GUIAHEMATOLOGIA2013

MANUAL DE TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS
HEMATOLOGIA
HEMA-226, HEMA 227, HEMA 230.
II
Contenido
HEMATOLOGA GENERAL
ANTICOAGULANTES ................................................................................................................................................................... 1
ANTICOAGULANTES SLIDOS .................................................................................................................................................2
EDTA ............................................................................................................................................................................................................ 2
HEPARINA ................................................................................................................................................................................................. 2
ANTICOAGULANTES LIQUIDOS ...............................................................................................................................................3
CITRATO DE SODIO ............................................................................................................................................................................... 3
SOLUCION ACD (CIDO CTRICO CITRATO DEXTROSA) ..................................................................................................... 3
METODOS GENERALES DE EXTRACCION SANGUINEA ..................................................................................................... 5
PUNCIN VENOSA (VENOPUNTURA O FLEBOTOMA) ........................................................................................................ 5
PUNCIN CAPILAR ................................................................................................................................................................................ 7
HEMOGRAMA ...............................................................................................................................................................................9
METODOS DE RECUENTO CELULAR SANGUINEO ......................................................................................................... 11
RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS ................................................................................................................................................ 13
RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS........................................................................................................................................... 15
RECUENTO DE PLAQUETAS ........................................................................................................................................................... 18
RECUENTO DE EOSINOFILOS ........................................................................................................................................................ 22
HEMATOCRITO ............................................................................................................................................................................................ 24
MICROHEMATOCRITO...................................................................................................................................................................... 24
MACROHEMATOCRITO (MTODO DE WINTROBE) ........................................................................................................... 26
DOSIFICACION DE LA HEMOGLOBINA ........................................................................................................................................... 27
CONSTANTES ERITROCITARIAS ....................................................................................................................................... 29
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION........................................................................................................................................ 31
REALIZACIN DE FROTIS SANGUNEO ............................................................................................................................... 33
TINCION MAY GRNWALD GIEMSA ................................................................................................................................................ 36
RECUENTO DE RETICULOCITOS ........................................................................................................................................... 37
CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LAS CELULAS SANGUNEAS ........................................................................ 39
FORMULA LEUCOCITARIA ..................................................................................................................................................... 40
GUIA PRACTICA DE HEMOSTASIA

EXMENES DE HEMOSTASIA ................................................................................................................................................ 47
EVALUACIN DE LA HEMOSTASIA PRIMARIA ................................................................................................................. 48
PRUEBA DEL LAZO (PRUEBA DEL TORNIQUETE O DE RUMPEL LEEDE).................................................................. 48
TIEMPO DE SANGRA ............................................................................................................................................................................. 50
HEMOSTASIA SECUNDARIA ................................................................................................................................................... 53
III
SISTEMA DE COAGULACIN ............................................................................................................................................................... 53
VA EXTRNSECA ................................................................................................................................................................................. 54
VA INTRNSECA .................................................................................................................................................................................. 55
FORMACIN DE TROMBINA .......................................................................................................................................................... 56
FORMACIN DE FIBRINA ................................................................................................................................................................ 57
FIBRINLISIS ....................................................................................................................................................................................... 57
EVALUACIN HEMOSTASIA SECUNDARIA ........................................................................................................................ 58
VA EXTRNSECA ...................................................................................................................................................................................... 58
TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) ..................................................................................................................................................... 58
CONTROL DEL TRATAMIENTO ANTICOAGULANTE ORAL ............................................................................................. 60
EXPLORACIN VA INTRNSECA ...................................................................................................................................................... 61
TIEMPO TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA) ................................................................................................... 61
TIEMPO COAGULACIN DE LEE AND WHITE ............................................................................................................................. 62
TIEMPO DE TROMBINA ......................................................................................................................................................................... 63
DETERMINACIN DE FIBRINGENO .............................................................................................................................................. 64
MTODO DE PRECIPITACIN POR CALOR (MILLAR Y COL) ......................................................................................... 64
MTODO EVALUACIN FIBRINGENO POR DILUCIONES ............................................................................................. 65
RETRACCIN DE COAGULO ................................................................................................................................................................. 66
LISIS DEL COAGULO ................................................................................................................................................................................ 67
FACTOR ESTABILIZADOR DE LA FIBRINA ................................................................................................................................... 67
BSQUEDA DE INHIBIDORES ............................................................................................................................................................. 68
DETERMINACIN FACTORES VIII Y FVW ..................................................................................................................................... 70
ANEXO 1. PRECAUCIONES ESTANDAR .................................................................................................................71
ANEXO 2. ALTERACIONES MORFOLOGICAS DE LOS ERITROCITOS ................................................................78
ANEXO 3.ALTERACIONES MORFOLOGICAS DE LA SERIE GRANULOCITICA Y LINFOIDE ............................89
ANEXO 4. HEMOGRAMA AUTOMATIZADO .........................................................................................................94
BIBLIOGRAFA GENERAL .................................................................................................................................... 103
HEMATOLOGA GENERAL
ANTICOAGULANTES
La sangre una vez extrada, puede conservarse coagulada o mantenida incoagulable
mediante la adicin de anticoagulantes.
SANGRE COAGULADA
La coagulacin de la sangre es un proceso espontneo que se inicia aproximadamente a los
5 minutos de practicada la extraccin. En una primera fase, la sangre se transforma en una masa slida
llamada cogulo, luego aparece la retraccin del mismo. Este coagulo est constituido por una red de
fibrina que engloba las clulas sanguneas; posteriormente se produce la liberacin del suero, lquido de
constitucin similar al plasma, pero que carece de fibringeno y de la mayora de los factores de la
coagulacin.
SANGRE SIN COAGULAR

Si se desea obtener sangre total o plasma, es necesario agregar a la sangre recin extrada
un anticoagulante.
Es de suma importancia saber elegir el anticoagulante adecuado y usar la proporcin
correcta entre ste y el volumen de sangre extrada.
A excepcin de la heparina, que acta inhibiendo la accin de la trombina, la mayora de los
anticoagulantes acta fijando el ion calcio (Ca2+), formando sales insolubles, con lo que se evita el
desarrollo de la coagulacin sangunea.
Los anticoagulantes usados en hematologa deben cumplir los siguientes requisitos:
No producir hemlisis
Evitar la agregacin plaquetaria
No alterar la morfologa de los eritrocitos
No alterar la morfologa de los leucocitos
Los anticoagulantes pueden utilizarse en forma slida o lquida; en hematologa se usan de

preferencia slidos, para evitar la dilucin de la sangre y alterar los parmetros hematolgicos bsicos,
existen algunas excepciones como por ejemplo la utilizacin de Citrato de sodio para la determinacin de
Velocidad De Sedimentacin, entre otros.
HEMATOLOGA GENERAL
ANTICOAGULANTES SLIDOS
EDTA
Este compuesto realiza su accin anticoagulante mediante un efecto quelante sobre el

calcio (Ca++), fijndolo, pero sin llegar a precipitarlo. El cido etildiaminotetraactico, constituye el
anticoagulante de eleccin en hematologa por las ventajas que posee:
Respeta la morfologa celular, permitiendo realizar los extendidos dentro de las 2 horas de extrada
la muestra.
Asegura la conservacin de los elementos sanguneos durante 24 horas a 4C.
Al inhibir la aglutinacin plaquetaria, facilita su recuento y apreciacin en el extendido.
Las formas ms utilizadas de EDTA son sus formas de sal dipotsica (K2EDTA) y tripotsica
(K3EDTA), las cuales presentan mejor solubilidad en forma slida, pero presentan el inconveniente,
sobre todo esta ltima, de que a cierta concentracin de anticoagulante disminuyen el tamao de los
eritrocitos, especialmente a partir de las 2 horas de realizada la extraccin y puede inducir una
agregacin plaquetaria in vitro.
La concentracin ideal de EDTA es de 1 - 1.5 mg/ml de sangre, ya que un exceso de
anticoagulante, superior a 2 mg/ml, puede producir importantes alteraciones morfolgicas tanto de
leucocitos como eritrocitos, adems de disminuir el valor del hematocrito y aumentar la concentracin
corpuscular media de la hemoglobina.
Por otro lado una disminucin de la concentracin de EDTA menor de 1 mg/ml puede
producir microcogulos que alteraran los resultados de las diversas pruebas diagnsticas.
HEPARINA
Anticoagulante fisiolgico, estructuralmente es un mucopolisacrido cido. Acta

aumentando la velocidad de accin de la Antitrombina III, inhibidor natural de algunas proteasas de la
coagulacin. Su nombre proviene del griego hepar que significa hgado, de cuyas clulas fue aislado
por primera vez.
An cuando no altera el volumen sanguneo, no es recomendable para realizar extendidos,
ya que producen una coloracin de fondo azul intenso, debido a su pH, lo cual se intensifica cuando en el
plasma del paciente existen protenas anormales. Es utilizado frecuentemente para la toma de muestra
de la prueba de fragilidad osmtica y algunas determinaciones bioqumicas (gasometra).
La heparina (de sodio o de litio) puede usarse en forma seca o lquida, siendo la proporcin
recomendable de 15 20 UI, lo que equivale a 0,1-0,2 mg/ml de sangre (1 mg de heparina en polvo
equivale a 125UI).
HEMATOLOGA GENERAL
ANTICOAGULANTES LIQUIDOS
CITRATO DE SODIO
Es el anticoagulante exclusivo para la determinacin de la velocidad de sedimentacin

globular (VHS) y de eleccin para las pruebas de hemostasia. Acta precipitando el Calcio, con lo que
consecuentemente inhibe el proceso de coagulacin.
Se emplea en forma de solucin de citrato trisdico 0,109 M o bien 3.2%
Para las pruebas de hemostasia se emplea en proporcin 1/9
(1 vol. sol anticoagulante x 9 vol. de sangre)

Para la determinacin de VHS la proporcin utilizada es de 1/4
(1 vol. sol anticoagulante x 4 vol. de sangre)
SOLUCION ACD (cido ctrico citrato dextrosa)
Tiene las mismas indicaciones que el citrato de sodio, pero debido a las caractersticas de su
pH es el anticoagulante de eleccin para asegurar una buena conservacin de los hemates, por lo que se
usa preferentemente en Bancos de Sangre y estudios metablicos eritrocitarios.
Se utiliza en proporcin 1/4 (1 volumen sol anticoagulante por 4 volmenes de sangre)
La mezcla est constituida por:

cido ctrico
0.9 gr
Citrato disdico
2.0 gr
Dextrosa
2.0 gr
H2O destilada
120 mL
HEMATOLOGA GENERAL
TABLA 1. DETERMINACIONES HEMATOLGICAS Y TIEMPOS DE CONSERVACIN MXIMOS DE MUESTRAS SANGUNEAS

SEGN TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO Y ANTICOAGULANTE .
Prueba
Recuento eritrocitos
Hemoglobina
Hematocrito
VCM, HCM,CHCM
Recuento Leucocitos
Frmula Leucocitaria
Recuento Eosinfilos
Recuento Plaquetas
Velocidad de
Sedimentacin
Resistencia Osmtica
Eritrocitaria
Pruebas de Hemostasia
Tpo. mx. conservacin

(hrs)
48
Temperatura
(C)
4
Anticoagulante
24
25
48
24
25
48
24
25
24
25
24
25
25
25
25
4-5
25
Citrato de Sodio
25
Heparina
25
EDTA
EDTA
EDTA
EDTA
EDTA
EDTA
EDTA
EDTA
Citrato de Sodio
HEMATOLOGA GENERAL
METODOS GENERALES DE EXTRACCION SANGUINEA
La sangre para poder ser estudiada debe extraerse del organismo y, en ocasiones,
fraccionarse en sus componentes fundamentales: plasma, suero y clulas. La extraccin sangunea puede
realizarse por diversos mtodos, siendo los ms empleados la puncin venosa y la puncin capilar.
Puncin Venosa (Venopuntura o Flebotoma)
Constituye el tipo de extraccin sangunea ms comnmente empleado. El lugar de eleccin

es generalmente la regin venosa antecubital (venas cubitales, especialmente baslica o la ceflica), ya
que a ste nivel existe una piel fina y mvil y las venas son de grueso calibre y relativamente
superficiales.
Lugar de toma de muestra
Para la atencin de pacientes ambulatorios se debe disponer de una sala de espera amplia.
La sala de extraccin debe ser independiente, contar con un lavatorio, un espacio de recuperacin y una
camilla.
Materiales
Agujas:
Adultos1.1/4 1.1/2 y 19 - 21G

Nios 3/4 1 y 23 - 25G
Jeringa: Debe ser estril, seca y ajustarse al volumen de la muestra.

Camilla y silla de extraccin: con una superficie para apoyar el brazo extendido.
Tubos y frascos adecuados para la recoleccin de muestras.
Procedimiento
1.
Anotar en la etiqueta del tubo donde se va a poner la muestra, los datos que vienen en la orden
del examen.
Nombre completo del paciente
Nmero de la ficha/ RUT
Fecha y hora
En las muestras obtenidas en una sala de

hospitalizacin, se marcan los tubos
despus de obtenida la muestra para
evitar confusiones.
2. Ubicar al paciente siempre en una misma posicin, que puede ser de cbito dorsal o sentado.
3. Localizar una vena adecuada para la puncin, que sea visible y fcilmente palpable. Para esto
pedir al paciente que empue la mano. Palpar y seguir el trayecto de la vena con el dedo ndice.
HEMATOLOGA GENERAL
4. Limpiar el sitio de puncin, usando un algodn con alcohol isoproplico al 70%. Luego esperar
que la piel est seca, pues si se introduce alcohol con la aguja, se puede producir hemlisis,
adems de ardor.
5. Revisar que no haya filtracin de aire entre la aguja y la jeringa.
6. Aplicar un torniquete (ligadura) 7-10 cm ms arriba del sitio de puncin, para favorecer el llene
venoso. Como alternativa se puede usar un esfingomanmetro a una presin de 60 mmHg.
Un torniquete por ms de un minuto produce un aumento del hematocrito, por lo tanto en caso de
excederse en el tiempo, se debe esperar unos 2 minutos antes de aplicarlo nuevamente.
7. Sostener el brazo del paciente usando el pulgar para estirar la piel.
8. Canalizar la vena con la aguja en la misma direccin de ella y con el bisel hacia arriba, extraer la
cantidad necesaria de sangre a un flujo continuo, sin ejercer aspiracin excesiva, para evitar la
hemlisis.
Si se necesita ms sangre, cambiar la jeringa conservando la aguja en la vena. Utilizar un algodn seco
para absorber la sangre que sale por la aguja.
9. Una vez extrada la cantidad de sangre necesaria indicar al paciente que abra la mano.
10. Soltar el torniquete antes de retirar la aguja.
11. Colocar un algodn seco sobre la puncin y retirar la aguja aplicando presin sobre este.
En caso de no encontrar venas superficiales se puede masajear el

antebrazo hacia el codo. Tambin se puede golpear con los dedos
ndice y medio un par de veces o aplicar calor local.
En caso de fracaso, intentar en el otro brazo.
En caso de linfoedema o de tratamiento endovenoso, usar el otro
brazo.
En caso de hematoma, elegir un sitio distal a ste
Extraccin venosa en pacientes en aislamiento

1. Se debe aplicar el protocolo descrito para el lugar. Leer cuidadosamente las instrucciones antes
de entrar a la pieza de aislamiento y cumplirlas rigurosamente.
2. Dejar el equipo sobre una o dos toallas de papel.
3. Si el paciente est en aislamiento protector, limpiar y secar el torniquete antes de usarlo.
4. Conviene limpiar con alcohol los frascos luego de ser empleados.
5. Se debe usar siempre material desechable.
6. En caso de hepatitis o SIDA, marcar el frasco para evitar contaminacin en el laboratorio.
HEMATOLOGA GENERAL
Puncin capilar
Cuando la cantidad de sangre que se precise sea muy pequea, o cuando por diferentes motivos
no pueda practicarse una puncin venosa, debe recurrirse a la puncin capilar.
Esta permite la obtencin de una cantidad muy pequea de sangre. Aunque se prefiere la
muestra venosa, su obtencin por sta va se justifica en pacientes peditricos, enfermos oncolgicos
que requieren determinaciones repetidas o en caso de no tener muestra venosa disponible.
Materiales
Lanceta estril
Tubos capilares
Procedimiento
1. Ubicar el punto de extraccin, que puede ser el lbulo de la oreja o el pulpejo del dedo. En un
lactante puede ser la planta del pie en las regiones laterales, cuidando de no puncionar sitios de
puncin previos.
2. Asegurarse que la piel est tibia, con buena perfusin. En caso que la piel est fra conviene
calentar el dedo con agua caliente o frotar el lbulo de la oreja.
3. Limpiar la piel con alcohol y se deja secar.
4. Tomando firmemente el dedo se punciona con una lanceta estril. La incisin debe ser de 2 a 3
mm de profundidad.
5. Se elimina la primera gota de sangre con un algodn seco.
6. La sangre debe fluir libremente. En caso de ejercer presin para extraerla, no debe producirse
cianosis del dedo.
7. Mediante el uso de tubos capilares se saca la sangre necesaria. Se pueden tomar 0.5 a 1 ml de
una sola puncin.
Las muestras para hematocrito pueden tomarse directamente en tubos capilares heparinizados.
Debe llenarse por lo menos 2/3 del tubo.
La sangre para anlisis morfolgico debe ser extendida directamente en un portaobjeto limpio y bien
seco, en forma inmediata, para evitar la distorsin de las clulas.
8. Los tubos capilares deben ser sellados por un lado con plasticina, introduciendo el tubo unos 3 a
4 mm en ella y rotndolo entre los dedos ndice y pulgar.
HEMATOLOGA GENERAL
Comentarios
El hematocrito puede ser falsamente disminuido por una presin exagerada o mantenida por
un tiempo excesivo para extraer la sangre.
El recuento de plaquetas puede ser estar falsamente bajo por la liberacin de tromboplastina
consecutiva al dao tisular por la puncin.
En caso de edema, la puncin capilar dar una falsa disminucin de todos los elementos
sanguneos.
Causas de error en la extraccin sangunea

La interpretacin correcta de los valores hematimtricos obtenidos con la sangre extrada a travs de
los procedimientos descritos, depende en gran parte de la correcta metodologa empleada en la
realizacin de la extraccin sangunea. As, una mala tcnica de extraccin puede falsear muchos
resultados obtenidos mediante tcnicas correctamente realizadas. Las causas de error pueden ser muy
diversas y las ms importantes se resumen a continuacin:
Empleo de tubos o jeringas no excesivamente limpias o hmedas (en el caso de no usarse material
desechable).
Empleo de anticoagulantes inadecuados o en proporcin errnea.
Mantencin de la ligadura durante un tiempo excesivamente largo antes de practicar la puncin
venosa.
Perforacin de la vena por la parte profunda, con la formacin de un hematoma y la subsiguiente
lesin de tejidos, que al producir la entrada de factores hsticos en la muestra, puede diluir la
muestra y acelerar el proceso de la coagulacin sangunea.
Extraccin sangunea excesivamente lenta con coagulacin parcial de la sangre en la jeringa o en el
tubo de recogida.
Introduccin de la sangre en el tubo de recogida por vaciamiento de la jeringa bajo presin y con la
aguja puesta, lo que facilita la formacin de espuma y la aparicin de hemlisis.
Agitacin excesiva de la mezcla anticoagulante sangre con formacin de espuma (hemlisis), o
agitacin insuficiente con la aparicin de microcogulos.
Errores de identificacin del paciente al realizar la recoleccin de la muestra.
a) Registrar un nombre equivocado o incompleto
b) Registrar un cdigo numrico equivocado
c) Error en la fecha de extraccin
d) Llenado insuficiente de los tubos de vaco que contiene una proporcin determinada de
anticoagulante
HEMATOLOGA GENERAL
HEMATOLOGA GENERAL- HEMA 226

HEMOGRAMA
Es el examen bsico de toda exploracin hematolgica, y est constituido por dos tipos de
anlisis: Cuantitativo y Cualitativo (citolgico).
Parte cuantitativa:
Recuento de:
Eritrocitos
Leucocitos
Plaquetas
Reticulocitos
Determinacin de:
Hematocrito
Hemoglobina
Clculo de las constantes hematolgicas
Parte cualitativa
Estudio morfolgico de eritrocitos y plaquetas.

