Quim. Nova, Vol. 29, No.

5, 907-910, 2006

Selene Maia de Morais*, Francisco Eduardo Arago Catunda Jnior, Ana Raquel Arajo da Silva e Jason Stone
Martins Neto
Curso de Qumica, Universidade Estadual do Cear, Av. Paranjana, 1700, Campus do Itaperi, 60740-000 Fortaleza - CE
Davide Rondina
Faculdade de Veterinria, Universidade Estadual do Cear, Av. Paranjana, 1700, Campus do Itaperi, 60740-000 Fortaleza - CE
Jos Henrique Leal Cardoso
Instituto de Cincias Biomdicas, Universidade Estadual do Cear, Av. Paranjana, 1700, Campus do Itaperi, 60740-000
Fortaleza - CE

Artigo

ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DE LEOS ESSENCIAIS DE ESPCIES DE Croton DO NORDESTE DO BRASIL

Recebido em 10/3/05; aceito em 4/11/05; publicado na web em 5/5/06

ANTIOXIDANT ACTIVITY OF ESSENTIAL OILS FROM NORTHEASTERN BRAZILIAN CROTON SPECIES. Three Croton
species, C. zenhtneri, C. nepetaefolius and C. argyrophylloides, were collected at two different times, 6:00 and 13:00 h, their essential
oils were extracted by steam distillation and analyzed by gas Chromatography / Mass Spectrometry. The percentage yield of oil
constituents changes along the day. The oils were submitted to the antioxidant test thiobarbituric acid reactive species, using BHT
and a-tocoferol as the reference compounds. All oils exhibited good antioxidant activities. In general, C. zenhtneri and C.
argyrophylloides essential oils showed higher antioxidant activity than C. nepetaefolius.
Keywords: essential oil; antioxidant; TBARS test.

INTRODUO
O ecossistema Caatinga cobre quase 1 milho de km2 no Nordeste
do Brasil. A vegetao xerfila caracterstica afetada pela longa e
irregular seca, altas temperaturas e elevada radiao ultravioleta. Principalmente devido s famlias de baixa renda, o uso de plantas medicinais e auto-medicao grandemente estendido na regio1.
Nas plantas, a sntese de metablitos secundrios antioxidantes
que absorvem em 300-400 nm significantemente aumentada por
radiao UV2 fornecendo, portanto, um alto nvel de proteo contra oxidantes prejudiciais gerados termicamente ou pela luz3. Alm
disso, embora plantas medicinais sejam raramente utilizadas como
antioxidantes em medicina tradicional, suas caractersticas teraputicas poderiam ser sustentadas devido, em parte, a sua capacidade varredora de radicais livres que podem estar envolvidos em
muitas doenas4. Cncer, enfisema, cirrose, arterosclerose e artrites tm sido correlacionados com stress oxidativo. Os organismos
em geral so protegidos contra os danos causados pelos radicais
livres, por enzimas como superxido desmutase e catalase, ou compostos como cido ascrbico, tocoferol e glutationa. Quando os
mecanismos da proteo antioxidante se tornam ineficientes por
fatores como idade, a deteriorao das funes fisiolgicas pode
ocorrer, resultando em doenas e acelerao do envelhecimento.
Entretanto, suplementos alimentares antioxidantes podem ser usados para ajudar o corpo humano a reduzir os danos oxidativos5.
Os leos, as gorduras e os alimentos que os contm esto sujeitos,
durante o processamento e a estocagem, a reaes qumicas que podem alterar, de modo indesejvel, as caractersticas do produto final.
Hidrlises e oxidaes podem ser responsveis por esse processo, sobretudo a oxidao dos lipdeos. Antioxidantes so geralmente utilizados em leos e comidas gordurosas para retardar sua autooxidao6.
Alguns antioxidantes sintticos como butil-hidroxianisol (BHA) e butil-

