UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICAS Y DE LA SALUD

ESCUELA DE CIENCIAS MDICAS
MEDICINA TROPICAL
MODULATION OF INTRATHYMIC SPHINGOSINE-1-PHOSPHATE LEVELS
PROMOTES ESCAPE OF IMMATURE THYMOCYTES TO THE PERIPHERY
WITH A POTENTIAL PROINFLAMMATORY ROLE IN CHAGAS DISEASE
Ana Flvia Nardy, 1 Leonardo Santos, 1 Clio Geraldo Freire-deLima, 2 and Alexandre Morrot 1 , * / Biomed Res Int. 2015; 2015: 709846.Published
online 2015 Aug 4. doi: 10.1155/2015/709846 PMCID: PMC4539443
1. Introduction
T lymphocytes are key players in acquired immunity and have a lineage
commitment characterized by expression of the T cell receptor (TCR), which
has a vital role in recognizing pathogen antigens during the development of
host resistance to infections [1]. The activation and differentiation of T cells
depend on the TCRs being specific for exogenous antigens but not mounting an
autoimmune response against self-antigens and generating a collateral
response. This quality control of the immune system is performed during the
maturation of T cell precursors in the thymus [2, 3].
The thymus is the primary lymphoid organ in which T cell precursors derived
from the bone marrow undergo cell differentiation process consisting of the
sequential expression of multiple lymphocyte differentiation genes and
rearrangement of the T cell receptor (TCR) genes. During thymic maturation,
thymocytes express TCRs, some of which interact with peptides presented by
molecules of the major histocompatibility complex (MHC) on the surface of the
thymic stromal cells. These interactions determine the positive and negative
selection events that are crucial components of the program of terminal
thymocyte differentiation [46].
During intrathymic development, thymocytes begin to express on their
membranes the TCR/CD3 complex together with CD4 and CD8 coreceptors,
thus becoming double-positive (DP) thymocytes, distributed throughout most of
the cortical region of the organ. At this phase of intrathymic maturation of
thymocytes, the generation of a highly diverse TCR repertoire produces many T
lymphocytes expressing TCRs that recognize self-antigens. These
autoreactive T lymphocytes are negatively selected in the thymus as part of
the process called central tolerance. In this process, the self-reactive
lymphocytes die by apoptosis, while a small percentage of positively selected
cells move to the medulla of the thymus where their differentiation proceeds
[68].
During the course of their differentiation, thymocytes develop into T cells
expressing high densities of TCR/CD3 and they become simple positive (SP) for

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one or another (but not both) of the coreceptors CD8 or CD4, which recognize,
respectively, peptides complexed with class I and class II MHC molecules.
These nave T cells ultimately leave the thymus to form part of the repertoire of
peripheral T cells [1, 9]. They are exported from the thymus under the control
of the lipid mediator sphingosine-1-phosphate (S1P) [1012]. Sphingosine-1phosphate is a biologically active sphingolipid derivative critical to the signaling
pathways involved in the traffic of leukocytes [10, 13, 14].
The tissue concentration of S1P increases in several inflammatory conditions
such as asthma and autoimmune diseases and this lipid agonist engages and
activates a family of G-protein coupled receptors (S1P1S1P5) [1517]. Several
groups have demonstrated the importance of S1PRs in the trafficking of
leukocytes mediating effector responses in the immune system. Their findings
indicate a key role of the S1P-S1PRs axis in the development and maintenance
of immunity [18, 19].
2. Fine-Tuned Metabolic Regulation of Sphingosine-1-Phosphate
Sphingolipids are essential lipids rich in cholesterol that are concentrated in
microdomains known as lipid rafts or lipid platforms on the plasma
membrane. These lipids can be rapidly metabolized upon activation of an
enzymatic cascade that converts sphingolipids such as sphingomyelin and
glycosphingolipid complexes to ceramide and subsequently to sphingosine, two
sphingosine kinases (SphK1 and SPHK2) and then phosphorylate sphingosine to
sphingosine-1-phosphate [17, 20, 21].
Sphingosine-1-phosphate has both cell-extrinsic and intrinsic activities affecting
homeostasis and cellular function [22]. Much emphasis has been given to the
extrinsic function of S1P in the immune system, which was recognized through
studies of the immunosuppressive agent, FTY720, a drug mediator proved
capable of binding to and blocking sphingosine-1-phosphate receptors (S1PRs)
[23]. FTY720 induces lymphopenia by causing sequestration of lymphocytes in
the lymph nodes, thus blocking the egress of mature thymocytes to the
periphery [24, 25].
The tissue levels of S1P are determined not only by its rate of biosynthesis but
also by its rate of degradation. It is constantly produced by most cells and is
irreversibly degraded by S1P lyase or dephosphorylated by S1P phosphatases
[2628]. In most tissues including lymphoid organs, S1P levels are extremely
low. Exceptions are the blood and lymph, in which S1P levels are generally
high, ranging from submicro to micromolar concentrations, respectively
[29, 30]. The S1P levels in serum arise mainly from its production by

