ESPECTROFOTOMETRIA

1.

INTRODUCCIN

Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias qumicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de
radiacin se puede estudiar la absorcin de sustancias, no solamente en la zona
del espectro visible, sino tambin en ultravioleta e infrarrojo. Se denomina
espectrofotometra a la medicin de la cantidad de energa radiante que absorbe
un sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la radiacin, y a las
mediciones a una determinada longitud de onda. La teora ondulatoria de la luz
propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energa llamados
fotones; la luz de una cierta longitud de onda est asociada con los fotones, cada
uno de los cuales posee una cantidad definida de energa.

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2. DESARROLLO
DESARROLLO

2.1 ESPECTRO ELECTROMAGNETICO

Se denomina espectro electromagntico a la distribucin energtica del conjunto
de las ondas electromagnticas. Referido a un objeto se denomina espectro
electromagntico o simplemente espectro a la radiacin electromagntica que
emite (espectro de emisin) o absorbe (espectro de absorcin) una sustancia.
Dicha radiacin sirve para identificar la sustancia de manera anloga a una huella
dactilar. Los espectros se pueden observar mediante espectroscopios que,
adems de permitir ver el espectro, permiten realizar medidas sobre el mismo,
como son la longitud de onda, la frecuencia y la intensidad de la radiacin.
El espectro electromagntico se extiende desde la radiacin de menor longitud de
onda, como los rayos gamma y los rayos X, pasando por la luz ultravioleta, la luz
visible y los rayos infrarrojos, hasta las ondas electromagnticas de mayor longitud
de onda, como son las ondas de radio. Se cree que el lmite para la longitud de
onda ms pequea posible es la longitud de Planck mientras que el lmite mximo
sera el tamao del Universo (vase Cosmologa fsica) aunque formalmente el
espectro electromagntico es infinito y continuo.

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Colores de la luz visible

Longitud de onda de la
absorcin mxima (nm).
380 420
420 440
440 470
470 500
500 520
520 550
550 580
580 620
620 680
680 780

Color absorbido
Violeta
Azul - violeta
Azul
Verde - azuloso
Verde
Verde amarillento
Amarillo
Naranja
Rojo
Prpura

Color observado
Amarillo - verdoso
Amarillo
Naranja
Rojo
Prpura
Violeta
Azul - violeta
Azul
Verde - azuloso
Verde

TIPO DE RADIACION
Rayos Gamma
Rayos X
Ultravioleta

Intervalos de las longitudes de onda

inferiores a 10-2 nanmetros
entre 10-2 nanmetros y 15 nanmetros
entre 15 nanmetros y 4.102 nanmetros
entre 4.102 nanmetros y 7,8.102
ESPECTRO VISIBLE
nanmetros
(4000 Angstroms y 7800 Angstroms)
Infrarrojo
entre 7,8.102 nanmetros y 106 nanmetros
Regin de Microondas entre 106 nanmetros y 3.108 nanmetros
Ondas de Radio
mayores de 3.108 nanmetros

2.1 LA LUZ VISIBLE

Es una regin muy estrecha pero la ms importante, ya que nuestra retina es
sensible a las radiaciones de estas frecuencias. A su vez, se subdivide en seis
intervalos que definen los colores bsicos (rojo, naranja, amarillo, verde, azul y
violeta).
2.2 RADIACIN ULTRAVIOLETA
3

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Los tomos y molculas sometidos a descargas elctricas producen este tipo de

radiacin. No debemos olvidar que la radiacin ultravioleta es la componente
principal de la radiacin solar.
La energa de los fotones de la radiacin ultravioleta es del orden de la energa de
activacin de muchas reacciones qumicas lo que explica muchos de sus efectos.
3 DEFINICION DE ESPECTROFOTOMETRA
La espectrofotometra es un mtodo analtico que utiliza los efectos de la
interaccin de las radiaciones electromagnticas con la materia (tomos y
molculas) para medir la absorcin o la transmisin de luz por las sustancias.
3.1 ESPECTROFOTMETRO
La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolucin se miden con un
aparato denominado espectrofotmetro, el cual consta bsicamente de los
siguientes componentes:

Fuente luminosa
Su funcion es la de proporcionar una intensidad de radiacin alta y
constante en el intervalo de longitud de onda de inters en el anlisis.
Lasfuentesempleadasson:lmparadewolframio(tambinllamadotungsteno),l
mparadearcodexennylmparadedeuterioqueesutilizadaenloslaboratoriosa
tmicos
Monocromador: Su funcin es la de seleccionar la longitud de onda de la

radiacin emitida por la lmpara.