Elaboracin de frmula leucocitaria y estudio morfolgico de leucocitos.
A travs del tiempo, el hemograma ha sido objeto de mltiples modificaciones en

cuanto a la forma de obtener los parmetros que lo componen, los grados de precisin y
exactitud, y la manera de interpretarlos. Actualmente los diversos laboratorios clnicos que
realizan hemogramas cuentan con contadores hematolgicos que permiten la automatizacin
de este examen bajo la utilizacin de diversas tcnicas que permiten la entrega de resultados
rpidos y confiables adems de entregar ndices adicionales que permitirn una mejor
interpretacin del hemograma por parte del clnico (ANEXO 4).
A continuacin se describen los mtodos manuales recomendados por ICSH
(International Council for Standarization in Haematology) para la realizacin del hemograma.
HEMATOLOGA GENERAL
TABLA 2. VALORES DE REFERENCIA DE PARMETROS HEMATOLGICOS SEGN EDAD Y SEXO .
10
HEMATOLOGA GENERAL
METODOS DE RECUENTO CELULAR SANGUINEO

El recuento celular es la determinacin del nmero de clulas sanguneas (eritrocitos, leucocitos,
plaquetas y reticulocitos) por unidad de volumen sanguneo.
RECUENTO DE ERITROCITOS Y LEUCOCITOS.
Recuento mediante cmara cuenta glbulos: Principio.

Ha constituido hasta hoy el procedimiento tradicional de recuento celular. Tiene como
fundamento la realizacin de una dilucin sangunea con una pipeta dilutora y el posterior recuento de
las clulas (eritrocitos, leucocitos o plaquetas) con una cmara cuentaglbulos y un microscopio
convencional.
Actualmente ha quedado limitado a situaciones tales como, intensas leucopenias o leucocitosis,
donde los mtodos electrnicos pierden fiabilidad y para corroborar resultados de trombocitopenia en
que la clnica no es compatible con el recuento obtenido; siendo hasta hoy el mtodo recomendado para
su recuento. Adems, es ampliamente utilizada en laboratorios clnicos para realizar recuentos celulares
de lquidos biolgicos.
Liquido de dilucin
Puede emplearse diferentes tipos de lquidos de dilucin para el recuento de clulas sanguneas.
La naturaleza de estos lquidos vara segn el recuento que se realice. Para el recuento de eritrocitos
debe emplearse lquidos neutros o isotnicos, mientras que para el recuento de leucocitos se emplean
lquidos que tian levemente el ncleo y produzcan lisis de los eritrocitos; en cuanto al recuento de
plaquetas se utiliza un lquido hemolizante que impide la agregacin plaquetaria.
Pipetas dilutoras
Hay de dos tipos que se diferencian por su distinta capacidad, segn vayan destinadas al
recuento de leucocitos o de eritrocitos. El diseo es similar para ambas y consiste en un capilar
adecuadamente calibrado con una dilatacin de la ampolla o bulbo en su extremo proximal. La pipeta
para el recuento leucocitario permite hacer una dilucin a 1/10, puesto que la capacidad del bulbo es 10
veces superior a la del capilar, mientras que la pipeta para el recuento de eritrocitos tiene un bulbo con
una capacidad 100 veces superior a la del capilar, permitiendo realizar una dilucin al 1/100.
11
HEMATOLOGA GENERAL
Ambas pipetas llevan asimismo un enrase en la mitad exacta del capilar (0.5), con lo cual se
pueden realizar, enrasando en l la muestra de sangre, diluciones dobles.
Figura 1. Pipetas Dilutoras
Cmaras cuenta glbulos
Hay de distintas marcas y modelos, todas ellas poseen un diseo parecido. Consisten en un
portaobjeto de vidrio grueso (unos 3 mm), que lleva grabado en su superficie 3 prismas paralelos, de los
cuales el central est dividido en 2 hemiprismas idnticos, separados por un surco transversal. Sobre
estos ltimos se han trazado sendos retculos, cuyo diseo vara segn el modelo de cmara que se trate.
El ms utilizado es el de Neubauer, que presenta 9 cuadrados grandes de 1mm2 de superficie cada uno,
estando los cuatro de las esquinas destinadas al recuento de leucocitos, y el central (que presenta
mayores lneas de referencia) al recuento de eritrocitos.
La interseccin de las lneas de referencia delimitan a nivel de cuadro central, 400 cuadritos
pequeos con una superficie de 1/400 mm2 cada uno, y cada 16 cuadritos pequeos se agrupan
formando cuadrados de mediano tamao. En el cuadro central existen 16 cuadros de mediano tamao,
que contienen cada uno de ellos 16 cuadritos pequeos. El retculo de Thomas es de cuadro nico, con
un diseo y unas dimensiones idnticas a las del cuadro central del retculo de Neubauer.
Figura 2. Cmara Cuentaglbulos
Figura 3. Retculos cmara Neubauer
12
HEMATOLOGA GENERAL
RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS

Su objetivo es conocer el nmero de glbulos rojos contenido en 1 mm3 de sangre. Se diluye la sangre
con un reactivo que preserve la forma, evite la coagulacin y autolisis de las clulas.
Muestra
3 mL de sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
El paciente debe estar en ayunas y debe evitarse la hemlisis
Materiales
Pipetas de dilucin
Cmaras cuenta glbulos (Neubauer)
Cubre cmaras
Microscopio
La pipeta de recuento eritrocitaria est formada por una parte capilar, un bulbo de dilatacin y, para
terminar, nuevamente un capilar. El interior del bulbo contiene una granalla de color rojo, que permite
una buena mezcla de la sangre con el lquido diluyente. El volumen de la pipeta para eritrocitos est
constituido por 101 partes las cuales se dividen como sigue: la mitad de una parte a nivel de la marca
0.5, a nivel de la marca 1 se completa esta y 100 partes de la ampolla (101). Cuando se aspira la sangre
hasta la marca 0.5 y el lquido diluyente hasta 101, la dilucin es de 1:200.
La parte capilar de la pipeta no contiene sangre, sino solo lquido diluyente, por lo tanto, no est
incluido en el volumen total y su contenido debe ser expulsado antes que la suspensin de eritrocitos se
introduzca en la cmara de recuento.
Reactivos: Se puede utilizar solucin Hayem I o Grower

Solucin Hayem I:
Solucin Grower:
Sulfato de Sodio
: 2,5 g
Cloruro de Sodio
: 0,5 g
Bicloruro de Mercurio
: 0,25 g
H20 dest c.s.p
: 100 mL
Sulfato de sodio
: 12,5 g
Acido actico
: 33,3 g
H2O dest c.s.p.
: 100 mL
13
HEMATOLOGA GENERAL
Procedimiento
Agitar la muestra.
Aspirar la sangre suavemente hasta la marca 0.5
NO OLVIDAR: Siempre utilizar

guantes!
(si es necesario ajustar la pipeta tocando la punta

con papel filtro).
Limpiar prolijamente el exterior de la pipeta y aspirar la solucin diluyente hasta la marca
101.
Mientras se aspira la solucin diluyente se hace girar la pipeta entre el pulgar y el ndice de
manera que la sangre y el lquido que va penetrando se mezclen perfectamente.
Preparar la cmara de recuento con el cubre cmara en posicin, ambos muy limpios.
Eliminar las 3 o 4 primeras gotas de la pipeta.
La gota se extiende por capilaridad debajo del cubre cmara. El retculo debe quedar
completamente cubierto de lquido, pero no en exceso, el lquido no debe salir por los lados.
Dejar en reposo durante 2 a 3 minutos para que las clulas sedimenten y examinar al
microscopio (10x) para comprobar que la distribucin de los glbulos es uniforme, si es as,
se cuentan.
No debe existir diferencias de ms o menos 18 glbulos entre cada uno de los grupos a
contar.
Para hacer el recuento, se usa el objetivo seco de mayor aumento (40x).
En cmara de Neubauer perfeccionada se cuentan 4 grupos angulares y uno central de 16
cuadraditos cada uno. Superficie contada: 80 (16x5).
Figura 4.Cuadro central Cmara de Neubauer, crculos indican lugares de recuento eritrocitario.
En cada grupo se contarn los glbulos que se encuentran dentro de cada

cuadradito y los que estn en contacto con las lneas divisorias de la izquierda
e inferior; no se incluyen en la cuenta los que tocan las lneas de la derecha y
superior
14
HEMATOLOGA GENERAL
CALCULO
GR x mm3 = N GR x 400 x 200 x 10 = N GR x 10.000

80
Donde:
Superficie total
400
Factor de Dilucin
1/200
Profundidad de la cmara
1/10
Superficie contada
80
Valores de referencia
Hombres: 4.500.000 - 5.500.000 /L

Mujeres: 4.000.000 - 5.000.000 /L
RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS

El objetivo es medir el nmero total de leucocitos x mm3(L ). Para esto, la muestra de sangre es
diluida con un reactivo que es capaz de lisar los eritrocitos, pero no los leucocitos. El reactivo contiene
adems un colorante que tie los ncleos.
Existen ciertas patologas en que la mdula sea libera eritroblastos a la periferia. Si en el
hemograma se detecta la presencia de estos, la cuenta total debe ser corregida (aplicar correccin si el
nmero de eritroblastos es igual o mayor a 10).
Muestra: Sangre venosa con EDTA o sangre capilar
Materiales:
Cmara de Neubauer
Cubre cmara
Pipeta de dilucin de leucocitos (*)
Solucin diluyente
Microscopio
15
HEMATOLOGA GENERAL
*La pipeta de dilucin de los leucocitos est formada por un parte capilar, luego un bulbo y termina
nuevamente en forma capilar. En el interior del bulbo existe una granalla de color blanco y sirve para una
buena mezcla de la sangre con el diluyente.
Reactivos
Solucin Hayem II:
Acido actico glacial
2ml
Azul de metileno al 1%
1ml (*)
Agua destilada c.s.p.
100ml
Esta solucin debe ser filtrada previamente para remover partculas extraas.
*Azul de metileno al 1%:
Azul de metileno
1gr
Agua destilada
100ml
Procedimiento
1. Aspirar la sangre suavemente hasta la marca 1 de la pipeta de dilucin de leucocitos. En caso de
hiperleucocitosis cargar la pipeta solo hasta la marca 0.5.
2. Limpiar prolijamente el exterior de la pipeta y aspirar la solucin diluyente hasta la marca 11.
3. Agitar la pipeta durante 3 minutos, sujetndola con el pulgar y el dedo medio.
4. Preparar la cmara de recuento con el cubre cmara en posicin, ambos muy limpios.
5. Eliminar las 5 primeras gotas y luego llenar la cmara, cuidando que no rebalse.
6. Dejar en reposo durante 2 a 3 minutos para que las clulas sedimenten.
7. Observar al microscopio con aumento menor (10x). Cerrar parcialmente el diafragma del
condensador para ver los leucocitos y comprobar que las clulas estn uniformemente
distribuidas.
8. Efectuar el recuento, en aumento seco mayor (40x), de los cuadrados grandes de las esquinas
(de 1 mm2 cada uno). En cada uno de estos se incluirn las clulas que estn dentro de ste y los
que estn en contacto con las lneas divisorias izquierda e inferior.
Figura 5. Cuadro de recuento leucocitario.

Se indica lneas divisorias que deben ser consideradas en el recuento.
16
HEMATOLOGA GENERAL
CALCULO
LEUCOCITOS x mm3 = L x 10 x 10 = N Leucocitos x 100

N
N
Donde:
L
N de leucocitos contados
Superficie de contacto
1 mm2
Dilucin
1/10
1/10 mm
N de cuadrantes contados
Fuentes de error:
Uso de anticoagulantes no adecuados.
Muestra con microcogulos
Error de pipeteo o presencia de burbujas en pipeta o cmara.
Desintegracin de Leucocitos. El recuento debe hacerse antes de
transcurridas 6 horas de obtenida la muestra.
Agitacin insuficiente de la muestra o pipeta.
Valores de referencia:
5.000 a 10.000 /L
17
HEMATOLOGA GENERAL
RECUENTO DE PLAQUETAS
Casi todos los mtodos utilizados para el recuento de plaquetas tropiezan con muchas
dificultades, debido a la propiedad que tienen estos elementos para adherirse a superficies extraas
como vidrio u otras partculas; y tambin, su propiedad de agregarse. Debido a lo anterior es necesario
tener presente una serie de recomendaciones para hacer un buen recuento.
Tanto para la extraccin como para el recuento debe utilizarse material de plstico o vidrio
siliconado.
Muestra de sangre preferentemente venosa y el ideal es con EDTA, debido a que impide la
agregacin plaquetaria (1 mg/ml o 1 gota de
EDTA 10% para 5 ml de sangre. No deberan
Se considera, segn algunos autores
(Brecher y col 1953) que existe una
hacerse recuentos con sangre capilar, porque se
prdida promedio de 2.5% de plaquetas en
produce dilucin de la sangre al mezclarse con
recuentos realizados a partir de sangre
lquido tisular, por prdida de plaquetas que se
capilar, comparada con sangre venosa.
van a adherir a los bordes de la lesin, liberacin
de substancias tromboplsticas y ADP.
Realizar el recuento dentro de 3 horas de haber obtenido la muestra.
El lquido de dilucin debe guardarse a 4 C en frascos bien tapados y, si es necesario, filtrado
antes de su uso. Descartarlo ante la presencia de turbidez, hongos, etc. Idealmente esterilizarlo
y guardarlo en alcuotas.
La mayora de los mtodos directos presentan dificultad para distinguir plaquetas de otras partculas
como: cristales, polvo o bacterias. En el microscopio de contraste de fases se distingue con mayor
facilidad, porque adquieren una tonalidad rosado-prpura brillante. Si se utiliza microscopio de luz, se
debe observar con poca luminosidad y utilizar frecuentemente el micromtrico para lograr un enfoque
preciso, distinguindose por un aspecto plateado brillante.
18
HEMATOLOGA GENERAL
PLAQUETAS
Son pequeos corpsculos discoides de 2 a 4 m de dimetro, de color rosa plido, en los que se
observan otras pequeas granulaciones.
Las plaquetas, desprendidas del citoplasma de los megacariocitos adultos, pasan a la sangre
perifrica donde ejercen sus funciones en los mecanismos de coagulacin. Son los elementos formes de
la sangre que presentan menor tamao y estn desprovistos de ncleo, por lo que no se trata de
verdaderas clulas, sino de fragmentos celulares. En los frotis se observan con frecuencia en
aglomerados, debido a su gran capacidad de agregacin. Su forma fisiolgica es discoide, aspecto que se
modifica con facilidad por las maniobras de extensin o centrifugacin, adquiriendo un aspecto
redondeado y emitiendo finas prolongaciones.
Figura 6. Plaquetas en frotis de sangre perifrica. Tincin May Grunwald-Giemsa (100x).
Materiales
Cmara de Neubauer
Pipetas de dilucin de eritrocitos
Microscopio
Cubre cmaras
Diluyente para plaquetas
Cmara Hmeda (placa Petri con papel absorbente empapado en agua en su interior)
Reactivos
Liquido diluyente*
Filtrar antes de usar.
Citrato de sodio 3,8%
100ml
Formaldehdo 40%
0,2ml
Azul de cresil brillante
0,1gr
19
HEMATOLOGA GENERAL
Procedimiento
1. Agitar la muestra de sangre venosa tomada con EDTA.
2. Aspirar la sangre hasta la marca 0.5 de la pipeta de eritrocitos.
3. Limpiar prolijamente la pipeta y luego aspirar el lquido diluyente hasta el enrase 101 sobre la
ampolla.
4. Agitar la pipeta, eliminar las 3 primeras gotas y proceder a cargar la cmara de Neubauer por
ambos lados.
5. Dejar reposar alrededor de 10 minutos en una cmara hmeda, con el objeto de permitir que las
plaquetas sedimenten.
6. Observar al microscopio de contraste de fase o de luz, con objetivo seco mayor (40x).
7. Contar mnimo dos cuadrados laterales de la cmara de Neubauer.
Figura 7. Pipetas dilutoras y esquema retculos de Neubauer. Se indica la pipeta utilizada y cuadrantes en
cmara para recuento plaquetario.

CALCULO
PLAQUETAS x l= P x 200 x 10
N
Donde:
Nmero de plaquetas contadas
Dilucin de la pipeta
200
10
Nmero de cuadrantes contados
20
HEMATOLOGA GENERAL
Tambin se puede utilizar sangre diluida al 1/100 en una solucin de oxalato de amonio al 1%,
contndose en cmara de Neubauer, pero en ste caso se recomienda el uso de microscopia de
contraste de fase.
Recuento de plaquetas en frotis.

Se ha establecido que existe una relacin de 1 plaqueta por campo de inmersin por cada 20.000
plaquetas en cmara de recuento, por lo tanto, en un frotis teido con May Grnwald-Giemsa (ver figura
8), utilizando objetivo de inmersin se puede realizar un recuento estimado de plaquetas contndolas en
10 campos de 100 glbulos rojos (aprx), aplicando la siguiente frmula:
Plaquetas/uL= N de plaquetas en 10 campos x 2.000
Est frmula nos permite establecer un recuento que se correlaciona bastante bien con el
recuento plaquetario normal, pero no establece un recuento exacto, sino un estimado del nmero de
plaquetas en la muestra analizada.
Valores de referencia :
150.000 a 400.000/L
Figura 8. Frotis de sangre perifrica teido con May Grnwald-Giemsa. Con las flechas se indican plaquetas,
flecha horizontal muestra plaqueta sobre un eritrocito
21
HEMATOLOGA GENERAL
RECUENTO DE EOSINOFILOS
Los eosinfilos son clulas de forma redondeada, citoplasma claro, incoloro, con abundantes
granulaciones refringentes de mayor tamao que los neutrfilos.
Dichas granulaciones se tien muy bien con los colorantes cidos, la eosina los tie de color rojo
anaranjado. El ncleo es mas simple que el de los neutrfilos, se compone casi siempre de dos lbulos
unidos por un delgado filamento de cromatina.
Los eosinfilos dan intensamente positiva la reaccin de las peroxidasas. Se encuentran en
proporcin 2 a 4% en el hemograma normal y de 100 a 400 x mm 3, existiendo variaciones de estas cifras
en las distintas horas del da.
An cuando el recuento total de eosinfilos puede ser calculado aproximadamente a partir de
los recuentos total y diferencial de leucocitos, las propiedades tintoriales de los eosinfilos permiten que
estos sean contados directamente con mucho mas exactitud usando una cmara cuenta glbulos.
Muestra: Sangre venosa con EDTA
Materiales
Pipeta dilucin de leucocitos

Cmara de Neubauer
Microscopio
Diluyente
Solucin acuosa de eosina al 2%
Acetona
Agua destilada
5 mL
5 mL
90 mL
*El lquido diluyente debe filtrarse antes de ser usado y se guarda a 4C durante 2 a 3 semanas.
Procedimiento
1. Llenar la pipeta de leucocitos hasta la marca 1 con sangre con anticoagulante que no tenga en lo
posible ms de 15 minutos de extrada, se aspira diluyente hasta el enrase 11.
2. Agitar la pipeta, eliminar las primeras gotas y se procede a cargar la cmara de Neubauer doble,
se deja reposar 2 a 3 minutos para que los eosinfilos sedimenten, luego se cuentan 9
cuadrados de la cmara de ambos. Leer de inmediato, pues los eosinfilos se desintegran
lentamente en el lquido diluyente.
22
HEMATOLOGA GENERAL
Clculo:
N eosinfilos contados x 10 x 10
18
Donde:
N
Eosinfilos contados
10
Dilucin pipeta
10
18
Nmero de milmetros contados
Las causas ms comunes de eosinofilia son:

Reacciones alrgicas e infecciones parasitarias
Por el contrario se observa eosinopenia en la primera mitad del perodo

de evolucin de la fiebre tifoidea, al igual que en la brucelosis aguda.
Adems, este tipo celular disminuye en forma considerable en shocks
anafilctica y otras, como por ejemplo inyecciones de adrenalina,
cortisona, etc.
23
HEMATOLOGA GENERAL
HEMATOCRITO
Es el volumen relativo ocupado por lo eritrocitos en una muestra de sangre total, capilar o
venosa. El hematocrito est directamente relacionado con la concentracin de hemoglobina, por lo que
su determinacin es el procedimiento ms simple para el diagnstico de la anemia Se expresa como
fraccin decimal o porcentaje.
La determinacin se puede efectuar mediante:
Microhematocrito
Macrohematocrito de Wintrobe
MICROHEMATOCRITO
Muestra:
Sangre capilar recolectada desde el sitio de puncin.

