Guia BioquimicaII - Primer Parcial

UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
GUIA DE
BIOQUMICA
PRATICA II
DOCENTES:
- Dra. CHACALTANA RAMOS, Luz
- Dra. PARI OLARTE, Bertha
- Q.F. CHUMBES HUAMAN, Andrea.
ICA PER
PRLOGO
UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS
FACULTAD FARMACIA Y
Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioqumica prctica son
BIOQUIMICA
cada vez ms estrechas y se complementan de una forma ms evidente cada
da, como se pone de manifiesto en esta Gua Prctica de Bioqumica.
En este contexto de continuos avances en la bioqumica y por la patogenia de las
enfermedades; que existe una amplia evidencia de la importancia que puede
jugar la inflamacin en el inicio y progresin de la enfermedad, as como los datos
de recientes publicaciones que sugieren que ciertas infecciones bacterianas o
vricas podran dar lugar al mencionado proceso inflamatorio.
De aqu la importancia de las determinaciones analticas, que el laboratorio nos
puede proporcionar en la deteccin precoz y el estudio y conocimiento de la
misma. Todo esto ha conducido a una nueva terminologa para los avances de las
fases aguadas de las enfermedades hoy en da.
Esta es la novedad que aporta esta gua de prctica, avalada por los trabajos
qumicos y bioqumicos ms recientes de la literatura mdica.
Se prosigue a un protocolo analtico simple y a unas determinaciones bioqumicas
sricas rpidas y precisas. Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de
un laboratorio de bioqumica en continua evolucin y que incorpora en todo
momento los ltimos avances en determinaciones analticas.
Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde
siempre.
OBJETIVO DE LA GUA PRCTICA

OBJETIVO GENERAL
BIOQUIMICA II PRCTICA
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
Al final de semestre del curso prctico el estudiante ser capaz de

explicar cmo funcionan los principales procesos metablicos y los mecanismos
moleculares que le subyacen a la funcin fisiolgica de clulas, tejidos, y rganos
del cuerpo humano, bajo distintas condiciones fisiolgicas.
OBJETIVO ESPECIFICOS
- Que el estudiante entienda los fenmenos fisiolgico desde el punto de
vista bioqumico y que sea capaz de integrar este conocimiento en la
estructura fisiolgica de la clula, del tejido y del organismo.
- Que el estudiante conozca los mecanismos bioqumico del funcionamiento
del organismo humano de una manera dinmica e integral y, al mismo
tiempo, comprenda cmo esos mecanismos se encuentran alterados en la
enfermedad.
- Que el estudiante aplique el mtodo cientfico como una herramienta en la
identificacin, el anlisis y la solucin de problemas mdicos.
- Que el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido integrar
el conocimiento a nivel bioqumico como una herramienta fundamental
para la comprensin de los procesos fisiolgicos y de la fisiopatologa y con
ello entienda los principios en los que se apoya la tecnologa empleada en
el diagnstico de enfermedades.
NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO

Las prcticas de Bioqumica son una parte esencial en la formacin de un alumno
en esta materia. Para el buen aprovechamiento de las mismas es necesario leer
con atencin estas notas y en particular, cada prctica antes de entrar en el
laboratorio.
1. Realizar las prcticas de Laboratorio con el debido inters y responsabilidad.
2. Lea cuidadosamente la Gua de Prctica y tenga en cuenta las indicaciones
de los Profesores sobre el uso del material y equipo de Laboratorio, as
como el orden, limpieza y seguridad que debe mantenerse.
3. El o la estudiante deber acudir a todas las Prcticas de Laboratorio
provisto de mandil blanco con su respectivo logo de la facultad.
4. Por cada Prctica de Laboratorio, cada mesa de Trabajo presentar un
nico informe, el cual consta de las siguientes partes: INTRODUCCIN,
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BIOQUIMICA
OBJETIVOS, RESULTADOS, DISCUSIN DE LOS RESULTADOS,

