CROMATOGRAFIAGASOSA

ACOPLADAAESPECTROMETRIADE
MASSAS GCMS
PrincpioseAplicaes
p
p
EliasPauloTessaro
Elias
Paulo Tessaro
elias.tessaro@iqm.unicamp.br
eliastessaro@gmail.com

1.Introduo

Instrumentao

Direto
GC
HPLC

EI
CI
APCI
APPI
ESI
MALDI

B
Q
Tof
IT
LIT
ICR
Orbitrap

Multiplicadore
MCP

1.Introduo

Oquecromatografia??

1906 BotnicorussoMikhailTswett

1.Introduo

2.Cromatografia Gasosa
O principal mecanismo de separao da Cromatografia Gasosa (CG) est baseado
na partio dos componentes de uma amostra entre a fase mvel gasosa e a fase
estacionria (lquida ou slida).
slida)

Alto poder de resoluo;

Alta sensibilidade;
A amostra e/ou seus componentes devem ser volteis e termicamente
estveis!!! (temperaturas at 300 C);
Tempos razoavelmente longos de analise.
5

2.Cromatografia Gasosa
Sinal
Registrado

Introduo
deamostra

Conversor
desinal
GsdeArraste

ColunaCromatogrfica
Coluna
Cromatogrfica
eForno

Detector
6

Instrumentao
Instrumentao

Direto
GC
HPLC

EI
CI
APCI
APPI
ESI
MALDI

B
Q
Tof
IT
LIT
ICR
Orbitrap

Multiplicadore
MCP

Sinal
Registrado

Introduo
deamostra

Conversor
desinal
GsdeArraste
ColunaCromatogrfica
eForno

Detector

3.IonizaoporEltrons

3.IonizaoporEltrons

Molculas neutras, na fase gasosa (dessoro trmica), a uma

presso tpica de 105 torr, so bombardeadas por eltrons, com
energia
i tpica
i de
d 70 eV.
V Ocorre
O
principalmente
i i l
a retirada
i d ou captura
de um eltron formando ons M+. ou M.. ons positivos so
predominantes. M. se tornam importantes para molculas com alta
EA.
EA

M+e (70eV)M+. (~510eV)+2e (~6065eV)

3.IonizaoporEltrons

FontedeEI

10

3.IonizaoporEltrons

I i
Ionizao
70 eV
Os espectros de massas
so reprodutveis em
equipamentos similares
Existem uma variedades
de
bibliotecas
de
espectros de massas:
Wil Nist,
Wiley,
Ni t entre
t outras
t

11

3.IonizaoporEltrons

EnergiaxFragmentao

12

3.IonizaoporEltrons

E
Exemplos
l

C7H16 m=100

13

3.IonizaoporEltrons

Caractersticas
Processo unimolecular. Os ons formados so rapidamente extrados da fonte de
ionizao pelo eletrodo de repulso ("repeller).
ons

moleculares so formados com excesso de energia interna e se fragmentam

total ou parcialmente.
EI bastante popular: produz tanto o on molecular (massa) como tambm
fragmentos (estrutura); espectros reprodutveis; bibliotecas de espectros de EI a
70 eV; estvel; fcil de operar; alta sensibilidade.
Aplicase a molculas de mdia e baixa polaridade e baixo peso molecular
(~500u), volteis e termoestveis: molculas orgnicas relativamente pequenas.
Quando o on molecular no observado (devido a dissociao excessiva),
existe um processo dissociativo exotrmico e portanto M+. uma espcie instvel.
EI ocorre em ~1016 s. Uma
U
em cada
d 103105
103 105 molculas
l l que entram
t
na fonte
f t de
d
EI ionizada.
14

4.IonizaoQumica
Munson and Field 1966

EI:
Simples
Produzextensafragmentao
MuitasvezestemM+.