*e-mail: selene@uece.br

hidroxitolueno (BHT), bastante utilizados em alimentos, revelaramse txicos em altas doses7. Desta forma, a pesquisa por antioxidantes
naturais tem aumentado bastante nos ltimos anos8,9.
leos essenciais so constituintes volteis orgnicos responsveis pela fragrncia de muitas plantas. Podem ser obtidos de flores, folhas, frutos, sementes, gramas, razes, rizomas e caules das
plantas10. A atividade antioxidante dos leos volteis tem sido bastante estudada11,12 e os leos essenciais de plantas do Nordeste brasileiro constituem fontes potenciais de antioxidantes naturais13.
Croton zehntneri Pax et Hoffm., conhecida popularmente como
canela de cunh, canelinha ou canela-brava, uma planta
subarbustiva e caduciflia do Nordeste brasileiro, cujas folhas e talos so dotadas de um aroma que lembra uma mistura de erva-doce
e cravo-da-ndia. Entretanto, este aroma mostra-se varivel entre
exemplares desta planta coletados em diferentes localidades do Nordeste. Isto se deve variao na concentrao dos constituintes qumicos mais abundantes nos seus leos essenciais14. Assim, distinguem-se para esta espcie quatro tipos qumicos como: anetol - para
os exemplares coletados em Fortaleza (CE) e Viosa (CE); eugenol para os coletados em Areia Branca (RN) e Quixad (CE); metileugenol - para os coletados em Ipu (CE) e Oeiras (PI); estragol para os exemplares coletados em Tiangu (CE) e Granja (CE).
O Croton zehntneri usado na medicina popular principalmente
como sedativo, como estimulante de apetite e para aliviar distrbi-

Esquema 1.

908

de Morais et al.

os intestinais, sendo comprovados os efeitos antinociceptivos de

seu leo essencial15.
O Croton nepetaefolius largamente utilizado na medicina
popular como estomquico, carminativo e para clicas intestinais,
sendo esta ltima ao comprovada cientificamente16. No h informaes do uso popular do Croton argyrophylloides conhecido
como marmeleiro prateado devido ao aspecto de suas folhas.
Neste trabalho foi realizada a avaliao da atividade antioxidante
dos leos essenciais das trs espcies do gnero Croton mencionadas, comuns no semi-rido nordestino: C. zehntneri, C. nepetaefolius
e C. argyrophylloides, coletadas em dois horrios diferentes do
dia, utilizando o mtodo TBARs (quantificao das espcies
reativas ao cido tiobarbitrico).
PARTE EXPERIMENTAL
Coleta do material vegetal
C. zenhtneri, C. nepetaefolius e C. argyrophylloides foram
coletados (parte area) na Fazenda Cocalzinho, situada na cidade
de Viosa (CE), no dia 20/09/2002 e seus nmeros de exsicatas
so, respectivamente: 32.446, 32.448 e 32.444, estando depositadas no Herbrio Prisco Bezerra, da Universidade Federal do Cear.
Foram feitas coletas no ms de setembro em dois horrios diferentes do dia 6:00 e 13:00 h.
Reagentes utilizados: -tocoferol, 3,5-di-terc-butil-4-hidroxitolueno (butil hidroxytoluene-BHT), dodecil sulfato de sdio (SDS),
DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidrazila), cido tiobarbitrico (TBA)
e o cloreto de 2,2-azo-bis (2-amidinopropano) (ABAP), sendo todos de pureza analtica. Os quatro primeiros foram adquiridos junto Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, EUA), o TBA, junto
Merck KgaA (Darmstadt, Alemanha) e o ABAP, junto Wako
Chemicals USA Inc. (Richmond, VA, EUA).
Extrao dos leos essenciais
Foi utilizado o mtodo de destilao por arraste com vapor
dgua em aparelho tipo Clevenger17. O tempo de extrao foi de
aproximadamente 2 h para cada planta. Os leos essenciais foram
em seguida secos com sulfato de sdio anidro e mantidos em refrigerador at a anlise.
Anlise dos leos essenciais - cromatografia com fase gasosa
acoplada espectrometria de massa (CG/MS)
Foi realizada no Parque de Desenvolvimento Tecnolgico do Cear (PADETEC - UFC), atravs do mtodo de cromatografia gasosa
acoplada espectrometria de massa (CG/EM) em um aparelho da
Hewlett-Packard 5971. Condies programadas no aparelho: coluna
capilar de DB-1 (dimetil-polisiloxane) com 30 m de comprimento e
0,25 mm de dimetro interno; gs de arraste: Hlio (1 mL/min);
programa: 50-180 oC a 4 oC/min e, depois, 180-280 oC a 20 oC/min;
temperatura do injetor: 220 oC; modo de injeo: 0,1 L (soluo 10%), split 1:20, 500 ng/na coluna. Os espectros de massas foram produzidos por impacto eletrnico (70 eV). Os espectros de
massas dos constituintes foram comparados com os padres existentes na biblioteca Wiley do computador no aparelho. Em seguida,
foram feitas comparaes visuais com espectros de massa de substncias encontrados na literatura18. Os tempos de reteno dos picos
maiores, mais facilmente identificados pelo espectro de massa, foram comparados com os tempos de reteno destas substncias
registrados em catlogos18, observando-se a diferena que se manteve aproximadamente constante para as demais substncias identifi-

