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Resumen
El incremento sustancial de la acuicultura cubana y la carencia de algunos fertilizantes
usados para fines de cultivo fitoplantnico, que finalmente pasan a nutrir especies
zooplanctnicas como el cladcero Moina, ha dado pauta para realizar el presente
estudio, referido al cultivo de dicha especie con la microalga Chlorella spp. desarrollada
previamente con riles orgnicos de la industria pesquera. Se realizaron dos tandas
experimentales: 1) en acuarios de 50 litros de capacidad efectiva 2) en tanquetas de
180 litros. Se hallaron parmetros poblacionales derivados del desarrollo del
zooplancton y se evalu la calidad del agua. Como conclusin se seala que Chlorella
spp. cultivada con los riles orgnicos de la industria pesquera result un alimento
adecuado para el buen desarrollo del cladcero Moina sp, este ltimo con una densidad
mxima a los seis-siete das de cultivo entre 7,0 y 9,0 ind.mL -1 (80,0 mg.L-1 base
hmeda y 5,0 mg.L-1 base seca) y que la calidad del agua donde se desarrollaron los
organismos cultivados fue aceptable para la reproduccin de la poblacin, sin provocar
alteraciones al medio ambiente despus de su vertimiento.
Palabras clave: cultivo l Moina sp l Chlorella spp. l riles orgnicos de la pesca
Summary
Substantial increase of Cuban acuiculture and deficiency of some fertilizers used for the
phytoplanktonic cultures, that finally feed the zooplanktonic species like cladocera
Moina, provides the possibility of conducting the current study, referred to the culture of
this species with microalga Chlorella spp. previously developed in waste waters of the
fishing industry. Two experiments were conduced: 1) in 50 liters of effective capacity
aquariums 2) in 180 liters tanks of effective capacity. Some parameters derived from the
development of zooplancton were calculated and also water quality was evaluated. As a
conclusion is pointed out that Chlorella spp. cultured in waste waters from the fishing
industry resulted in an adequate food for cladocera Moina sp, ranging the latest in a
density between 7,0 and 9,0 ind.mL -1 at six-seven days culture (80,0 mg.L -1 humid
weight and 5,0 mg.L -1 dry weight) and that water quality where organisms were
cultured was acceptable for reproduction of population, with no alterations to
environmental after its discharge.
Keywords: culture l Moina sp l Chlorella spp. l fishing waste waters
INTRODUCCIN
Para la acuicultura cubana, la etapa comprendida entre 1960 a 1970, se reconoce como
un perodo de tanteo, introducindose nuevas especies cultivables con el objetivo de
aportar una importante fuente proteica a la poblacin. A partir de esta fecha y hasta
1980, la cra de peces y otras especies se afianz ms, entre otros factores debido a la
construccin de presas y embalses, que serviran como hbitat de estos recursos
(Gonzlez, 2006). Cabe citar como ejemplo que en el quinquenio 76-80 la produccin
acucola fue de 17 100 t. Durante 1981 a 1985 se apreci un incremento sustancial, con
producciones de 63 000 t y a partir de esa fecha y hasta el 2002 se alcanzaron 370 163
t.
Para la acuicultura, un papel fundamental en los primeros estadios de vida lo constituye
el alimento, que se compone de variadas especies vivas con talla minscula,
comenzando por las microalgas y transitando por el zooplancton, conformando estos
ltimos, presas de absoluta obligatoriedad para lograr una buena supervivencia en los
estadios larvales.
Las algas ingeridas por el zooplancton requieren para su desarrollo, fertilizantes tanto
orgnicos como inorgnicos, entre los que se encuentran sales de nitrgeno, fsforo y
miel final fundamentalmente (Castellanos, com. pers.). La carencia de uno de ellos,
imposibilita implementar el mtodo que se emplea para su produccin en las
estaciones acucolas del pas (en la actualidad el criollo y el tailands), por lo que se
hace inevitable explorar nuevas formas y vas de nutricin con el fin de incrementar las
poblaciones zooplanctnicas.