QuandonotemM+. ???
15

4.IonizaoQumica

FontedeCI

16

4.IonizaoQumica

I i
Ionizao

Presso ~ 103 mbar;

Mtodo de ionizao indireta e branda;
prton do ggs reagente
g
molcula
Transferncia de um p
on molecular protonado [MH]+;
Fragmentao leve ou quase ausente, ideal para obter o
on molecular
17

4.IonizaoQumica

CH4

Exemplos

IsoC4H10

NH3

18

EIvs CI

E
EspectrodeMassas:ComparaoentreEIeCI
t d M
C

t EI CI
IIonizaoEletrnica
i El t i
Fragmentao intensa mais
informaes sobre a molcula;
Muitas vezes no encontrado o
on molecular.
IonizaoQumica
Fragmentao branda espectro
mais limpo;
Sempre encontrado o on
molecular;
Necessrio a utilizao de um gs
reagente.
reagente
19

Instrumentao
Instrumentao

Direto
GC
HPLC

EI
CI
APCI
APPI
ESI
MALDI

B
Q
Tof
IT
LIT
ICR
Orbitrap

Multiplicadore
MCP

Sinal
Registrado

Introduo
deamostra

Conversor
desinal
GsdeArraste
ColunaCromatogrfica
eForno

Detector

20

5.SetorMagntico

S
SetorMagntico
M i

21

5.SetorMagntico

S
SetorEltrico
El i

Devido a problemas de focalizao dos ons aps

passar pelo Setor Magntico
22

5.SetorMagntico

D l F li
DuplaFocalizao

23

5.SetorMagntico

F
FrancisAston
i A
1919
Francis Aston constri o primeiro espectrgrafo de
massa com focalizao de velocidade com poder de
resoluo
l de
d 130.
130
1937
Aston constri um espectrgrafo de massa com poder
de resoluo de 2000
Descobriu 212 dos 287 istopos naturais 1922
Nobel
Nobel Prize in Chemistry "for
for his discovery, by means of
his mass spectrograph, of isotopes, in a large number of
nonradioactive elements, and for his enunciation of the
whole number rule
wholenumber
24

5.SetorMagntico

F
FrancisAston
i A

25

5.SetorMagntico

Mi Viki
MissoViking

26

5.SetorMagntico

C l
Calutron

Main
M
i Calutron
C l
patents:
U.S.Patent2709222Methodsofandapparatusforseparatingmaterials(ErnestO.Lawrence)
U.S.Patent2719924Magneticshims(RobertOppenheimerandStanleyFrankel)
U S Patent 2847576Calutron
U.S.
2847576 Calutron system(ErnestO.Lawrence)
system (Ernest O Lawrence)

27

6.RazoIsotpica

R I t i
RazoIsotpica

28

6.RazoIsotpica

R I t i
RazoIsotpica

29

6.RazoIsotpica

R I t i
RazoIsotpica

30

6.RazoIsotpica

R I t i
RazoIsotpica

31

6.RazoIsotpica

32

6.RazoIsotpica

33

6.RazoIsotpica

34

6.RazoIsotpica

Caractersticas
Altaresoluo(~50.000)
(
)
Alta exatido (~1020ppm)
Altaexatido(
10 20 ppm)
Analizador
Analizador discriminativo
Feixecontnuo

35

7.Quadrupolo

Quadrupolo
Quatro plos acopladosdiagonalmente
Quatroplos
acoplados diagonalmente
Idealmentehiperblicos
Substituiseporcirculares
VoltagemRFeDC

ParaQuadrupolosCirculares
D/d=1.148
36

7.Quadrupolo

Dimenses
Quadrupolosintonizadoparam/z200eondem/z200
Freqncia =880kHz
Comprimento=20cm
Potencial de acelerao = 10 V
Potencialdeacelerao=10V
Tempodepermannciaaproximado=64s
37

7.Quadrupolo

C
Caractersticas
t ti
Resoluounitria(1Da)
Resoluo unitria (1 Da) ~nmerodeciclosRF
nmero de ciclos RF
Paralelismomuitoimportante!
p
Simples
Varreduradiscriminatria