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endothelial cells, while the high levels in plasma are contributed by the
erythrocytes [31, 32].
Deletion of the genes encoding both of the kinases, SphK1 and SPHK2, results
in embryonic lethality due to the absence of S1P. In addition, conditional
deletion of these two genes results in deficiency in circulating S1P. However
deletion of either one of the two genes is without effect, showing that these
kinases have redundant functions [29, 33].

3. Expression of the Specific G Protein Coupled Receptors for S1P and

the Regulation of Cellular Traffic in the Immune System
The discovery of the orphan receptor-associated G protein gene originally
known as endothelial differentiation gene 1 (EDG1) opened a new frontier in
our understanding of the mechanism of action of S1P [34]. Since then, S1P has
been shown to be the ligand for five different members of this orphan
receptor family, S1P1S1P5 [35]. These receptors mediate several cellular
functions through associated heterotrimeric G proteins (I, q, or 12/13) and
are expressed by most cells of the immune system. However, there is
heterogeneity in terms of their pattern of expression among immune cells [36].
Although S1PRs are present in other physiologic systems, S1P3S1P5 are
mainly limited to the immune system. T cells express S1P1 and S1P4 [12, 37
39], while mast cells and macrophages express S1P1 and S1P2 [4045].
Expression of S1P1 is also found in B lymphocytes and dendritic cells [4650].
The primary function of most S1PRs is to regulate the migratory responses of
cells by inducing proteins with Rac GTPase activity [36, 51]. S1P signaling plays
a role both in the migration or homing of immune cells to lymphoid organs and
in their egress into the blood and lymph, a topic that has received much
attention recently [5254]. The S1P gradient between lymphoid tissues, which
have low levels of S1P, and their vascular compartments, which have high
levels of S1P, is a key factor determining the egress of leukocytes from lymph
nodes and thymus into the blood [32]. The signaling pathways activated by
S1P1 in response to this gradient of S1P control not only the egress of T and B
lymphocytes from lymph nodes but also the exit of mature T lymphocytes and
natural killer T cells (NKT) from the thymus to vascular compartments
[10, 12,14].
S1P-mediated chemotaxis via S1P1 is dependent on the concentration of SIP: in
vitro studies have demonstrated that low concentrations promote S1P
chemotaxis, while high concentrations tend to inhibit it [54, 55]. It appears that