CONCLUSIONES, CUESTIONARIO Y BIBLIOGRAFA. Debindose
presentar a la semana siguiente en el horario y grupo respectivo que le
corresponda; ciertos informes de prctica puede ser entregados en el
mismo da de la prctica realizada. La presentacin del informe ser CON
LETRA CLARA Y LEGIBLE DESARROLLADO A MANO.
5. El inicio de la prctica es en la hora exacta programada. Se tendr una
tolerancia de 5 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se tendr
derecho a Nota de prcticas.
6. Las inasistencias a las Prcticas de Laboratorio NO SON RECUPERABLES EN
NINGUNO DE LOS GRUPOS, por lo tanto dichas faltas debern de ser
justificadas con un mximo de una (01) semana.
7. Cada Alumno ser integrante de una Mesa de Trabajo, a la cual pertenecer
a lo largo del Semestre Acadmico.
8. Por mesa de trabajo, ser nombrado un responsable del material y equipo
recibido.
9. En caso de dao, deterioro o prdida del material y equipo, el responsable
de mesa informar del hecho al Profesor. TODO EL GRUPO ES RESPONSABLE
DEL Dao CAUSADO y deber repararlo en la brevedad posible, no mximo
de una (01) semana despus del incidente, con la detencin de sus Carnet
Universitarios.
10.
Al final de la Prctica, se proceder a limpiar el material usado, con el
fin de entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos.
11.
Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolver a la
persona encargada de laboratorio.
12.
El laboratorio deber quedar completamente limpio, las mesas secas y
limpias, debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura, segn
corresponde al material utilizado
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PRACTICA N 1
BIOQUIMICA
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO BIOQUMICO