Quim. Nova

cadas pelo computador do aparelho. A coluna do cromatgrafo

similar (apolar) relatada na referncia utilizada.
Teste de atividade antioxidante dos leos essenciais - Mtodo
modificado do cido tiobarbitrico-espcies reativas19
Usou-se, como meio rico em lipdeos, soluo de gema de ovo
homogeneizada. O procedimento foi feito em quintuplicata. Em cinco
tubos de ensaio foram colocados 0,5 mL da soluo de gema de ovo
(10% m/v) e 0,1 mL de soluo da amostra (leos essenciais e padres) dissolvida em metanol, completando-se o volume para 1 mL
com gua. Foram testadas trs concentraes para as solues de cada
amostra: 100, 500 e 1000 ppm (m/v). Em seguida, foi adicionado, a
cada tubo, 0,05 mL de ABAP (0,07 mol/L) para induzir a peroxidao
dos lipdeos. Adicionaram-se 1,5 mL de soluo 20% de cido actico
(pH 3,5) e 1,5 mL de soluo de TBA (0,8% m/v) em soluo de SDS
(1,1% m/v). Foi preparado, tambm, um tubo de ensaio com o experimento controle, no qual foram adicionados todos os reagentes, com
exceo da amostra testada, para se observar a completa peroxidao
dos lipdeos. Os tubos de ensaio foram levados ao banho-maria 95
o
C, sob agitao, por 1 h. Aps resfriamento, foram adicionados 5 mL
de 1-butanol a cada tubo e centrfugados a 3000 rpm, durante 10 min.
Mediu-se ento a absorbncia da camada orgnica superior em um
espectrofotmetro Spekol no comprimento de onda de 532 nm. Por
fim, obteve-se o ndice Antioxidante da amostra em percentual (IA%)
usando a frmula: IA% = (1 A/C) x 100, onde C a absorbncia do
controle totalmente oxidado e A, a mdia aritmtica das absorbncias
da amostra testada. Utilizou-se como padro positivo neste mtodo os
antioxidantes BHT e -tocoferol nas mesmas propores a que foram
submetidos os leos essenciais.
Anlise estatstica
Todos os clculos foram feitos no programa de computador
SAS20. Os dados foram submetidos anlise de varincia (ANOVA),
usando o procedimento GLM. As variaes testadas foram as trs
concentraoes em relao ao mesmo leo e dentro da mesma
concentrao os diversos leos e padres. Para comparaes entre
as mdias dos ndices de atividade (IA%), utilizou-se o teste de
Duncan. As diferenas foram consideradas estatisticamente significantes qundo P < 0,05.
RESULTADOS E DISCUSSO
As anlises dos leos essenciais por cromatografia gasosa
acoplada espectrometria de massa esto mostradas nas Tabelas 1,
2 e 3, registrando-se os principais constituintes qumicos presentes
nestes leos. No leo do C. zenhtneri coletado de manh cedo (6:00
h), o E-anetol apresenta-se em maior percentual que o somatrio
do anisaldedo e o formiato de anisila, que so considerados biossinteticamente seus produtos de oxidao. s 13:00 h estes dois
produtos juntos representam um maior percentual. Pode-se supor
que o maior teor de oxignio e de radiao solar no ambiente s
13:00 h contribua para o aumento dos produtos oxidados. O leo
do C. nepetaefoluis apresenta o metileugenol como principal constituinte e sua concentrao diminue s 13:00 h, enquanto o segundo
componente mais abundante, o -copaeno, no mostra variao nos
dois horrios de coleta. No leo do C. argyrophylloides, -pineno
e 1,8-cineol diminuram e espatulenol e cariofileno aumentaram.
Pela Tabela 4, verifica-se que os leos essenciais obtidos
nos dois horrios de coletas das espcies do gnero Croton revelaram-se agentes antioxidantes relevantes. Todos os leos essenciais apresentaram atividades antioxidantes que diminuram