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high S1P levels stimulate ubiquitin-dependent lysosomal membrane protein
sorting and degradation, which causes breakdown of S1P1 [56]. Interestingly,
elevated concentrations of the synthetic agonist of S1PRs, FTY720, are also
highly effective in inducing internalization, ubiquitination, and degradation of
S1P1 [23, 5759].
4. Disruption of S1P Homeostasis Promotes Thymocyte Precursor
Release and Organ Atrophy in Chagas Disease
In most vertebrates, acute short-term stress signals induced by infectious
pathogens are responsible for evoking host innate defense responses [60]. If a
pathogen persists chronically the stress signals can cause the host immune
response to be suppressed, thus increasing susceptibility to the microorganism;
this results at least in part from a shift from T helper 1-mediated cellular
immunity to T helper 2-mediated humoral immunity. These stress signals are
the result of release of neurotransmitters, hormones, and cytokines secreted
during inflammatory responses [61].
In Chagas disease, infection by T. cruzi generates an inflammatory syndrome
mediated by TNF- in the acute phase. This cytokine activates the
hypothalamus-pituitary-adrenal (HPA) axis leading to release of stress hormone
corticosterone. The primary consequence is atrophy of the thymus leading to
severe reduction in thymic cell numbers, followed by a reduction in the thymic
output of T cells to the periphery [62, 63].
Although thymic atrophy occurs in infections caused by several pathogens, the
impact of this trait on thymic central tolerance has only recently been clarified.
We have demonstrated that the alterations in the thymic microenvironment
induced by T. cruzi infection do not affect the key elements needed for
intrathymic negative selection of maturing thymocytes during thymopoiesis
[64]. Nevertheless, we have observed that in severe atrophy of the thymus the
number and frequency of developing extrathymic thymocytes bearing low TCR
levels increase markedly during the acute phase [65].
Moreover, we found that the immature thymocytes released into the periphery
(subverting the process of negative selection) acquired similar activated
phenotype to that described for activated effector cells and single-positive
memory cells, suggesting a possible imbalance in the mechanism controlling
thymocyte exit to the periphery [64]. As the signaling pathway mediated by
sphingosine-1 phosphate (S1P) through its receptors is responsible for the
egress of mature thymocytes, we investigated whether some modulation of the
sphingosine-1-phosphate (S1P) pathway was responsible for the early release
of thymocytes in thymic atrophy [66].

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The gene expression profile of the enzymes involved in the S1P pathway in
the T. cruzi infected thymus during acute phase in fact showed a reduction of
sphingosine-1-phosphate accompanied by reduced expression of the activating
kinases SPHK1/2 and upregulation of the inactivating phosphatase SGPL1.
However, the S1P levels in the sera of infected and normal mice were similar
[66]. These findings indicate that the gradient of S1P level from the thymus to
the blood of T. cruzi infected mice becomes steeper upon infection and this
may promote thymocyte egress. Since high concentrations of S1P are needed
to stimulate ubiquitin-dependent lysosomal membrane protein sorting and
degradation the breakdown of S1P1 this feedback mechanism should not be
active in the infected thymus because of the reduced S1P concentration.
Interestingly, analysis of the expression of the S1P receptor in developing
thymocytes indicated a substantial upregulation of S1P1 and S1P3 expression
in immature CD4CD8 T cells upon T. cruzi infection, suggesting that some
S1P-mediated pathway could also contribute to the premature exit of these
cells [66]. The upregulation of S1P receptors should increase the sensitivity of
thymocytes to S1P-mediated chemotaxis in the atrophic thymus. Using an ex
vivo Transwell migration assay, we found that the sensitivity of the
CD4CD8 cells to S1P-mediated chemotaxis increased during T. cruzi infection
[66].
These findings together indicate that the export of developing
CD4CD8 thymocytes could be favored by a disturbance of the physiological
levels of S1P in the thymus during T. cruzi infection. In fact, we found that when
we blocked the S1P receptors with FTY720 in infected mice we inhibited the
escape of these cells to the periphery thus restoring physiological levels of
CD4CD8 thymocytes [66].
Furthermore, when we assessed the differentiation status of the
CD4CD8 thymocytes released during T. cruzi infection, we found that these
immature cells (present in peripheral lymph nodes) exhibited a significant
increase in the expression of the cytokines IL-17 and TNF upon polyclonal
stimulation [66]. The findings we have described correlate with the presence in
patients with the indeterminate or cardiac clinical forms of Chagas disease of
increased numbers of circulating CD4 CD8 T cells exhibiting an activated
phenotype as defined by the expression of activation marker, HLA-DR [64].
5. Concluding Remarks
Overall our studies indicate that infection with Trypanosoma cruzi promotes
thymic alterations, due in part to the effects of modulation of the S1P-S1P1
receptor axes on intrathymic CD4CD8 T cells. As a result, thymocytes