La bioseguridad es un conjunto de medidas probadamente eficaces para evitar la
adquisicin accidental de infecciones con patgenos contenidos en las muestras,
as como los riesgos relacionados con la exposicin a agentes qumicos, fsicos o
mecnicos a los que est expuesto el personal en los laboratorios.
Recuerden que la bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas
reconocidas internacionalmente orientadas a proteger la salud y la seguridad del
personal y su entorno. Complementariamente se incluye normas contra riesgos
producidos por agentes fsicos, qumicos y mecnicos.
Modernamente se incorporan tambin las acciones o medidas de seguridad
requeridas para minimizar los riesgos derivados del manejo de un organismo
modificado genticamente (OMG), sus derivados o productos que los contengan, y
uso de la tecnologa del ADN recombinante (ingeniera gentica) y otras tcnicas
moleculares ms recientes.
OBJETIVO:
Establecer la normativa para proteger la salud de las personas que puedan estar
expuestas a riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos,
qumicos, fsicos, en los laboratorios de ensayo clnicos.
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BIOQUIMICA
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD
1.- UNIVERSALIDAD. Las medidas de bioseguridad deben involucrar a todas
las dependencias de la institucin. Todo el personal, pacientes (si los
hubiera) y visitantes deben cumplir de rutina con las normas establecidas
para prevenir accidentes.
2.- USO DE BARRERAS. Establece el concepto de evitar la exposicin directa
a todo tipo de muestras potencialmente contaminantes, mediante la
utilizacin de materiales o barreras adecuadas que se interpongan al
contacto con las mismas, minimizando los accidentes.
3.- MEDIOS DE ELIMINACIN DEL MATERIAL CONTAMINADO. Es el conjunto
de dispositivos y procedimientos a travs de los cuales se procesan y
eliminan muestras biolgicas y qumicas sin riesgo para los operadores y la
comunidad.
4.- EVALUACIN DE RIESGOS. Es el proceso de anlisis de la probabilidad de
que ocurran daos, heridas o infecciones en un laboratorio. Debe ser
efectuada por el personal de laboratorio ms familiarizado con el
procesamiento de los agentes de riesgo, el uso del equipamiento e insumos,
los modelos animales usados y la contencin correspondiente.
Una vez establecido, el nivel de riesgo debe ser reevaluado y revisado
permanentemente, a fin de formular un plan de minimizacin.
La mayora de los accidentes estn relacionados con:
- El carcter potencialmente peligroso (txico o infeccioso) de la muestra.
- Uso inadecuado de equipos de proteccin.
- Errores humanos. Malos hbitos del personal.
- Incumplimiento de las normas.
A su vez, los accidentes pueden ser causados por:
a) AGENTES FSICOS Y MECNICOS: Efectos traumticos quemaduras por
exposicin a muy altas/bajas temperaturas, cortaduras por vidrios o
recipientes rotos, malas instalaciones que generan posturas inadecuadas,
cadas por pisos resbalosos, riesgo de incendios, inundaciones, instalaciones
elctricas inadecuadas, etc.
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b) AGENTES QUMICOS:
Exposicin a productos corrosivos, txicos, irritantes
BIOQUIMICA
o cancergenos por inhalacin, contacto con la piel o mucosas, por heridas o
ingestin. Exposicin a agentes inflamables o explosivos.
c) AGENTES BIOLGICOS: El riesgo depender de la naturaleza del agente,
su patogenicidad, virulencia, modo de transmisin y la va de entrada
natural al organismo y otras rutas (inhalacin de aerosoles, inyeccin por
pinchazos con agentes punzantes, contacto), concentracin en el inculo,
dosis infecciosa, estabilidad en el ambiente y la existencia de una profilaxis
eficiente o la posibilidad de una intervencin teraputica. Las prcticas que
se realizan en los laboratorios presentan riesgos propios de cada actividad.
BARRERAS DE BIOSEGURIDAD:
1.- EQUIPOS DE SEGURIDAD (BARRERAS PRIMARIAS): El concepto de barrera
primaria incluye elementos de proteccin personal, tales como: guantes,
delantales, cobertores de zapatos, botas, respiradores, mscaras faciales,
anteojos de seguridad, propipetas y cabinas de seguridad biolgica.
- Se trabajar con guantes en caso de que las tareas as lo requieran o de que
existan lastimaduras o alguna erupcin; es fundamental saber utilizarlos,
esto implica que el usuario deber abstenerse de tocar otros elementos de
uso comn con la mano enguantada (por ejemplo: telfono, manijas de
cajones o puertas, etc.).
- Se recomendar el uso de guantes, mandiles o uniformes de laboratorio a
fin de evitar que la ropa de calle se pueda contaminar o ensuciar.
- La proteccin ocular se llevar a cabo si existe el riesgo de que durante los
procedimientos se produzcan salpicaduras con microorganismos u otros
materiales peligrosos.
- Los equipos de proteccin personal se utilizarn en forma individual, segn
la necesidad, o en combinacin con las cabinas de seguridad biolgica y
otros dispositivos que contengan los agentes, animales o materiales que se
manipulan.
- En cada lugar de trabajo, se deber conocer la ubicacin de los elementos
de seguridad, tales como extintores, seales de salidas, mantas ignfugas,
lavaojos, kits para contener derrames, alarmas, duchas, etc.
- Bajo ninguna circunstancia se podr correr en los laboratorios.
- Es fundamental que las rutas de escape o pasillos no estn bloqueadas con
bancos, sillas, equipos u otros elementos que entorpezcan la correcta
circulacin.
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BIOQUIMICA
2.- HBITOS E HIGIENE PERSONAL:
- Las personas se lavarn las manos todas las veces que sea necesario,
luego de manipular materiales viables, luego de quitarse los guantes y
antes de retirarse del laboratorio.
- No estar permitido comer, beber, fumar, manipular lentes de contacto,
maquillarse o almacenar alimentos para uso humano en reas de trabajo.
- Las personas que usan lentes de contacto en laboratorios debern tambin
utilizar antiparras o un protector facial.
- Se evitar el uso de accesorios colgantes (aros, pulseras, collares) y,
aquellas personas que as lo requieran debern trabajar con el cabello
recogido.
Los alimentos se almacenarn fuera del rea de trabajo en gabinetes o
refrigeradores designados y utilizados con este nico fin.
- Tampoco se debe hervir agua a los fines de preparar mate, caf o te.
RECOMENDACIONES MNIMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
PROTECCIN PERSONAL:
- Es importante que todos respeten las seales de advertencia, como lo son
las seales de riesgo elctrico, temperaturas elevadas, radiaciones.
- Se usarn en todo momento batas o uniformes especiales para el trabajo en
el laboratorio.
- El personal deber lavarse las manos despus de manipular materiales y
animales infecciosos, as como antes de abandonar las zonas de trabajo del
laboratorio.
- Se usarn gafas de seguridad, viseras u otros dispositivos de proteccin
cuando sea necesario proteger los ojos y el rostro de salpicaduras, impactos
y fuentes de radiacin ultravioleta artificial.
- Estar prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio.
- No se usar calzado sin puntera.
- En las zonas de trabajo estar prohibido comer, beber, fumar, aplicar
cosmticos o manipular lentes de contacto.
- Estar prohibido almacenar alimentos o bebidas para consumo humano en
las zonas de trabajo del laboratorio.
- La ropa protectora de laboratorio no se guardar en los mismos armarios o
taquillas que la ropa de calle.
- Estar estrictamente prohibido pipetear con la boca.
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BIOQUIMICA
No se colocar ningn material en la boca ni se pasar la lengua por