A partir del ao 2002, el Ministerio de la Industria Pesquera (MIP), se vio menos
favorecido con el suministro de miel final debido a la desactivacin de la mayora de sus
centrales azucareros (CubaGenWeb, 2007), fenmeno econmico que diera pauta para
acometer estudios referidos a la bsqueda de fuentes alternativas para la nutricin del
cladcero Moina, as como otros individuos del zooplancton, con fuentes nacionales
disponibles para su desarrollo y que compitiera, al menos, con los resultados obtenidos
por investigadores que han propuesto otras vas y mtodos de nutricin de los
organismos en cuestin.
De esta manera, se concret como objetivo del presente trabajo, hacer un estudio
referido a la posibilidad de alimentar Moina sp con la microalga Chlorella spp. cultivada
con riles orgnicos de la industria pesquera cubana.
MATERIALES Y MTODOS
Para acometer el cultivo de Moina sp con Chlorella spp. previamente cultivada con riles
orgnicos de la industria pesquera cubana, se procedi al aislamiento del cladcero en
los estanques de produccin de larvas de peces en una estacin de alevinaje del pas,
realizndose con posterioridad los experimentos de crecimiento en dos acuarios de 50
litros efectivos de capacidad a modo de replicacin, continuando en dos tanquetas de
180 litros, con el objetivo de incrementar progresivamente los volmenes de prueba.
Los acuarios fueron colocados a la intemperie, cubrindose la superficie de los mismos
con hierba seca para evitar la incidencia directa de la radiacin solar y las tanquetas se
mantuvieron en un rea techada (Fig. 1 A-B).
2
g/100g
2,98
3,86
2,56
3,24
Aminocido
Arginina
cido asprtico
cido glutmico
Glicina
g/100g
4,18
5,39
7,62
4,00
3
Leucina
Isoleucina
Fenilalanina
Histidina
Anlisis
Humedad
Materia grasa
Protena
Carbohidrato
cido graso
14:0
14:1
15:0
16:0
16:1
16:2
16:3 (n-3)
6,83
2,09
3,99
1,11
(%)
5,0 6,0
1,0 1,3
46,0 70,0
15,0 20,0
(% peso)
5,9
1,0
1,3
25,1
6,9
3,3
0,4
Alanina
Tirosina
Serina
Mineral
K
Ca
Mg
Fe
Na
cido graso
18:0
18:1
18:2 (n-6)
18:3 (n-3)
18:4 (n-3)
20:5 (n-3)
22: 0
5,22
2,30
2,86
(%)
0,60
1,74
0,29
0,12
0,16
(% peso)
6,7
18,1
7,3
10,4
0,5
3,9
2,7
Los experimentos, que se dilataron por un perodo entre siete y ocho das (tiempo que
se considera adecuado para determinar si la microalga era ingerida y a su vez
aceptada por el cladcero) se condujeron con agua de abasto. La concentracin de
Chlorella spp. empleada durante todos los ensayos fue de 3,0 x 10 6 Cel.mL-1 y la
poblacin inicial de Moina sp para los acuarios y tanquetas de 0,2 y 3,0 ind.mL-1
respectivamente.
Para determinar la densidad celular se utiliz la cmara de Neubauer, y para cuantificar
el desarrollo poblacional de Moina sp se emple la cmara de Bogorov, tomndose las
muestras en diferentes puntos sin agitar previamente el medio, alternativa que simula
las condiciones reales de cultivo del cladcero en los estanques de alevinaje.
Los parmetros poblacionales hallados fueron: densidad mxima de organismos (Dmo),
da de mxima densidad (Dmd), tiempo de duplicacin (Td), rendimiento (r) y velocidad
de crecimiento (K) y para ello se utilizaron las ecuaciones siguientes, citadas por Prieto
y col. (2006):
Td = ln 2 /K ; r = (Cf Ci) / t ; K = (ln Cf ln Ci) / (tf ti)
donde:
Ci: concentracin inicial del cultivo
Cf : concentracin final del cultivo al trmino de la fase exponencial
tf y ti: tiempo final e inicial del cultivo
fe: fase exponencial del cultivo
Las variables fsico-qumicas analizadas al agua a las 11:00 horas fueron: temperatura
(T), pH y oxgeno disuelto (OD), adems, intensidad de luz incidente (I L) en los
cultivos. Se determin la demanda bioqumica de oxgeno soluble (DBO 5-S), iones
fosfato (PO43-), nitrito (NO2-) y amonio (NH4+) al inicio y final de los experimentos, debido
4
a que los ensayos se realizaron en batch. Los mtodos utilizados fueron los descritos
en el APHA (1995) y AOAC (2000).