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undergoing differentiation become prematurely chemotactically responsive to
S1P [66]. These double-negative thymocytes are therefore able to emigrate
from the thymus before undergoing the negative selection process necessary
for self-tolerance. Moreover these immature T cells that escaped to periphery
have an activated phenotype in both experimental murine and human models
of Chagas disease [64].
The presence of these cells bearing TCRs in the periphery may have potential
implications for disease outcome. In other systems, these cells have been
shown to have pathogenic properties: they are able to recognize antigens and
signal through their TCR in an MHC-independent manner [67, 68]. Importantly,
as demonstrated in patients with systemic lupus erythematous and myasthenia
gravis, there is a direct correlation between CD4 CD8 T cells and the
development of human autoimmune diseases, suggesting a role for these cells
in autoimmune responses [69].
It is also possible that the early egress of undifferentiated CD4 CD8 T cells
plays a role in the immunopathologic events in Chagas disease by altering
adaptive immune responses, since they produce proinflammatory cytokines
when activated. In addition to these various phenomena, our results indicate a
direct link between the changes in the level of the CD4 CD8 T cell subset and
the severity of myocardial lesions in human Chagas disease, thus identifying a
potential clinical marker of disease progression [66].

References
1. Hogquist K. A., Baldwin T. A., Jameson S. C. Central tolerance: learning selfcontrol in the thymus.Nature Reviews Immunology. 2005;5(10):772782. doi:
10.1038/nri1707. [PubMed] [Cross Ref]
2. Davis M. M. T cell receptor gene diversity and selection. Annual Review of
Biochemistry. 1990;59:475496.
doi:
10.1146/annurev.bi.59.070190.002355. [PubMed] [Cross Ref]
3. Kappler J. W., Roehm N., Marrack P. T cell tolerance by clonal elimination in
the thymus. Cell.1987;49(2):273280. doi: 10.1016/0092-8674(87)90568X. [PubMed] [Cross Ref]

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4. Pieter R., Spits H. Developmental stages in the human thymus. Seminars in
Immunology. 1999;11(1):3946.
doi:
10.1006/smim.1998.0152. [PubMed] [Cross Ref]

TRADUCCION
MODULACIN DE INTRATMICA NIVELES ESFINGOSINA-1-FOSFATO PROMUEVE ESCAPE
DE MADURO TIMOCITOS A LA PERIFERIA, CON UN PAPEL PROINFLAMATORIO POTENCIAL
EN LA ENFERMEDAD DE CHAGAS