las etiquetas.
Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a

materiales infecciosos se comunicarn al supervisor del laboratorio.
Se elaborar y seguir un procedimiento escrito para la limpieza de todos
los derrames.
Los lquidos contaminados debern descontaminarse (por medios qumicos
o fsicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento.
La ropa de trabajo debe estar abrochada en todo momento, evitando vestir
mangas anchas o colgantes, y tener los cabellos recogidos.
Los desperdicios, manchas y residuos de sustancias peligrosas se
eliminarn con rapidez.
El buen estado de los productos y materiales as como su etiquetado debe
comprobarse antes de su utilizacin.
Todos los preparados deben estar etiquetados adecuadamente, estando
prohibida la reutilizacin de los envases vacos sin la retirada de la etiqueta
original.
El laboratorio se mantendr ordenado, limpio y libre de materiales no
relacionados con el trabajo.
Las superficies de trabajo se descontaminarn despus de todo derrame de
material potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
Las ventanas que puedan abrirse estarn equipadas con rejillas que
impidan el paso de artrpodos.
MANIPULACIN DE SUSTANCIAS QUMICAS:

Productos qumicos como factores de riesgo. Las sustancias qumicas
peligrosas, son aquellos elementos qumicos y sus compuestos, tal y como se
presentan en su estado natural o como se producen por la industria, que
pueden daar directa o indirectamente a personas, bienes y/o medio ambiente.
Estas sustancias qumicas, en funcin de su peligrosidad, se clasifican como:
a) Explosivas.- Sustancias y preparados que pueden explosionar por el efecto
de una llama o del calor, o que sean muy sensibles a los choques y a los
roces.
b) Comburentes.- Sustancias y preparados, que en contacto con otros,
particularmente con los inflamables, originan una reaccin fuertemente
exotrmica.
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c) Inflamables.- Sustancias y preparados cuyo punto de ignicin es

bajo. En funcin de su mayor o menor inflamabilidad se distinguen tres
grupos:
a. Extremadamente Inflamables
b. Fcilmente Inflamables
c. Inflamables
d) Txicas.- Sustancias y preparados que por inhalacin, ingestin o