Vol. 29, No. 5

Atividade antioxidante de leos essenciais

909

Tabela 1. Composio qumica percentual do leo essencial do Croton

zehntneri Pax et Hoffm. coletado em dois horrios diferentes do dia

Tabela 3. Composio qumica percentual do leo essencial do Croton

argyrophylloides Muell Arg. coletado em dois horrios diferentes do dia

Constituintes

Constituintes

-pineno
Canfeno
1,8-Cineol
Cnfora
Estragol
para-Anisaldedo
E-Anetol
Formiato de anisila
-Elemeno
E-Cariofileno
-E-Bergamoteno
-Guaieno
-Selineno
E-Metil-isoeugenol
-Selineno
xido de cariofileno

Horrio de coleta
6:00h

13:00 h

3,62
1,58
1,83
2,15
19,32
47,34
11,49
4,61
1,22
1,92
1,24
1,38
1,29

2,12
2,69
1,70
27,37
30,97
16,47
6,53
2,65
2,80
1,93
2,75
2,42
5,58

Tabela 2. Composio qumica percentual do leo essencial do Croton

nepetaefoluis Baill. coletado em dois horrios diferentes
Constituintes

-Pineno
Canfeno
-Pineno
1,8-Cineol
Cnfora
-Cubebeno
-Copaeno
-Cubebeno
-Elemeno
Metil-eugenol
E-Cariofileno
-Z-Bergamoteno
-Guaieno
-Humuleno
Biciclogermacreno
-Cadineno
xido de cariofileno

Horrio de coleta
6:00h

13:00 h

2,89
1,22
1,22
0,83
3,53
1,27
19,05
4,37
39,62
5,42
1,70
3,40
1,12
5,03
4,44
1,53

5,90
2,24
2,78
5,94
1,43
18,92
3,07
5,41
27,80
4,75
1,00
3,05
0,88
7,90
4,08
1,23

-Pineno
Sabineno
-Pineno
para-Cimeno
-Felandreno
1,8-Cineol
4Terpineol
-Terpineol
-Elemeno
E-Cariofileno
Aromadendreno
-Humuleno
Allo-aromadendreno
-Muuroleno
-Selineno
-Selineno
-E-Guaieno
-Cadineno
-Cadineno
E-nerolidol
Espatulenol
xido de cariofileno
Guaiol

Horrio de coleta
6:00h

13:00 h

14,23
1,37
2,59
1,60
8,15
1,99
1,23
2,49
2,35
1,84
1,47
2,28
2,09
2,50
3,86
2,27
9,80
1,46
-