38

7.Quadrupolo

EEspectrometriadeMassas
t
ti d M
Sequencial

39

7.Quadrupolo

Tipos de Experimentos MS/MS

TiposdeExperimentosMS/MS
Experimentos
p
Varredura(MS)
SIM(MS)
SIM (MS)
SRM/MRM(MS/MS)
VarreduradeonsProdutos(MS/MS)
Varredura de ons Produtos (MS/MS)
VarreduradeonsPrecursores(MS/MS)
VarreduradePerdaNeutra(MS/MS)
V
d
d P d N t (MS/MS)

40

7.Quadrupolo

41

8.Ion Trap

Ion Trap 3D

42

8.Ion Trap

I Trap
Ion
T 3D
Armadilha inica desenvolvida por
Wolfgang
g g Paul ((Nobel de Fsica de 1989))

43

8.Ion Trap

I Trap
Ion
T 3D

Consiste de um eletrodo em forma de Anel e dois eletrodos tampa

ConsistedeumeletrodoemformadeAneledoiseletrodos
tampa
ConectadosumavoltagemRF/AC
Forma um potencial oscilante de aprisionamento
Formaumpotencialoscilantedeaprisionamento
SegueaequaodeMathieu

44

8.Ion Trap

SequnciadeEventos(MS)
Aprisionamento
p
Resfriamento
Varredura
Deteco(porinstabilidadederbita)

SequnciasnoTempo!!!

45

8.Ion Trap

Desvantagens
Chemical Shift
Interaesentreosonscausamdesvioderbitadentrodotrap;
Provocaumerrodemassaemalgunscasos.

Fonte
Fontedeonsdeveficarafastadadotrap;
p;
Possibilidadedereaesonmolcula(CI);
Usaseumguiadeonsparafazeratransfernciadeons.

46

8.Ion Trap

EspectrometriadeMassasSequencialno
d
l
Tempo (IT)
Tempo(IT)
Eventosdeanlisedem/z,dissociaoeanlisedem/zocorrem
/
/
noIT;
Eventosocorremnotempo;
nicoanalizador
nico anali ador m/z,vriosexperimentos;
m/ rios e perimentos
DissociaorealizadacomHe;
NovafontedeRFexcitaosonsaxialmente,provocandoo
aumento da energia interna Dissociao
aumentodaenergiainterna
47

8.Ion Trap

Desvantagens
Low Mass Cut
CutOff
Off (LMCO)
NascondiesdeCID;

;
onsdemassabaixanosoestveisnessascondies;
onscommassa<1/3doprecursorsoejetados

48

8.Ion Trap

Low Mass CutOff

ff (LMCO)
(
)

49

8.Ion Trap

MSn
Experimentos de MS sequencial com n > 2 so possveis
sem custo;
Basta
B
repetir
i os ciclos
i l
d seleo,
de
l
resfriamento,
fi
dissociao e varredura;
Limitado pela sensibilidade (somente 1 acumulao !);
Aplicaes c/ n=3, demonstrado c/ n=12.
50

8.Ion Trap

Ion Trap Linear(LIT)

( )
OutraformadeTrap;
Consiste em um arranjo quadrupolar comlentesdeentradasada;
Consisteemumarranjoquadrupolar
com lentes de entrada sada;
Vriasmelhoriasemrelaoao3D:
Maiorcapacidade
MenorLMCO
Menorchemical shifts
Doistiposextrao:
Radial(Thermo)
Axial(Applied Biosystems)

51

8.Ion Trap

Configuraes
f

Thermo
h
52

8.Ion Trap

Configuraes
f

ABSciex

53

8.Ion Trap

54

9.TimeofFlight

TimeofFlight TOF
Princpiomaissimplesdosanalizadores;
Princpio mais simples dos analizadores;
onssoaceleradosporumavoltagemconstante;
Asvelocidadesdosonsdependemdarazom/z;
Medeseotempoqueoonlevaparapercorrer
umacertadistncia.
55

