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VII CONGRESSO DE INICIAO CIENTFICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE

PIVIC/CNPq/UFCG-2010

EXTRAO DE CELULASE E DETERMINAO DA ATIVIDADE CELULOLTICA


PRODUZIDA POR FERMENTAO SEMI-SLIDA
1

Israel Nogueira de Oliveira , Paloma Lima de Oliveira , Carlos Alberto Bispo de Sousa , Beatriz
4
5
Cavalcante Amorim , Lbia de Sousa Conrado

RESUMO

Este trabalho teve como objetivo obter enzimas celulases a partir da fermentao semi-slida do
bagao do pednculo do caju lavado e sem lavar utilizando o Trichoderma sp. como agente
fermentativo. A fermentao foi realizada em erlenmeyers utilizando como parmetros: temperatura a
30C, umidade inicial do meio 45%, tempo de fermentao 44 horas, fonte de nitrognio 1% e inculo
7
de 10 esporos por grama de meio de fermentao. A extrao foi realizada em shaker a temperatura
de 35C usando como solvente de extrao tampo acetato de sdio a 200mM e pH 5,0, obejtivando
estudar a influncia da agitao, tempo de contato e relao solvente/fermentado sobre a produo
das enzimas celulolticas. Verificou-se que o aumento da agitao e a relao volume de
solvente/massa de fermentado influenciaram na obteno de um extrato com maior atividade
celuloltica. As atividades mximas obtidas e expressas em FPase foram 0,2446 (U/g) e 0,3423 (U/g)
para o bagao de caju lavado e sem lavar, respectivamente, nas condies de agitao de 150rpm e
razo volume de solvente /massa de fermentado de 10.
Palavras-chave: Trichoderma sp., fermentao semi-slida, extrao de celulase.

EXTRACTION CELLULASE AND DETERMINATION OF CELLULOLYTIC ACTIVITY


PRODUCED BY SEMISOLID FERMENTATION
ABSTRACT

This study had as objective to get enzymes celulases from the semisolid fermentation of the cashew
peduncle bagasse washed and unwashed using the Trichoderma sp. as fermentation agent. The
fermentation was carried through in flasks using as parameters: temperature 30C, initial humidity of
7
way 45%, time of fermentation 44 hours, nitrogen source 1% and 10 esporos of inoculum for gram of
way of fermentation. The extraction was carried through in shaker with temperature of 35C using as
solvent of extraction buffer sodium acetate 200mM and pH 5,0, objectifying to study the influence of
the agitation, time of contact and the relation of solvent/leavend mass on the production of cellulolytic
enzymes. It was verified that the increase of the agitation and the relation solvent /leavend mass had
influenced in the attainment of an extract with biggest cellulolytic activity. The maximum activities
gotten and express in FPase had been 0,2446 (U/g) and 0,3423 (U/g) for the bagasse of washed
cashew and unwashed, respectively, in the conditions of agitation of 150rpm and reason
solvent/leavend mass of 10.
1

Aluno do Curso de Engenharia Qumica, Unidade Acadmica de Engenharia Qumica, UFCG, Campina Grande , PB,
E-mail: israelnogueiraa@yahoo.com.br
2
Aluna do Curso de Engenharia Qumica, Unidade Acadmica de Engenharia Qumica, UFCG, Campina Grande , PB,
E-mail: palomalima_eq@yahoo.com
3
Aluno do Mestrado em Engenharia Qumica, Unidade Acadmica de Engenharia Qumica, UFCG, Campina Grande,
PB, E-mail: carlosbispo@yahoo.com.br
4
Aluna do Mestrado em Engenharia Qumica, Unidade Acadmica de Engenharia Qumica, UFCG, Campina Grande,
PB, E-mail: bia_eq@yahoo.com.br
5
Engenharia Qumica, Professora. Doutora, Unidade Acadmica de Engenharia Qumica, UFCG, Campina Grande, PB,
E-mail: libiaconrado@yahoo.com.br

Keywords: Trichoderma sp., semisolid fermentation, extraction of cellulase.