penetracin cutnea pueden alterar la salud de un individuo. El grado de
toxicidad se establece en tres categoras:
a. Muy Txicas
b. Txicas
c. Nocivas
e) Corrosivas.- Sustancias y preparados que en contacto con el tejido vivo
pueden ejercer una accin destructiva del mismo.
f) Irritantes.- Sustancias y preparados no corrosivos, que por contacto
inmediato, prolongado o repetido con la piel o las mucosas puedan provocar
una reaccin inflamatoria.
g) Peligrosas para el medio ambiente.- Sustancias y preparados que, en caso
de contacto con el medio ambiente, pueden suponer un peligro inmediato o
futuro para uno o ms componentes del mismo.
h) Cancergenas.- Sustancias y preparados que, por inhalacin o penetracin
cutnea, pueden producir cncer o aumentar su frecuencia.
i) Teratognicas.- Sustancias y preparados que, por inhalacin, ingestin o
penetracin cutnea, pueden producir alteraciones en el feto durante su
desarrollo intrauterino.
j) Mutagnicas.- Sustancias y preparados que, por inhalacin, ingestin o
penetracin cutnea, pueden producir defectos genticos hereditarios o
aumentar su frecuencia.
k) Alergnicas.- Sustancias y preparados que, por inhalacin o penetracin
cutnea, pueden ocasionar una reaccin en el sistema inmunitario, de
forma que la exposicin posterior a esa sustancia o preparado de lugar a
una serie de efectos negativos caractersticos.
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INFORME N1
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
INTRODUCCIN:
CUESTIONARIO:
1. En forma de cuadernillo: Dibuje y describa cada uno de los signos qumicos
(pictogramas) que se utilizan para clasificar el peligro de las sustancias
qumicas. De cada signo qumico mencione 3 ejemplos.
2. Realizar un esquema indicado el proceso que debemos seguir en una
emergencia en el laboratorio como son:
a. salpicadura de sustancias
b. inhalacin de gases.
c. Heridas punzantes, cortes y abrasiones
d. Derrames sobre la mesada de trabajo.
BIBLIOGRAFA:
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BIOQUIMICA
PRACTICA N 2
DIGESTIN DE CARBOHIDRATOS
El carbohidrato ms importante en la alimentacin es la glucosa, la cual
ingerimos bajo la forma de disacridos (maltosa, sacarosa y lactosa) o de
almidn, polisacridos formados por muchas molculas de glucosa.
El almidn es el constituyente esencial de cereales, leguminoso, tubrculos y
races. La digestin de los carbohidratos se produce gracias a las enzimas
digestivas producidas por la glndula salivares, el pncreas y la pared intestinal.
Estas enzimas son:
o La alfa amilasa salivar
o La alfa amilasa pancretica
o La amilo 1,6 glucosidasa de la pared intestinal
Las alfa amilasas son enzimas que actan a pH neutro y en presencia de iones
cloro. Rompen los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacridos y
glucosa. Los carbohidratos se comienzan a digerir en la boca por accin de la amilasa de la saliva lquido orgnico segregado de modo reflejo ante la presencia
de la comida. La -amilasa tambin llamada ptialina, cataliza la hidrlisis de las
unidades glucosa a nivel del enlace glucosidico -1,4.
Existen dos formas de evaluar la actividad enzimtica e la amilasa:
o Por desaparicin de sustrato: forma como desaparece el almidn el
que se aprecia por la reaccin del lugol.
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BIOQUIMICA
o Por formacin de producto: forma como desaparece

carbohidratos reductores (glucosa) en el medio, los que se aprecian
por reduccin del cobre.
OBJETIVO
- Comprender la importancia de la accin de la -amilasa.
- Realizar experimentalmente la digestin enzimtica del almidn por accin
de la -amilasa.
- Evaluar de forma experimental el efecto del cloruro de sodio y del pH sobre
la actividad enzimtica de la amilasa.
- Identificar cualitativamente la presencia del sustrato de la reaccin
enzimtica.
- Identificar cualitativamente los productos de la reaccin enzimtica.
- Fundamentar las resultados obtenidos.
TCNICA EXPERIMENTAL: Digestin del almidn por la amilasa salivar
Coleccin de la saliva: El donante de saliva no debe haber ingerido
alimento durante un mnimo de 2 horas, antes de la coleccin se proceder
a un enjuague simple de la cavidad oral con agua; luego, manteniendo la
boca cerrada esperara entre 5 a 7 minutos. Evitando hablar y pasar la
saliva.
La coleccin se realizara en un recipiente de boca ancha dejando caer por
gravedad la saliva, evitando la formacin de espuma.
TECNICA EXPERIEMENTAL:
Preparar un batera de tubos como sigue:
REACTIVOS
TUBOS
FACULTAD FARMACIA
Y
1
2
3
ml Almidn al 1%
1
1
1
BIOQUIMICA
ml Buffer Fosfato pH 6,6
5,2
6
6
ml Cloruro de sodio 1,6%

0.8
0.8
0.8
ml bicloruro de mercurio
0.8
--1%
ml Solucin Enzimtica
-0.2
-Hervida
ml Solucin Enzimtica
0.2
-0.2
Fresca
Mezclar e incubar a B.M. a37 C por 20 minutos, al
minutos de incubar, efectuar
TUBOS
REACTIVOS
1
2
3
ml HCl
5
5
5
ml solucin iodada
0.5
0.5
0.5
ml solucin de tubos
0.5
0.5
0.5
anteriore
Mezclar y dejar en reposo 15 minutos. Interpretar los
4
1
6,8
---0.2
trmino de los20
4
5
0.5
0.5
resultados.
EQUIPOS
- Bao de agua o bao mara
- Cocina Elctrica
- Balanza Analtica
MATERIALES
- Probetas de 100m
Probetas de 50 ml
Pipetas de 2 ml
Pipetas de 1 ml
Pipetas de 5 ml
Fiola 100 ml
Vaso de precipitado
- Gradilla para tubos de ensayo
- Tubos de ensayo
- Propipetas
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
- Celda para espectrofotmetro