La Longitud de onda que se selecciona esta relacionada con el tipo de
muestra que se este analizando. Para cada sustancia existe una longitud de
onda que se le denomina de MXIMA ABSORCIN, a la cual la sustancia
por analizar absorbe el mximo de la energa radiante y de esta forma el
anlisis que se efecta da resultados ptimos, respuesta lineal y que
obedece la ley de Lambert y Beer.
Est constituido por las rendijas de entrada y salida, colimadores y el
elemento de dispersin. El colimador se ubica entre la rendija de entrada y
4

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salida. Es un lente que lleva el haz del luz que entra con una de terminada l
longitud de onda hacia un prisma el cual separa todas las longitudes de o
onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra lente que
direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

Portador de muestras: Est diseado para sostener la muestra que se

quiere analizar dentro del rayo de luz de longitud de onda determinada por
el monocromador. El elemento que contiene la muestra es una celda o
cubeta, por lo general, rectangular. Las celdas o cubetas se fabrican de
vidrio, si se requieren efectuar estudios en el rango de los 340 a los 1 000
nm y de slice, si el anlisis est en el rango comprendido entre los 220 y
los 340 nm. Tambin hay celdas en materiales plsticos como estireno o
poliestireno.

Sistema detector: La funcin del detector es la de recibir la radiacin que

transmite la muestra, y transformarla en una seal ( generalmente
elctrica ), que sea proporcional a la concentracin de la substancia
presente.
El sistema de deteccin puede estar diseado con fotoceldas, fototubos,
fotodiodos o fotomultiplicadores. Esto depende de los rangos de longitud de
onda, de la sensibilidad y de la velocidad de respuesta requeridas

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4 PRINCIPIO DE LA ESPECTROFOTOMETRA
En la espectrofotometra se aprovecha la absorcin de radiacin electromagntica
en la zona del ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la
radiacin incidente en este espectro y promueve la transicin del analito hacia un
estado excitado, transmitiendo un haz de menor energa radiante. En esta tcnica
se mide la cantidad de luz absorbida como funcin de la longitud de onda utilizada.
La absorcin de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las molculas, y es caracterstica de cada sustancia qumica.
4.1 LEY DE BEER
La Ley de Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de
la concentracin en la solucin.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azcar disuelta y en otro
vaso tenemos la misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azcar en
solucin. El detector es una celda fotoelctrica, y lo que se mide es la
concentracin de la solucin de azcar.

Segn la ley de Beer, si hiciramos que un rayo de luz atravesara el primer vaso,
la cantidad de luz que saldra del otro lado sera mayor que si repitiramos esto en
el segundo, ya que en este ltimo las ondas electromagnticas chocan contra un
mayor nmero de tomos o/y molculas y son absorbidos por estos.1
4.2 LEY DE LAMBERT
La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de
la distancia recorrida por la luz.
Por ejemplo, retomando el ejemplo de los vasos, pensemos que ambos tienen la
misma cantidad de agua y la misma concentracin de azcar; pero el segundo
tiene un dimetro mayor que el otro.
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ESPECTROFOTOMETRIA

Segn la ley de Lambert, si hiciramos que un rayo de luz atravesara el primer

vaso, la cantidad de luz que saldra del otro lado seria mayor que si repitiramos
esto en el segundo, ya que en este ltimo las ondas electromagnticas chocan
contra un mayor nmero de tomos o/y molculas y son absorbidos por estos, tal
como se explic en la ley de Beer.

4.3 LEY DE BOUGUER-BEER

Una ley muy importante es la de Bouguer-Beer-Lambert (tambin conocida como
ley de Lambert Bouguer y Beer), la cual es solo una combinacin de las citadas
anteriormente.
4.4 TRANSMITANCIA Y ABSORCIN DE LAS RADIACIONES
or las leyes mencionadas anteriormente, al hacer pasar una cantidad de fotones o
de radiaciones hay una prdida que se expresa con la ecuacin:

It/Io=T-kdc''

donde It es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda

fotoelctrica (llamada radiacin o intensidad transmitida); Io es la intensidad con la
que sale al atravesar la celda (radiacin intensidad incidente), y la relacin entre
ambas (T) es la transmitancia.
En el exponente, el signo negativo se debe a que la energa radiante decrece a
medida que el recorrido aumenta. El superndice k es la capacidad de la muestra
para la captacin del haz del campo electromagntico, d es la longitud de la
cubeta de espectrofotometra que recorre la radiacin, y c es la concentracin del
soluto en la muestra ya ubicada en la cubeta.
La ecuacin simplificada de la ley de Beer-Lambert
7