INTRODUO
O cajueiro, denominado Anacardium occidentale Lineu, pertence ao gnero Anacardium, da
famlia Anacardiaceae. Planta originaria do Brasil, encontra-se disseminado nas regies tropicais, sendo
cada vez maior o interesse em sua explorao econmica, notadamente nas regies agrcolas menos
desenvolvidas, pela suas caractersticas de gerao de emprego e renda (Oliveira et al 2002). A explorao
de aproximadamente 690.131 hectares de cajueiros mobiliza no campo 300 mil pessoas e proporcionam
uma produo anual de 147.129 t de castanha e 1.650.000 t de pednculo.
Na regio Nordeste o aproveitamento industrial do caju feito praticamente do fruto (a castanha) para
produo de castanha comestvel e em pequena escala do suco e derivados do pseudofruto (Embrapa,
2004; Globo Rural, 2005). Segundo Holanda & Oliveira (2001) a quantidade desperdiada representa um
elevado potencial de uso para converso por microrganismos.
A utilizao integral de resduos gerados de processos industriais uma necessidade fundamental da
sociedade contempornea, uma vez que se evita impactos ao meio ambiente ao se colocar os resduos e
emisses como insumos para outros produtos de elevada importncia econmica e social.
Um novo paradigma mundial em combustveis e energia renovvel a produo de etanol a partir de
materiais lignocelulsicos (Bastos, 2007).
A busca de um melhor aproveitamento das culturas do pednculo do caju tem incentivado
pesquisadores do Nordeste brasileiro na procura de maximizar a ampliao do aproveitamento dessas
culturas. Nesse sentido, busca-se utilizar as matrias-primas em escala industrial, para atender a
necessidade de desenvolvimento scio-econmico e tecnolgico da regio. E dentre estas possveis
inovaes surge como proposta a produo de lcool etlico, por fermentao alcolica utilizando-se como
substrato as matrias-primas lignocelulsicas, que pode vir se no substituir integralmente a to tradicional
cana-de-acar nas usinas, mas complementar a produo como matria-prima em perodos de entre safra,
aumentando o tempo de operao das unidades fabris (usinas) (Rajeev et al., 2009).
Com isso, o esforo na busca de alternativas para a produo de lcool se apresenta bastante atrativa
para o setor. Endossado pela preocupao mundial, que desponta acentuadamente no sentido da busca de
alternativas para tecnologias e combustveis que sejam renovveis e que possuam um menor impacto
ambiental.
As enzimas so catalisadores orgnicos efetivos, responsveis por milhares de reaes bioqumicas
coordenadas, envolvidas nos processos biolgicos dos sistemas vivos. So macromolculas pertencentes
classe das protenas globulares (Couri, 1993).
O aproveitamento de resduos agrcolas para obteno de um produto de valor comercial alto, atravs
de um processo fermentativo semi-slido (FSS), pode ser visto como uma tentativa de se agregar valores a
um produto de descarte. Os microrganismos podem produzir uma grande variedade de enzimas hidrolticas
extracelulares em FSS como pectinases, celulases, amilases, dentre outros.
O uso da FSS tem se mostrado particularmente vantajoso para o crescimento de fungos filamentosos,
uma vez que simula o habitat natural destes microrganismos. Essa vantagem estendida produo de
enzimas, proporcionando uma maior produtividade quando comparada ao processo de fermentao
submersa. Alm disso, as enzimas produzidas pela FSS so menos susceptveis a problemas de inibio
por substrato e tambm possuem uma estabilidade maior a variaes de temperatura e pH (HOLKER et al.,
2004).
As enzimas celulases tm interesse sob o ponto de vista tanto tecnolgico quanto industrial, j que a
mesma hidrolisa as matrias lignocelulsicas (materiais indiretamente fermentescveis) em acares
diretamente fermentescveis para o processo de produo de bioetanol e aplicaes txteis.
O custo e a baixa produo dessas enzimas so os maiores problemas para a aplicao industrial
(KANG et al., 2004).
Os fungos so os mais importantes microrganismos utilizados pela indstria na produo de enzimas
(NOVO NORDISK, 1996; MENEZES, 1997) e os principais celulolticos produtores de celulases e xilanase
incluem: Trichoderma reesei (tambm denominado Trichoderma viride), Trichoderma koningii, Trichoderma
lignorum, Sporotrichum pulverulentum (tambm denominado Chrysosporum lignorum), Penicillium
funiculosum, Penicillium iriensis, Aspergillus sp, Schizophyllumm sp, Chaetomium sp (BISARIA & GHOSE,
1984) e Humicola sp (DA SILVA et al., 1994).
Os microrganismos oferecem grandes vantagens como sistemas produtores de enzimas, isso porque
possuem alta velocidade de sntese, alto rendimento de converso de substrato em produto, grande
versatilidade e maior simplicidade de manipulao ambiental e gentica de sua capacidade produtiva. A
produo de enzimas pode ser realizada, dentre outros mtodos, por via fermentativa em estado semislido (estado slido) ou fermentao submersa atravs da inoculao de um microrganismo em substratos
adequados.