Sangre venosa recolectada con EDTA
Materiales
Tubos de microhematocrito heparinizados para sangre capilar y sin anticoagulante para sangre
venosa de 75mm de largo y 1 mm de dimetro

Microcentrfuga
Lector de microhematocrito
Sellador (plasticina)
Procedimiento
1. Previa agitacin de la muestra (en el caso de ser sangre con EDTA) se llena el tubo de
microhematocrito por capilaridad en a de su largo total. Limpiar la superficie externa del
tubo.
2. Sellar el extremo vaco con plasticina.
3. Colocar los tubos de microhematocrito en la centrifuga, con el extremo sellado hacia la periferia.
4. Centrifugar 5 minutos a 10.000 a 15.000 rpm.
5. Si los tubos no son ledos inmediatamente, deben dejarse en posicin vertical hasta su lectura.
6. Leer en la tabla lector.
24
HEMATOLOGA GENERAL
Se recomienda expresar el resultado como una fraccin decimal en lugar de porcentaje, aunque ste
ltimo es el ms utilizado.
En caso de sangre con poliglobulia se debe aumentar el tiempo de centrifugacin a 7 a 8 minutos.
El hematocrito obtenido por mtodos automatizados es frecuentemente 1,5 a 3% ms bajo de los
microhematocritos, ya que se elimina el plasma atrapado y el nivel de oxigenacin
Fuentes de error
Presin exagerada al obtener la muestra por puncin capilar, hay dilucin por fluido
intersticial.
Estasis prolongada por la constriccin de la ligadura, por un minuto o ms, puede
resultar en un falso aumento del hematocrito de 2,5 a 5%.
El EDTA debe tener una concentracin de 1,5mg/ml de sangre. Si es mayor la cantidad
de EDTA, hay una hiperosmolaridad del medio, ocurriendo una disminucin del tamao
de los glbulos rojos, y con esto un hematocrito ms bajo.
Si la muestra se conserva por ms de 6 a 8 horas, hay un falso incremento del
hematocrito.
Mezcla inadecuada de la muestra antes de medirse.
El nivel de oxigenacin de la sangre tambin afecta los resultados, el hematocrito de la
sangre venosa es un 2% ms alto que el de la sangre arterial
Muestra con microcogulos.
En la lectura debe excluirse nivel de blancos y plaquetas.
Prdida inaparente de muestra en el tubo capilar.
25
HEMATOLOGA GENERAL
MACROHEMATOCRITO (Mtodo de Wintrobe)
Muestra: Sangre venosa tomada con EDTA.

Materiales:
Centrfuga
Pipetas Pasteur
Tubos de hematocrito (Wintrobe)
Tabla lectura
Procedimiento:
1. Llenar un tubo de Wintrobe con sangre total tomada con EDTA hasta la marca 10, con una pipeta
Pasteur lo suficientemente larga y delgada como para que llegue al fondo del tubo con la sangre
del paciente.
2. Centrifugar durante 30 minutos a 3000rpm.
3. Leer el resultado directamente en el tubo.
Fuentes de error: Igual que para el microhematocrito.
El micromtodo se prefiere al macromtodo por tener un tiempo de determinacin ms corto,

requerir una menor cantidad de muestra y ser ms real, ya que tiene menor cantidad de plasma
atrapado, debido a la mayor fuerza de centrifugacin.
Valores de referencia:
Adultos Hombres
40-54%
Mujeres
37-47%
Recin Nacidos
43-66%
Nios 3 meses
33-40%
Nios 3 a 6 aos
31-43%
Nios 10-12 aos
40-46%
El hematocrito es sin lugar a dudas el examen ms fcil de realizar y uno de los ms precisos del
hemograma.
26
HEMATOLOGA GENERAL
DOSIFICACION DE LA HEMOGLOBINA
Principio
La hemoglobina es una molcula proteica que constituye el 95% del peso seco del eritrocito y su
determinacin ayuda a establecer el grado de anemia. Tiene la caracterstica de ser intensamente
coloreada, propiedad que es utilizada para estimar colorimtricamente su concentracin en la sangre.
El mtodo recomendado para la dosificacin de hemoglobina se basa en la dilucin de la sangre
en una solucin que contenga cianuro potsico y ferrocianuro potsico (Solucin de Drabkin).
El ferrocianuro potsico convierte el hierro ferroso de todas las formas de hemoglobina (a
excepcin de la sulfahemoglobina, SHb) en hierro frrico para formar metahemoglobina (Hi), sta ms lo
que habitualmente hay en la sangre, se combina con el cianuro potsico para formar
cianmetahemoglobina (HiCN).
La cianmetahemoglobina es un compuesto estable, cuya concentracin es directamente
proporcional a su absorbancia a 540 nm, por lo tanto la solucin es medida con un espectrofotmetro a
540 nm, donde no interfieren ni la bilirrubina, ni los pigmentos carotenoides.
Muestra: Sangre capilar o venosa tomada con EDTA

Materiales.
Tubos de fondo cnico

Pipetas de Salhi
Espectrofotmetro o fotocolormetro equipado con filtro para leer a 540 nm
Dispensador o pipeta para 5 ml
Reactivos.
Solucin Drabkin*:
Ferrocianuro potsico
0.20 gr.
Cianuro potsico
0.05 gr.
Bicarbonato sdico
1.00 gr.
Agua destilada
1.000 mL
*Debe conservarse en frasco ambarado a 4 C o a temperatura ambiente, mantenindose estable

aproximadamente durante un mes.
27
HEMATOLOGA GENERAL
Procedimiento.
1. Homogenizar cuidadosamente la muestra y tomar 20 uL de sangre e introducirlos en 5 mL de
Solucin de Drabkin; dejar la pipeta en el tubo.
2. Mezclar cuidadosamente y esperar 10 minutos la lisis total.
3. Medir la densidad ptica a 540 nm, utilizando como blanco un tubo solo con Solucin de
Drabkin.
4. Interpolar en la curva de calibracin.
Curva de calibracin.
1. Para elaborar la curva de calibracin se deben prepara soluciones al 1/2, 1/3 y 1/4, hechas con
solucin de Drabkin, a partir de una solucin patrn de concentracin conocida de hemoglobina
(solucin comercial).
2. Medir la densidad ptica de las soluciones de trabajo (1/2, 1/3 y 1/4) y la solucin preparada
para la muestra.
3. Calcular la cantidad de hemoglobina que corresponda a cada una de las diluciones.
4. Graficar los valores obtenidos, ubicando la densidad ptica en el eje Y y la concentracin de
Hemoglobina en el eje X.
5. Llevar los valores de densidad ptica a concentracin de hemoglobina correspondiente a cada
una de las soluciones.
Hombres
13 a 16 gr/dl
Mujeres
12,5 a 14,5 gr/dl
Actualmente, esta tcnica est siendo

reemplazada por tcnicas que no contienen cianuro
potsico (compuesto txico), entre ellas el mtodo del
lauril sulfato sdico (ver anexo 4) que presenta niveles de
exactitud y precisin similares al mtodo antes descrito.
28
HEMATOLOGA GENERAL
CONSTANTES ERITROCITARIAS
Las constantes eritrocitarias o ndices eritrocitarios, son calculados para cada muestra de sangre a
partir del resultado de recuento de eritrocitos, dosificacin de hemoglobina y valor del hematocrito, y
son consideradas como valores absolutos.
VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM):

o Corresponde al volumen promedio de los eritrocitos y se calcula a partir del hematocrito
y el nmero de eritrocitos.
o Se expresa en femtolitros (fL).
VCM
VCM normal:
HEMATOCRITO (%) x 10
N ERITROCITOS x 106/ul
82 a 96 fL
Menos de 80 fL
Ms de 100 fL
Normocitosis
Microcitosis
Macrocitosis
HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM):

o Es la cantidad media de hemoglobina contenida en un eritrocito.
o Se calcula mediante el cociente entre la concentracin de hemoglobina y el recuento de
eritrocitos.
o Se expresa en picogramos (pg)
HCM
HCM normal :
HEMOGLOBINA (g/dL) x 10
N ERITROCITOS x 106/ul
27 a 31 pg
Menos de 27 pg
Normocroma
Hipocroma
29
HEMATOLOGA GENERAL
CONCENTRACION HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (CHCM)

o Representa el porcentaje de hemoglobina contenido en la masa globular, o bien, el peso
de la hemoglobina contenida en 100 ml de eritrocitos.
o Se calcula a partir de la concentracin de hemoglobina y el hematocrito.
o Se expresa en porcentaje (%)
CHCM
CHCM normal adulto y nio:
29 a 32%
Menos de 29%
HEMOGLOBINA (g/dL) x 100

HEMATOCRITO (%)
Normocroma
Hipocroma
Las constantes hematolgicas o eritrocitarias son extremadamente tiles y consideradas

imprescindibles para realizar el diagnostico etiolgico y clasificacin de las anemias, ya que permiten una
orientacin basada en el tamao y contenido de hemoglobina de los eritrocitos. Pero, para establecer un
diagnstico definitivo deben ser obligatoriamente completadas con un estudio minucioso de la
morfologa del eritrocito (Ver Anexo 2).
La condicin de hipercroma no se usa, ya que

representa la saturacin en hemoglobina del
eritrocito, es decir pone de manifiesto un elevado
contenido hemoglobnico en los eritrocitos.
30
HEMATOLOGA GENERAL
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION
Si se deja reposar verticalmente un tubo de sangre con anticoagulante se observa que, despus
de algn tiempo, los eritrocitos sedimentan en su fondo, formndose dos fases que corresponden a
plasma (parte superior) y a las clulas sanguneas (parte inferior), constituidas fundamentalmente por
eritrocitos. Este proceso se llama eritrosedimentacin y aunque el mecanismo por el cual se produce
an no es bien conocido, parece obedecer a interacciones electrostticas entre la superficie de los
eritrocitos y diversas protenas del plasma que favorecen (fibringeno y globulinas) o disminuyen
(albmina) la agregabilidad de stas clulas, lo que a su vez depende, desde el punto de vista fsico, de
los siguientes factores: tamao de los eritrocitos (VCM), diferencias de densidad entre eritrocitos y
plasma, viscosidad de ste y por ltimo, temperatura.
En la prctica los aumentos importantes de VHS se producen cuando existen disminuciones
marcadas de VCM (microcitosis), de la concentracin de hemoglobina (anemia intensa) o cuando
aumenta la concentracin plasmtica de ciertas protenas.
El mtodo utilizado de referencia es el Mtodo de Westergreen que mide la tasa de
sedimentacin de los glbulos rojos en el plasma. Es obtenida por medicin de la distancia entre el
menisco del plasma hasta el lmite superior de la columna de los glbulos rojos y se expresa en
mm/hora.
Muestra: Sangre venosa tomada con solucin de citrato de sodio en proporcin 1:4
Solucin citrato
Sangre
1 volumen
4 volmenes
Materiales
Tubos de Westergreen *
Longitud total :
Dimetro
:
Graduacin
:
300 +- 1,5 mm
2,55 +- 0,15 mm
0 a 200 mm
*Tras ser usados estos tubos se deben limpiar con mezcla de agua y acetona, no debe utilizarse ni detergente ni
mezcla sulfocrmica.
Soporte especial que permita mantener los tubos en posicin estrictamente vertical.
Reactivo:
Citrato trisdico
Agua destilada
:
:
3,8 g
100 mL
Despus de la dilucin, filtrar sobre una membrana estril. La aparicin de turbidez debe hacer
rechazar la solucin.
31
HEMATOLOGA GENERAL
Procedimiento
1. La prueba debe realizarse dentro de las dos horas que siguen a la extraccin. Si la muestra ha
sido mantenida a T ambiente se conserva hasta 5 horas viable.
2. Despus de homogenizar cuidadosamente la muestra, aspirar en el tubo de Westergreen hasta
la marca 0.
3. Colocar el tubo perfectamente vertical, en su soporte y dejarlo a temperatura ambiente,
protegido de vibraciones y de la luz directa.
4. Al cabo de una hora, leer la altura del plasma sobrenadante, desde la base del mecanismo
superior hasta el punto ms alto de la columna de eritrocitos.
5. Expresar el resultado en mm/hr.
Hombres
Mujeres
3 a 10 mm/hr
7 a 15 mm/hr
Causas de error ms comunes:

No verticalidad del tubo
Error de dilucin
Vibraciones que afecten el soporte
Interpretacin:
Es una prueba inespecfica, es til por sobretodo en el control de la evolucin de enfermedades
inflamatorias e infecciosas.
Por lo general est aumentada en:
Embarazo (10 a 12 semanas)

Con la edad (despus de los 60 aos)
Enfermedades reumticas
Tuberculosis
Infecciones agudas y crnicas
Sndromes neoplsicos y trastornos degenerativos
32
HEMATOLOGA GENERAL
REALIZACIN DE FROTIS SANGUNEO
La prctica de un frotis sanguneo (tambin llamado extensin) es de gran importancia en

hematologa, ya que el diagnstico de muchas enfermedades hematolgicas puede realizarse con solo
observar las caractersticas morfolgicas sanguneas. Debido a ello, la tcnica de realizacin del frotis
debe ser impecable, procurando que sta no sea excesivamente fina, ni gruesa. Con ello se conseguira
una distribucin adecuada de las clulas en diferentes reas del frotis, cuyo reconocimiento es
fundamental tanto para la observacin de la morfologa eritrocitaria como para la realizacin de la
frmula leucocitaria.
Este examen requiere condiciones y tcnicas rigurosas en:
Preparacin de los portas

Confeccin de los frotis
Tincin
Lectura de los frotis
Preparacin de los portas: Antes de su uso deben ser lavados con agua y un detergente, luego ser
enjuagados con abundante agua corriente y agua destilada. Posteriormente se debe conservar en un
recipiente cerrado que contenga una mezcla de partes iguales de alcohol etlico y ter. En el momento
de su utilizacin deben dejarse escurrir y secar con un pao limpio y seco que no deje pelusas. Los portas
deben ser manipulados con cuidado y nicamente por los bordes para no dejar huellas grasas en su
superficie.
Confeccin de los frotis:

1. Marcar con un lpiz graso el portaobjeto, identificando la muestra.
2. Colocar una pequea gota de sangre capilar o venosa recin extrada en un extremo de un porta
limpio.
3. Mientras se sujeta firmemente con los dedos ndice y pulgar el portaobjeto, con la otra mano se
toma un cubreobjeto o un porta esmerilado en un ngulo de 45, tocando la gota de sangre.
4. La sangre difunde entre el cubre y el portaobjeto.
5. Una vez extendida la gota a lo ancho del portaobjeto, se desplaza el cubreobjeto a una velocidad
uniforme, con un movimiento rpido sin perder contacto con el portaobjeto.
6. Luego se deja secar. Se puede acelerara el proceso mediante agitacin.
33
HEMATOLOGA GENERAL
Figura 9. Realizacin de frotis sanguneo.

(Palomo I, Pereira J, Palma J. 2005. Hematologa; Fisiopatologa y Diagnstico. 1 Ed. Editorial Universidad de Talca)
Detalles a considerar:
El grosor de la extensin depende del tamao de la gota, la velocidad y del ngulo.

Un buen frotis debe ser ms angosto y ms corto que el portaobjeto.
Regular, sin escotaduras, ni agujeros.
Ni demasiado grueso, ni demasiado delgado
Sin flecos, ni estras.
Para que un frotis sea bueno:
No debe ser demasiado grueso ( los elementos estaran aglutinados y no seran

identificables)
No deben ser demasiado delgados ( sera pobre en elementos, lo que impedira
una lectura conveniente)
No deben ser extremadamente largo (se pierden los elementos ms ntidos)
Deben ser secados al aire ( un secado defectuoso induce a informes no reales de
las caractersticas de los eritrocitos )
No deben presentar agujeros, ni bordes festoneados
Una buena extensin realizada mediante esta tcnica presentar tres areas de diferente grosor y
distinta distribucin de leucocitos:
1. Cabeza, zona excesivamente gruesa y se encuentra en la regin inmediata de partida de la
extensin. En esta zona se observa siempre un aumento del nmero de linfocitos.
34
HEMATOLOGA GENERAL
2. Cola o Barbas, zona excesivamente fina, se ubica al final de la extensin y termina con una
rea donde las clulas adoptan una disposicin acordonada. En esta regin se observa un exceso
de granulocitos y monocitos.
3. Cuerpo, zona intermedia, ubicada entre las dos anteriores, corresponde a la zona ideal de
lectura, donde existe una distribucin equilibrada de las clulas.
Figura 10. Esquema de una extensin sangunea con indicacin de las distintas zonas que la componen y la
distribucin celular de estas.
(Modificado de Vives, J.L.; Aguilar, J.L. 1997. Manual de Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. 2da Ed.)
Tincin de los frotis

El frotis sanguneo, una vez seco, se somete a un proceso de fijacin y posteriormente a una
tincin mediante un colorante adecuado. Los colorantes ms empleados para la tincin hematolgica se
basan en el Romanowsky, constituido fundamentalmente por la mezcla de eosina y azul de metileno.
La aplicacin del mtodo de Romanowsky a la rutina hematolgica precisa dos aspectos: fijacin de
la sangre extendida sobre el portaobjeto antes de aplicar el colorante y el empleo, junto a la eosina y
azul de metileno, de derivados por oxidacin de ste ltimo, que se conocen con el nombre de azures.
Estas substancias son las responsables de la coloracin prpura o roja de la cromatina de lo eritrocitos y
de ciertas granulaciones citoplasmticas, que por ello se denominan azurfilas. Mediante este tipo de
colorantes pueden distinguirse los siguientes aspectos morfolgicos de las clulas:
Forma, dimensin y contorno de las clulas sanguneas

Ncleo celular y restos de cromatina: Color prpura
Citoplasma de linfocitos: Color azul
Citoplasma de monocitos: Color grisceo
Granulaciones polinucleares
o Eosinfilos: Color naranja
o Basfilo: Color azul oscuro
o Neutrfilo: Color pardo
Eritrocitos: Color rosa plido
Reticulocitos: Color azulado
35
HEMATOLOGA GENERAL
Tanto la eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH de las diferentes
estructuras celulares, de forma que los que tienen carcter bsico fijan mayoritariamente la eosina
(carcter cido), mientras que los que poseen propiedades cidas fijan principalmente el azul de
metileno (colorante bsico). Esto explica que ciertas estructuras basfilas presentes en el ncleo
(nuclolo) o en el citoplasma (ribosomas), se tian de color azul, mientras que otros componentes
acidfilos, como la hemoglobina, adquiera un color rosado.
Dentro del grupo de colorantes tipo Romanowsky, los ms utilizados son el Giemsa y el MayGrnwald-Giemsa y el de Wright.
TINCION MAY GRNWALD GIEMSA
Es la tincin por excelencia tanto en el hemograma como en el mielograma.