ESPECTROFOTOMETRIA

A = .d.c
comprende la mnima ecuacin que relaciona la concentracin (c), la absorbencia
de la muestra (A), el espesor recorrido por la radiacin (d) y el factor de calibracin
(). El factor de calibracin relaciona la concentracin y la absorbancia de los
estndares.
La absorcin (o absorbancia) es igual a A, que es el logaritmo recproco de la
transmitancia:2
A= log 1/T
lo que es igual a:
A= -log T
Las ecuaciones mencionadas de las leyes son vlidas solo y solo si:

la radiacin incidente es monocromtica;

las especies actan independientemente unas de otras durante la

absorcin;
la absorcin ocurre en un volumen de seccin trasversal uniforme.

5. TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRAS
5.1 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCIN MOLECULAR VIS-UV
El aumento de
energa
interna
conlleva
transiciones
electrnicas. Estas transiciones
forman enlaces

son de electrones

o de electrones

compartidos

que

de orbitales atmicos externos (no

compartidos).
Los principales tipos de moleculas que experimentan este fenmeno son:
compuestos orgnicos con grupos no saturados (dobles y
triples

enlaces)donde hay electrones de enlace que pueden

saltar a otros orbitales de enlace.Estos grupos funcionales que

absorben en VIS o UV se llaman cromforos.

ESPECTROFOTOMETRIA

compuestos de
transicin.

coordinacin (complejos) de

metales

de

Ej. Fe(SCN)2- rojo intenso.

iones de metales de transicin, de lantnidos y de actnidos. Ej.

color azul de la disolucin de Cu2+

Cuando la especie

qumica a

medir

absorbe en

el visible

(y

disolucin tiene color) la tcnica se llama vulgarmente colorimetra.

los aparatos utilizados se llaman colormetros.

la
Y

Tambin

se

comercializan kits de anlisis rpidos que tienen unas tablas de

comparacin de colores (o disoluciones prepararadas y de color
estable) en lugar de un aparato como el descrito.

La disolucin

problema se mezcla con lo reactivos adecuados en un pequeo tubo

de ensayo y se compara con la tabla de
colores. En esta tabla est asignada la concentracin de analito que
corresponde a cada

color,

con

lo

cual

es

concentracin en el problema. Este mtodo

exactitud

pero en

muchas

puede

no

aplicaciones

determinar

tiene

es

una

la

gran

suficiente (cloro en

piscinas, nitratos en aguas de embalses, NaCl en aguas para riego, etc).

5.2 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCIN MOLECULAR IR.
La
absorcin
molecular
de
radiaciones de
esta
espectro produce transiciones vibracionales y

zona del

rotacionales. Por

lo

tanto, todas las molculas absorben en IR, excepto algunas diatmicas

(O2, N2, Cl2) de elevada simetra.
Las bandas de absorcin son muy estrechas y corresponden a
enlaces

muy especficos, y a menudo dependen de los atomos ms

prximos. Un espectro de IR es como una huella dactilar de la molcula

y esto implica que es una tcnica idnea para

identificar

orgnicos o inorgnicos puros,

es

pero

no

cuantificar.
Los instrumentos ms utilizados son:
Espectrofotomtros IR. Similares al VIS-UV, pero

compuestos

tan adecuada para

con

componentes

diferentes.Hacen un barrido de l y recogen el espectro. Los ms

9

ESPECTROFOTOMETRIA

utilizados son los llamados NIR (near infrared) que trabajan con zonas del
espectro en el infrarojo cercano.
Espectrometros de transformada de Fourier.
una

zona

del espectro

posteriormente

por

un

Recoge

simultneamente

en

proceso matemtico

datos

varias

muy

de

pasadas,

complejo

se

resuelven los picos del espectro con una gran sensibilidad. Son
los ms usados actualmente.

5.3 ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCIN Y DE EMISIN ATMICA.