Aps a produo da enzima por via fermentativa faz-se necessrio a extrao da mesma. A extrao de
substncias contidas nos slidos fermentados uma operao de extrao slido-lquido, porm com
algumas especificidades devido ao fato de se estar lidando com um sistema biolgico. Na produo de
enzimas por fermentao semi-slida, a extrao feita atravs da adio de um solvente, como gua,
tampes, solues salinas diludas ou solues de glicerol (Ramakrishna et al., 1982). O extrato deve estar
concentrado em enzimas e em se tratando de um extrato contendo celulase deve apresentar atividade
celuloltica.
A busca por microrganismos produtores de enzimas celulases de suma importncia para contribuir
com a viabilizao da rota biolgica de produo de etanol celulsico. Dentre os fungos filamentosos, os do
gnero Trichoderma sp. destacam-se pela alta produtividade enzimtica exibida.
Dessa forma neste trabalho buscou-se oferecer suporte experimental, no que diz respeito a como as
variveis agitao (AG), tempo de contato (TE) e relao volume de solvente/massa (RE) fermentada
influenciam na atividade celuloltica. Objetivando assim determinar as melhores condies para obteno de
um extrato enzimtico mais concentrado.

MATERIAIS E MTODOS

Substrato
O caju utilizado nos experimentos deste trabalho foi adquirido na CEASA/PB, Campina Grande/PB. O
substrato utilizado neste trabalho (bagao do caju seco) foi obtido aps a extrao da polpa dos frutos
maduros previamente selecionados e lavados em gua corrente para eliminar as sujeiras mais grosseiras.
Aps a extrao da polpa, o bagao foi levado estufa 105C por aproximadamente 15 horas. Aps a
secagem, o substrato foi passado em um moinho e armazenado.
O substrato utilizado neste trabalho foi utilizado de duas formas, lavado e sem lavar. O substrato lavado
foi lavado com gua destilada antes de ser levado estufa 105C por 15 horas. E o substrato sem lavar,
foi seco sem ser lavado com gua destilada.

Local de execuo
Todos os experimentos foram realizados no Laboratrio de Engenharia Bioqumica do CCT/UFCG.

Trichoderma sp. LCB79


O microrganismo empregado na fermentao semi-slida deste trabalho o Trichoderma sp. LCB79
pertencente coleo da Embrapa Agroindstria Tropical, com sede em Fortaleza-CE. Os condios da
linhagem foram preservados em tubos de ensaio com tampas rosqueadas contento solo estril e estocados
a -18 C.

Densidade aparente
Para a densidade aparente, descrita em Brasil (2005), foram pesados 100 gramas ( m A ) do substrato,
lavado e sem lavar, e colocando em uma proveta para determinar o volume ocupado (V), sem que
houvesse compactao. Os clculos foram feitos segundo a Equao:

Densidade aparente( g / cm 3 )

mA (g)
V (cm 3 )

Densidade real
A densidade real do bagao de caju lavado e sem lavar foi determinada a partir da relao entre a
massa e o volume ocupado pela amostra, atravs do deslocamento de um fluido de volume conhecido, que
nesse caso foi o leo de cozinha. Inicialmente colocou-se o leo em uma proveta e mediu-se o volume
ocupado (V1), em seguida adicionou-se uma massa conhecida do bagao (m A) e esperou-se que a mesma
se depositasse totalmente no fundo da proveta. Por fim, mediu-se novamente o volume indicado na proveta
(V2), e o volume real do material em anlise foi determinado pela diferena dos volumes (V 2-V1). O clculo
da densidade real foi determinado pela equao mostrada a seguir:

Densidade Re al ( g / cm3 )

mA ( g )
(V2 - V1 )(cm3 )

Extrativos
O teor dos extrativos contidos no bagao de caju lavado e sem lavar foi determinado empregando um
aparelho de Soxhlet, sendo utilizados 5g de amostra e 200 mL de etanol-ciclohexano a uma proporo 1:2
(v/v). As partculas foram acondicionadas em um cartucho confeccionado com papel de filtro e colocadas
dentro do Soxhlet. O solvente foi colocado em um balo de 250mL, de massa seca conhecida, e o material
foi extrado por 6 horas. Aps o banho, o material foi levado estufa at atingir massa constante. Por
diferena de massa, obteve-se o valor de extrativos em gramas e dividindo-se pela massa da amostra
analisada, obtem-se o teor de extrativos em percentual.