Solucin May Grnwald: Solucin colorante compuesta por azul de metileno, eosina y metanol. Fija la
preparacin, diferencia y tie las sustancias acidfilas (color rojo) y basfilas (color azul) del citoplasma.
Solucin Giemsa: Mezcla de azur, eosina, azul de metileno y metanol, tie la cromatina y granos
azurfilos.
Procedimiento
1. Preparar solucin Giemsa a partir de solucin madre:
Solucin madre de Giemsa
2 gotas (1 volumen)
Solucin buffer (H2O neutra)
1ml (9 volmenes)
2. Se cubre el frotis con May-Grnwald. Dejar actuar por 3 minutos.
3. Se agrega un volumen igual al anterior de solucin de buffer (H2O neutra), con esto se provoca
un cambio de pH para activar la solucin colorante. Se deja actuar por 3 minutos (se tien las
substancias acidfilas de color rojo y las basfilas de color azul).
4. Se elimina la mezcla H2O-colorante.
5. Se cubre con la solucin recin preparada de Giemsa y se deja actuar por 8-12 minutos.
6. Se lava con abundante H2O de la llave y se deja secar al aire, inclinando la lmina para que
escurra el H2O (poniendo la cabeza hacia abajo para evitar que el exceso de agua dae la cola del
frotis), luego se limpia el reverso del portaobjeto con alcohol.
36
HEMATOLOGA GENERAL
RECUENTO DE RETICULOCITOS
Los reticulocitos son los eritrocitos ms jvenes y su nmero en sangre perifrica es el mejor
ndice de la efectividad de la eritropoyesis. Contienen restos de RNA en forma de sustancias granulo
filamentosas, los que son teidos por tinciones vitales como el azul de cresil brillante. Al cabo de uno o
dos das, los reticulocitos pierden sus redes de reticulina y se convierten en eritrocitos adultos.
Muestra: Sangre venosa tomada con EDTA.
Materiales.
Microscopio
Portaobjetos
Pipetas Pasteur
Tubos de 12 x 15 mm
Reactivo colorante
o 1 gramo de azul cresil brillante en 100 mL de solucin preparada con 20 mLde citrato de
sodio al 3,8% y 80 mL de cloruro de sodio al 0,9%*
*Disolver y filtrar.
Procedimiento
1. Depositar 3 gotas de colorante en un tubo de hemlisis.
2. Aadir igual cantidad de sangre (si el hematocrito fuese bajo agregar 1 o 2 gotas mas de sangre,
si el hematocrito es alto agregar menos).
3. Mezclar e incubar 15 a 20 minutos a 37C en Bao Mara.
4. Luego de terminar el perodo de incubacin agitar para resuspender.
5. Colocar una gota sobre un portaobjeto limpio y hacer un extendido. Dejar secar.
6. Observar con inmersin. La sustancia granulofilamentosa aparecer teida de color azul oscuro
(Figura 11).
7. Contar 1000 glbulos rojos (10 campos de 100 G.R.) y calcular el porcentaje de reticulocitos
como sigue:
Clculo:
Reticulocitos (%)
N de reticulocitos x 100
1000
37
HEMATOLOGA GENERAL
El clculo de reticulocitos proporciona una importante ayuda en la interpretacin de los

hemogramas y principalmente la capacidad de respuesta de la mdula sea en las distintas formas de
anemia.
El recuento porcentual de reticulocitos siempre debe venir referido a una concentracin normal
de eritrocitos, pues podra obtenerse un valor falsamente elevado en anemias con disminucin
importante del nmero de eritrocitos. Para evitar una falsa interpretacin se debe corregir segn el
hematocrito del paciente (siempre que este sea menor de 35%).
Clculo:
Reticulocitos corregidos (%)
Reticulocitos (%) x HTO paciente

HTO Normal (: 45 :40)
Figura 11. Tincin Azul Cresil Brillante. Se indica con flechas reticulocitos teidos.
(Dacie, JV; Lewis, S.M Hematologa Prctica 10 Edicin.)
Valores de referencia Adulto
0.5 - 1.5 %
38
HEMATOLOGA GENERAL
CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LAS CELULAS SANGUNEAS

(Ver ANEXO 2 y 3)
A diferencia de otros tejidos, la sangre est constituida por tres tipos de clulas muy diferentes entre
s, tanto desde el punto de vista morfolgico y estructural, como funcional.
Clulas nucleadas con funcin defensiva: Leucocitos
Clulas anucleadas con funcin respiratoria: Eritrocitos
Pseudofragmentos citoplasmticos con funcin hemosttica: Plaquetas
ERITROCITOS
Constituyen el componente celular ms abundante de la sangre. Debido a su elevada
diferenciacin carecen de ncleo y organelos citoplasmticos, estructuras que han sido sustituidas por
hemoglobina que ocupa la totalidad del citoplasma celular.
La tincin del frotis sanguneo mediante los colorantes habituales permite apreciar muy bien la
morfologa eritrocitaria, confirindole una tonalidad rosada caracterstica.
En una persona sana, los eritrocitos se caracterizan por la uniformidad de su tamao, forma e
intensidad de color. En el frotis sanguneo los eritrocitos destacan como corpsculos redondeados cuya
coloracin es ms intensa en la periferia que en la regin central. Ello se debe a su forma de disco
bicncavo.
Figura 12. Eritrocitos teidos con May Grnwald-Giemsa.
LEUCOCITOS
Los leucocitos o glbulos blancos constituyen un conjunto de clulas relacionadas con la funcin
de defensa del organismo frente a diversas sustancias o agentes patgenos. Son clulas nucleadas con
organelos citoplasmticos, lo que permite su diferenciacin morfolgica con los eritrocitos y plaquetas.
39
HEMATOLOGA GENERAL
Desde el punto de vista morfolgico los leucocitos se han clasificado en 2 grandes grupos:
Polinucleares cuyo ncleo es lobulado y de apariencia mltiple (neutrfilos, eosinfilos, basfilos)
Mononucleares con un ncleo y redondeado, situado generalmente en el centro de la clula (linfocitos
y monocitos).
El trmino de granulocitos, utilizado para denominar a los polinucleares es impreciso, por cuanto
cualquier leucocito, incluido monocitos y linfocitos presentan granulaciones citoplasmticas
FORMULA LEUCOCITARIA
Denominacin dada al recuento porcentual de cada subpoblacin leucocitaria.
Valores de Referencia
ADULTOS
Valores relativos (%)
Valores absolutos (cl/uL)
BASOFILOS
0 - 1%
0 - 100
EOSINOFILOS
2-4%
100 - 400
BACILIFORMES
1 - 5%
50 - 500
SEGMENTADOS
50 - 65%
2500 - 6500
LINFOCITOS
21 - 35%
1050 - 3500
MONOCITOS
4 - 8%
200 - 800
RECIEN NACIDOS
SEGMENTADOS
45 - 85%
LINFOCITOS
20 -25%
Nios hasta 5 aos
Nios mayores
SEGMENTADOS
30 - 40%
SEGMENTADOS
50 - 60%
LINFOCITOS
60 - 70%
LINFOCITOS
20 - 35%
40
HEMATOLOGA GENERAL
POLINUCLEARES
Los leucocitos polinucleares se han denominado tambin polimorfonucleares (PMN), debido a

las diferentes configuraciones que en ocasiones suele adoptar el ncleo.
De acuerdo con la afinidad de la granulacin citoplasmtica por lo colorantes, se clasifican en:
Neutrfilos
Eosinfilos
Basfilos
NEUTROFILOS SEGMENTADOS
Constituyen el 50 a 65% del total de leucocitos, siendo por tanto el tipo de leucocitos
predominante en sangre perifrica. Su dimetro vara entre los 10 y 14 um.
El citoplasma es ligeramente acidfilo (rosa plido) y contiene granulaciones de color pardo.
Estas granulaciones se encuentran distribuidas irregularmente por todo el citoplasma y su intensidad
vara a veces de manera significativa entre diferentes clulas.
El ncleo es color violeta oscuro y est compuesto de cromatina muy densa, su caracterstica
morfolgica ms destacada es la de hallarse dividido en lbulos o fragmentos separados entre s por
puentes cromatnicos muy delgados. En las formas menos maduras, el puente cromatnico que divide los
lbulos es mucho ms ancho y a veces tanto como el propio ncleo, por lo que presenta una forma de
cayado (neutrfilo en cayado o banda). El aumento patolgico de estas formas juveniles se conoce como
desviacin a la izquierda.
En un pequeo porcentaje de granulocitos, el ncleo presenta un presenta un pequeo apndice
que recibe el nombre de cromatina sexual o palillo de tambor, cuya frecuencia, muy superior en la
mujer, permite reconocer el sexo del individuo mediante la simple observacin del frotis sanguneo.
Figura 13. Neutrfilo segmentado y en banda (baciliforme).
41
HEMATOLOGA GENERAL
EOSINOFILOS
Constituyen entre el 2 a 4 % del total de leucocitos, su dimetro aproximado es de 12um.
El citoplasma es azulado y se encuentra completamente repleto de una granulacin constituida
por grnulos bien individualizados, redondos y de gran tamao, que casi nunca cubren el ncleo. Estos
grnulos contienen substancias de intenso carcter bsico, por lo que fijan solamente colorantes cidos,
tales como la eosina (granulacin acidfila) y se tien de color pardo anaranjado.
El ncleo posee una coloracin violeta algo ms tenue que el del neutrfilo y en general es
bilobulado. La polisegmentacin es rara en el eosinfilo maduro normal.
Figura 14. Eosinfilo teido con May Grnwald-Giemsa.
BASOFILOS
Constituyen el tipo de leucocitos menos abundantes en sangre perifrica, donde se encuentran
en proporcin inferior al 1%. Su dimetro vara entre 12 y 14 m. El citoplasma es acidfilo y se halla
repleto de grnulos esferoides e irregulares, que debido a su elevado contenido en compuesto con
carcter cido, fijan intensamente los colorantes bsicos.
A diferencia del eosinfilo, estas granulaciones casi siempre cubren completamente el ncleo,
aunque es relativamente frecuente observar una degranulacin parcial por efecto del lavado en el
proceso de la tincin. El ncleo presenta una forma irregular con lobulaciones, pero es difcil de visualizar
debido a que siempre se halla cubierto por los grnulos.
Figura 15. Basfilo teido con May Grnwald-Giemsa
42
HEMATOLOGA GENERAL
LINFOCITOS
Constituyen un 21 a 35% del total de leucocitos y su dimetro es variable (7 a 18um), al igual que su
aspecto morfolgico. Los linfocitos de sangre perifrica pueden diferir tambin por la relacin ncleo
citoplasma y por el nmero de granulaciones azurfilas presentes en su citoplasma.
El citoplasma es variable, pudiendo ser muy escaso (linfocito pequeo) o relativamente abundante (gran
linfocito). Su coloracin es azul plida debido a la basofilia, que le confiere su contenido relativamente
elevado de RNA. Esta basofilia aumenta considerablemente cuando los linfocitos son estimulados y se
transforman en linfocitos reactivos.
La granulacin, que es siempre azurfila, es escasa y frecuentemente se halla en un rea del citoplasma.
El ncleo es redondeado y su cromatina relativamente homognea.
Figura 16. Linfocito teido con May Grnwald-Giemsa
MONOCITOS
Los monocitos constituyen un 4 a 8% del total de leucocitos y su dimetro vara entre los 14 a 20
um).
El citoplasma es muy abundante y de color gris azulado. En ocasiones se encuentra vacuolizado y
casi siempre posee una fina granulacin azurfila dispersa por todo el citoplasma, pero especialmente
cerca del ncleo.
El ncleo suele presentar una localizacin central y su forma, aunque siempre es redondeada con
una o ms escotaduras, suele presentar importantes variaciones. Debido a su gran tamao el ncleo ocupa
gran parte del citoplasma y su cromatina es laxa, filamentosa e irregular.
Figura 17. Monocito teido con May Grnwald-Giemsa.
43
GUA PRCTICA DE HEMOSTASIA
Gua Prctica de Hemostasia

Se entiende por hemostasia a un conjunto de procedimientos que participan en la
detencin del sangrado ante la lesin de un vaso sanguneo, con la posterior formacin de un tapn
hemosttico que ocluye el vaso lesionado.
Este proceso comprende 2 fases:
Hemostasia primaria: proceso inicial que conduce a la formacin del tapn plaquetario.
Hemostasia secundaria: proceso que conlleva a la formacin de mallas de fibrina a partir del tapn
hemosttico primario, el cual al unirse a las plaquetas y factores de la coagulacin dan origen a lo
que se conoce como cogulo.
En la hemostasia intervienen factores fisiolgicos estrechamente relacionados entre s como
la pared vascular, plaquetas y factores de coagulacin, por ende cualquier alteracin es indicio de
patologa.
Pared vascular: ante una lesin se produce la contraccin y retraccin del vaso.
Funcin plaquetaria: adhesin de plaquetas al colgeno, agregacin y liberacin de

sustancias formando el tapn plaquetario primario (hemostasia primaria).
Factores de coagulacin: coagulacin propiamente tal dando origen al tapn definitivo

(hemostasia secundaria). Ocurre la retraccin del coagulo.
Fibrinlisis: se inhibe el proceso de coagulacin con la posterior reparacin del vaso

lesionado. Ocurre la cicatrizacin mediada por fibroblastos, factores y fibringeno.
Finalmente hay un restablecimiento del flujo sanguneo mediante la lisis del cogulo de
fibrina a travs de las enzimas del sistema fibrinoltico.
En resumen, la finalidad del proceso hemosttico es:
1. Mantener la composicin y fluidez de la sangre dentro de los vasos sanguneos

2. Sellar los derrames en los vasos sanguneos para detener la prdida de sangre
3. Restaurar la estructura vascular normal o repararla.
44
Para evaluar la hemostasia en el laboratorio clnico es posible examinar distintos aspectos

del proceso, el cual puede encontrase alterado por diversos factores tales como los que se describen
a continuacin:
Dficit congnito o adquirido de factores de coagulacin
Presencia en la circulacin de inhibidores de los factores de coagulacin
Fibrinlisis aumentada
Dficit o disfuncin de las plaquetas
Coagulacin intravascular seguida a la entrada en circulacin de substancias procoagulantes.
Factores externos
Las pruebas de hemostasia son reacciones sensibles y fciles de modificar por factores
externos, por lo cual es esencial considerar ciertos aspectos, como la limpieza del material,
obtencin de muestras y las condiciones de temperatura y tiempo de incubacin apropiado para la
realizacin correcta de la tcnica.
Precauciones generales
La extraccin de sangre debe hacerse en una vena adecuada y visible.
Efectuar la puncin con rapidez y sin hacer movimientos exploratorios para evitar la
contaminacin con tromboplastina tisular. Si no se obtiene sangre en la primera puncin,
hay que cambiar la aguja, jeringa y puncionar de nuevo.
Aspirar la sangre rpidamente evitando la formacin de espuma o burbujas.
Mezclar inmediatamente la sangre con el anticoagulante, es indispensable que la relacin

sangre anticoagulante sea exacta 9:1, ya que la cantidad de Ca ++ que hay que aadir est
calculada para neutralizar esa cantidad de anticoagulante.
La sangre se centrifuga a 3000rpm durante 10 minutos. Si se debe separar el plasma,

realizarlo antes de los 30 minutos siguientes a la extraccin.
Si el plasma se conserva en fro, la prueba debe realizarse durante el da dentro de 1 a 4

horas.
En ciertos casos cuando la muestra est mal tomada, el proceso de coagulacin puede
producirse por una mezcla inadecuada o tarda de la sangre con anticoagulante,
contaminacin con tromboplastina tisular, destruccin de plaquetas, suciedad del material,
hemlisis, coagulo y formacin de espuma o burbujas.
45
Recomendaciones para la realizacin de pruebas de coagulacin
Las pruebas de coagulacin deben ser procesadas lo antes posible desde su toma de
muestra, para evitar la desestabilizacin de algunos factores.
Equipos automatizados deben alcanzar temperatura ptima de trabajo. Adems de

efectuarse los controles de calidad respectivos.
Para reconstituir los controles de calidad y reactivos liofilizados utilizar agua destilada libre
de sales calcreas.
Mantener los reactivos en uso y stock refrigerados a 4C.
Las muestras de plasma que son procesadas posteriormente (ms de 4 horas o en das
posteriores) deben ser alicuotadas y almacenadas a -20 C. Sin embargo, la temperatura
ideal que se utiliza habitualmente y que permite una mayor estabilidad de los factores
lbiles es a 70C.
El nivel de aceptacin del llenado de los tubos de citrato se indica en la siguiente imagen,
respetando la relacin sangre - anticoagulante:
Imagen N 1: Llenado correcto de tubos con citrato.
46
Exmenes de Hemostasia
Las pruebas de laboratorio son indispensables para el diagnstico y seguimiento de las
alteraciones de hemostasia y para la monitorizacin del tratamiento anticoagulante. La mayora de
las pruebas se basan en medir el tiempo que tarda en formarse un cogulo de fibrina in vitro, el cual
a su vez est relacionado con la actividad de un determinado factor o de varios.
Pruebas de seleccin
Estos exmenes son recomendables de realizar previamente a una intervencin quirrgica, o
cuando se sospecha de alteraciones en el proceso de hemostasia en un paciente, en cual se pueden
observar petequias, equimosis, sangrados, hematomas entre otros.
Algunos test clnicamente importantes para el diagnstico de coagulopatas y que son
realizados en los laboratorios clnicos son:
Tiempo de protrombina
Tiempo parcial de tromboplastina activada
Tiempo de trombina
Tiempo de reptilasa DDV Test
Factores (actividad y concentracin)
Dmero D
Recuento de plaquetas y observacin al frotis
Tiempo de sangra
Fibringeno
47
Evaluacin de la hemostasia primaria

Participan en ste proceso la pared vascular, plaquetas y algunas protenas plasmticas. Las
alteraciones de estos elementos dan lugar a una hemostasia primaria insuficiente.
Evaluacin de factores vasculares

Cuando existe una lesin vascular, se produce una vasoconstriccin local que contribuye al
cese de la hemorragia. Esta vasoconstriccin depende de algunas reacciones hemodinmicas locales
y de sustancias humorales liberadas por las plaquetas. La integridad estructural de los vasos, es por
lo tanto, fundamental para prevenir la hemorragia.
Existen pruebas que miden la capacidad de los pequeos vasos sanguneos para mantener la
sangre al interior de su lumen bajo condiciones de trauma o stress.
Prueba del lazo (Prueba del torniquete o de Rumpel Leede)

Evala la resistencia de los capilares al aumentar la presin intracapilar mediante la
obstruccin del flujo venoso. Esto ocurre cuando se somete los vasos a una presin positiva. Si la
fragilidad capilar est aumentada, los capilares no son capaces de resistir el aumento de presin y
permiten la salida la sangre, lo cual se traduce en la aparicin de petequias.
Procedimiento
1) Revisar el antebrazo del paciente para observar si hay petequias previas a la prueba
2) Posicionar el esfingomanmetro en el brazo. Determinar la presin sistlica y diastlica del
paciente
3) Mantener la presin media durante 5 minutos, pero nunca excedidos los 100 mm de
mercurio
4) Liberar el brazo del esfingomanmetro e inspeccionar el antebrazo, la mueca y la mano en
busca de petequias
5) Si las petequias aparecen durante la realizacin de la prueba se suspende la presin
inmediatamente y se considera positiva.
48
Interpretacin
La reaccin puede ser valorada semicuantitativamente, informando en cruces de 1 a 4 (+),
segn sea el nmero e intensidad de las petequias.
+
Pocas petequias en nmero de 15 hasta 50, sobre la superficie anterior del antebrazo
++
Ms de 50 petequias en la misma zona
+++
Muchas petequias tanto en la superficie anterior del antebrazo, como en el dorso de la mano
++++ Petequias concluyentes en toda la superficie del antebrazo y dorso de la mano.
La aparicin de petequias puede ser tarda, por lo que el brazo debe examinarse de 5 a 10
minutos despus de haber cesado la presin, antes de considerar la prueba negativa.
Otra forma de expresar el resultado es contando el nmero de petequias en un rea
previamente delimitada. La prueba del lazo NO debe repetirse antes de una semana despus de
haberla realizado.
Imagen N 2: Prueba del lazo positiva.
49
Tiempo de sangra
Principio: esta prueba valora la capacidad hemosttica global in vivo con la finalidad de
medir el tiempo que tarda en detener el sangrado de una lesin realizada en la piel bajo condiciones
estandarizadas. Constituye una verdadera interpretacin de la hemostasia primaria, ya que el
sangramiento cesa porque las plaquetas se adhieren a la membrana basal y al colgeno para,
posteriormente agregarse, dando origen al tapn plaquetario.Por lo tanto, es una prueba que mide
el nmero y el estado funcional de las plaquetas. El mtodo deber ser confiable y estandarizado. Al
informar el resultado debe indicarse el mtodo utilizado y los valores de referencia de cada
laboratorio.
Existen 2 mtodos: mtodo de Duke e Ivy.
Mtodo de DUKE.
Mide el tiempo de duracin de sangrado desde la realizacin de una pequea incisin en el
lbulo de la oreja.
Procedimiento
1) Limpiar el lbulo de la oreja con alcohol y dejarlo secar
2) Hacer una incisin en forma horizontal con una lanceta desechable en la parte inferior del
lbulo de la oreja
3) Al momento de hacer la incisin accionar simultneamente un cronmetro
4) Cada 30 seg. con un trozo de papel filtro recoger las gotas de sangre que van apareciendo,
tratando de no tocar el cogulo que se va formando
5) Detener el cronmetro cuando cese el flujo de sangre.
Cuando la hemorragia es muy escasa o muy abundante, se recomienda repetir el
procedimiento en el otro lbulo, para descartar causas de error en la puncin. Esta prueba no es
muy aceptada, debido a la falta de reproductibilidad de los valores obtenidos.
Valores Referencia: 2 a 3 minutos
50
Mtodo de IVY
En la actualidad es el mejor mtodo para realizar esta determinacin ya que permite medir
el tiempo de sangrado de una lesin producida en el antebrazo mediante un dispositivo estril
sometida a una presin constante y bajo condiciones estndares.
Ventajas uso del dispositivo
Es desechable lo que previene las infecciones
Es prcticamente indoloro y poco traumtico lo que hace fcil de usar en nios.
Desventajas
Existe una serie de factores externos que pueden alterar el resultado del tiempo de sangra
enmascarando el verdadero diagnstico. Estos son:
Profundidad y vascularidad de la piel: Si no es muy profunda la incisin estandarizada puede

ser insuficiente para producir sangrado. Por el contrario si la zona donde se realiza la
incisin es muy vascularizada el sangrado puede ser mayor de lo habitual, aunque el
paciente no tenga sndrome hemorragparo.
Temperatura: Si el ambiente es muy fro puede ocurrir vasoconstriccin.
Longitud y profundidad de la incisin: hay mtodos donde no se ha logrado estandarizar

stos 2 parmetros no habiendo control de la incisin.
Cuando el tiempo de sangra es prolongado, indica la presencia de un defecto a nivel