Al culminar los experimentos en tanquetas, se tomaron 50 mL de muestra conteniendo
animales adultos y neonatos y se conservaron en lugol, procediendo posteriormente a
la observacin de la cmara incubatriz de las hembras adultas y a la medicin del
ancho (en la parte ms ancha del cuerpo) y la longitud (desde la base de la espina
caudal hasta la parte anterior de la cabeza). Las mediciones se realizaron con el auxilio
de un microscopio biolgico binocular CAMPUS 1000x, con lente objetivo 10X y ocular
7X.
Se cuantific el peso hmedo de Moina sp filtrando una muestra representativa a travs
de una red de 50 micras. Posteriormente se realiz una primera deshidratacin con
papel secante seguida de una segunda deshidratacin al sol por 10 horas,
aprovechando as las condiciones medioambientales imperantes en Cuba.
Se compararon las lneas de regresin determinadas tanto en acuarios como en
tanquetas, referidas al crecimiento poblacional de Moina sp, utilizando el paquete
STATGRAPHICS Centurin XV Versin 15.2.05. Las grficas se plotearon con el auxilio
del paquete Sigma Plot 10 con Sigma Stat 3.5 integrado.
RESULTADOS
ind/mL
12
10
8
6
4
2
0
Das
Dmd
Td
1,15
1,5
0,63
-1
Dmo: densidad mxima de organismos (ind.mL ); Dmd: da de mxima densidad (d); Td:
tiempo de duplicacin (d); r: rendimiento (ind.mL-1.d-1); K: velocidad de crecimiento (conc/fe)
ind/mL
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0
Das
Dmd
Td
7,0
1,87
1,0
0,31
10
Grupo
1
2
ind_Ml
8
6
4
2
0
0
Das
Experimento
T
pH
OD
DBO5-S
27,0
7,4
8,8
12,2
28,2
8,3
9,6
4,8
II
0,035
0,01
0,53
27,0
7,9
9,5
14,0
1,44
0,07
1,19
0,096
0,003
0,032
23,5
7,4
8,6
3,8
2,15
0,04
5,82
I L incidente en los organismos a las 11:00 horas: en acuarios 3 000 lx; en tanquetas 90 lx
Para el ensayo en acuarios, la I L hallada a las 14:00 horas fue de 5 500 lx, lo cual se
logr debido a la cobertura de hierba con que se protegieron los organismos de prueba
contra las intensidades altas de luz.
Las grficas de la figura 6 muestran el comportamiento de la DBO 5-S, el fosfato, el
nitrito y el amonio, observndose en su gran mayora, concentraciones superiores de
todos los indicadores hallados en los experimentos efectuados en tanquetas con
respecto a los acuarios. Por su parte, la DBO 5-S y el nitrito presentaron disminuciones al
finalizar los ensayos, as como el fosfato y el amonio que experimentaron incrementos
de sus concentraciones (Tabla 4).
Fig. 6 Concentraciones de DBO5-S, PO4 3-, NO2- y NH4+ en mg.L-1, al inicio y fin de los
experimentos realizados en acuarios y tanquetas.
Con respecto al anlisis microscpico de los ejemplares tomados al azar, se observaron
neonatos con un largo entre 0,428 y 0,484 mm y un ancho entre 0,248 y 0,304 mm y
adultos con un largo entre 0,855 y 0,956 mm y un ancho entre 0,473 y 0,709 mm (Tabla
5).