Umidade
O teor de umidade foi determinado de acordo com o procedimento descrito em Brasil (2005). Foram
pesados 5 gramas da amostra em placas de Petri previamente secos e tarados. As Placas de Petri foram
colocadas em estufa a 105C por 24 horas. Os clculos foram realizados com base na seguinte equao:

Umidade(%)

( peso inicial peso final da amostra)


100
peso inicial da amostra

pH
O pH foi determinado seguindo a metodologia descrita em Brasil (2005), na qual foi preparada uma
suspenso de 2g de amostra com 20mL de gua destilada. Aps completa homogeneizao a suspenso
foi deixada em repouso por 30 minutos e em seguida o pH foi medido diretamente em um potencimetro
digital.

Cinzas
O teor de cinzas contidos no bagao de caju lavado e sem lavar foi determinado seguindo a
metodologia descrita em Brasil (2005).Para o desenvolvimento da metodologia, um cadinho de porcelana foi
colocado em uma mufla a uma temperatura de 550C por aproximadamente 5 horas. Aps esse tempo, o
cadinho foi colocado em um dessecador at total resfriamento e pesado. Em seguida, colocou-se no
cadinho aproximadamente 3g do material a ser analisado m A e levou-o para uma estufa a 105C por 24
horas. Aps as 24 horas, o cadinho foi levado para a mufla por 5 horas, colocado para esfriar em um
dessecador e pesado. O cadinho foi levado novamente para a mufla por 30 minutos e repetiu-se o
procedimento de pesagem at que a amostra atingisse massa de cinzas constante ( mC ). O teor de cinzas
foi calculado seguindo a Equao mostrada a seguir:

Cinzas (%)

mC
100
mA

Teor de slidos solveis (brix)


A concentrao de slidos solveis medida em Brix uma medida relacionada com a quantidade de
acares presentes na amostra e foi determinada de acordo com a metodologia descrita por Brasil (2005).
Dessa maneira, foram adicionados 9 ml de gua destilada a 1g do resduo, agitou-se at perfeita
homogeneizao e deixou-se a suspenso por 30 minutos em repouso. Aps este perodo a suspenso foi
filtrada com algodo, e feita a leitura em refratmetro. O resultado foi multiplicar a leitura pela soma da
massa mais o volume de gua destilada adicionada para determinar o teor de slidos solveis do resduo.

Teor de acares redutores e redutores totais (AR e ART)


A O mtodo do DNS (cido 3,5-dinitro saliclico) baseia-se na reduo do cido 3,5 a cido 3-amino-5nitrosaliclico, concomitantemente com a oxidao do grupo aldedo do acar a grupo carboxlico. Aps
aquecimento, a soluo torna-se avermelhada, sendo lida, no espectrofotmetro a 540 nm, conforme
procedimento descrito por Miller (1959).
Inicialmente foi determinada a quantidade inicial de amostra que resulte em leitura dentro da faixa da
curva padro. As diluies necessrias foram usadas no clculo para determinao do teor de acar da
amostra desconhecida. Depois de dissolver determinada quantidade de amostra em um volume definido de
gua, transferiu-se 1mL para um tubo de ensaio contendo 1mL de soluo DNS. A seguir, os tubos foram
levados para banho de gua fervente por exatos 5 minutos. Aps este intervalo, os tubos foram retirados do
banho de gua quente e colocados em banho de gua fria por trs minutos, at completo resfriamento. Em
cada tubo foi adicionado 8ml de gua destilada e feita leitura imediatamente a 540nm. A curva padro foi
usada para transformar a leitura de absorbncia em miligramas de acares redutores por mililitro de
soluo. Efetuaram-se os clculos para expressar os resultados em miligramas de acares redutores por
grama de amostra inicial (mg acares/g amostra).
Lignina

