Tema 3

Mutacin en microbios

No hay Gentica sin mutantes

La mutacin es el origen de toda variacin heredable

Mutacin

Alteracin heredable del genotipo

Genotipo

Constitucin gentica de una estirpe

Fenotipo

Carcter o conjunto de caracteres

experimentalmente detectable

Mutante

Estirpe con un genotipo diferente

del silvestre

Alelo

Cada una de las formas alternativas

del mismo gen

Nomenclatura
Bacterias:
Fenotipo RecAProtena RecA
Gen recA
Mutante recA

Levaduras:
Fenotipo SptProtena Spt6
Gen SPT6
Mutante spt6

Auxotrofa
Prdida de la capacidad para crecer en medio mnimo,
debido a una mutacin que impide la biosntesis de un
compuesto esencial
Fosforribosilpirofosfato
+
ATP
MM
Auxtrofo His-

Histidina
MM + His

Mutaciones condicionales:
Se manifiestan en determinadas condiciones
(restrictivas) pero no en otras (permisivas)

Mutacin termosensible
Temperatura permisiva: 30o
Temperatura restrictiva: 42o

RNA polimerasa II

Mutacin crosensible
Temperatura permisiva: 37o
Temperatura restrictiva: 20o

Mutacin letal condicional (ej. termosensible)

Lamarckismo: las mutaciones son consecuencia

de la seleccin

Darwinismo:la mutacin y la seleccin son

procesos independientes
(Jacques Monod: las mutaciones se producen con
ignorancia de sus efectos)

Cultivo de
E. coli

Suspensin de
fago T

Mezclar alcuotas
y sembrar

Hiptesis lamarckista
Cada bacteria individual tiene una probabilidad pequea, pero
finita, de mutar como respuesta a la presencia del fago
La mutacin se produce como consecuencia de la seleccin

Hiptesis darwinista
Las mutaciones se producen al azar, y la presencia del fago
se limita a ponerlas de manifiesto
La mutacin y la seleccin son sucesos independientes

Nature of mutation
Luria-Delbrck fluctuation experiment

Add
phage

Little variation from tube to tube

Add
phage

Great variation from tube to tube

Cultivos independientes

Cultivo
en masa

Bacterial Mutation is
Independent of Selection
Luria and Delbrck found that
the variance of the number of
mutants from small cultures
was larger than the variance
from large cultures.
This is consistent with the
first model, in which mutants
arise in the absence of
selection.
Selection is still very important,
but only after the mutation has
arisen, nor in favor the mutant
that will arise.

Small
Culture
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

# T1-r
1
0
3
0
0
5
0
5
0
6
107
0
0
0
1
0
0
64
0
35
Mean
11.4
Variance
694
Var/Mean
60.8

Large
Sample
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Mean
Variance
Var/Mean

# T1-r
14
15
13
21
15
14
26
16
20
13
16.7
15
0.9

Nature of mutation
Lederbergs replica plating experiment

Acquired hereditary immunity

Random mutation

En cultivo, E. coli y otras especies bacterianas

tienen frecuencias de mutacin alrededor de 10-7

1 colonia = 106-107 clulas

Cultivo saturado en medio rico = 2-3 x 109 clulas/ml

Silvestre

Lac+
Mutacin

Mutante

LacReversin

Silvestre
(revertiente)

Lac+
Retromutacin

Reversin Lac-

Lac+
Supresin

Delecin

Fenotipo

Nulo

Efecto sobre
protena

Prdida de aminocidos
Posibilidad de desfase

Reversin

Nunca por retromutacin

Supresin por rodeo

Delecin
AUG UGG GGA CCC AAG GGU AGC CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro

Delecin con desfase

AUG UGG GGA CCC AAG GGUA GCC
Met Trp Gly Pro Lys
Val Ala

Insercin

Fenotipo

Nulo

Efecto sobre
protena

Adicin de aminocidos (infrecuente)

Destruccin del gen (frecuente)

Reversin

Retromutacin
Supresin por rodeo

Desfase

Fenotipo

Nulo

Efecto sobre
protena

Cambio en la pauta de lectura

Terminacin prematura (frecuente)

Reversin

Retromutacin
Supresin intragnica

Desfase -1
AUG UGG GGA CCC AAG GGU AGC CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro
AUG UGG GAC CCA AGG GUA GCC CC..
Met Trp Gly Pro Arg Val Ala ...
C

Desfase +1

AUG UGG GGA CCC AAG GGU AGC CCU

Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro
AUG UGG CGG ACC CAA GGG UAG CCC
Met Trp Arg Thr Gln Gly Stop