- Vasos descartables
- Materiales de limpieza
REACTIVO
- Almidn
Buffer fosfato pH 6,6
HCl
Suero fisiolgico
Agua destilada
Parafina
INFORME N2
DIGESTIN DE CARBOHIDRATOS
INTRODUCCIN:
OBJETIVO:
CUESTIONARIO: Mediante un esquema explique la digestin de carbohidratos,

las reacciones, las enzimas que intervienen.
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS:
CONCLUSIN:
BIBLIOGRAFA:
PRACTICA N 3
GLICEMIA ENZIMTICA
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN MUESTRA BIOLOGICA
La glucosa es la principal fuente de energa en los seres vivos. Por tal razn es un
metabolito fundamental en los procesos biolgicos.
La determinacin cuantitativa de este compuesto, ha sido objeto de muchos
estudios y la literatura ofrece diversas tcnicas de anlisis que varan de acuerdo
con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los contenidos de
glucosa y la viabilidad experimental.
El Mtodo enzimtico para la determinacin de glucosa en sangre y otros lquidos
biolgicos
Fundamento del mtodo: El esquema de reaccin es el siguiente:
Glucosa+O2 + H 2 O
GOD Acido Gluconico+ H 2 O2
2 H 2 O2+ 4 AF+ Fenol
POD Quinona Coloreada+ 4 H 2 O
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
OBJETIVO
- Determinar por espectrofotometra el contenido de la glucosa en suero y/o
en plasma sanguneo humano.
- Comprender la importancia de la glucosa
- Determinar cuantitativamente la determinacin de la glucosa
EQUIPOS
Espectrofotmetro
Centrifugas
Micropipetas
Bao mara
Materiales
MATERIALES
Tubos de ensayos
Tubos de centrifugacin
Pipetas graduadas 5 ml
Pipetas graduadas 2 ml
Gradilla para tubos ensayos
Varilla de vidrio y/o baguete
Propipetas
Jeringa de 5 cc
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
Aguja de 21
Ligadura
Algodn y alcohol
Materiales de limpieza
REACTIVOS
o Kit de glucosa:
TCNICA EXPERIMENTAL:
-
RECOLECCIN DE MUESTRA: Se debe obtener suero o plasma de la manera

usual. Tambin es posible realizar la determinacin en lquido
cefalorraqudeo. Adems, cuando no es posible extraer sangre venosa o en
casos de extrema urgencia, la determinacin se puede realizar en sangre
capilar.
o Aditivos: En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se
recomienda el uso de anticoagulante G.
o Estabilidad e instrucciones de almacenamientos: los hemates y
leucocitos son los responsables de la destruccin enzimtica de la
glucosa sangunea, siendo mxima a 37C, razn por la debe
centrifugarse la sangre dentro de las dos horas posteriores a la
extraccin, hasta obtener un sobrenadante lmpido y trasferir a otro
tubo para su conservacin. En estas condiciones la glucosa es estable
4 horas a temperatura ambiente o 24 horas refrigeradas (2- 10 C).En
caso de no poder procesarse la muestra de la forma antes indicada,
deber adicionarse un conservador en el momento de la extraccin
para inhibir la glucolisis.
Luego de obtener la muestra (plasma o suero).
En tres tubos de ensayos marcados con B (blanco), S (Standard)

(desconocido o muestra), colocar segn el siguiente esquema:
STANDARD
MUESTRA
10 ul
10ul
y D
FACULTAD
FARMACIA Y
REACTIVO DE
1 ml
1ml
TRABAJO
BIOQUIMICA
-
1ml
Incubar minutos en bao de agua a 37C. luego leer en espectrofotmetro a