A Para a determinao da composio de lignina do substrato, pesou-se 10g do bagao, sendo envolto
em papel de filtro e deixado num sistema de banho, utilizando ciclo-propano e lcool etlico, por
aproximadamente 6 horas. Aps, o bagao foi seco em estufa durante 24 horas. Do substrato lavado e
seco, foi pesado 2g e posto num erlenmeyer de 250mL adicionando 15mL de H 2SO4 (72%), mantendo sob
agitao durante 2 horas. Aps esse tempo a pasta negra foi transferida quantitativamente para um balo
de 1 litro de um sistema de refluxo, usando exatamente 560mL de gua destilada e deixando refluxar por 4
horas.
A lignina insolvel foi filtrada empregando um cadinho de Gush, com kitassato, aclopado a uma
bomba de vcuo, sendo posteriormente seca e pesada.
A lignina solvel foi determinada medindo-se a absorbncia nos comprimentos de onda de 280 e
215nm do filtrado sem diluio, j que est no altera os resultados obtidos. A concentrao de lignina em
gramas por litro foi calculada pela seguinte equao:

CL

4,53 A215 A280


g / L
300

Onde,
A215 o valor da absorbncia a 215 nm.
A280 o valor da absorbncia a 280 nm.
O teor de lignina total ser dado pela soma do teor de lignina insolvel com o teor de lignina solvel.
Preparou-se uma soluo do branco com 1,5ml de cido sulfrico a 72%, diluindo-se proporcionalmente ao
volume final do filtrado.
Celulose
O teor de celulose contido no bagao de caju lavado e sem lavar foi determinado conforme a
metodologia descrita por XU et al. (2006). Para o desenvolvimento da metodologia, isolou-se a celulose do
bagao utilizando-se uma mistura de cido actico a 80% com cido ntrico a 70% na proporo de 10:1
(v/v). A amostra foi ento digerida por 20 minutos em banho de leo temperatura de 110 a 120C e o
precipitado foi separado e determinado gravitamente como celulose total (ABNT NBR-14032,1998; Fengel
and Wegener, 1989).

Preparo do meio de cultivo e repique do microrganismo


O meio de cultivo foi preparado segundo metodologia de Couri(1993). O repique do microrganismo foi
realizado seguindo o procedimento descrito por TAVARES (2009). A Figura 1 apresenta o Trichoderma
LSB79 em primeiro repique:

Figura 1. Repique de Trichoderma LSB79 em gar


Processo fermentativo
As fermentaes foram realizadas em erlenmeyer de 250 mL contendo 10 g do substrato mido. A
umidade inicial do meio foi ajustada pela adio de um volume definido de gua para restabelecer a
umidade inicial em 40%.
A suplementao do substrato com a fonte de nitrognio foi realizada adicionando 1% de sulfato de
amnio. No volume de gua a ser adicionado ao resduo, diluiu-se o sulfato de amnio.
Os erlenmeyers foram fechados com tampo de algodo envolvido com gaze e autoclavados por 5
minutos a 0,5 atm. Aps essa etapa o microrganismo foi inoculado no meio contido a uma concentrao de
7
10 esporos/g de resduo mido e incubado em estufa mida a 30C, sendo esta a temperatura mdia anual
da regio e tambm favorvel ao desenvolvimento do microrganismo. A umidade relativa dentro da estufa
durante o processo fermentativo foi mantida pela evaporao da gua contida em um recipiente colocado
dentro da estufa. As amostras foram retiradas da estufa aps 44 horas. A Figura 2 apresenta um ensaio de
fermentao semi-slida do Trichoderma LSB79 em frasco.

Figura 2. Fermentao semi-slida em frasco


Planejamento experimental para extrao das enzimas
3

Foi realizado um planejamento fatorial 2 com 2 repeties no ponto central totalizando 10 ensaios.
Foi estudado o efeito da agitao, tempo de contato e a relao entre volume de solvente/massa de
fermentado sobre a atividade celuloltica.
A matriz de planejamento experimental est apresentada na Tabela 1, mostrando as variveis utilizadas
no planejamento suas codificaes e os nveis.
3

Tabela 1: Matriz de planejamento experimental fatorial 2 com duas repeties no ponto central
Ensaio
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Agitao
-1 (50)
+1 (150)
-1 (50)
+1 (150)
-1 (50)
+1 (150)
-1 (50)
+1 (150)
0 (100)
0 (100)