1. Introduccin
Los linfocitos T son actores clave en la inmunidad adquirida y tienen un compromiso de
linaje caracterizado por la expresin del receptor de clulas T (TCR), que tiene un papel
vital en el reconocimiento de antgenos de patgenos durante el desarrollo de la
resistencia del husped a las infecciones [1]. La activacin y diferenciacin de las clulas
T dependen del TCR ser especfico para los antgenos exgenos, pero no el montaje de
una respuesta autoinmune contra antgenos propios y la generacin de una respuesta
colateral. Este control de calidad del sistema inmunolgico se lleva a cabo durante la
maduracin de precursores de clulas T en el timo [2, 3].
El timo es el rgano linfoide primario en el que los precursores de clulas T derivadas de
la mdula sea se someten a proceso de diferenciacin celular que consiste en la
expresin secuencial de mltiples genes de diferenciacin de linfocitos y la reordenacin
del receptor de clulas T (TCR) genes. Durante la maduracin tmica, timocitos expresan
TCR, algunos de los cuales interactan con pptidos presentados por molculas del
complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en la superficie de las clulas del estroma
tmico. Estas interacciones determinan los eventos de seleccin positivos y negativos que
son componentes cruciales del programa de diferenciacin terminal de timocitos [4-6].
Durante el desarrollo intratmica, timocitos comienzan a expresar en sus membranas del
complejo TCR / CD3 junto con correceptores CD4 y CD8, convirtindose as en (DP)
timocitos doble positivos, distribuidos a lo largo de la mayor parte de la regin cortical del
rgano. En esta fase de la maduracin intratmica de los timocitos, la generacin de una
gran diversidad repertorio TCR produce muchos linfocitos T que expresan TCR que
reconocen "autoantgenos". Estos linfocitos T autorreactivas se seleccionan
negativamente en el timo como parte del proceso llamado tolerancia central. En este
proceso, los linfocitos autorreactivos mueren por apoptosis, mientras que un pequeo
porcentaje de clulas seleccionadas positivamente se mueven a la mdula del timo,
donde sus ganancias de diferenciacin [6-8].
Durante el curso de su diferenciacin, los timocitos se convierten en clulas T que
expresan altas densidades de TCR / CD3 y se convierten en positivas simples (SP) por
uno u otro (pero no ambos) de los correceptores de CD8 o CD4, que reconocen,
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respectivamente, los pptidos complejados con la clase I y clase II molculas MHC. Estas
clulas T ingenuas en ltima instancia, dejan el timo para formar parte del repertorio de
clulas T perifricas [1, 9]. Ellos se exportan desde el timo bajo el control del mediador
lipdico esfingosina-1-fosfato (S1P) [10-12]. La esfingosina-1-fosfato es un esfingolpidos
biolgicamente activo derivado crtico para las vas de sealizacin implicadas en el
trfico de leucocitos [10, 13, 14].
La concentracin en el tejido de los aumentos de S1P en varias condiciones inflamatorias
tales como el asma y las enfermedades autoinmunes y este lpido se acopla agonistas y
activa una familia de receptores acoplados a protena G (S1P1-S1P5) [15-17]. Varios
grupos han demostrado la importancia de S1PRs en el trfico de leucocitos que median
respuestas efectoras en el sistema inmune. Sus resultados indican un papel clave del eje
de S1P-S1PRs en el desarrollo y el mantenimiento de la inmunidad [18, 19].
2. Fine-Tuned regulacin metablica de esfingosina-1-fosfato
Los esfingolpidos son lpidos esenciales ricos en colesterol que se concentran en
microdominios conocidos como "balsas lipdicas" o "plataformas de lpidos" en la
membrana plasmtica. Estos lpidos pueden ser metabolizados rpidamente tras la
activacin de una cascada enzimtica que convierte esfingolpidos tales como
esfingomielina y complejos de glucoesfingolpidos a ceramida y posteriormente a la
esfingosina, dos quinasas de esfingosina (SphK1 y SPHK2) y luego fosforilan esfingosina
para la esfingosina-1-fosfato [17, 20 , 21].
La esfingosina-1-fosfato tiene ambas actividades celular intrnsecos y extrnsecos que
afectan a la homeostasis y funcin celular [22]. Mucho nfasis se ha dado a la funcin
extrnseca de S1P en el sistema inmune, que fue reconocido a travs de estudios del
agente inmunosupresor, FTY720, un mediador de drogas demostr ser capaz de unirse a
y bloquear los receptores de esfingosina-1-fosfato (S1PRs) [23] . FTY720 induce
linfopenia haciendo que el secuestro de los linfocitos en los ganglios linfticos,
bloqueando as la salida de timocitos maduros a la periferia [24, 25].
Los niveles tisulares de S1P se determinan no slo por su tasa de biosntesis sino
tambin por su velocidad de degradacin. Se produce constantemente por la mayora de
las clulas y es irreversiblemente degradada por S1P liasa o desfosforilado por fosfatasas
S1P [26-28]. En la mayora de los tejidos, incluyendo los rganos linfoides, los niveles de
S1P son extremadamente bajos. Las excepciones son la sangre y la linfa, en el que los
niveles de S1P son generalmente altos, que van desde submicro a concentraciones
micromolares, respectivamente [29, 30]. Los niveles de S1P en suero se deben
principalmente a su produccin por las clulas endoteliales, mientras que los altos niveles
en plasma son aportados por los eritrocitos [31, 32].
La delecin de los genes que codifican ambas de las quinasas, SphK1 y SPHK2,
resultados en letalidad embrionaria debido a la ausencia de S1P. En adicin, supresin
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condicional de estos dos genes resultados en la deficiencia en circulacin de S1P. Sin
embargo la supresin de cualquiera uno de los dos genes es sin efecto, demostrando que
estas quinasas tienen funciones redundantes [29, 33].
3. La expresin de la protena G especfica Receptores acoplados para S1P y el
Reglamento de Trnsito celular en el Sistema Inmune
El descubrimiento del "receptor hurfano" -asociado gen de la protena G originalmente
conocido como gen de diferenciacin endotelial 1 (EDG1) abri una nueva frontera en
nuestra comprensin del mecanismo de accin de S1P [34]. Desde entonces, S1P se ha
demostrado que el ligando para cinco miembros diferentes de esta familia "receptor
hurfano", S1P1-S1P5 [35]. Estos receptores median en varias funciones celulares a
travs de protenas G heterotrimeric asociado (I, q, o 12 / 13) y se expresan por la
mayora de las clulas del sistema inmune. Sin embargo, existe heterogeneidad en
trminos de su patrn de expresin entre las clulas inmunes [36].
Aunque S1PRs estn presentes en otros sistemas fisiolgicos, S1P3-S1P5 se limitan
principalmente al sistema inmunolgico. Clulas T expresan S1P1 y S1P4 [12,, 37-39],
mientras que los mastocitos y macrfagos expresan S1P1 y S1P2 [de 40-45]. Expresin
de S1P1 tambin se encuentra en los linfocitos B y las clulas dendrticas [46-50]. La
funcin primaria de la mayora de S1PRs es regular las respuestas migratorias de las
clulas mediante la induccin de protenas con actividad GTPasa Rac [36, 51]. S1P
sealizacin juega un papel tanto en la migracin o homing de las clulas inmunes a los
rganos linfoides y en su salida a la sangre y la linfa, un tema que ha recibido mucha
atencin recientemente [de 52-54]. El gradiente de S1P entre los tejidos linfoides, que
tienen bajos niveles de S1P, y sus compartimentos vasculares, que tienen altos niveles de
S1P, es un factor clave que determina la salida de los leucocitos de los ganglios linfticos
y el timo en la sangre [32]. Las vas de sealizacin activadas por S1P1 en respuesta a
este gradiente de S1P controlar no slo la salida de linfocitos T y B de los ganglios
linfticos, pero tambin la salida de los linfocitos T maduros y natural killer clulas T (NKT)
desde el timo a los compartimentos vasculares [10 , 12,14].
S1P quimiotaxis mediada a travs de S1P1 es dependiente de la concentracin de SIP:
en estudios in vitro han demostrado que bajas concentraciones de promover la
quimiotaxis de S1P, mientras que las concentraciones altas tienden a inhibir es [54, 55].
Parece ser que los altos niveles de S1P estimulan dependiente de ubiquitina protena de
la membrana lisosomal clasificacin y la degradacin, lo que provoca la ruptura de S1P1
[56]. Curiosamente, concentraciones elevadas del agonista sinttico de la S1PRs,
FTY720, tambin son muy eficaces en la induccin de la internalizacin, ubiquitinacin y
degradacin de S1P1 [23, 57-59].
4. La interrupcin de S1P Homeostasis Promueve Timocitos Precursor de lanzamiento y
rgano Atrofia de la Enfermedad de Chagas