9.TimeofFlight

TOFLinear

Analisador Pulsado (nocontnuo)

Grande sensibilidade (No faz varredura)
Sem limite terico de massa
Baixo
B i Custo
C t
Baixa resoluo (100400) devido disperses
56

9.TimeofFlight

TOFRefletor

Alta resoluo (1000020000)

Alta exatido (~ 310 ppm)
Limite de massa (at 8000 a 10000)
Menor sensibilidade

57

Instrumentao
Instrumentao

Direto
GC
HPLC

EI
CI
APCI
APPI
ESI
MALDI

B
Q
Tof
IT
LIT
ICR
Orbitrap

Multiplicadore
MCP

Sinal
Registrado

Introduo
deamostra

Conversor
desinal
GsdeArraste
ColunaCromatogrfica
eForno

Detector

58

10.Detectores

Detectores
O detector tem a funo de detectar e amplificar o sinal
d corrente
da
t de
d ons

que vem do
d analisador
li d e transferir
t
f i o
sinal para o sistema de processamento de dados.
Os principais tipos de detectores so:
Multiplicador de eltrons
MCP (microchannel plate)

59

10.Detectores

MultiplicadordeEltrons
Dinodo de converso que utilizado para converter ons positivos
ou negativos em eltrons.
Potencias mais altos nos dinodos de converso so utilizados para
acelerar ons de massa altas e assim melhorar a sensibilidade

60

10.Detectores

M lti li d d Elt
MultiplicadordeEltrons

61

10.Detectores

MCP
O MCP um multiplicador
lti li d de
d eltrons
lt
muito
it rpido
id
Um nico on pode gerar 107 eltrons sendo produzidos em um
perodo de 45 ns

62

10.Detectores

MCP

63

Instrumentao
Instrumentao

Direto
GC
HPLC

EI
CI
APCI
APPI
ESI
MALDI

B
Q
Tof
IT
LIT
ICR
Orbitrap

Multiplicadore
MCP

Sinal
Registrado

Introduo
deamostra

Conversor
desinal
GsdeArraste
ColunaCromatogrfica
eForno

Detector

64

11.Acoplamentos

A l
Acoplamentos
t

65

11.Acoplamentos
GC/MS:

FredMcLafferty

The direct coupling of gas chromatography (GC)

and TOF MS was achieved in the mid-1950s by Roland S.
Gohlke and McLafferty of Dow Chemical Co., Midland, Mich., in
collaboration
ll b
ti
with
ith Wiley,
Wil
M L
McLaren,
and
d Dan
D
H
Harrington
i t
att
Bendix. At about the same time, GC was coupled to a
magnetic sector instrument by Joseph C. Holmes and Frank A.
Morrell of Phillip Morris, Richmond, Va., among others.

Finnigan 1968 Hewlett|Packard 1971

66

11.Acoplamentos

ThePerfectCouple!
The Perfect Couple !
67

Configuraes

ConfiguraesdeEquipamentos
f
d

68

VantagenseDesvantagens

Vantagens
EIfornecefragmentos/Ion molecular
GCtemaltaresoluo
Quantificaofeitaatravsdemonitoramentode1oumaisons
f
f
d
d

MaioramassaMaiorsele vidade

D
Desvantagens
t
Temposrazoavelmentelongos
l
l
Necessidadedederivatizao emvrioscasos
69

Exemplos

Hid
Hidrocarbonetos
b
t policclicos
li li
aromticos
ti
Amostra Matrizsimplesoucomplexa?solo,

guas, sedimentos, partculas no ar, entre

outros
o to ados e regulamentados
egu a e tados 16
6 HPAs
s ((7
Monitorados
HPAs so classificados como
g
p
pela IARC))
carcinognicos