Tempo
-1 (15)
-1 (15)
+1 (45)
+1 (45)
-1 (15)
-1 (15)
+1 (45)
+1 (45)
0 (30)
0 (30)

Relao S/M
- 1 (5:1)
- 1 (5:1)
- 1 (5:1)
- 1 (5:1)
+ 1 (10:1)
+ 1 (10:1)
+ 1 (10:1)
+ 1 (10:1)
0 (7,5:1)
0 (7,5:1)

Extrao das enzimas


A extrao da enzima foi realizada em Shaker temperatura de 35C usando como solvente de
extrao tampo acetato de sdio a 200mM e pH 5,0.
Atividades enzimticas
A atividade de celulase foi determinada seguindo a metodologia descrita por Attili (1994), utilizando o
mtodo FPase. A atividade foi determinada no extrato obtido ao final da extrao, usando-se uma fita de
papel de filtro de 1 cm x 6 cm em um tubo de ensaio contendo 2 mL de extrato e 4 mL de tampo acetato
de sdio 200mM e pH 5,0. Aps incubao por 60 min a 50C, a reao interrompida pela adio de 1 mL
do reagente DNS. Para desenvolvimento da cor, os tubos foram aquecidos por 5 min em banho de gua
fervente e, depois de esfriar por aproximadamente 5 min, foi adicionado 8 mL de gua destilada e os
acares redutores foram determinados em espectrofotmetro, utilizando-se comprimento de onda de 541
nm.
As atividades enzimticas de FPAse dos extratos obtidos a partir dos substratos do caju lavado e sem
lavar foram quantificadas e os resultados das anlises foram expressos como unidades de atividade por
massa de substrato inicial (U/g).Uma unidade de atividade enzimtica (U) foi definida como a quantidade de
enzima capaz de liberar 1mol de glicose, por minuto, a 50C. Neste trabalho, a atividade enzimtica foi
expressa em U/gam, a qual foi calculada seguindo a equao mostrada a seguir:

FPase(U/gam) =

ARliberado x10 6 ( ARComFP ARsemFP ) x10 6


=
180 x60
180 x60
RESULTADOS E DISCUSSO

Caracterizao Fsico-Qumica do bagao de caju


A Tabela 2 apresenta os valores encontrados para os parmetros determinados na caracterizao do
bagao do caju.
Tabela 2: Caracterizao fsico-qumica do bagao de caju lavado e sem lavar
Caracterizao
Parmetro

Lavado

Sem lavar

Densidade Aparente (g/mL)

0,43 0,01

0,54 0,00

Densidade Real (g/mL)

1,43 0,00

1,25 0,00

Umidade (Ubs) (%)

6,98 0,06

8,91 0,42

Cinzas (%)

1,33 0,05

2,01 0,02

pH

5,31 0,03

4,00 0,01

Brix (%)

00

36,66 5,77

AR (%)

0,45 0,04

25,54 1,24

ART (%)

0,51 0,03

26,44 0,87

Lignina (%)

29,49 2,53

26,67 1,94

Celulose (%)

22,75 0,39

21,32 0,50

Extrativos (%)

14,66 0,80

38,17 0,44

A umidade encontrada para o bagao de caju lavado e sem lavar foi, respectivamente, de 6,98 e 8,91. A
umidade do bagao de caju sem lavar maior do que o lavado provavelmente pela presena dos acares
e os mesmos reterem mais umidade no bagao.
O valor do pH encontrado se aproxima muito com os de Kinh, Van Do & Phuong (1996) que
encontraram o pH do bagao do pednculo do caju sendo 4,1. Os pesquisadores Zheng e Shetly (2000) ao