vascular y/o plaquetario. Sin embargo, hay que tener en cuenta que existen anomalas plaquetarias
que cursan con tiempo de sangra normal lo que no excluye totalmente una alteracin en el
funcionamiento plaquetario.
Este examen puede encontrarse alterado en pacientes con trombocitopenia, enfermedad de
von Willebrand, trombastenia de Glanzmann, sndrome de Bernard-Soulier, enfermedad del pool de
almacenamiento y otros trastornos plaquetarios.
Inclusive para un tiempo de sangra normal se requiere de fibringeno y factor vW. Por lo
tanto, el tiempo de sangra puede alargarse en pacientes con deficiencia de ambos factores y
tambin en algunos pacientes con enfermedades renales, disproteinemias, o trastornos vasculares.
El tiempo de sangra se altera despus de la ingesta de aspirina, por lo cual es de gran
importancia el interrogatorio al paciente antes de realizar el examen.
51
Procedimiento
1) Se posiciona el esfingomanmetro en el brazo del paciente regulando la presin a 40 mm Hg.
Esta presin debe mantenerse constante durante toda la prueba
2) Seleccione una zona en el antebrazo donde la piel sea tensa, sin lesiones, vellos y no se
visualicen venas superficiales
3) Limpie la zona con alcohol 70% y deje secar
4) Coloque el dispositivo en la zona elegida. Presione suavemente estirando la piel
5) Libere el seguro del dispositivo y disprelo. Se liberara automticamente una cuchilla,
obtenindose una incisin de 5 mm (adulto) o 3,5 mm (peditrico) de longitud por 1 mm de
profundidad. Al mismo tiempo accione el cronmetro
6) Secar con papel filtro las gotas de sangre cada 30 seg, evitando tocar los bordes de la herida
para que no se desprenda el cogulo que se va formando hasta que cese de sangrar.
Valores referencia: 2 a 7 minutos.
Imagenes N 3, 4 y 5: Tiempo Sangra de Ivy.Dispositivos y generalidades del procedimiento.
52
Hemostasia secundaria
Nomenclatura, funcin y vida media de los factores de coagulacin
Factor
Sinnimo
Vida media (hrs)
Funcin
Fibringeno
96 -144
Estructural
II
Protrombina
48 - 72
Serino Proteasa
III
Factor Tisular
IV
Calcio
Factor Labil, proacelerina
VI
Cofactor / iniciador
12 24
Cofactor
NO ASIGNADO
VII
Proconvertina, Factor Estable
36
Serino protesa
VIII
Globulina o factor Antihemoflico A
8 12
Cofactor
IX
Factor Christmas o antihemoflico B
16 24
Serino protesa
Factor Stuart Prower
20 60
Serino protesa
XI
Factor Antihemoflico C
48 72
Serino protesa
XII
Factor de Hageman
48 72
Serino protesa
PK
Precalicrena o Factor de Fletcher
Aprox 36
Serino protesa
HMWK
Ciningeno de alto peso molecular
Aprox 144
Cofactor
XIII
Factor estabilizador de la fibrina
72 120
Transglutaminasa
Sistema de coagulacin
El proceso de coagulacin consiste en una serie de reacciones enzimticas en las que cada
factor es enzima y sustrato a la vez, en otras palabras es la transformacin de una protena soluble
que es el fibringeno en una protena insoluble denominada fibrina. Por ser una sucesin de
reacciones enzimticas recibe el nombre de cascada de la coagulacin.
53
La secuencia de los mecanismos en la coagulacin de la sangre puede resumirse en tres

grandes etapas:
a) Activacin de protrombina
b) Formacin de trombina
c) Formacin de fibrina
Imagen N 6: Activacin de la Protrombina mediante la va extrnseca e intrnseca de la coagulacin..
Activacin de la protrombina
El activador de la protrombina es un complejo lipoproteico formadopor factor X, factor V,
fosfolpidos (factor plaquetario III) y el in Ca++. La activacin previa del factor X puede realizarse a
travs de dos mecanismos que corresponden a la va intrnseca y extrnseca.
Va extrnseca
Se designa como va extrnseca, a aquel proceso de coagulacin que se origina tras una lesin
tisular que activa sustancias que normalmente estn fuera de los vasos sanguneos y que son
liberados como consecuencia de la lisis celular.
54
Esta sustancia liberada es una protena transmembrana denominada factor tisular (FT) que
a su vez forma un complejo con los fosfolpidos tisulares dando origen a lo que conocemos como
Tromboplastina hstica. Posteriormente se desencadena una reaccin, en la cual el FT forma un
complejo con el factor VII en presencia de Ca++, lo que produce la activacin del factor X. Este una
vez activado, junto con el factor V en presencia de Ca++, transforma la protrombina en trombina.
Imagen N 7: Va Extrnseca de la coagulacin.
Va intrnseca
Se denomina as ya que la sangre en ausencia del factor tisular, es capaz de generar por s
sola actividad procoagulante. Su inicio tiene lugar con la activacin del factor XII en el momento en
que la sangre entra en contacto con superficies extraas de carga elctrica negativa (vidrio y
silicatos) .La activacin del factor XII se inicia con una primera activacin parcial, inmediatamente
despus de entrar en contacto con superficies extraas.
55
Despus de la primera fase de activacin del factor XII (XIIa) ejerce una actividad
proteoltica sobre una protena llamada precalicrena, que se transforma en calicrena, la cual, a su
vez tiene un efecto proteoltico sobre el factor XIIa. El factor XIIa produce la activacin inmediata del
factor XI.
Tanto la formacin de calicrena como la activacin del factor XI se estimulan en presencia
de ciningenos de alto peso molecular (CAPM) que corresponde a un cofactor no enzimtico. En
presencia de Ca++, el factor XIa activa a su vez el factor IX y lo transforma en factor IXa, el cual
forma un complejo con los fosfolpidos plaquetarios, el factor VIII (catalizador) y el Ca++, capaz de
activar el factor X y transformarlo en factor Xa.
Traumatismo vaso sanguneo
Imagen N 8: Va intrnseca de la coagulacin.
Formacin de trombina
La protrombina (factor II) est presente normalmente en el plasma, pero carece de
actividad. El factor activador de la protrombina (factor Xa) formado por una u otra va, acta
transformando la protrombina en trombina en presencia de fosfolpidos de la membrana
plaquetaria, de Ca++ y del factor V como catalizador.
56
Formacin de fibrina
El fibringeno es una protena presente en el plasma formada por 3 cadenas polipeptdicas
unidas entre s por puentes disulfuros (S_S). Posee dos fibrinopptidos (A y B). Al actuar la trombina
sobre el fibringeno, se rompen los enlaces arginina glicina de la molcula de fibringeno,
producindose la liberacin de los fibrinopptidos.
La molcula de fibringeno resultante se conoce como monmero de fibrina y su carga
superficial es diferente a la molcula entera de fibringeno lo que permite la polimerizacin
espontnea con la formacin de enlaces de hidrgeno entre los monmeros, dando lugar a los
llamados cordones de fibrina quienes constituyen el primer grado de polimerizacin.
Estos cordones debido a su escasa fuerza en los enlaces se vuelven solubles en urea.
Simultneamente a ste proceso, la trombina produce la activacin del factor XIII (XIIIa) en
presencia de Ca++, siendo el factor XIIIa quien cataliza la formacin de los enlaces fuertes. Estos
enlaces se forman mediante un proceso de transglutaminacin, que consiste en la sustitucin de un
grupo amino (NH2) de un glutamato por un grupo - amino de una lisina, perteneciente a otra
subunidad. Con ello se libera una molcula de NH3, y se forma un enlace covalente muy fuerte y
capaz de resistir la accin de la urea. Este proceso estabiliza la malla de fibrina, dando lugar a la
formacin del trombo definitivo.
Fibrinlisis
Es el conjunto de procesos fisiolgicos que tiene como finalidad la destruccin del trombo de
fibrina una vez que ste ha cumplido su misin hemosttica. La fibrinolisis se realiza gracias a la
activacin de una proteasa plasmtica llamada plasmina. La plasmina se forma a partir de un
precursor plasmtico inactivo, el plasmingeno, que es una globulina que circula normalmente en
forma de proenzima.
La activacin fisiolgica del plasmingeno corre a cargo del activador hstico del
plasmingeno, sintetizado en la clula endotelial. Esta activacin tiene lugar en presencia de fibrina
y en el seno del complejo t PA -plasmingeno fibrina. En el medio plasmtico la afinidad del tPA
por el plasmingeno es muy escasa y la poca plasmina formada ser inhibida de inmediato por la
2- antiplasmina (2-AP), la cual por el contrario, no puede actuar sobre la plasmina formada en
contacto con la fibrina.Esto explica que en condiciones fisiolgicas la accin de la plasmina se limite
a la fibrina y no degrade el fibringeno y otros factores. La activacin intrnseca de la fibrinlisis
(mediante la precalicrena y la urocinasa) tendran su principal papel en el espacio extravascular.
Es as como existen numerosas pruebas de laboratorio para evaluar las distintas vas de
coagulacin, las que veremos en forma detallada ms adelante.
57
Imagen N 9: Descripcin pruebas de coagulacin.
Evaluacin hemostasia secundaria

Va extrnseca
Tiempo de protrombina (TP)
Es el tiempo necesario para la coagulacin de un plasma recalcificado en presencia de un
exceso de tromboplastina.
El plasma citratado en presencia de tromboplastina (factor tisular y una mezcla de
fosfolpidos) y cloruro de calcio se coagula a una velocidad dependiente de las actividades de la
protrombina (factor II), factor V, VII, X y fibringeno siempre que no existan inhibidores de la
reaccin.
Esta prueba se utiliza para controlar la terapia anticoagulante en pacientes que reciben
cumarnicos. Los factores II, V, VII y X son inhibidos por los cumarnicos mostrando en primer lugar
el factor VII una disminucin de su actividad.
Las situaciones que prolongan el tiempo de protrombina son dficit de vitamina K,
trastornos hepticos, tratamiento con cumarnicos y obstrucciones biliares.
58
Procedimiento:
Para la realizacin de esta determinacin se utiliza plasma fresco del paciente,
tromboplastina comercial y cloruro de Ca ++ 0,025 M. (Habitualmente el reactivo comercial
utilizado incluye la tromboplastina y Cloruro de Calcio en un solo vial).
1) Muestra: Sangre obtenida con citrato de sodio en proporcin 1:9
2) Centrifugar la muestra 3.000 rpm por 10 minutos
3) Incubar los reactivos por mnimo 5 minutos
4) Pipetear 100 l de plasma (muestra paciente) en una copa de reaccin.
5) Incubar la muestra a 37 C durante 60 a 120 segundos
6) Agregar 200l de tromboplastina mezclada con el Ca++. Activar cronometro. (En el caso que
el reactivo de calcio sea independiente, se debe proceder a agregar 100 l de tromboplastina
y 100l de cloruro de calcio).
7) Esperar la formacin del cogulo con la detencin del cronometro.
8) Hace algn tiempo, los resultados que se obtenan en segundos se transformaban a
porcentaje mediante el empleo de una tabla de conversin. Actualmente los equipos de
coagulacin entregan los resultados en segundos y porcentajes.
9) Si se efectan las determinaciones manualmente, se aconseja realizarlas en duplicado sin
exceder los 0,5 segundos entre una y otra determinacin. Si el paciente se encuentra con
TAC, la determinacin siempre debe hacerse en duplicado.
Valores de referencia: 70 a 100% equivalente de 11 a 14 segundos.
Nota: La tromboplastina comercial liofilizada se reconstituye segn las indicaciones de cada

fabricante, homogeneizndola suavemente. Una vez reconstituida se coloca en el panel
temorregulado del equipo hasta que se estabilice la temperatura a 37 C por lo menos durante 5
minutos antes de iniciar la determinacin.
59
Control del tratamiento anticoagulante oral

Se ha utilizado diferentes modos de expresar los resultados del tiempo de protrombina
debido a la utilizacin de diferentes equipos y valores de referencia lo que ha dificultado su
interpretacin principalmente cuando el paciente tiene que ser trasladado de un centro asistencial a
otro. Por lo tanto, fue necesario establecer un mtodo de informe que estandarice los resultados
instaurando la utilizacin de la razn de protrombina y el clculo del radio o razn normalizada
internacional (INR). Este clculo requiere que conozcamos la sensibilidad de nuestra
tromboplastina (dato aportado por el fabricante) expresada como ISI. Conocido este valor, se realiza
la siguiente frmula:
INR: Relacin entre el valor obtenido de la protrombina del paciente y la protrombina normal
elevados al ISI.
ISI: ndice de sensibilidad de la tromboplastina hstica utilizada. Especificada en cada lote del kit
comercial.
Sensibilidad: Capacidad para discriminar fcilmente entre un plasma normal y uno anormal.
Plasma control: 12 segundos
INR normal: 1
INR TACO: 2-3
Este valor de INR es utilizado y recomendado sobre todo para el control de la terapia
anticoagulante, ya que existe una adopcin casi universal de l, ya que permite minimizar las
diferencias ocasionadas por las diferentes tcnicas, siendo ms fcil comparar los resultados entre
diferentes laboratorios, ya que aun usando las mismas tromboplastinas pueden existir diferencias
significativas en la expresin porcentual de la actividad, la que es prcticamente despreciable al ser
expresadas en INR. Ejemplo:
Tenemos: TP paciente= 27 segundos, TP control= 12 segundos e ISI = 1,15
INR= 27/12
INR = (2,25)1,15
INR = 2,54
El tiempo de protrombina es ms sensible a las deficiencias del factor VII y luego la de los
factores X, II y V. Las deficiencias de estos factores pueden ser conjuntas o nicas.
60
Exploracin va intrnseca
Tiempo tromboplastina parcial activada (TTPA)
Esta tcnica mide el tiempo de coagulacin de un plasma pobre en plaquetas recalcificado en
presencia de cefalina, fosfolpido similar al factor plaquetario 3. Adems, se aade una sustancia que
facilite la activacin del sistema de contacto (caoln), por eso el nombre del anlisis es de tiempo
tromboplastina parcial activada.
La tromboplastina parcial se obtiene de extractos tisulares ricos en tromboplastina tales
como cerebro y placenta, siendo el complejo proteico de estos extractos el que posee propiedades
coagulantes. Por medio de la utilizacin de solventes orgnicos como el cloroformo, se extrae sta
porcin lipdica que se denomina tromboplastina parcial que acta como un sustituto plaquetario
cumpliendo el mismo papel que el factor plaquetario-3, siendo las ms usados la cefalina y la
inositina.
Como sustancias activadores se usa caoln, cido elgico, celite y silica. Algunos laboratorios
presentan la sustancia activadora y el sustituto plaquetario en forma separada, otros la presentan
en un solo reactivo junto.
Materiales:
Plasma pobre en plaquetas (PPP) obtenido de una muestra de sangre tomada con citrato de
sodio 3,2 % y centrifugada a 3000 rpm durante 10 minutos.
Tromboplastina parcial (cefalina)
Nota: Dentro de los activadores el

ms utilizado es el caoln por ser ms
sensible en detectar deficiencias leves
de los factores VIII y IX y niveles bajos
de heparina. El tiempo normal
depende de la tcnica y reactivos
utilizados.
Activador (caoln)
Cloruro de Ca 0,025 M
Procedimiento:
1) Pipetear 100l de plasma pobre en plaquetas en un vial
2) Agregar 100l de suspensin de cefalina o suspensin cefalina activador, dejar incubar 2 a 3

minutos a 37C
3) Terminada la incubacin se agrega 100l de CaCl2 esperando la formacin del cogulo.
Valores referencia
30 -50 seg.
61
El TTPA evala el sistema intrnseco de la coagulacin con excepcin del FP3, debido
a que usa un sustituto plaquetario. Tampoco mide factor VII, ya que participa en la va extrnseca, ni
al factor XIII que acta despus que se ha formado al cogulo de fibrina y sta tcnica como la
mayora de las pruebas de coagulacin, miden el tiempo que tarda en formarse el coagulo de fibrina,
ningn evento que ocurra despus.
Un TTPA alargado puede indicar hemofilia A y B algn inhibidor de factores VIII, IX y XI,
anticoagulantes circulantes.
Tiempo coagulacin de Lee and White

Esta tcnica fue muy utilizada antiguamente para medir la va intrnseca de la coagulacin y
tambin para el control de la terapia anticoagulante. Mide todas las etapas de la va intrnseca, pero
su utilidad es limitada.
Se encuentra prolongado en casos de hemofilia moderada, afibrinogenemia, estados
fibrinolticos agudos y ante la presencia de anticoagulantes (heparina).
Materiales y procedimiento
1) La tcnica consiste en extraer sangre con una puncin venosa exacta
2) Tomar el tiempo desde que la sangre aparece en la jeringa con un cronmetro
3) Repartir 1 ml en cada uno de 3 tubos de vidrio de 12 x 75 mm , llevarlos a bao mara a 37C
4) A los 5 minutos, se ladea el tubo 1 hasta un ngulo de 45, repetir sta operacin cada 30
seg, sin que su contenido se derrame, hasta que toda la sangre se haya coagulado
5) Repetir la operacin con el tubo 2 y 3
6) Registre el resultado de los 3 tubos y calcule el promedio
6 a 11 minutos
62
Nota: Algunas observaciones a tener presentes al realizar la prueba

Colocar exactamente 1 ml de sangre en cada tubo, una cantidad superior puede prolongar el
tiempo de coagulacin.
El resultado puede estar disminuido si la puncin ha sido defectuosa, ya sea por hemlisis o
mezcla de sangre con tromboplastina tisular.
Respetar la temperatura constante de 37C del bao mara.
No agitar excesivamente los tubos, ya que acorta los tiempos de coagulacin.
Actualmente sta prueba no se utiliza por su falta de reproductividad, lo difcil de

estandarizar y por el tiempo que conlleva, siendo reemplazada el TTPA que brinda mayor
informacin, sensibilidad y reproductividad.
Tiempo de trombina
Mide el tiempo que tarda en coagular el plasma en presencia de una cantidad de trombina
estandarizada. Es una forma de medir el tiempo de transformacin del fibringeno en fibrina. Esta
transformacin depende de la cantidad y calidad del fibringeno presente.
La reaccin es alterada por la presencia de inhibidores tales como la heparina y los
productos de degradacin del fibringeno y/o fibrina (PDF), lo que interfieren en la accin de la
trombina sobre el fibringeno.
Se necesita para la prueba plasma citratado como control, plasma paciente y una solucin de
trombina. La trombina a utilizar puede ser bovina o humana, debe diluirse de tal forma que un
plasma normal de un tiempo de protrombina entre 18 y 22 seg. Lo importante es establecer sus
valores segn la tcnica a utilizar y obtener un rango de valores que le permita discriminar entre un
paciente normal y uno anormal.
La solucin de trombina una vez reconstituida de su forma liofilizada se deteriora
rpidamente, por lo cual se debe separaren alcuotas y conservarlas a -20C.Para ajustar la trombina
es necesario diluir la trombina comercial de acuerdo a las instrucciones y a partir de su
reconstitucin que generalmente equivale a 50U/ml, se preparan diluciones de 10 U/ml y de 3
U/ml; sta ltima es la dilucin que se usa para realizar la prueba.
63
Procedimiento
1) Colocar en un tubo de hemlisis 100 l de plasma e incubar un minuto
2) Agregar 200l de la solucin de trombina ajustada, mezclar y medir el tiempo de
coagulacin.
Valor de referencia*
14 a 21 segundos
*Valores de referencia debe ser estandarizado respecto del reactivo y bajo las condiciones del fabricante
Determinacin de fibringeno
Esta tcnica evala la fase terminal del proceso de coagulacin, debe realizarse despus de
un tiempo de trombina prolongado para verificar si la causa es una hipofibrinogenemia.
La prueba es til para el tratamiento y pronstico de ciertos desrdenes hemorrgicos como
CID, desrdenes hepticos, infarto al miocardio.
Existe una gran variedad de mtodos basados en diferentes principios, por lo tanto, al
seleccionar un mtodo ste debe reunir las condiciones de sencillez, rapidez y confiabilidad.
Mtodo de precipitacin por calor (Millar y col)

El fibringeno humano precipita por calor a 56C. La medida de la altura del precipitado
despus de su centrifugacin es directamente proporcional a su concentracin en el plasma.
Procedimiento
1) Llenar con plasma pobre en plaquetas un tubo de macrohematocrito con una pipeta pasteur
2) Colocarlo en bao mara durante 20 minutos a 56C
3) Centrifugar 30 minutos a 3000 rpm, al cabo de ste tiempo el fibringeno habr precipitado
4) Se procede a la centrifugacin por 10 minutos ms a 2000 rpm y se mide la cantidad de
fibringeno precipitado.
64
Cada graduacin del tubo de macrohematocrito corresponde a 100mg por 100ml de

plasma. Si se usa un tubo no graduado se puede usar una regla milimetrada, donde 1mm
correspondera a 1mg.
Este mtodo tiene la desventaja de que es poco preciso, debido a su sencillez y rapidez. Debe
tenerse en cuenta que los productos de degradacin de la fibrina precipitan tambin a 56C, as
tambin lo hacen algunas macroglobulinas, dando cifras altas de fibringeno.
Valores referencia
200-400 mg por 100 ml de plasma
Mtodo evaluacin fibringeno por diluciones

Procedimiento
1) Se toman 10 tubos de hemlisis y se coloca en cada uno 1ml de suero fisiolgico
2) Al primer tubo se le agregar 1ml de PPP, se mezcla y se pasa 1ml al segundo tubo
3) As sucesivamente continuar con el proceso hasta el tubo N 9, cuyo sobrenadante se
elimina, dejando el tubo 10 sin plasma.
4) Llevar los tubos a 37C por 10 minutos.
5) Agregar 0,1ml de trombina a cada tubo, dejar reposar sin moverlos, inclinar los tubos uno
por uno a los 10 minutos y observar en cual se ha producido la coagulacin y no se vierte
lquido, lo cual ocurre normalmente en la dilucin 1/64 o 1/ 128.
Este mtodo es muy fcil y puede servir en forma espordica por su fcil interpretacin,
pero slo permite medir groseramente si existe una disminucin, aumento o normalidad de la
cantidad de fibringeno.
En caso de no disponer de trombina, puede usarse suero normal fresco, pero en cantidades
mayores (0,5- 1 ml).
65
Retraccin de coagulo
Una vez coagulada la sangre y dentro de un periodo de unos 20 minutos comienza la
retraccin del coagulo o sinresis. Con sta retraccin se exprime lentamente el suero y al mismo
tiempo, le cogulo se vuelve ms firme, disminuye de tamao y se desprende de las paredes.
En la retraccin del cogulo intervienen un equilibrio de fuerzas:
A) La tendencia a retraerse de las redes de fibrina, que actan en un sentido
B) En sentido contrario, las fuerzas que oponen los elementos figurados a ser comprimidos.
La tendencia a retraerse depende especialmente de la presencia y actividad de las plaquetas.