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En la mayora de los vertebrados, las seales de estrs agudo a corto plazo inducidos por
agentes patgenos infecciosos son responsables de la evocacin de acogida respuestas
de defensa innatos [60]. Si un patgeno persiste crnicamente las seales de estrs
pueden provocar la respuesta inmune del husped a ser suprimida, lo que aumenta la
susceptibilidad para el microorganismo; esto da como resultado al menos en parte a partir
de un cambio de la inmunidad celular T helper 1 mediada por la inmunidad humoral a T
helper 2 mediada. Estas seales de estrs son el resultado de liberacin de
neurotransmisores, hormonas y citocinas secretadas durante las respuestas inflamatorias
[61].
En la enfermedad de Chagas, infeccin por T. cruzi genera un sndrome inflamatorio
mediado por TNF- en la fase aguda. Esta citoquina activa el (HPA) del eje hipotlamohipfisis-suprarrenal que conduce a la liberacin de la hormona del estrs corticosterona.
La consecuencia principal es la atrofia del timo conduce a una severa reduccin en el
nmero de clulas del timo, seguido por una reduccin en la salida tmica de las clulas T
a la periferia [62, 63].
Aunque atrofia del timo se produce en las infecciones causadas por varios patgenos, el
impacto de este rasgo en la tolerancia central tmico slo recientemente ha sido aclarado.
Hemos demostrado que las alteraciones en el microambiente tmico inducida por la
infeccin por T. cruzi no afectan a los elementos clave necesarios para intratmica
seleccin negativa de timocitos con vencimiento durante timopoyesis [64]. Sin embargo,
hemos observado que en la atrofia severa del timo el nmero y la frecuencia de desarrollo
de los timocitos extrathymic teniendo bajos niveles de TCR aumentan notablemente
durante la fase aguda [65].
Por otra parte, se encontr que los timocitos inmaduros liberados en la periferia (subvertir
el proceso de seleccin negativa) adquiri fenotipo activado similar a la descrita para las
clulas efectoras activadas y clulas de memoria de una sola positivos, lo que sugiere un
posible desequilibrio en el mecanismo de control de salida de timocitos a la periferia [64].
A medida que la va de sealizacin mediada por la esfingosina-1 fosfato (S1P) a travs
de sus receptores es responsable de la salida de timocitos maduros, se investig si
alguna modulacin de la ruta de la esfingosina-1-fosfato (S1P) era responsable de la
liberacin temprana de los timocitos en atrofia del timo [66].
El perfil de expresin de genes de las enzimas implicadas en la va de S1P en el T. cruzi
infectado timo durante la fase aguda, de hecho, mostr una reduccin de la esfingosina-1fosfato acompaado por una expresin reducida de las quinasas que activan SPHK1 / 2 y
la regulacin positiva de la fosfatasa inactivar SGPL1. Sin embargo, los niveles de S1P en
los sueros de ratones infectados y normales fueron similares [66]. Estos hallazgos indican
que el gradiente del nivel de S1P del timo a la sangre de ratones infectados por T. cruzi se
hace ms pronunciada despus de la infeccin y esto puede promover la salida de
timocitos. Dado que se necesitan altas concentraciones de S1P para estimular la protena