estudarem a produo de enzimas por Lentinee edones concluram que este microrganismo produz a
enzima com maior atividade quando o meio apresenta pH na faixa de 3,0-6,5 demonstrando uma alta
tolerncia a meios cidos. Percebe-se que como o pH encontrado para o resduo foi de 5,31 para o bagao
lavado e 4,0 para o sem lavar se encaixam na faixa de 3,0-6,5 e se conclui que microrganismo j se adapta
ao meio na forma in natura, sem necessidade de correes de pH.
O teor de lignina encontrado no bagao do pednculo do caju lavado foi de 29,49% j o sem lavar foi de
26,67%. Alguns materiais tambm vm sendo utilizados como substratos na produo de enzimas
lignocelulolticas como a Palma Forrageira, que apresenta 4,62% de lignina e o bagao de cana que contm
entre 15 e 35% de lignina (Cowling e Kirk, 1976).No entanto para uma melhor produo de enzimas
celulolticas recomenda-se uma deslignificao do material, para que aumente proporcionalmente na
biomassa uma maior quantidade de celulose que a fonte indutora na produo de celulases.
O teor de cinzas do bagao lavado (1,33%) e para o sem lavar (2,01%) foram muito parecidos com os
teores encontrados por Tavares (2009) que caracterizou o bagao de caju e encontrou 1,25% e 1,69% para
o bagao lavado e sem lavar, respectivamente.
Experimentos em escala laboratorial tm mostrado que altos rendimentos em enzimas so obtidos em
meios que apresentam concentraes balanceadas de acares redutores e celulose. Os valores de
celulose encontrados neste trabalho foram bem prximos do encontrado por Ferreira et al. (2007) que ao
determinar o percentual de celulose no subproduto da agroindstria do caju encontrou valor de 21,0%.Os
teores de acares encontrados para o bagao lavado e sem lavar evidenciam que os mesmos podem ser
usados como substrato no processo de produo de enzimas celulase por fermentao semi-slida, desde
que a quantidade de celulose seja balanceada com o teor de acares redutores.
Fermentao e extrao da enzima celuloltica
A fermentao foi realizada nas condies em que Tavares (2009) obteve a melhor atividade celuloltica,
que foi 0,15U/ml, para o resduo lavado. A partir do fermentado foram realizados os testes de extrao; a
Tabela 3 apresenta os resultados das atividades celulolticas expressas em FPase, para o resduo lavado
(ATL) e para o resduo sem lavar (ATSL).
Tabela 3. Resultados das atividades celulolticas

Ensaios
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

AG(rpm)
50
150
50
150
50
150
50
150
100
100

TE(min)
15
15
45
45
15
15
45
45
30
30

RE S/M
5
5
5
5
10
10
10
10
7,5
7,5

ATL(U/g)
0,0474
0,0076
0,0076
0,0367
0,0168
0,0734
0,0764
0,2446
0,1582
0,1903

ATSL(U/g)
0,2675
0,2033
0,0015
0,0397
0,0825
0,4250
0,2446
0,3424
0,1926
0,1812

O planejamento experimental para o modelo testado no apresentou qualidade de ajuste satisfatrio


para nveis de at 90% de confiana. Desta forma ser discutido atravs da Figura 3 as tendncias que as
variveis estudadas para a extrao da enzima celuloltica influenciaram na atividade enzimtica.

Figura 3. Efeitos dos parmetros da extrao AG, TE e RE sobre a atividade celuloltica.


A agitao influncia positivamente na atividade celuloltica. Para a agitao de 150 rpm obteve-se as
maiores atividades com valores de 0,2446 (U/g) e 0,3424 (U/g) para o caju lavado e sem
lavar,respectivamente. Esse fato pode indicar que a agitao provoca uma diminuio ou eliminao das
resistncias transferncia de massa.
H uma tendncia que o tempo de contato no esteja influenciando significamente na extrao da
enzima de forma a se obter uma maior atividade enzimtica.
Na faixa de relao de volume de solvente/massa de fermentado estudado no presente trabalho ocorre
um aumento na atividade celuloltica.
Desse modo observa-se que h uma tendncia a que um aumento na agitao e no volume de extrao
ocorra o aumento na atividade celuloltica.

CONCLUSO

Os dados experimentais obtidos para caracterizao do pendculo do caju lavado e sem lavar
demonstram que o mesmo possui viabilidade para ser utilizado como substrato para a produo de enzimas
celulases, j que apresentou um pH comumente encontrado nos resduos agroindustriais destinados para
tal fermentao, e, tambm, por apresentar teores de acares redutores adequados produo dessas
enzimas.
Conclu-se tambm que um aumento da agitao e do volume de solvente/massa de fermentado ocorre
aumento na atividade celuloltica.

AGRADECIMENTOS
A todos os colegas do Laboratrio de Engenharia Bioqumica do CCT que contriburam com o
desenvolvimento deste projeto.

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