Existe indudablemente una explicacin mecnica, si se tiene en cuenta que estos elementos sirven
de apoyo a los filamentos de fibrina, formando mallas.
La temperatura tiene gran influencia en la retraccin del cogulo, pero no solamente en
cuanto a la velocidad, sino tambin sobre la capacidad de retraccin.
Procedimiento
1) Tomar 5 ml de sangre sin anticoagulante y vaciarla a un tubo de 15mm de largo. Despus de
coagulada, se incuba una hora a 37C.
2) La disminucin del tamao del cogulo o la aparicin de suero entre ste y la pared del tubo,
significa que ha habido retraccin y puede servir de medida orientadora del grado de
retraccin.
3) Vertiendo el suero y midiendo su volumen es posible su valorizacin aproximada.
Retraccin del cogulo: % en centimetros de suero x 50
NOTA: Este clculo es vlido si el volumen mnimo de sangre venosa en el examen es de 2cc.
Retraccin del cogulo (%) = CC de suero x 100
CC de sangre
Valores referencia
40 a 60%
66
Lisis del coagulo

El cogulo utilizado para efectuar la retraccin, se puede conservar a 37 C y examinarse a
las 8 -24 48 y 72 horas para comprobar si se ha producido lisis. Normalmente esto no ocurre antes
de 72 horas.
Si el cogulo inicialmente formado se vuelve fluido en menos de este tiempo puede hablarse
de una lisis de cogulo normal. Se indica el momento en que se ha observado la lisis como tiempo de
lisis del cogulo. Si ste no se produce, el resultado se expresa como ausencia de lisis despus de 48
y 72 horas.
Factor estabilizador de la fibrina

EL factor XIII conocido como factor estabilizador de la fibrina, tiene como misin conferir al
coagulo de fibrina una forma ms estable. Se cree existe en forma inactiva en el plasma siendo
activado por la trombina en el curso de la transformacin del fibringeno en fibrina. La trombina al
actuar sobre el fibringeno conduce a la formacin de fibrina soluble, la cual es mecnicamente
frgil y se disocia fcilmente en los monmeros que la constituyen cuando se pone in vitro, en
presencia de inhibidores de enlaces de hidrgeno como es la solucin de urea 5M o de cido
monocloroactico al 1%
El factor XIII una vez activado por la trombina, transforma la fibrina soluble en insoluble en
presencia de iones de calcio, mediante la formacin de enlaces covalentes entre los monmeros de
fibrina.
Esta tcnica consiste en coagular un plasma con la adicin de cloruro de calcio y analizar el
cogulo frente a la adiccin de urea al 5 M. Si no existe factor XIII en el plasma del paciente, dicho
cogulo desaparecer en menos de 24 horas disuelto por la urea.
Procedimiento
1) Se toman 2 tubos de hemlisis, a uno se le agregan 0,5 ml de plasma problema y al otro 0,5
ml de plasma control
2) Se agregan 0,5ml de cloruro de calcio 0,025 M a cada tubo
3) Se incuban durante 20 minutos a bao mara a 37C
4) Desprender los cogulos del fondo del tubo y agregar 5ml de urea 5M a cada tubo
5) Dejar los tubos a temperatura ambiente durante 24 horas, observar el aspecto de estos
durante las 3 primeras horas y luego a las 24 horas
6) Registrar el tiempo transcurrido hasta la disolucin del cogulo del paciente. Si despus de
24 horas el cogulo permanece inalterado, indica que no hay deficiencia de factor XIII
7) En ausencia del factor XIII el cogulo se disuelve generalmente al cabo de 2 a 6 horas.
67
Bsqueda de inhibidores
En ciertas ocasiones ocurre un desequilibrio hemosttico debido a la presencia de
anticuerpos llamados inhibidores adquiridos de la coagulacin o anticoagulantes circulantes que
interfieren en el proceso de coagulacin evidencindose sangrados espontneos o cuadros de
trombosis. De estos se conocen 2 tipos:
Inhibidores: corresponden a aquellas sustancias que bloquean las reacciones entre los
factores de coagulacin tales como el Ac lpico, PDF.
Inactivadores: corresponden a aquellos que actan sobre un determinado factor
destruyndolo.
Frente a esta eventualidad se procede a realizar una mezcla entre un plasma paciente con un
plasma normal, ya que constituye una forma rpida de diferenciar entre un dficit de factor (es) y
un inhibidor de coagulacin. Esto se explica, ya que a un plasma deficiente en 1 o ms factores de
coagulacin, si se le adiciona un plasma normal este corregir el valor de la prueba alterada. En
cambio, si la prolongacin persiste se trata de inhibidor.
La distincin de si un inhibidor es de accin inmediata como la heparina o si es de modo
progresivo como el anti F VIII, depende del efecto que produce el plasma que contiene el inhibidor
al incubarlo con un plasma normal a diferentes tiempos.
Procedimiento
1) Rotular 3 tubos : Tubo 1 plasma control
Tubo 2 plasma paciente
Tubo 3 partes iguales plasma control/plasma paciente
2) Realizar un TTPA (TP o TT) a cada tubo. Incubar a 37C.
3) A los 30 minutos de incubacin preparar una mezcla fresca de plasma control /plasma
paciente y realizar un TTPA (TP o TT). Tambin realizar esta determinacin al tubo 3 ya
incubado.
4) Repetir este procedimiento a los 60 y 90 minutos.
5) A los 120 minutos realizar TTPA (TP o TT) a todos los tubos, incluido a una mezcla fresca.
Ejemplo Bsqueda de Inhibidores, con TTPA.
Tiempo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Mezcla
(min)
Fresca 1:1
0
35
63
50
30
56
53
60
60
53
90
70
55
120
40
69
75
59
En este ejemplo se evidencia la

presencia de un inhibidor, ya que el
TTPA del tubo 3 a los 0 minutos est
alargado con respecto al tiempo del
tubo 1 control, es decir la mezcla no
corrige el TTPA, por lo tanto la
alteracin del tiempo no se debe a la
deficiencia de un factor de la
coagulacin
68
Interpretacin
TP alargado
TTPA alargado
TTPA y TP Alterado
TT alargado
TP Anormal
TP mezcla plasma normal/ paciente 1:1
No corrige
Corrige
Inhibidor Factor
Cuantificar factor VII
VII
Dficit factor VII
TTPA Anormal
TTPA mezcla plasma normal / paciente 1:1
No corrige
Corrige
Inhibidor
Dficit de Precalicrena,
KAPM, XII, VII, IX
Ac Lpico y Ac anti factor
TTPA y TP anormal
TTPA y TP mezcla plasma normal / paciente 1:1
No corrige
Corrige
Inhibidor
Cuantificar Dficit
factor II, V, X, I
Ac Lpico y Ac anti factor
TT anormal
TT mezcla plasma normal / paciente 1:1
No corrige
Corrige
Inhibidor tipo heparina y
Hipo o afrinogenemia
PDF aumentado
Disfibrinogenemia
Los anticoagulantes circulantes llamados lpicos son muy frecuentes. Estos consisten en
anticuerpos antifosfolpidos sin accin anticoagulante in vivo pero que se asocian a complicaciones
trombticas y abortos a repeticin. Se presentan en pacientes con LES, colagenosis o neoplasias. En
cambio, los anticuerpos espontneos dirigidos contra un determinado factor de la coagulacin son
muy raros. El factor VIII es afectado con mayor frecuencia generando cuadros hemorrgicos graves.
Los pacientes hemoflicos pueden desarrollar inhibidores contra el factor que carecen en respuesta
a la terapia sustitutiva.
69
Determinacin factores VIII y FVW

Idealmente las muestras deben centrifugarse y procesarse inmediatamente despus de su
obtencin. Sin embargo, hay laboratorios en los cuales las muestras no se procesa diariamente, slo
se procede con la centrifugacin y almacenaje del plasma a -80 C hasta su realizacin.
A nivel local, la realizacin de este tipo de exmenes consta de una doble centrifugacin a
2000 rpm durante 10 minutos. Posteriormente se almacena una alcuota de plasma en un tubo de
procedimiento rotulado y se lleva a-80 C.
FVW: Ag
El ensayo FVW:Ag es una inmunoturbidimetra amplificada con partculas de ltex que
permite cuantificar FVW:Ag en plasma. Cuando se mezcla un plasma que contiene FVW:Ag con el
Reactivo Ltex y el Tampn de Reaccin, las partculas de ltex aglutinan. El grado de aglutinacin
es directamente proporcional a la concentracin de FVW:Ag contenida en el plasma y se determina
midiendo el descenso de la luz transmitida causado por los agregados.
Factor VIII o IX
Las muestras de plasma con deficiencia de factor VIII y IX tienen tiempos de TTPA ms
prolongados de lo normal. Por ende cuando a una muestra de paciente se mezcla con un plasma del
cual ya conocemos que contiene una deficiencia de factores especficos, se produce una correccin
en el tiempo de coagulacin que es proporcional al nivel de dicho factor en el plasma del paciente. El
procedimiento se efecta en base a diluciones de un calibrador y de la muestra paciente segn las
siguientes proporciones 1:5, 1:10,1:20,1:40.
70
PRECAUCIONES ESTANDAR
ANEXO 1. PRECAUCIONES ESTANDAR

GOBIERNO DE CHILE
MINISTERIO DE SALUD
SERVICIO DE SALUD VALDIVIA
HOSPITAL BASE VALDIVIA
Comit de I.IH.
DRA.MCCP/ENF.NFLA/nfla.
NORMA N 6
EX PRECAUCIONES UNIVERSALES CON SANGRE Y FLUIDOS
CORPORALES Y
PRECAUCIONES CON SECRECIONES
INTRODUCCIN:
Existen actualmente varias enfermedades que pueden ser transmitidas a travs de la
sangre, como la Hepatitis B, SIDA, Jacob Crautzfeldt, entre otras.
Muchos de estos pacientes infectados con los agentes de las enfermedades
mencionados pueden permanecer asintomticos por largos perodos de tiempo, sin embargo ser
infectantes para los dems. Por ese motivo el equipo de salud debe considerar a todos los pacientes
como potencialmente infectados con algunos de estos agentes y adoptar rigurosamente las
precauciones para minimizar el riesgo de exposicin a material infectante proveniente de cualquier
paciente.
EL RIESGO DEL PERSONAL DE LA SALUD DE ADQUIRIR LA INFECCIN
DURANTE LA PRACTICA PROFESIONAL ESTA ASOCIADO PRINCIPALMENTE A
LA EXPOSICIN PARENTERAL CON SANGRE INFECTADA
OBJETIVO:
Prevenir la transmisin de Infecciones Intrahospitalarias desde los pacientes al
personal con microorganismos que se transmiten por el contacto con la sangre y fluidos corporales.
DIRIGIDO A:
- Profesionales Mdicos, Qumicos Farmacuticos, Bioqumicos, Dentistas, Enfermeras, Matronas,
Tecnlogos Mdicos, Kinesilogos, Nutricionistas.
- Tcnicos Paramdicos, Auxiliares, Choferes.
71
DEFINICIONES:
PRECAUCIONES UNIVERSALES:
Son el conjunto de procedimientos destinados a minimizar el riesgo de adquirir enfermedades por el
personal de la salud al exponerse a productos biolgicos potencialmente contaminados en la prctica
clnica. Debido a que todos los pacientes pueden ser potenciales portadores de patologas que se
transmiten por la va parenteral, sin tener un diagnstico objetivable, LAS PRECAUCIONES
UNIVERSALES deben aplicarse en la prctica de la atencin de cualquier paciente en todo
momento y en cualquier mbito de la atencin de salud, siendo esto lo que les confiere el carcter de
Universales.
PRECAUCIONES CON SECRECIONES O SUSTANCIAS CORPORALES:

Se considera a todos los fluidos (sangre, heces, orina, expectoracin, saliva, secreciones y pus
entre otros) de todos los pacientes como potencialmente infectantes.
PRECAUCIONES ESTANDAR:
Sintetiza las caractersticas principales de la precauciones universales (reduccin del riesgo de
transmisin de agentes infecciosos que se transmiten por la sangre) y precauciones con secreciones o
sustancias corporales (reduccin del riesgo de trasmitir agentes infecciosos por fluidos corporales)
Todos los fluidos (sangre, heces, orina, expectoracin, saliva, secreciones y pus entre otros), con o
sin sangre visible y las mucosas y piel no intacta, de todos los pacientes se consideran
potencialmente infectantes.
FLUIDOS CORPORALES:
Se entiende por fluido corporal a todas las secreciones o lquidos biolgicos, fisiolgicos o
patolgicos que se producen en el organismo.
FLUIDOS CORPORALES DE ALTO RIESGO:
Se aplican siempre a la sangre y a todos los fluidos que contengan sangre visible. Se incluyen
adems el semen y las secreciones vaginales, leche materna y aquellos lquidos provenientes de
cavidades normalmente estriles como: lquido cefalorraquideo, lquido sinovial, lquido peritoneal,
lquido pericrdico y lquido amnitico, saliva en caso de procedimientos invasivos en cavidad
bucal. Se considera de alto riesgo por constituir fuente de Infeccin de virus de hepatitis B, VIH y
otros agentes que se transmiten por la va parenteral.
FLUIDOS CORPORALES DE BAJO RIESGO:
Se aplican a las deposiciones, secreciones nasales, expectoracin, transpiracin, lgrimas, orina o
vmitos a excepcin de aquellos que tengan sangre visible.
EXPOSICIN SIGNIFICATIVA:
Se considera a toda inoculacin percutnea o exposicin de piel o mucosas con erosin o
lesin reciente a instrumentos contaminados con fluido corporal de alto riesgo.
SEROCONVERSIN:
Se considera al viraje de la condicin serolgica de un paciente, conocida como negativa
hacia positiva, respecto a un agente patgeno determinado.
72
1. LAVADO DE MANOS:
Se debe realizar antes y despus de atender a los pacientes. Norma N 4 .
2. BARRERAS PROTECTORAS
A. Deben usarse en todo procedimiento que exista riesgo de estar expuesto a fluido corporal de
alto riesgo y bajo riesgo.
B. Deben usarse cuando el personal tiene lesiones en las manos, transformndose en una puerta
de entrada de microorganismos.
GUANTES deben cambiarse entre cada paciente y deben ser colocados con lavado
clnico de manos previo. Para realizar cualquier puncin venosa deben usarse guantes
debido a que reduce el riesgo de la contaminacin de la piel de las manos con sangre y
disminuye el inculo al producirse un accidente por cortopunzante contaminado con
fluido de alto riesgo.
MASCARILLAS, ANTEOJOS PROTECTORES se deben usar en los procedimientos
que con frecuencia se producen aerosoles o salpicaduras de sangre, fluido corporal de
alto o bajo riesgo.
PECHERAS IMPERMEABLES su uso est indicado en los procedimientos en que con
frecuencia se producen derrames o salpicaduras de sangre u otro fluido corporal de alto o
bajo riesgo.
SI DURANTE EL PROCESO DE ATENCIN DE CUALQUIER PACIENTE , LA
PIEL O LAS MANOS DEL PERSONAL ENTRA EN CONTACTO CON SANGRE U
OTRO FLUIDO CORPORAL, ESTAS DEBERN LAVARSE DE INMEDIATO
CON ABUNDANTE AGUA Y JABN ANTISPTICO.
3. EVALUAR EL RIESGO DE ACCIDENTES CORTOPUNZANTE DURANTE LA
REALIZACIN DE PROCEDIMIENTOS CLNICOS.
A. MATERIAL DESECHABLE se utilizar agujas y hojas de bistur desechables en todos
los pacientes, las que en ningn caso se reutilizarn en otro paciente. Todo este material
se desechara en cuanto cese su uso.
B. MANIPULACIN DE LAS AGUJAS utilizadas: no deben ser recapsuladas, dobladas o
quebradas intencionalmente o manipuladas con las manos.
C. La remocin de las agujas de las jeringas no deber hacerse con las manos y deber
utilizarse una pinza o dispositivo de caja de seguridad.
D. MANIPULACIN DE HOJAS DE BISTUR Y MATERIAL CORTANTE durante el
acto quirrgico se recomienda evitar el contacto a ciegas y el intercambio de instrumental
quirrgico directamente entre las manos del cirujano y la arsenalera, se recomienda que
ste sea dejado en un lugar del campo operatorio para evitar lesiones en el momento de la
intervencin.
73
4.
DESCONTAMINACIN DEL MATERIAL CONTAMINADO

DEFINICIN DESCONTAMINACIN: Bajar la carga microbiana de una superficie
sucia para minimizar los riesgos en el personal.
A. CORTOPUNZANTE NO DESECHABLE: eliminar la materia orgnica sumergiendo
el material con agua tibia y detergente, sin manipularlo en forma excesiva con las
manos. El personal debe realizar el procedimiento con guante de goma grueso. Despus
esterilizar con los procedimientos habituales.
B. NO CORTOPUNZANTE: lavar con detergente y uso de guantes. Despus esterilizar
con los procedimientos habituales.
TODO MATERIAL CONTAMINADO CON FLUIDO CORPORAL QUE NO
SE ESTERILICE (frascos de medicin de diuresis, frascos de exmenes no
microbiolgicos, otros), POSTERIORMENTE AL LAVADO DEBE SER
DESINFECTADO SUMERGINDOLO EN CLORO 0,5% .
LA DESCONTAMINACIN CON AGENTES QUMICOS PREVIA AL
LAVADO NO ES EFICIENTE, PUES LA ACCIN DE LOS
DESINFECTANTES SE ALTERA CON LA MATERIA ORGNICA (sangre,
secreciones, sueros, pus, etc.). EL PROCESO DE DESCONTAMINACIN
CON AGENTES QUMICOS SOLO DA UNA FALSA SENSACIN DE
SEGURIDAD.
5.
PRECAUCIONES AL ELIMINAR EL MATERIAL CONTAMINADO

