
3. Intensidades de fluorescencia a diferentes longitudes de onda.
B) Seales de Fluorescencia.
que slo la gota que contiene el evento de inters (clula) queda cargada.
Finalmente, el sistema direcciona dicha gota con la clula hacia un tubo
recolector al ser desviada por un intenso campo elctrico.
7.7. QU APLICACIONES TIENEN LOS CITMETROS DE FLUJO EN LA
INVESTIGACIN BSICA Y APLICADA?
El campo de aplicacin de este tipo de instrumentos crece rpidamente da a
da ya que son numerosas las reas de la biologa y medicina que se benefician
de su uso. Entre otras aplicaciones, se encuentra la tipificacin de las
leucemias y los linfomas que permite alcanzar un diagnstico preciso,
permitiendo un tratamiento y seguimiento ms adecuado y eficaz. Otra
aplicacin muy importante es el estudio de las poblaciones linfocitarias
afectadas por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) causante del
Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) que permite conocer en los
individuos afectados su capacidad de respuesta inmunitaria, de capital
importancia para el seguimiento de la evolucin de la infeccin y el tratamiento
adecuado para el paciente.
El estudio de la cantidad de material hereditario (ADN) posee numerosas
aplicaciones. En medicina, se emplea para evaluar si existen cambios
genticos en poblaciones de clulas tumorales. La presencia de estos cambios
tiene importancia en el prnostico de la enfermedad maligna. Dado el elevado
nmero de clulas a analizar para realizar estos diagnsticos, el citmetro de
flujo es la herramienta indicada para este tipo de estudios. Tambin es posible
estimar si las clulas han sufrido cambios relevantes en el ADN, as como
evaluar su nivel de proliferacin ya que con frecuencia las clulas malignas
crecen con mayor rapidez que las normales. El citmetro es capaz de
cuantificar el grado de proliferacin celular, es decir la tasa con que las clulas
se multiplican. En el campo de la biologa, la citometra de flujo se ha tornado
el mtodo ms empleado para determinar el contenido exacto de ADN de cada
especie, lo cul es de suma importancia para estudios genticos, evolutivos y
biotecnolgicos. A su vez, se pueden realizar estudios del nivel de ploidia,
anlisis cromosmicos y estudios del dao del ADN.
CITOMETRA DE FLUJO
Los citmetros de flujo analizan clulas en suspensin que intefieren en
forma individual con una fuente de luz; la interseccin de cada clula con la luz
lser provoca la emisin de una serie de seales luminosas que permite
diferenciar poblaciones celulares dentro de la muestra analizada, por su
tamao relativo, por sus granulaciones o bien por su reactividad a
fluorocromos, previa incubacin con anticuerpos monoclonales.
Los instrumentos de la citometra de flujo (CF) pueden dividirse en tres
compartimientos funcionales: hidrulico, ptico y electrnico. El primero
consiste en un complejo de fludos de diferentes presiones que obligan a las
clulas a pasar en un arreglo constante y secuencial a travs de un pequeo