Tab. 5 Tallas promedio de los diferentes estados de Moina sp
Estado
Neonato
0,428 0,484
0,248 0,304
Adulto
0,855 0,956
0,473 0,709
La poblacin de Moina sp pudo haber sido superior, de haberse dilatado mayor tiempo
los experimentos, aunque los resultados aqu expuestos cumplieron con el objetivo con
que fue planificada la investigacin: demostrar que Chlorella spp. cultivada en los riles
procedentes del proceso productivo de diferentes recursos pesqueros es asimilada por
el cladcero de referencia.
Independientemente de la poblacin alcanzada, existe un aspecto econmico
importante al no suministrarse otros aditivos a la dieta de los individuos de prueba,
prctica comn en los cultivos tradicionales y que ha sido discutido por Malhotra y
Langers (1990) y recientemente por Prieto y col. (2006) entre otros. En la Tabla 6 se
observan concentraciones de distintas especies de Moina que van desde 4,0 hasta 40,0
ind.mL-1, empleando solamente un alimento, as como distintas combinaciones. En la
misma Tabla se denota como mayoritariamente las poblaciones ms elevadas de
cladcero se obtuvieron cuando el alimento fue combinado y no como nica fuente
nutricional.
No obstante a lo sealado anteriormente, los resultados expuestos demuestran la
validez del uso de Chlorella spp. cultivada en condiciones econmicas, contando para
ello con un medio orgnico rico en elementos esenciales (Surez y Romero 1995;
Romero, 1998), capaz de inducir un crecimiento rpido de la microalga.
Tab. 6 Crecimiento poblacional de diferentes especies del gnero Moina, alimentadas
con dietas variadas.
Dieta
Pulpa de hierba Taraxurum
officinate fermentada
Planta acutica Oenanthe
javanica fermentada
Hierba Taraxurum officinate
fermentada ms planta
acutica Oenanthe javanica
fermentada
Microalgas Chlorella mas
Ankistrodesmus sp.
ind.mL-1
31,0
2,8; 5,0;
7,0
7,0
17,0
40,0
22,0
8,0; 9,0
8,0
7,9; 8,4;
5,1
5,6; 5,5;
Cladcero
Moina
macrocopa
Moina
macrocopa
Moina
macrocopa
Referencia
Yang (1995)
Cladcero del
gnero
Moinodaphnia
Moina
macrocopa
Moina
macrocopa
Moina
macrocopa
Prieto (2000)
Alva-Martnez y
col. (2001)
Flores-Burgos y
col. (2003)
Flores-Burgos y
col. (2003)
Moina
macrocopa
Moina
macrocopa
Moina
Flores-Burgos y
col. (2003)
Jimnez y col.
(2003)
Jimnez y col.
Yang (1995)
Yang (1995)
10
cerevisiae
Alimento formulado para
fitoplancton
Microalga Chlorella
Microalga Ankistrodesmus
sp.
Microalga Ankistrodesmus
sp. ms levadura
Saccharomyces cerevisiae
Microalga Chlorella spp.
cultivada en riles pesqueros
(laboratorio)
Microalga Chlorella spp.
cultivada en riles pesqueros
(exterior)
4,0
11,2; 9,2
6,22
macrocopa
Moina
macrocopa
Moina
macrocopa
Moina sp
12,3
Moina sp
3,0
Moina sp
Romero (2009)
7,0-9,0
Moina sp
Este trabajo
4,8
(2003)
Jimnez y col.
(2003)
Sarma y col.
(2003)
Prieto y col.
(2006)
Prieto y col.
(2006)
Los estudios aqu realizados pueden corroborar lo antes planteado, con una produccin
de Moina sp ligeramente superior en los acuarios, coincidiendo con el hecho de haber
asociado Chlorella spp. con paja seca, lo que hace pensar que esa fuera la causa del
incremento en la progenie.