CORTOPUNZANTE DESECHABLE: Bistur, hojas de rasurar, agujas, jeringas:
A. Debe ser eliminado por el personal que realiza el procedimiento.
B. Debe ser eliminado en receptculos resistentes a las punciones, deben llenarse solo a 2/3
de su capacidad, para evitar accidentes en la manipulacin posterior del envase.
C. Debe no manipularse su contenido, no deben cambiarse de envase.
DEBE ROTULARSE CORTOPUNZANTE, CONTAMINADO INCINERAR.
Debe incinerarse.
EL MATERIAL DE VIDRIO NO CONTAMINADO DEBE SER ELIMINADO EL
LA BASURA COMN, PROTEGIDO EN CAJAS RESISTENTE, ROTULADO
VIDRIO. EJEMPLO: mamaderas, ampollas de medicamentos, DEBE ROTULARSE
MATERIAL CORTANTE NO CONTAMINADO.
NO CORTOPUNZANTE:
Apsitos de curaciones, secreciones con sangre, equipos de administracin de transfusiones.
A. Deben eliminarse en bolsa impermeables.
B. Debe manipularse con barreras mecnicas, guantes de seguridad.
DEBE ROTULARSE CONTAMINADO INCINERAR
74
6.
MANEJO DE DERRAMES:
A. Debe limpiarse la superficie con detergente y luego aplicar Cloro 0,5 % o alcohol 70 %.
B. Todos los procedimientos de limpieza debern ser realizados con guantes
7. TRANSPORTE DE MUESTRAS:
A. El llenado de los frascos ser realizado con precaucin para evitar el derrame por sus
costados.
B. Los frascos debern ser transportados en cajas de seguridad tapadas y el personal que las
transporta debe manipularlas con guantes.
C. Los gases arteriales deben ser tapados con tapn combi sin aguja.
8. MANIPULACIN LECHE MATERNA: Debe considerarse como fluido de alto riesgo.
A. La leche materna recolectada en lactarios deber seguir solo la va madre-hijo y no podr
ser
utilizada en otros nios.
B. El personal debe manipular este fluido con guantes.
9. ASPIRACIN DE SECRECIONES EN EL RECIN NACIDO:
A. Debe realizarse mediante mquina de aspiracin o algn sistemas de pipetas desechables
que elimine el riesgo del personal de tener contacto con secreciones.
10. REANIMACIN: Ante la necesidad de reanimacin
A. Deber utilizarse bolsas autoinflables (Amb r), con mascarilla o tubo endotraqueal, no
deber realizarse respiracin boca a boca sin una proteccin.
11. MANEJO DE ROPA SUCIA:
A. La ropa sucia deber ser almacenada en servicios clnicos en bolsa impermeable.
B. La ropa sucia debe ser transportada en carro cerrado.
C. El personal que manipula ropa sucia debe usar elementos de proteccin; guantes de goma
gruesa, mascarilla, lentes y pecheras plsticas que permita el libre desplazamiento.
D. El personal que manipula ropa sucia debe hacerlo con zapatos y ropa de uso exclusivo, la
que no debe salir del rea sucia de Lavandera.
E. El personal de lavanderia posterior a la manipulacin de ropa sucia, debe ducharse.
F. El personal que labora en el sector de ropa sucia no debe ingerir alimentos en el interior
del recinto.
12. PRECAUCIONES AL ELIMINAR DESECHOS BIOLGICOS
DESECHOS BIOLGICOS: Son el conjunto de residuos orgnicos constituidos por
tejidos u rganos humanos o animales.
A. Deben eliminarse separados de la basura comn y rotulados.
B. Deben ser incinerados o enviados a la fosa comn del cementerio.
C. La sangre lquida puede eliminarse al desage.
75
D. La sangre lquida contenida en receptculos de drenajes desechables hermticos debe ser

eliminada en forma separada puesto que durante su incineracin puede haber estallido
del receptculo con la consiguiente exposicin de los manipuladores.
E. Deposiciones de los pacientes, an en portadores de microorganismos que producen
infecciones entricas (virus de hepatitis A, Salmonella, Vibrio Cholerae, entre otras), no
requieren tratamientos especiales para eliminarse por el W.C.
13. TRANSPORTE DE CADVERES:
A. Deben ser transportado en bolsa de polietileno grueso, debidamente identificado.
B. El personal debe usar guantes para su manipulacin.
14. ELIMINACIN DE MEDIOS DE CULTIVO:
A. Los medios de cultivos bacteriolgicos utilizados, sern eliminados separados de basura
comn en la seccin de Microbiologa.
B. Los medios de cultivos sern autoclavados.
C. Luego sern eliminados en la basura comn del Laboratorio Central y el material
reciclable, lavado de acuerdo a norma establecida.
EL CUMPLIMIENTO DE LA NORMATIVA ES UN DEBER

DE RESPONSABILIDAD CON NOSOTROS.
76
BIBLIOGRAFA:
Normas de infecciones intrahospitalarias, MINSAL 1993.
Mandell, Benett, Enfermedades infecciosas 3 Ed. Vol.2 Cap. 276 Infecciones Nosocomiales.
1991.
Precauciones universalescon sangre y fluidos corporales. Actualizacin de circular 3/F 17 1988.
Circular 3F/68 MINSAL 1989.
Recomendaciones y actualizacin de la normativa de aislamiento de pacientes del programa de
Infecciones Intrahospitalarias Circular 46 MINSAL 1998
Guideline for Isolation Precautions in HospitalsJulia S. Garner, RN, MN, and the Hospital
Infection Control Practices Advisory Committee, CDC Atlanta 1998,
SRA. NORA F. LEAL ALARCN

Enfermera Comit de I.IH.
Hospital Base Valdivia
DRA. M CAROLINA CRUZ PAREDES

Mdico Comit de I.IH.
DR. JAVIER LEN RIVERA

Director
Actualizacin Octubre 2004

Actualizacin octubre del 2001.
Actualizacin septiembre 1997
Elaboracin junio 1994
77
ALTERACIONES MORFOLOGICAS DE LA SERIE ERITROIDE
ANEXO 2. ALTERACIONES
MORFOLOGICAS DE LOS
ERITROCITOS
Los eritrocitos constituyen el componente celular ms abundante de la sangre. Debido a su

elevada diferenciacin carecen de ncleo y organelos citoplasmticos, estructuras que han sido
sustituidas por hemoglobina que ocupa la totalidad del citoplasma celular.
La tincin del frotis sanguneo mediante los colorantes habituales permite apreciar muy bien la
morfologa eritrocitaria, confirindole una tonalidad rosada caracterstica.
En una persona sana, los eritrocitos se caracterizan por la uniformidad de su tamao, forma e
intensidad de color. En el frotis sanguneo los eritrocitos destacan como corpsculos redondeados cuya
coloracin es ms intensa en la periferia que en la regin central. Ello se debe a su forma de disco
bicncavo. La observacin de la morfologa de los glbulos rojos tiene un gran valor diagnstico,
especialmente en los diferentes tipos de anemia. A continuacin describiremos las alteraciones ms
comunes en la rutina del laboratorio de hematologa.
Figura 1. Morfologa normal del eritrocito
78
ANISOCITOSIS
Corresponde a la desigualdad en el tamao de los hemates. Es una caracterstica inespecfica, aunque

constante es los glbulos rojos de los enfermos transfundidos
Figura 2. Dibujo esquemtico de anisocitosis.
MICROCITOSIS
Caracterstica: Predominio de hemates de dimetro < 6 m y VCM< 80 fl.
Causas: Insuficiencia medular y envejecimiento del GR.
Patologas asociadas: Anemia ferropnica, talasemia, anemia de enfermedades crnicas,
hipertiroidismo, dficit de PK.
Figura 3. Microcitos
MACROCITOSIS
Son hemates de un dimetro entre 8 y 11 m y VCM>100 fL. Usualmente normocrmicos pero pueden
ser hipocrmicos.
La macrocitosis junto con la policromatofilia significa, en general, eritropoyesis regenerativa e
hiperactividad medular.
79
Se ve asociada a dficit de factores madurativos (vitamina B 12, cido flico), es el caso de las anemias
megaloblsticas o anemia perniciosa. Tambin se observa en hepatopatas crnicas, sndromes
mielodisplsicos, eritroblastosis fetal, en recin nacidos, y en prdida masiva de sangre.
Figura 4. Macrocitos
MEGALOCITOS
Caracterstica: Predominio de hemates de dimetro mayor a 12 m y VCM > 100fL.
Causas: Dficit de vitamina B 12 y/o Acido flico que produce alteracin en la sntesis de ADN, con esto
disminuye la divisin y maduracin celular.
Patologas asociadas: Anemias megaloblsticas (A. Perniciosa: falta factor intrnseco)
TODAS LAS ANEMIAS MEGALOBLASTICAS CURSAN CON MACROCITOSIS,

PERO NO TODAS LAS MACROCITOSIS SON ANEMIAS MEGALOBLASTICAS.
DIMORFISMO (Poblacin Dimrfica o doble poblacin celular).

Se observa esta doble poblacin de eritrocitos a consecuencia de transfusiones sanguneas y tratamiento
con hematnicos en fase de recuperacin. Al frotis se ven eritrocitos con distintas caractersticas
morfolgicas, que corresponden en el primer caso a glbulos rojos del paciente (hipocromos), junto a
eritrocitos que pertenecen a la unidad de sangre transfundida que son morfolgicamente normales.
Figura 5. Doble poblacin celular, indicado por flechas se indican eritrocitos de distinta poblacin celular.
80
ALTERACIONES DE LA COLORACION
POLICROMATOFILIA
Se visualiza en eritrocitos jvenes que an contienen ARN en su citoplasma (reticulocitos). Generalmente
son ms grandes que los eritrocitos normales. Se observan azulados. Son indicadores de regeneracin
medular activa.
Estn presentes en pacientes con anemia hemoltica inmune con respuesta medular eritroide, como
respuesta al tratamiento de fierro en anemia ferropnica, en recin nacidos y muy abundante en
eritroblastosis fetal.
Figura 6.Policromatofilia
HIPOCROMIA
Corresponde a la disminucin de hemoglobina intracelular soluble. Los eritrocitos slo presentan un

delgado halo de hemoglobina rodeando a una amplia rea central de palidez. Generalmente son
microcticos. Se observa en patologas que tengan un dficit de sntesis de hemoglobina debido a falta de
hierro, talasemia y algunas hemoglobinopatas. Adems en dficit de liberacin de hierro de sus lugares
de almacenamiento y anemia sideroblstica.
Figura 7. Eritrocitos hipocromos
81
POIQUILOCITOSIS.
Se define como la diferencia en las formas de los eritrocitos, es una caracterstica inespecfica de
cualquier trastorno sanguneo.
Los poiquilocitos se producen en muchos tipos de eritropoyesis anmala; por ejemplo, la anemia
megaloblsticas, anemia ferropnica, talasemia, mielofibrosis (tanto idioptica como secundaria), la
anemia diseritropoyetica congnita y los sndromes mielodisplsicos.
Los poiquilocitos no son nicamente caractersticos de la eritropoyesis alterada, sino que se encuentran
tambin en diversas anemias hemolticas congnitas causadas por defectos de la membrana y en
trastornos adquiridos como la anemia hemoltica microangiopatica.
Figura 8. Poiquilocitosis marcada
CRENOCITOS O EQUINOCITOS
Son eritrocitos con espculas o proyecciones cortas, distribuidas regularmente por toda la superficie.
La mayora de las veces son consecuencia de un artefacto durante el secado rpido o por exposicin a
soluciones hiperosmticas.
Patologas asociadas: Dficit de piruvatocinasa, uremia, hepatopatas neonatales, carcinomas
gstricos, lcera pptica, sangre conservada, falla renal o deshidratacin severa.
Figura 9. Crenocitos.
82
KERATOCITOS (o Hemates en casco)

Son hemates maduros, caracterizados por dos proyecciones citoplasmticas que se parecen a cuernos.
Ocasionalmente, puede observarse un solo cuerno.
Patologas asociada: Anemia hemoltica microangioptica, hemlisis por fragmentacin mecnica
intravascular asociada anormalidades valvulares. Se pueden observar tambin en: glomrulo nefritis,
deficiencia de piruvato kinasa.
Figura 10. Keratocitos
ELIPTOCITOS
Son hemates alargados de extremos casi simtricos y contorno regular. Su causa principal es el dficit
hereditario de la protena de membrana espectrina.
Patologas asociadas: Su aparicin es inespecfica, es abundante en eliptocitosis
hereditaria, pero tambin puede observarse en anemias megaloblsticas, ferropenia y
talasemias.
Figura 11. Eliptocitos en Eliptocitosis hereditaria
83
ESQUISTOCITOS
Corresponden a fragmentos celulares, debidos a roturas de la membrana, son hemates fragmentados de
2-3 m y menos frecuentemente eritrocitos contrados de forma irregular.
Patologas asociadas: anemias hemolticas por fragmentacin mecnica, sndrome hemoltico urmico,
prpura trombtica trombocitopnica, microangiopatas del embarazo y puerperio. Coagulacin
intravascular diseminada, prtesis valvulares, anemia hemoltica microangioptica.
Figura 12. Esquistocito
DACRIOCITOS
Dacriocitos viene del griego dakryon que quiere decir lgrima. Son hemates con una proyeccin
elongada en un polo (forma de pera o lgrima).
Patologas asociadas: Anemias graves y en mielofibrosis idioptica.
Figura 13. Dacriocitos
ESTOMATOCITOS
Son hemates maduros que muestran en su regin central ms clara una hendidura en forma de boca. Se
produce por la falta de una protena estructural de la membrana eritrocitaria.
Patologas asociadas: Estomatocitosis hereditaria, cirrosis heptica, hepatopata
enfermedades hepticas obstructivas, anemias hemolticas por autoanticuerpos.
alcohlica,
84
Figura 14. Estomatocitos
CODOCITOS (target cell o clulas en diana)

Son hemates maduros con un rea en la que se concentra una mayor cantidad de hemoglobina en una
zona central clara, que les confiere un aspecto parecido a una diana.
Se presentan asociados a talasemia, hepatopatas crnicas, hemoglobinopatas de tipo C,
postesplenectoma y anemias ferropnicas muy graves.
Figura 15. Codocitos
ESFEROCITOS
Son hemates esfricos y uniformemente coloreados (sin aclaramiento central). Tienen un volumen algo
ms pequeo que las clulas normales.
Estn asociadas a esferocitosis hereditaria, anemia hemoltica autoinmune y quemaduras graves.
Figura 16. Esferocitos
85
SICKLE CELLS O DREPANOCITOS

Drepanocitos viene del griego drpanos que quiere decir hoz. Estos eritrocitos tienen forma de
medialuna u hoz.
Resulta de la presencia hereditaria de Hb S anormal en lugar de Hb A. Cuando la Hb S pierde el oxgeno,
tiende a formar polmeros que deforman los glbulos rojos, los cuales adquieren forma de hoz. Para
estos efectos se realiza el test de Sickling, en el cual se agrega in vitro un agente desoxigenante a la
sangre del paciente y si el 25% o ms de Hb es Hb S, las clulas tomarn forma de hoz.
Patologas asociadas: Anemia Falciforme o Drepanoctica, hemoglobinopatas y en otros tipos de
hemlisis.
Figura 17. Drepanocitos
HEMOGLOBINOPATIA C
La hemoglobina C forma agregados en el interior de la clula lo que puede originar la formacin de

fragmentos o de esferocitos. Es causada por la mutacin del gen de globina lo que se traduce en la
sustitucin de un aminocido (glutamina por lisina) en la cadena .
Las inclusiones de la Hemoglobina C se producen por la precipitacin de la Hb normal que tienen una
solubilidad menor y por la deshidratacin celular asociada se origina una hipercromasia.
Figura 18. Enfermedad de hemoglobina C, flecha indica eritrocitos con cristal de Hb.
86
INCLUSIONES ERITROCITARIAS
CUERPOS DE HOWELL-JOLLY
Son inclusiones eritrocitarias redondeadas de alrededor de 1 m de dimetro, que se tien con MGG de
color violceo. Corresponden a restos de ncleo del eritroblasto (ADN) que quedan adheridos a la
membrana del eritrocito. Generalmente son lisos, excntricos y nicos. Normalmente aparecen cuando
ha habido una esplenectoma. Tambin se observan en anemia megaloblstica grave, o anemia
hemoltica post esplenectoma.
Figura 19. Eritrocitos con corpsculos de howell-jolly
PUNTEADO BASOFILO
Es la presencia de agregados de grnulos ribosmicos, o sea este glbulo rojo posee un alto contenido
de ARN. Generalmente estos glbulos rojos son ms grandes que los normales. Al frotis se observan
azules.
Causas: Reticulocitosis, intoxicacin por plomo, debido a que este se deposita en mdula sea
interfiriendo con el metabolismo del hierro (en este caso se acompaa de anemia microctica
hipocrmica). La patologas asociadas a esta caracterstica son la anemia hemoltica inmune con
respuesta medular eritroide a la hemlisis o Intoxicacin por plomo.
Figura20. Eritrocitos con punteado basfilo
87
CUERPOS DE PAPPENHEIMER
Esta inclusin eritrocitaria corresponde a hierro citoplasmtico que no ha sido integrado a la
hemoglobina en mdula sea. Son de pequeo tamao, basfilas (de color casi negro) y normalmente se
alojan en la periferia del eritrocito. Su naturaleza puede confirmarse por medio de una tincin de Perls.
Patologa asociada: Anemia refractaria sideroblstica.
Figura 21. Cuerpos de Pappenheimer
ANORMALIDADES DE MEMBRANA
AGLUTINACION
En este caso los eritrocitos forman grupos que recuerdan a un racimo de uvas pequeo o grande.
Se presentan en anemias hemolticas inmunes causada por crioaglutininas (IgM).
Nota: difcil de diferenciar con el fenmeno de pilas de monedas o rouleaux que se presenta en el
mieloma mltiple.
Figura 22. Autoaglutinacin
Figura 23. Rouleaux
88
ALTERACIONES MORFOLOGICAS DE LA SERIE GRANULOCITICA LINFOIDE
ANEXO 3.
ALTERACIONES MORFOLOGICAS DE LA SERIE

GRANULOCITICA Y LINFOIDE
SERIE GRANULOCITICA.
Granulacin txica.
La granulacin txica o granulacin patolgica es el trmino utilizado para describir el aumento de
la densidad de la tincin. Representa un exceso de granulacin primaria o azurfila, que corresponden a
lisosomas con elevada actividad mieloperoxidasa.
Se produce frente a inflamacin e infecciones bacterianas, a menudo, asociado a la observacin de
vacuolas.
Puede ser tambin una caracterstica de la administracin del factor estimulador de las colonias de
granulocitos y presentarse de forma fisiolgica durante el embarazo.
Figura 1.Neutrfilo con Granulacin txica
Figura 2. Neutrfilo normal
Hay trastornos hereditarios raros que se manifiestan por medio de neutrfilos anmalos. En la
anomala de Alder Reilly, los grnulos son muy grandes y bien diferenciados, se tien de un rojo intenso
y pueden impedir la visin del ncleo. Otros leucocitos, incluyendo algunos linfocitos, muestran tambin
grnulos anmalos. En el sndrome de Chediak-Higashi se observan grnulos azurfilos gigantes, aunque
escasos y puede haber afectacin de los otros tipos leucocitarios. Los neutrfilos de Alder- Reilly
funcionan normalmente, pero en el sndrome de Chediak- Higashi hay un defecto funcional que se
manifiesta por la susceptibilidad a las infecciones graves.
89
Figura 3. Sndrome de Chediak-Higashi.

Neutrfilos con grnulos azurfilos anmalos.
Figura 4. Anomala de Alder-Reilly.

El ncleo no es visible debido a los
grnulos citoplasmticos.
Vacuolas.
En las extensiones sanguneas realizadas sin demora, la presencia de vacuolas en los neutrfilos
suele indicar la existencia de una sepsis grave cuando coexiste con la presencia de granulacin toxica.
Las vacuolas aparecern como artefactos cuando la sangre se ha conservado de forma
prolongada antes de realizar la extensin.
Figura 5. Neutrfilo con vacuolas citoplasmticas.
90
Cuerpos de Dhle.
Son inclusiones citoplasmticas que corresponden a estructuras pequeas redondeadas u
ovaladas y de color gris azulado plido. Habitualmente se encuentran en la periferia de los neutrfilos.
Estn formados por agregados paralelos de retculo endoplsmico y ribosomas.
Se observan en infecciones bacterianas y pueden estar asociados a otros cambios reactivos de
los neutrfilos, como la granulacin patolgica y/o desviacin izquierda.
Figura 6. Neutrfilo con cuerpos de Dhle indicados por flechas.
Anomala de May-Hegglin.
Trastorno hereditario benigno que se caracteriza por la presencia de trombocitopenia con
macroplaquetas y grandes inclusiones con una estructura morfolgica similar a Cuerpos de Dhle
aunque no idntica.
En este trastorno, las inclusiones se presentan en todos los tipos de leucocitos con ausencia de
granulacin txica, a excepcin de los linfocitos.
Figura 7. Neutrfilo con anomala de May-Hegglin indicada por flecha
91
Anomala de Pelger-Het.
Trastorno benigno hereditario en el que los ncleos de los neutrfilos no se segmentan de
manera adecuada. La mayora de los neutrfilos circulantes tienen nicamente dos lbulos diferenciados
de igual tamao conectados por un puente delgado de cromatina. La cromatina esta toscamente
aglomerada y el contenido de los grnulos es normal.
Una anomala morfolgica adquirida similar, conocida como las clulas seudo-Pelger o la
anomala adquirida de Pelger-Huet, puede observarse en los sndromes mielodisplsicos, en la leucemia
mieloide aguda con maduracin displsica y, en ocasiones, en la leucemia mieloide crnica (durante la
fase acelerada).
Figura 8. Neutrfilo Pelger-Huet
Hipersegmentacin de los neutrfilos.