4,48
1,66
0,90
2,47
7,43
4,58
2,34
0,99
3,95
10,13
2,30
2,64
2,11
2,24
4,51
4,77
1,85
3,01
2,95
1,63
14,33
5,76
1,51

significativamente na concentrao de 100 em relao de 1000

ppm, com exceo do leo do C. nepetaefolius, que mostrou
atividade semelhante nas trs concentraes. Na concentrao
de 100 ppm, os leos de C. zenhtneri e C. argyrophylloides dos
dois horrios foram mais ativos que os padres. Na concentrao de 500 ppm, todos os leos foram semelhantes aos padres
considerados. Na concentrao de 1000 ppm, C. zehntneri (6:00
h) e C. argyrophylloides (13:00 h) foram semelhantes ao tocoferol e mais ativos que o BHT; C. zehntneri (13:00 h) e C.
argyrophylloides (6:00 h) foram mais ativos que o BHT; C.
nepetaefolius dos dois horrios foi menos ativo que os demais,
no entanto foi semelhante ao BHT. A atividade antioxidante destes leos deve-se provavelmente presena entre seus constituintes qumicos de vrios componentes antioxidantes e alguns
com atividade j relatada 12, como E-anetol no C. zenhtneri e
metileugenol no C. nepetaefolius. O leo de C. argyrophylloides

Tabela 4. Resultado da atividade antioxidante dos leos essenciais das espcies do gnero Croton pelo mtodo TBARS
leo (sigla) e padres

Concentraes das Amostras / Valores de IA*(%)

1000 ppm

OECz (6:00 h)
OECz (13:00 h)
OECn (6:00 h)
OECn (13:00 h)
OECa (6:00 h)
OECa (13:00 h)
BHT
- tocoferol

52,330,27Aa
41,302,75Ab
25,922,33Ac
21,888,74Ac
41,075,34Ab
55,967,48Aa
27,934,55Ac
59,286,74Aa

500 ppm
27,183,08Ba
23,686,00Ba
17,573,99Ba
21,044,53Aa
30,6714,01ABa
24,9213,27Ba
21,346,06Aa
28,382,68Ba

100 ppm
22,835,38Bab
21,263,58Bab
11,924,10Bcd
15,744,26Abc
22,824,32Bab
23,572,93Ba
08,366,60Bd
12,324,42Ccd

*IA = ndice de atividade antioxidante. Os valores entre parnteses referem-se aos desvios padres das mdias de quatro determinaes. Letras maisculas
diferentes representam diferenas significativas no ndice de atividade (IA) entre as trs concentraes do mesmo leo. Letras minsculas diferentes representam
diferenas significativas no ndice de atividade (IA) entre os diversos leos em relao mesma concentrao. OECz: leo Essencial de Croton zehntneri;
OECn: leo Essencial de Croton nepetaefolius; OECa: leo Essencial de Croton argyrophylloides.

910

de Morais et al.

apresentou -pineno, E-cariofileno e 1,8-cineol, cujas atividades relatadas so baixas, mas provavelmente esto agindo sinergisticamente. O efeito sinergstico pode ser observado entre
compostos fenlicos e no fenlicos, a exemplo do cido ascrbico e lecitina21.

Quim. Nova

mudana nesta atividade. Em geral, os leos do C. zenhtneri e C.

argyrophylloides mostraram maior ao antioxidante que o C.
nepetaefolius. A utilizao popular das trs espcies de Crotons
fica valorizada pela verificao de sua ao antioxidante.
AGRADECIMENTOS

CONCLUSES
Os leos essenciais do C. zenhtneri e C. nepetaefolius apresentam
na sua constituio monoterpenides e sesquiterpenides, como tambm arilpropanides; j o leo do C. argyrophylloides apresenta
monoterpenides e sesquiterpenides, mas no contm arilpropanides.
Os constituintes E-anetol, formiato de anisila, anisaldedo, metileugenol, 1,8-cineol, -pineno e espatulenol (Figura 1) foram os principais constituintes dos leos essenciais estudados.