Las fluctuaciones que se aprecian en la figura 4 se deben a que los ejemplares ms
pequeos no se cuantificaron, situacin que se hizo posible al da siguiente, motivado
por el crecimiento acelerado de la especie en apenas pocas horas, ratificado por el
tiempo de duplicacin de 1,15 y 1,87 d en acuarios y tanquetas respectivamente. Este
indicador 2,6 y 1,94 d, result inferior a los hallados por Prieto y col. (2006), cuando
aplicaron dietas combinadas.
En ambos casos estudiados, el rendimiento de 1,5 y 1,0 ind.mL -1.d-1 fue bueno,
mostrando que el inculo de Chlorella spp. aplicado al comienzo de los ensayos y que
indujo una concentracin en el cultivo de 3,0 x 10 6 Cel.mL-1, fue suficiente para lograr
densidades poblacionales hasta de 9,0 y 7,0 ind.mL -1 respectivamente en slo seis-siete
das de cultivo. Por su parte, los inculos de Moina sp utilizados en los ensayos fueron
suficientes para el desarrollo de la poblacin cultivada, hecho que hace tomar como
norma, iniciar los cultivos con una densidad poblacional que flucte entre 0,2 y 3,0
ind.mL-1 para lograr poblaciones, inclusive, superiores a los 5,0 ind.mL -1 que sealan
Rottmann et al. (2003) como densidad rutinaria de cosecha en cultivos masivos de
Moina.
Este criterio est avalado tambin por los resultados de Alva-Martnez y col. (2001),
que lograron densidades de 7,0 ind.mL -1 cuando utilizaron como inculo 0,2 ind.mL -1, al
igual que Flores-Burgos y col. (2003), que obtuvieron esa misma densidad, con un
inculo de Moina de 1,0 ind.mL-1.
Las K halladas en el estudio resultaron superiores a las encontradas por Romero (2009)
al utilizar Scenedesmus sp cultivada tambin con riles pesqueros, donde el incremento
de la poblacin en el transcurso de 13 das no super los 3,0 ind.mL -1.
Referido a los indicadores fsico-qumicos, se comprende que la temperatura del medio,
reportada entre 27,0 y 28,2 C en acuarios y tanquetas respectivamente, present
valores que no infieren en el desarrollo de Moina sp, tal como lo sealan Rottmann y
11
col. (2003), los que a su vez demostraron que ese organismo es resistente y tolerante a
variaciones significativas de temperatura, con intervalos desde 5,0 hasta 31,0 C,
aunque varios autores sealan como ptimo para este gnero, el intervalo entre 24,0 y
31,0 C (Hoff y Snell, 1997). Rodrguez-Estrada y col. (2003) plantean en sus
investigaciones que el efecto de la temperatura es muy importante porque afecta el
desarrollo y metabolismo de los individuos, hecho que no contradice los resultados aqu
obtenidos, ya que los organismos se desarrollaron en ambientes con temperaturas
entre 23,0 y 28,0 C.
El pH del agua fue un indicador que no presupone influencia negativa para el buen
desarrollo del cladcero y as tambin lo demostraron Velsquez y col. (1986) para
ambientes naturales donde diferentes especies de cladceros se desarrollaron con pH
entre 7,4 y 8,3. Davis y Ozburn (1969) tambin encontraron rangos semejantes en sus
estudios para los organismos cultivados en laboratorio, mantenindose el pH entre 7,0 y
8,7.
La I L a pesar de variar significativamente en el transcurso del da, fue temporalmente
constante, atendiendo a las caractersticas climatolgicas de Cuba, de elevada
incidencia de luz solar y clima relativamente estable. No obstante al sometimiento
continuo de los individuos del experimento en acuarios a estas condiciones y a pesar de
las medidas tomadas al realizar las experiencias en correspondencia a lo planteado en
la bibliografa, que seala lo ideal que resulta una cobertura que minimice hasta en un
50-80% la radiacin solar, los organismos de prueba se desarrollaron
satisfactoriamente, inclusive, alcanzaron densidades discretamente superiores en los
acuarios, a pesar de haber recibido mayor intensidad de luz. De ah que se descarte la
posibilidad de que la luz fuese un factor que pudiese influir en el desarrollo de Moina sp.