Se observa neutrfilos con ncleos de ms de 5 segmentos.
Es una caracterstica diagnostica importante de las anemias megaloblsticas, donde puede
observarse neutrfilos grandes con ncleos de seis o ms segmentos conectados por puentes de
cromatina extremadamente finos.
Adems se puede ver hipersegmentacin tras tratamientos citotxicos
Figura 9. Neutrfilo Hipersegmentado
92
Neutrfilos Picnticos
Normalmente pueden encontrarse en sangre pequeas cantidades de clulas muertas o en
proceso de morir, sobre todo si hay una infeccin. Ms frecuentemente pueden aparecer en la sangre
normal in vitro tras permanecer durante 12-18 h, incluso si se mantiene a 4 C. Estas clulas tienen
ncleos redondos, densos y sin rasgos sobresalientes y su citoplasma tiende a ser rosa oscuro. Es
importante no confundir estas clulas con eritroblastos.
Figura 10. Neutrfilo picntico
SERIE LINFOIDE
Linfocitos Reactivos.
Las clulas linfoides reactivas son de mayor tamao que un linfocito normal, un ncleo de perfil
redondeado de cromatina poco condensada y un citoplasma amplio y de moderado a intensamente
basfilo. Existe un predominio de la basofilia en la periferia de la clula (reborde hiperbasfilo), cuyo
citoplasma muestra una tendencia a adherirse a los eritrocitos cercanos.
Su aparicin se debe generalmente a infecciones de etiologa vrica.
Figura 11. Linfocitos Reactivos
93
HEMOGRAMA AUTOMATIZADO
ANEXO 4. HEMOGRAMA
AUTOMATIZADO
El hemograma como prueba de laboratorio permite tener una visin global de la homeostasis del
sistema hematopoytico, de ah la importancia de que se evalen el mayor nmero de parmetros y,
sobretodo, de que stos tengan la mayor precisin y exactitud posibles, caractersticas que fcilmente se
pueden lograr gracias a los grandes avances en el laboratorio de hematologa mediante la incorporacin
de autoanalizadores de alta eficiencia.
No existe un mtodo nico para contar clulas, lo cual implica que hay en el mercado varios
modelos de contadores hematolgicos y cada uno de ellos realiza su funcin de una manera
determinada; aunque, como es lgico, los parmetros que miden y los resultados de sus mediciones s
son los mismos.
Recuento electrnico
La medida del nmero de clulas, ya sea eritrocitos, leucocitos o plaquetas, en la mayora de los
autoanalizadores de hematologa suele realizarse simultneamente con el tamao de las clulas y para
ello aprovechan las variaciones que se presentan en un campo electromagntico en el cual se suspenden
las clulas objeto del estudio. Desde el punto de vista tecnolgico, los recuentos electrnicos de
eritrocitos y plaquetas se hacen utilizando la impedancia elctrica, por el contrario en el caso de
leucocitos se realiza el recuento y diferenciacin mediante citometra de flujo.
Este documento describir los mtodos y tcnicas que utiliza especficamente el contador
SYSMEX de ROCHE, utilizado en la Unidad de Hematologa de la Universidad Austral de Chile.
Recuento de eritrocitos
Consiste en determinar la cantidad de eritrocitos en sangre perifrica por unidad de volumen por
microlitro (L).
Impedancia elctrica
Tambin conocida como principio Coulter, en honor al ingeniero Wallece Henry Coulter quien lo
describi en 1956, no slo revolucion la hematologa sino que inici la era de los autoanalizadores con
excelente eficiencia analtica (precisin y exactitud), y ha aportado nuevos parmetros de utilidad clnica.
El mtodo se basa en la resistencia que presentan las clulas, que no son conductoras elctricas, al paso
de la corriente elctrica cuando atraviesan un pequeo orificio, conocido como orificio de apertura
que separa dos medios con diferente potencial. Cada vez que una clula atraviesa el orificio de apertura
se presenta un cambio en la resistencia elctrica que el instrumento interpreta como un impulso que es
proporcional al volumen del lquido electroltico desplazado. Bajo estas circunstancias, los impulsos
representan el tamao o volumen de las clulas y el nmero de clulas que atraviesan el orificio de
apertura es proporcional a su concentracin en el medio electroltico.
94
Mediante la computadora incorporada al equipo, con el nmero y el tamao de los pulsos se

construye un histograma conocido como histograma de volmenes. El nmero de pulsos determina el
nmero clulas de acuerdo con la dilucin de stas en la solucin conductora; a su vez, la intensidad de
los pulsos determina el tamao de las clulas. La distribucin y el tamao de los mismos identifica las
poblaciones celulares y los coeficientes de variacin de cada una de ellas en el histograma.
Figura 1. Principio de Impedancia.

Gracias a la incorporacin del enfoque hidrodinmico, que se esquematiza en la figura 2, se
obliga a las clulas a fluir hacia la regin en donde son analizadas con una trayectoria bien definida,
como una hilera perfecta, estrecha y estable de clulas inmersas en el lquido electroltico, que permite
tener un histograma con distribucin gaussiana.
Figura 2. Sistema de flujo hidrodinmico
95
El anlisis del histograma de eritrocitos permite visualizar la poblacin de eritrocitos

normocticos, microcticos y macrocticos. Adicionalmente, es posible evidenciar la presencia de doble
poblacin eritrocitaria que el TM al momento de informar el hemograma, debe describir. Esta situacin
es frecuente en pacientes postransfundidos y en pacientes que estn recibiendo terapia con hematnicos
en la fase de recuperacin, en donde coexisten dos poblaciones de eritrocitos: los del paciente y los del
donante en el primer caso (ver figura 3), o los viejos y los nuevos en el segundo caso.
Eritrocitos Normocticos
VCM: 89.8 fL
Hb: 8.4g/dl
HCM: 31.7 pg
HTO: 23.8%
CHCM: 32.3g/dL RDW: 13.2%
Eritrocitos Microcticos
VCM: 57.6 fL
Hb: 7g/dl
HCM: 15 pg
HTO: 27%
CHCM: 26 g/dL
RDW: 14.6 %
Doble poblacin eritrocitaria

VCM: 82.3 fL
Hb: 12.8g/dl
HCM: 27.6 pg
HTO: 38%
CHCM: 33 g/dL
RDW: 23.2 %
Eritrocitos Macrocticos
VCM: 122.4 fL
Hb: 13.9g/dl
HCM: 41 pg
HTO: 41%
CHCM: 34 g/dL
RDW: 17.3%
Figura 3. Histograma Eritrocitos
Determinacin de Hemoglobina.
Los eritrocitos contienen una mezcla de hemoglobina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina,
metahemoglobina y cantidades mnimas de otras formas de hemoglobina menores. Cuando se mide la
hemoglobina se est determinando la suma de todas estas formas y para hacerlo los eritrocitos que la
contienen deben ser lisados convirtindose todas estas formas, excepto la sulfahemoglobina, en un
compuesto estable, conocido como cian metahemoglobina, que puede ser medido en un espectrmetro
a 540 nm, ya sea por mtodos manuales o por tecnologa automtica incorporada a los autoanalizadores
de hematologa como hemoglobinmetros.
Acorde con las corrientes actuales, preocupadas por el medio ambiente y la salud ocupacional,
con el conocimiento de que la hemoglobina por el mtodo convencional de la cian metahemoglobina es
una tcnica sucia que utiliza cianuro que aparte del peligro contamina el medio ambiente, los
autoanalizadores de hematologa de la marca Sysmex han incorporado a los instrumentos otro tipo de
hemoglobinmetro que en vez de cian metahemoglobina utiliza lauril sulfato sdico, una sustancia
atxica tanto para el medio ambiente como para el personal del laboratorio clnico. Una parte de la
96
sangre aspirada es diluida en un agente lisante, el lauril sulfato de sodio, que transforma la hemoglobina
en lauril sulfato de sodio-metahemoglobina (metahemoglobina sdica de lauril sulfato) que tiene un pico
de mxima absorcin a 555 nm, que es medido por el hemoglobinmetro incorporado al autoanalizador
La incorporacin de los autoanalizadores de hematologa a la rutina de los laboratorios clnicos,
adems de que recuper la precisin y la exactitud de los parmetros convencionales, ha entregado a la
comunidad mdica nuevos parmetros de verdadera utilidad clnica, en particular el ancho de
distribucin de los eritrocitos, el ancho de distribucin de la hemoglobina y el recuento de reticulocitos,
como se analizar a continuacin.
Ancho de distribucin de los eritrocitos (ADE)

El ancho de distribucin de los eritrocitos, tambin denominado RDW por red cell distribution
width o ndice de anisocitosis, es un parmetro exclusivo del hemograma electrnico y representa el
coeficiente de variacin, expresado en porcentaje, del tamao de los eritrocitos. En la mayora de los
autoanalizadores de hematologa, el ancho de distribucin de los eritrocitos es calculado como un
porcentaje de la variacin de los tamaos de los eritrocitos en el histograma de volumen de rojos.
Los autoanalizadores de hematologa Sysmex obtienen dos tipos de ancho de distribucin de
los eritrocitos:
El coeficiente de variacin del ancho de distribucin de los eritrocitos (RDW-CV) que
corresponde al concepto universal del parmetro, como se representa en la figura 4A, y
La desviacin estndar del ancho de distribucin de los eritrocitos (RDW-SD), que se representa
en la figura 4B
Figura 4. Ancho de distribucin de Eritrocitos
97
Recuento de reticulocitos.
Tradicionalmente el recuento de reticulocitos se ha considerado como un examen
complementario que el mdico y el laboratorio clnico solicitan y realizan como una prueba
independiente del hemograma. Gracias a la tecnologa incorporada a los autoanalizadores de
hematologa es posible integrar el recuento de reticulocitos, y otros nuevos parmetros de l derivados.
Gracias a la incorporacin a mediados de la dcada de los 80 de la naranja de tiazol al arsenal de
reactivos de citometra de flujo, se pueden medir los reticulocitos en el laboratorio clnico con una
excelente precisin y exactitud, con coeficiente de variacin alrededor del 4%.
Los autoanalizadores marca Sysmex han incorporado dentro de los parmetros constitutivos del
hemograma, el recuento de reticulocitos y los parmetros con l relacionados como las subpoblaciones
de acuerdo con la fluorescencia (elevada (HFR), media (MFR) y baja (LRF)) que corresponden al grado de
maduracin de los mismos, en donde los primeros son los reticulocitos ms jvenes o inmaduros, en
tanto que los ltimos representan los reticulocitos ms maduros y cercanos al eritrocito adulto. En la
figura 5 se muestra un citograma correspondiente al estudio de reticulocitos y las subpoblaciones de
estos.
Un parmetro relacionado con los reticulocitos con futuro en el mbito clnico es el ndice de
reticulocitos inmaduros (IRF, ver figura 5)que corresponde a la sumatoria de los reticulocitos de media y
alta fluorescencia, ya que permite identificar con mayor antelacin la recuperacin de la medula sea
postransplante puesto que aparecen a los 13 das, a diferencia de los neutrfilos que aparecen a los 27
das y las plaquetas a los 38 das y en este mismo sentido, se considera que un incremento del 2% en la
fraccin de reticulocitos inmaduros durante dos das consecutivos es indicador sensible de la
recuperacin de la actividad de la medula sea.
Figura 5. Escatergrama de reticulocitos
98
Recuento total de leucocitos

La mayora de los contadores diferenciales automatizados actualmente disponibles utilizan la
citometra de flujo incorporada en un contador de sangre total en vez de ser nicamente contadores
diferenciales. Cada vez ms, los contadores automatizados de clulas sanguneas tienen la capacidad de
realizar un recuento diferencial, proporcionando ya sea un recuento diferencial de tres componentes o
de cinco a siete componentes.
Los autoanalizadores Sysmex han incorporado dentro de su tecnologa el flujo continuo y la
medida de la dispersin de luz laser a dos ngulos diferentes transformndose en citmetros de flujo,
que asociado a la aplicacin de fluorescencia permite obtener un diferencial de 5 poblaciones (frmula
diferencial leucocitaria, ver figura 8).
Mtodo de la Dispersin Lumnica.

La interaccin de la luz con una clula modifica su direccin pero no su longitud de onda,
produciendo una dispersin de la misma en todas las direcciones del espacio. Este mtodo de anlisis
celular permite reconocer tamao, concentracin de las clulas y adems la complejidad de la estructura
celular (p/e granularidad y caractersticas del ncleo) (ver figura 7).
Este mtodo consiste en analizar el efecto que ejercen las clulas sobre un haz de luz
monocromtica de alta intensidad (lser) al pasar por su trayectoria una a una. La sensibilidad y
exactitud depender en gran medida de que las clulas en suspensin fluyan por un ncleo central sin
mezclarse con el lquido de arrastre. El lugar donde se produce el encuentro entre las clulas y el haz de
luz laser es la cmara de flujo (flow cell). Las clulas acceden a ella en pequeos grupos, trasportadas por
el lquido de arrastre y una vez en su interior, mediante enfoque hidrodinmico (figura 2) son alineadas
de manera que queden bien centradas en relacin con el haz de lser para poder ser analizadas
individualmente. Cada vez que una clula se interpone en el haz de luz laser se produce una interrupcin
del paso de fotones o sombra que se difracta (cambia de sentido por efecto de la superficie celular),
refracta (cambia de velocidad por efecto de las estructuras celulares y refleja (invierte el sentido por
efecto de las estructuras opacas). La suma de todos estos efectos es la dispersin lumnica que
normalmente es detectada por sensores situados a dos ngulos diferentes: ngulo recto (90) o
fotomultiplicador (Photo Multiplier) y ngulo cnico pequeo (0,5 10) o fotodetector (Photo Diode)
(figura 6).
La luz dispersada en ngulo recto (90) se conoce como dispersin lateral y es producida por las
diferencias del ndice de refraccin de las estructuras celulares. Su intensidad es por tanto directamente
proporcional a la complejidad de la estructura interna de las clulas que a su vez depende de sus
componentes bsicos (lobularidad del ncleo, granulacin de citoplasma). La luz dispersada en ngulo
cnico pequeo se conoce como dispersin frontal y su intensidad es directamente proporcional al
tamao de la clula y por tanto al volumen. Al igual que el mtodo de impedancia, a partir del nmero
de veces por unidad de tiempo que se interrumpe el paso de la luz sobre el campo oscuro se calcula la
concentracin de las clulas en el sistema de anlisis (ver figura 7).
99
Mtodo de Fluorescencia
Se utilizan fluorocromos o molculas que absorben luz a una longitud de onda y la emiten a una
longitud superior. Cuando un fluorocromo es excitado por una fuente de luz laser, adquiere una energa
que es emitida en forma de longitud de onda lumnica diferente a la de excitacin. El espectro de
absorcin o excitacin es el rango sobre el que un fluorocromo absorbe luz, y el espectro de absorcin o
excitacin es el rango sobre el que un flurocromo emite luz. La energa de excitacin es absorbida por lo
que la luz emitida tiene menor energa. La fluorescencia es al menos 100 veces ms sensible que la
impedancia y cada clula genera una seal luminosa que es recogida por un detector y ampliada para su
posterior transformacin en datos numricos (figura 6 y 7).
Figura 6. Esquema de un citofluormetro.
Figura 7. Esquema de dispersin de luz de un leucocito.
100
Figura 8. Escatergrama leucocitario.
Recuento de Plaquetas
Las plaquetas pueden ser contadas y analizadas mediante la impedancia y la dispersin ptica. La
impedancia, similar a la que permite hacer el recuento de eritrocitos, es el sistema ms utilizado en los
autoanalizadores de hematologa para el recuento de plaquetas. La segunda alternativa para el recuento
de plaquetas es la dispersin ptica. En el caso de los autoanalizadores de hematologa Sysmex se utiliza
la impedancia de rutina y la dispersin ptica slo para los casos en donde hay trombocitopenia o hay
alarmas que as activen el software para dicho objetivo, como se muestra en la figura 9.
Adems de los recuentos plaquetarios, los autoanalizadores obtienen otros parmetros de
utilidad clnica relacionados con las plaquetas: volumen plaquetario medio,
Volumen plaquetario medio

El volumen plaquetario medio, define, en fL como unidad de volumen, el tamao de las
plaquetas. Es un parmetro homologo al VCM de los eritrocitos.
El valor de referencia del volumen medio plaquetario es de 6,5 a 13,5 fL. Debe insistirse en el
hecho de que cada laboratorio clnico debe definir sus respectivos valores de referencia de acuerdo con
la poblacin y la instrumentacin que pueden modificar los parmetros de un lugar a otro.
Utilidad clnica
El volumen plaquetario medio determina los conceptos de micro y macroplaquetas, para
referirse a plaquetas de tamao pequeo o grande, de ah la importancia de la calidad (exactitud y
precisin) de la medicin. Desde el punto de vista de la utilidad clnica, el volumen medio plaquetario es
un parmetro que mide la funcin y la activacin de las plaquetas y en este sentido podra afirmarse que
101
cuando est elevado es un signo de "regeneracin plaquetaria" como usualmente se presenta en

pacientes con trombocitopenia por destruccin perifrica de plaquetas, tanto inmunolgica como no
inmunolgica, en donde caractersticamente hay aumento de la megacariopoyesis con hiperplasia
megacarioctica en la medula sea.
Contrario a lo anterior, cuando la trombocitopenia est relacionada con un defecto de la
produccin de plaquetas, el volumen medio plaquetario se encuentra por debajo de lmite inferior. Se
pueden observar en pacientes con sepsis, con anemia aplstica, con anemia perniciosa, con leucemias
agudas, en los sndromes mielodisplsicos, en la leucemia linfoctica crnica, posterior a tratamientos de
radioterapia y quimioterapia.
Ancho de distribucin de las plaquetas
Similar al ancho de distribucin de los eritrocitos, que determina el grado de anisocitosis
(diferencias en el tamao) de los eritrocitos, el ancho de distribucin de las plaquetas, determina el
grado de anisocitosis de las plaquetas. El ancho de distribucin de las plaquetas se deriva de clculos
mediante frmulas matemticas incorporadas al instrumento, de la misma manera que se obtiene el
ancho de distribucin de los eritrocitos, y se correlaciona estrechamente con el recuento de las
plaquetas y el volumen medio plaquetario.
Figura 9. Histogramas de: 1 Plaquetas normales, 2 Trombocitopenia (Recuentos por Impedancia)

Escatergrama de: 3 Plaquetas normales, 4 Trombocitopenia (Recuento por dispersin lumnica)
102
BIBLIOGRAFA GENERAL
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Dacie, J.V.; Lewis, S.M. 2008. Dacie y Lewis, Hematologa Prctica. 10ma Ed. Editorial Elsevier.
Merino, A. 2005. Manual de Citologa de sangre perifrica. Ed. Grupo Accin Mdica.
Theml, H.; Diem. H. 2004. Color Atlas of Hematology. 2da Ed. Ed Thiem.
103

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METODOS DE RECUENTO CELULAR SANGUINEO

RECUENTO DE ERITROCITOS Y LEUCOCITOS.

Recuento mediante cmara cuenta glbulos: Principio.

Figura 1. Pipetas Dilutoras

Cmaras cuenta glbulos

Figura 2. Cmara Cuentaglbulos

Figura 3. Retculos cmara Neubauer

RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS

Reactivos: Se puede utilizar solucin Hayem I o Grower

H20 dest c.s.p

H2O dest c.s.p.

NO OLVIDAR: Siempre utilizar

(si es necesario ajustar la pipeta tocando la punta

En cada grupo se contarn los glbulos que se encuentran dentro de cada

GR x mm3 = N GR x 400 x 200 x 10 = N GR x 10.000

Hombres: 4.500.000 - 5.500.000 /L

RECUENTO TOTAL DE LEUCOCITOS

Acido actico glacial

Agua destilada c.s.p.

Figura 5. Cuadro de recuento leucocitario.

LEUCOCITOS x mm3 = L x 10 x 10 = N Leucocitos x 100

Figura 6. Plaquetas en frotis de sangre perifrica. Tincin May Grunwald-Giemsa (100x).

Filtrar antes de usar.

Citrato de sodio 3,8%

Azul de cresil brillante

cmara para recuento plaquetario.

Nmero de cuadrantes contados

Recuento de plaquetas en frotis.

Pipeta dilucin de leucocitos

Nmero de milmetros contados

Las causas ms comunes de eosinofilia son:

Por el contrario se observa eosinopenia en la primera mitad del perodo

Sangre capilar recolectada desde el sitio de puncin.

venosa de 75mm de largo y 1 mm de dimetro

MACROHEMATOCRITO (Mtodo de Wintrobe)

Muestra: Sangre venosa tomada con EDTA.

El micromtodo se prefiere al macromtodo por tener un tiempo de determinacin ms corto,