Supresin intragnica de un desfase +1

C
AUG UGG GGA CCC AAG GGU AGC CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro
AUG UGG CGG ACC CAA GGG UAG CCC
Met Trp Arg Thr Gln Gly Stop
AUG UGG CGG ACC CAA GGG UAG CCC
Met Trp Arg Thr Gln Gly Stop
AUG UGG CGG ACC CAA GGG AGC CCU
Met Trp Arg Thr Gln Gly Ser
Pro

Sustitucin de un par de nucletidos

Clases de sustituciones
Transicin A
C

Efectos de las
sustituciones

G
T

Transversin A

C, T

C, T

A, G

A, G

Ninguno (mutacin
silenciosa)
Cambio de un aminocido
Terminacin prematura

Sustitucin de un par de nucletidos

Caso 1: Mutacin silenciosa
AUG UGG GGA CCC AAG GGU AGC CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro
AUG UGG GGG CCC AAG GGU AGC CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro
AUG UGG GGA CCC AAA GGU AGC CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro
AUG UGG GGA CCC AAG GGU AGU CCU
Met Trp Gly Pro Lys Gly Ser
Pro

Ej. valina

Ej. leucina
1 pareja

UUA
UUG

1 cuarteto

CUU
CUC
CUG
CUA

UUPu
CUX

1 cuarteto

GUX

GUU
GUC
GUA
GUG

Leu 6
Ser 6
Arg 6
Val
Pro
Thr
Ala
Gly

4
4
4
4
4

Ile

Tyr
His
Asn
Gln
Cys
Glu
Asp
Tyr
Asn

2
2
2
2
2
2
2
2
2

Met 1
Trp 1

Cambio de un aminocido
Fenotipo

Efecto sobre
protena
Reversin

Silencioso, rezumante o nulo

Sustitucin de un aminocido

Retromutacin
Supresin intragnica
Supresin intergnica

GUU
Val

AUU Ile
CUU Leu

UUU Phe

GUU
Val

GAU Asp

GCU Ala
GGU Gly

Supresin intragnica de una mutacin

de cambio de sentido missense
AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CCC
Pro

AAG
Lys

GGU
Gly

AGC
Ser

CCU
Pro

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CUC
Leu

AAG
Lys

GGU
Gly

AGC
Ser

CCU
Pro

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CUC
Leu

AAG
Lys

GGU
Gly

AGA
Arg

CCU
Pro

Compensa el efecto de la primera mutacin

sobre la estructura de la protena

Supresin extragnica de una mutacin

de cambio de sentido (missense)
Gen 1

Gen 1

Gen 2

Gen 2

Supresin extragnica de una mutacin

de cambio de sentido (missense)
Gen 1

Gen 1

Gen 2

Gen 2

Terminacin prematura (nonsense)

Fenotipo

Nulo

Efecto sobre Finalizacin prematura de la traduccin

protena
(protena truncada)

Reversin

Retromutacin
Supresin extragnica por tRNAs
mutados

UGG
Trp

UUG
Leu

UCG
Ser

CAG
Gln

UAG
mbar

GAG
Glu

AAG
Lys
UAU
UAC
Tyr

AUG
Met

AUG
Met

UGG
Trp

UGG
Trp

GGA
Gly

GGA
Gly

CCC
Pro

CCC
Pro

AAG
Lys

UAG
Stop

GGU
Gly

GGU

AGC
Ser

AGC

CCU
Pro

CCU

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CCC
Pro

AAG
Lys

GGU
Gly

AGC
Ser

CCU
Pro

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CCC
Pro

UAG
Stop

GGU

AGC

CCU

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CCC
Pro

UAC
Tyr

GGU
Gly

AGC
Ser

CCU
Pro

Gln

Gln

GUC

GUC

tRNAGln

CAG

RNAm

Mutacin en un gen
de tRNAGln

tRNAGln con un
anticodn alterado
(GUC
AUC)

Gln

AUC

tRNAGln con un
anticodn alterado
(GUC AUC)

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CCC
Pro

UAG
Stop

GGU

AGC

CCU

AUG
Met

UGG
Trp

GGA
Gly

CCC
Pro

UAG
Gln

GGU
Gly

AGC
Ser

CCU
Pro

Terminacin
prematura

Terminacin
natural

UAG

UAG

RNAm

El tRNA supresor compite

favorablemente con los
factores de liberacin

El tRNA supresor compite

desfavorablemente con los
factores de liberacin

Otras interacciones genticas adems de la supresin):

Letalidad sinttica (fenotipo sinttico)

mutA

mutB

mutA mutB

Viable

Viable

No viable
(o crecimiento lento)