En los ensayos en tanquetas la I L fue menor, reportando su mayor valor en 120 lx,
presentndose variaciones diurnas de intensidades de luz muy moderadas, a pesar de
las caractersticas del local donde se llev a cabo la experiencia.
Las concentraciones de OD del agua no fueron limitantes para el cultivo del cladcero y
aunque no es un aspecto al cual se haga mucha referencia en la bibliografa, Rottmann
y col. (2003) en el informe sobre tcnicas de cultivo de Moina, dejan bien clara la idea
de la tolerancia de estos organismos a ambientes carentes o sobresaturados de
oxgeno. Entre otros aspectos, esto se debe a la capacidad que tienen estos individuos
de sintetizar hemoglobina para sobrevivir en ambientes con oxgeno bajo, aunque en
este estudio no se presentaron situaciones semejantes en ninguno de las dos etapas en
que se efectuaron las investigaciones referidas en el presente artculo.
El hecho de que la DBO5-S alcanzara concentraciones superiores al comienzo de los
experimentos en acuarios y tanquetas (12,2 y 14,0 mg.L -1) e inferiores al culminar los
mismos, con reducciones del orden de 57 y 64% respectivamente, indica el papel
degradador de las bacterias que conviven en el agua de abasto utilizada para el cultivo,
que aunque empobrecidas en cantidad, aumentan al inocular microalgas que estn en
suspensin en los riles orgnicos de la pesca, jugando su papel biorremediador y por
consiguiente, provocando disminucin de la DBO 5-S.
Por otro lado, qued demostrada la capacidad que presenta esta especie de vivir en
ambientes ligeramente contaminados, como enfatizan Rottmann y col. (2003), cuando
sealan que el cladcero de referencia es capaz de reproducirse en cuerpos de agua
fuertemente contaminados con aguas albaales, reportndose especies que han jugado
un papel importante en la estabilizacin de las aguas negras de ciertas lagunas de
12
estabilizacin, con DBO5-S entre 300 y 500 mg.L -1. Tambin Diges (1974); Norman y
Chew (1979); De Pauw y col. (1980); Villegas y Lumasag (1991) han reportado a los
cladceros como recicladores activos en plantas de tratamiento de aguas residuales.
La presencia de nitrito con concentraciones en el orden de las dcimas de mg.L -1 o
inferiores, es un aspecto muy favorable en los cultivos, ya que este in est
considerado como muy txico (Camargo y Alonso, 2007) y responsable principal de la
toxicidad de los organismos acuticos, principalmente cuando la concentracin supera
el valor de 1,0 mg.L-1, por cuanto pueden provocarse trastornos en los pigmentos
respiratorios hemoglobina y hemocianina al convertirse en formas que son incapaces
de transportar y liberar oxgeno, como son la meta-hemoglobina y la meta-hemocianina,
causando asfixia o muerte de los individuos que conviven en estos ecosistemas
(Camargo y Alonso, 2006).
Las concentraciones de fosfato, que se presentaron bajas en los acuarios y
relativamente altas en las tanquetas, demuestran que Moina sp es capaz de sobrevivir
en estos ambientes, sin alterar de forma extrema su desarrollo. Se debe tener en
cuenta que cuando las formas solubles de fsforo son elevadas, se podra alcanzar
cierta eutrofia en dicho medio, nivel que estar determinado por la cantidad de fosfato y
otros nutrientes presentes (Vila y Pizarro, 2004). Este grado de eutrofia, al parecer no
influy en el desarrollo del cladcero.
El aumento de estos iones al finalizar los experimentos en tanquetas puede ser debido
a la inclusin diaria del cultivo de Chlorella spp. que contiene agua procedente del
procesamiento del pescado con elevada carga de fosfato, provocndose un incremento
de dicho in en el transcurso de los das.
Se plantea que cuando las concentraciones de
de forma crnica, pueden afectar la densidad
Rocha, 2003). Para ambas etapas del estudio
fueron superiores a las que sealan Conklin y
cladceros, aunque tambin consideran que la
con certeza.
AGRADECIMIENTOS
14
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16
17