Otimizaodaseparaocromatogrfica
Quantificao necessrio
Quantificao
Limitesdedeteco
IARC International Agency for Research on Cancer

Exemplos

HPA Separao
HPA

Exemplos

Espectros de massas PHA

Espectrosdemassas
128

100

152

100

50

50

26

39

51

64

20
30
40
50
60
MW: 128 C10H8 (ma inlib ) Na p htha lene

77
70

85 89
80

97

90

102

100

113
110

0
120

130

140

153

100

14

27

37

44 50 55

76
78 84 89

63

10
20
30
40
50
60
MW: 152 C12H8 (ma inlib ) Acena p hthylene

70

80

90

98

109

100

110

120 126
120

130

150

160

166

100

50

140

50
76
82

63
0

14

27 32

39

51

10
20
30
40
50
60
70
MW: 154 C12H10 (ma inlib ) Acena p hthene

87
80

90

98
100

126

110
110

120

130

139
140

0
150

160

170

14

26

39 44 51 56 63 69 74

10
20
30
40
50
60
MW: 166 C13H10 (ma inlib ) Fluorene

70

87
80

90

97
100

115
110

139
122

120

150
130

140

150

160

170

180

Exemplos

Espectros de massas PHA

Espectrosdemassas
178

100

50

50

27

38

63 69 76

50

20
30
40
50
60
70
MW: 178 C14H10 (ma inlib ) Anthra cene

80

76

89
98
90

110

100

110

120

152

139

126
130

140

150

163
160

0
170

180

190

50

39

27

152

89

63

98

20
30
40
50
60
70
80
MW: 178 C14H10 (ma inlib ) Phena nthrene

90

100

110
110

126
120

130

139
140

163
150

160

202

100

184
170

180

190

228

100

50

50

178

100

39

50

62

30
40
50
60
(ma inlib ) Fluora nthene

88

74
70

80

90

101
110
100 110

122

150

162

28

174

120 130 140 150 160 170 180 190 200

0
210

39

50

63

74

88

101

114
122

150

163 174

187

200

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240
MW: 228 C18H12 (ma inlib ) Benz[a ]a nthra cene

Exemplos

Drogas de abuso
Drogasdeabuso
Substancias
b
i
entorpecentes
psicotrpicas,eseus
metablitos
Anfetaminase
Metanfetaminas
Cocana
Metablitos
Maconha
Canabinoides

Exemplos

Anlise por CG/EM

AnliseporCG/EM
Acidic/neutraldrugs resolved tobaseline Acidic /neutrodrogasresolvidoscomabasedereferncia
1. Methprylon
2. Butalbital
3. Amobarbital
4 Meprobamate
4.

5. Glutethimide
6. Phenobarbital
7. Methaqualone
8 Primidone
8.

Figure1a Analyzeunderivatizedacidicdrugsorbasicdrugsunderthesameconditions,usinganRxi5ms
column(http://www.restek.com/aoi_forensics_A002.asp)

Exemplos

Anlise por CG/EM

AnliseporCG/EM
Sensitiveanalysisforbasicdrugsinfreebaseform
1. Amphetamine
2. Methamphetamine
3. Nicotine
4 Cotinine
4.
5. Caffeine
6. Benzphetamine
7. Ketamine

8. Phencyclidine
9. Methadone
10. Cocaine
11 Scopolamine
11.
12. Codeine
13. Alprazolam

Figure1b Analyzeunderivatizedacidicdrugsorbasicdrugsunderthesameconditions,usinganRxi5ms
column(http://www.restek.com/aoi_forensics_A002.asp.)

Exemplos

Anlise MS/MS
AnliseMS/MS

Atividades:

EntregaraAtividade3;
28/09(sexta) ReservadoparaAtividade4:
Encontrareresumirem23pginasumartigo
e resumir em 23 pginas um artigo
Encontrar
cientificopublicadonaQuimica NovasobreoUso
d GC/MS
deGC/MSemanalisesorgnicas
li
i

78