Permite la determinacin (cuantificacin) de unos 70 elementos
qumicos en concentraciones que oscilan entre ppb a ppm. La medida de
los elementos qumicos se hace en estado atmico mediante una
atomizacin

de

la

muestra

en

estado gaseoso. Estos tomos

experimentan absorcin, emisin o fluorescencia de radiaciones VIS, UV o

rayos

X,

debidas

atmicos.Esta tcnica

transiciones
no

da

con

entre

orbitales

informacin sobre enlace

moleculares en absoluto y nos da

elemento qumico.
La principal diferencia

electrnicas

informacin
las

otras

especfica

sobre

espectrometrias

es

un
la

atomizacin, proceso por el cual la muestra se introduce en un

mechero,

junto

temperatura. Las

con

el

molculas

liberandolos elementos

combustible,
del

qumicos

analito
en

pueden experimentar fenmenos de

fluorescencia. En

la

se quema
se

rompen

estado
absorcin,

elevada
totalmente

atmico,
emisin

estos
o

figura siguiente se muestra un esquema de estas

posibilidades.
5.4 ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA CON LLAMA.
Es el mtodo ms utilizado de la espectrofotometria atmica. Muy
adecuado para la determinacin de ppm de Fe, Cd, Au, Pb, Zn, Cu,
10

ESPECTROFOTOMETRIA

Mn en disoluciones acuosas de aguas, fertilizantes, suelos, extractos

vegetales, etc.
Los tomos en la llama absorben radiacin de determinadas l (VIS y
UV) segn su naturaleza,

por

lo

especfica para cada elemento.

que

es

una

tcnica

muy

La absorcin en la llama sigue la ley

de Beer, pero en la prctica es necesario hacer un calibrado

con

disoluciones patrn de las que se obtienen valores de absorbancia y

que permiten calcular la recta de calibrado.
El instrumento se denomina Espectrofotmetro de Absorcin Atmica
(EAA).En ingls: Flame Atomic Absorption Spectrophotometer (F)AAS.

5.5 ESPECTROFOTOMETRIA DE EMISIN CON PLASMA.

Se consigue una llama de altsima temperatura que transforma
mezcla de combustible y muestra
gaseosa con una concentracin

la

al estado de plasma: una mezcla

muy

alta

de

cationes

electrones.Esto permite una elevada eficiencia en la atomizacin, una

intensa emisin de los tomos y la determinacin de una gran
cantidad de elementos qumicos metlicos (y algunos no metales) con
algo menos de sensiblidad que el Horno de Grafito, pero con
ms

precisin. Adems

sistema

informtico

concentracin

de

la

combinacin

potente,permite

varias

decenas

de

de
la

esta

tcnica

con

un

determinacin

de

la

elementos qumicos en unos

segundos. Los diferentes aparatos se basan en la fuente de energa

para obtener el plasma en el mechero. Los ms comunes son:

DCP: plasma generado por una corriente contnua.

ICP: (induced coupled plasm) plasma acoplado por induccin de

un generador de radiofrecuencias.
plasma generado por frecuencias de microondas.

5.6 ESPECTROFOTOMETRIA DE FLUORESCENCIA MOLECULAR.

Se basa en el fenmeno que experimentan algunas molculas
de absorber una radiacin determinada y en el proceso de relajacin,
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ESPECTROFOTOMETRIA

liberar parte de la energia como calor (radiacin trmica) y otra parte

como radiacin electromagntica de una longitud de onda mayor a
la incidente.

Este

fenmeno

se

produce

en

un intervalo de

tiempo muy pequeo despus de la absorcin (10-5 s) a diferencia de la

fosforescencia que puede durar minutos y horas. Este fenmeno permite
una tcnica muy sensible ya que no todas las molculas
fluorescen y las l pueden cambiar segn las condiciones. Los lmites
de deteccin son inferiores a la absorcion molecular VIS-UV.
El instrumento ms usado es el espectrofluormetro, y la tcnica ms
comun se denomina Fluorescencia de Rayos X,
utilizados como fuente de energia. Tiene
la cuantificacin

gran aplicabilidad en

de molculas orgnicas en productos alimenticios,

farmaceuticos, clnicos y naturales.

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una

ya que son estos los

ESPECTROFOTOMETRIA

CONCLUSIN
Se ha llegado a la conclusin de que la espectrofotometra es un mtodo analtico
indirecto porque se basa en la medicin de la absorbancia o transmitancia de las
radiaciones; es de gran utilidad en la actualidad para la identificacin de un analito
en una muestra problema.
La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a que es sencillo,
especfico y sencillo.

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BIBLIOGRAFA
1. https://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofotometr%C3%ADa
2. https://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_electromagn%C3%A9tico
3. http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica
%20clinica/apuntes%20de%20espectrofotometria.pdf

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