Figura 1. Estruturas dos principais constituintes presentes nos leos

essenciais de espcies do gnero Croton estudadas

Entres estes compostos majoritrios e alguns constituintes presentes em menor percentual, pode-se identificar, pelas informaes da literatura12, vrios de ao antioxidante relevante que provavelmente esto agindo sinergisticamente. O horrio de coleta da
planta deve ser levado em considerao na procura de um leo com
maior ao antioxidante, pois houve variao na constituio qumica dos leos essenciais obtidos provocando, consequentemente,

Fundao Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico (FUNCAP) pelo apoio financeiro e bolsas de Iniciao Cientfica. Ao Conselho de Desenvolvimento Cientfico e
Tecnolgico (CNPq) pelas bolsas de Iniciao Cientfica e ao Prof.
A. A. Craveiro, do Parque de Desenvolvimento Tecnolgico do
Cear (PADETEC) pela anlise dos leos essenciais.
REFERNCIAS
1. Desmachelier, C.; Romo, R. L.; Coussio, J.; Ciccia, G.; J.
Ethnopharmacol. 1999, 67, 69.
2. Gottlieb, O.; Kaplan, M.; Borin, M.; Biodiversidade: Um Enfoque QumicoBiolgico, Ed. UFRJ: Rio de Janeiro, 1996.
3. Larson, R.; Phytochemistry 1988, 2, 969.
4. Spencer, C. M.; Cai, Y.; Martin, R.; Gaffney, S. H.; Goulding, P.;
Magnolato, D.; Lilley, T. H.; Haslam; E.; Phytochemistry 1988, 27, 2397.
5. Yang, J.; Mau, J.; Ko, P.; Huang, L.; Food Chem. 2000, 71, 249.
6. Weng, X. C.; Wang, W.; Food Chem. 2000, 71, 489.
7. Jayaprakasha, G. K.; Singh, R. P.; Sakariah, K. K.; Food Chem. 2001, 73,
285.
8. Loliger, J. Em Free radicals in food additivies; Auroma, I. O.; Halliwell,
B., eds.; Taylor & Francis: London, 1991.
9. Bracco, U.; Loliger, J.; Viret, J. I.; J. Am. Oil Chem. Soc. 1981, 58, 686.
10. Tisserand, R.; Balacs, T.; Essential Oil Safety: A Guide for Health Care
Professionals, Churchill Livingstone: London, 1999.
11. Mantle, D.; Anderton, J. G.; Falkous, G.; Barnes, M.; Jones, P.; Perry, E.
K.; Comp. Biochem. Physiol., Part B: Biochem. Mol. Biol. 1998, 121, 385.
12. Ruberto, G.; Baratta, M. T.; Food Chem. 2000, 69, 167.
13. Catunda Jr., F. E. A.; Luciano, J. H. S.; Morais, S. M.; Rev. Cincia e Tecnol.
da UECE 2002, 4, 23.
14. Craveiro, A. A.; Andrade, C. H. S.; Matos, F. J. A.; Alencar, J. W.; J. Agric.
Food Chem. 1978, 26, 773.
15. Oliveira, A. C.; Leal-Cardoso, J. H.; Santos, C. F.; Morais, S. M.; Coelhode-Souza, A. N.; Braz. J. Med. Biol. Res. 2001, 34, 1471.
16. Abdom, A. P. V.; Leal-Cardoso, J. H.; Coelho-de-Souza, A. N.; Morais, S.
M.; Santos, C.F.; Braz. J. Med. Biol. Res. 2002, 35, 1215.
17. Craveiro, A. A.; Matos, F. J. A.; Alencar, J. W.; J. Chem. Educ. 1976, 53,
652.
18. Adams, R. P.; Identification of Essential Oil Components by Gas
Chromatography / Quadrupole Mass Spectroscopy; Allured Publishing
Corporation: USA, 2001.
19. Kishida, E.; Kamura, A.; Tokumaru, S.; Oribe, M.; Igushi, H.; Kojo, S.; J.
Agric. Food Chem. 1993, 41, 2707.
20. SAS users guide: statistics, SAS Institute Inc.: Cary, NC, 2001.
21. Melo, E. A.; Guerra, N. B.; Bol. SBCTA 2002, 36, 1.