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de la membrana lisosomal dependiente de ubiquitina de clasificacin y la degradacin de
la descomposicin de S1P1 este mecanismo de retroalimentacin no debe ser activo en el
timo infectada debido a la concentracin S1P reducida.
Curiosamente, el anlisis de la expresin del receptor de S1P en el desarrollo de timocitos
indic una regulacin al alza sustancial de S1P1 y S1P3 expresin en clulas inmaduras
CD4-CD8 T en el momento infeccin por T. cruzi, lo que sugiere que algunos va mediada
por S1P tambin podra contribuir a la salida prematura de estas clulas [66]. La
regulacin positiva de los receptores de S1P debera aumentar la sensibilidad de los
timocitos para la quimiotaxis mediada por S1P en el timo atrfica. El uso de un ensayo ex
vivo Transwell migracin, se encontr que la sensibilidad de las clulas CD4-CD8 para la
quimiotaxis mediada por el aumento de S1P durante la infeccin por T. cruzi [66].
Estos hallazgos juntos indican que la exportacin de desarrollar timocitos CD4-CD8
podra ser favorecida por una alteracin de los niveles fisiolgicos de S1P en el timo
durante la infeccin por T. cruzi. De hecho, encontramos que cuando bloquearon la
receptores S1P con FTY720 en ratones infectados que inhibi el escape de estas clulas
a la periferia restaurando as los niveles fisiolgicos de timocitos CD4-CD8 [66].
Adems, cuando se evalu el estado de diferenciacin de los timocitos CD4-CD8
liberados durante la infeccin por T. cruzi, se encontr que estas clulas inmaduras
(presentes en los ganglios linfticos perifricos) mostraron un aumento significativo en la
expresin de las citocinas IL-17 y TNF tras la estimulacin policlonal [66]. Los resultados
que hemos descrito se correlacionan con la presencia en pacientes con las formas
clnicas indeterminados o cardacas de la enfermedad de Chagas de aumento del nmero
de clulas circulantes CD4-CD8 T que presenta un fenotipo activado como se define por
la expresin de marcador de activacin, HLA-DR [64 ].
5. Comentarios finales
En general, nuestros estudios indican que la infeccin por Trypanosoma cruzi promueve
alteraciones tmicas, debido en parte a los efectos de la modulacin de los ejes de los
receptores de S1P-S1P1 sobre las clulas CD4-CD8 T intratmicas. Como resultado, los
timocitos se someten a la diferenciacin se vuelven prematuramente quimiotcticamente
sensible a S1P [66]. Por tanto, estos timocitos doble negativo son capaces de emigrar del
timo antes de someterse al proceso de seleccin negativa necesaria para la autotolerancia. Adems, estas clulas T inmaduras que escaparon a la periferia tienen un
fenotipo activado tanto en murino experimental y modelos humanos de la enfermedad de
Chagas [64].
La presencia de estas clulas que portan los TCR en la periferia puede tener
implicaciones potenciales para la evolucin de la enfermedad. En otros sistemas, se ha
demostrado que estas clulas que tienen propiedades patgenas: son capaces de
reconocer antgenos y a travs de su seal de TCR de una manera independiente de
ESTUDIANTE: Glenda Piedad Belduma Ajila / DOCENTE: Dr. lvaro Calle
CTEDRA: Medicina Tropical

UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICAS Y DE LA SALUD
ESCUELA DE CIENCIAS MDICAS
MEDICINA TROPICAL
MHC [67, 68]. Es importante destacar que, como se ha demostrado en pacientes con
lupus eritematoso sistmico y la miastenia gravis, hay una correlacin directa entre las
clulas CD4-CD8 T y el desarrollo de enfermedades autoinmunes humanas, lo que
sugiere un papel para estas clulas en las respuestas autoinmunes [69].
Tambin es posible que la salida temprana de las clulas CD4-CD8 T indiferenciadas
juega un papel en los acontecimientos inmunopatolgicos en la enfermedad de Chagas
mediante la alteracin de la respuesta inmune adaptativa, ya que producen citocinas
proinflamatorias cuando se activa. Adems de estos diversos fenmenos, nuestros
resultados indican una relacin directa entre los cambios en el nivel del subconjunto de
clulas CD4-CD8 T y la gravedad de las lesiones miocrdicas en la enfermedad de
Chagas humana, identificando as un potencial marcador clnico de la progresin de la
enfermedad [66 ].

COMENTARIO
Este articulo nos da una pauta acerca de cmo diagnosticas la enfermedad de
Chagas mediante pruebas de CD4/CD8 que se encuentran ubicadas en el timo
este mtodo seria eficaz para diagnosticar de una forma ms rpida y segura la
enfermedad de Chagas ya que por medio de la alteracin de la TCR inmaduras
que salen del timo cuando hay infeccin por Chagas nos permiten realizar el
diagnostico; pero hay una dificultad ya que en otro tipo de enfermedades
sistmicas tambin se ha determinado la presencia de este tipo de clulas as que
hay que hacer un buen diagnstico diferencial con la ayuda de la clnica.

ESTUDIANTE: Glenda Piedad Belduma Ajila / DOCENTE: Dr. lvaro Calle

CTEDRA: Medicina Tropical