505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490 -530 nm) llevando el
aparato a cero con el blanco.
CONDICIONES DE REACCIN:
o longitud de onda: 505 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro
con filtro verde (490 530 nm).
o Temperatura de reaccin : 37C
o Tiempo de reaccin: 10 minutos
o Volumen de muestra: 20ul
o Volumen de reactivo de trabajo: 2 ml.
o Volumen final de reaccin: 2,02 ml.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIN FINAL: el color de reaccin final
es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser leda dentro de este
lapso.
RESULTADO:
- El Tubo B se emplea para la calibracin.
- El tubo S nos da la lectura del reactivo de trabajo y del factor.
- El tubo D nos da la lectura de las muestras.
GLICEMIA = D x f
Dnde:
D= es la absorbancia de la muestra (desconocido)
f= Concentracin de estndar x 100
Absorbancia del estndar
VALORES NORMALES
- Suero o plasma: 0,70 1,10 g/L
- En los nios pqueos se aceptan valores de 40 a 100 mg/ L.
DIAGNOSTICO POSIBLES EN VALORES ANORMALES DE GLUCEMIA:

-
FACULTAD FARMACIA Y
Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglicemia) en:
BIOQUIMICA
o Diabetes Mellitus
Enfermedades Renales
Feocromocitoma
Hipertiroidismo
Gkucagonona
Pancreatitis aguda
Sndrome de Cushing
Tumores pncreas
Estrs por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco, anestesia
general).
o Los tratamiento con sueros en vena, ya que contiene dextrosa
(azcar).
o Embarazo
o Medicamentos
(antidepresivos,
antihipertensivos,
hormonas
femeninas, etc.).
o
o
o
o
o
o
o
o
Pueden aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:

o Dieta excesivas
o Enfermedades hepticas
o Enfermedades de Addison
o Exceso de insulina en diabticos
o Hipotiroidismo
o Hipotituarismo
o Insulinoma
o Alcohol y analgsico puede disminuirla
INFORME N3
GLICEMIA ENZIMTICA
INTRODUCCIN:
OBJETIVO:
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
RESULTADOS:
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIN:
CUESTIONARIO:
1) cules son los valores de referencia de glucosa en la sangre, orina, suero?
2) Como interviene la glucolisis en la muestra problema (sangre). En el suero y
lquidos biolgicos.
3) Que objeto tiene el diagnostico precoz y el control de los pacientes
diabticos.
4) Enumere las 3 categoras principales de diabetes mellitus (DM) y cul es la
ms comn.
5) Realice las caractersticas diferenciales de la DM tipo 1 y la DM tipo 2.
6) Mencionar y explicar la triada diabtica
7) Dibuje un grfico sealando el mecanismo de accin de la glucosa, atreves
de sus hormonas catablicas y anablicas.
BIBLIOGRAFA:
CASOS CLINICOS
1. Paciente de 59 aos, ingresa por guardia central con diagnstico de
Cetoacidosis Diabtica (CAD). Antecedentes Patolgicos: Diabetes tipo 1 de
30 aos de evolucin. Pancreatitis aguda un mes previo a la internacin
actual acompaada de CAD con necesidad de asistencia respiratoria
mecnica. Motivo de Consulta: Depresin del sensorio acompaado de
relajacin de esfnteres. Antecedentes de la enfermedad actual: Familiar
refiere encontrar a la paciente tendida en el suelo, vigil, confusa con
relajacin de esfnteres
2. Paciente de sexo femenino de 28 aos de edad que consulta por consultorio

externo de diabetologa. Motivo de consulta: Mareos con prdida del
conocimiento al pasar de la posicin de pie a la posicin sentada o parada.
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
Ardor para orinar. Dolor quemante continuo de ambos pies con

imposibilidad en la deambulacin. Antecedentes personales patolgicos:
Diabetes tipo 1 de 18 aos de evolucin con mal control metablico, tratada
en la actualidad con insulina NPH 20 UI/dia + insulina regular pre prandial
segn glucemias a razn de 10UI/da. Con anterioridad estuvo tratada con
insulina Glargina por perodos cortos de tiempo, la paciente se negaba a
usar analgos.
DESARROLLAR EN CADA CASO CLNICO:

1. Explique las bases bioqumica del problema de salud, indicando los valores
normales, los sntomas y signos del paciente.
2. Realizar la posible solucin para el problema de salud.
PRACTICA N 4
EXTRACCIN Y AISLAMIENTO DE GLUCGENOS HEPTICO EN POLLO
Los hidratos de carbono son almacenados como sustancia de reserva por los
seres vivos en forma de polisacridos; el almidn y la inulina son las formas de
almacenamiento en vegetales, mientras que el glucgeno es la reserva glucdica
de los animales.
El glucgeno consta de unidades de glucosa unidas por enlace glucosdico(1-4)
formando cadenas; cada 8 10 unidades de glucosa, la cadena presenta
ramificaciones que se unen mediante enlace (1-6). El glucgeno es
especialmente abundante en el hgado (entre 3-5 g por 100 g de tejido fresco ) y
en, en menor medida, el msculo. El ayuno disminuye las reservas de glucgeno
fundamentalmente heptico.
OBJETIVOS:
- Recordar la importancia del glucgeno
- Recordar las fuentes de glucgeno
- Es la extraccin del glucgeno heptico
- Ser capaz de realizar la hidrolisis cidas enzimtica
MATERIAL BIOLOGICA
FACULTAD FARMACIA Y
BIOQUIMICA
Una pollo bien alimentado durante unas semanas antes

EQUIPO
Centrifuga
Balanza analtica
MATERIALES
Pipetas de 5 ml
Pipetas de 10 ml
Tubos de ensayo
Tubos de centrifuga
Mortero con pitn
Varilla de vidrio
REACTIVOS
KOH (30%)
alcohol etlico
SO4Na2
Etanol
Hielo
Solucin de lugol
Probeta de 100 ml
Vasos de precipitacin de 250
ml
Luna de reloj
Fiola de 100 ml
FAC. FARMACIA Y BIOQUMICA

PRCTICA - BIOQUMICA II
GUA DE
TCNICA EXPERIMENTAL
-
Prepare el cido tricloroacetico al 5% y al 10% en la fiola.

Decapitarun pollo bien alimentado con una dieta alta en
carbohidratos (una semana antes).
Extraiga el hgado con sumo cuidado.
Inmediatamente colocar el hgado en una luna de reloj bien helada
y pesar (previamente realizar pesada de la luna de reloj para
obtener el peso del material biolgico por diferencia)
Cortar el hgado en trozos pequeos y dejarlo caer en un mortero
muy frio, y adicionar 1 ml de TCA al 5 % por cada gramo de
hgado.
Pesar 0,5g de arena lavada y agregarlo al mortero para iniciar la
trituracin (mantener el mortero en hielo) hasta obtener una masa
liquida homognea.
Trasvasar el preparado a los tubos de ensayo equitativamente
hasta las dos cuartas partes de la capacidad.
Llevar los tubos a centrifugar durante 5 minutos a 2000 RPM
Decantar el lquido sobrenadante opalescente en la probeta de
1000ml
Enjuagar el mortero con un volumen mayor de TCA al 10% con el
objetivo de conseguir una extraccin ms completa del glucgeno
heptico.
Verter el lquido de los lavados en los tubos y llevar a centrifugar
durante 5 minutos a 2000 RPM
Decantar el sobrenadante uniendo al primer extracto TCA en la
probeta y anotar el volumen total.
Repetir los pasos anteriores para mayor rendimiento
Aadir con agitacin a los extractos TCA, 2 volmenes de etanol

por cada volumen de extracto.
Agitar la mezcla y dejar en reposo hasta que el precipitado flocule.
Una vez observada la floculacin agitar energticamente y
trasvasar el contenido en el nmero mayor posible de tubos de
ensayos, para llevar a la centrifuga por 5 minutos a 2000 RPM
Eliminar el sobrenadante trasparente
Aislar en la luna de reloj el glucgeno de cada tubo de ensayo para
su posterior secado.
RECONCIMIENTO DEL GLUCOGENO:

o Tome una pequea cantidad del glucgeno y disulvalo en 2
ml de agua destilada en un tubo de ensayo, agregue unas
gotas de reactivo de lugol. Observe el color.

GUA DE
INFORME N4
EXTRACCIN Y AISLAMIENTO DE GLUCGENOS HEPTICO EN
POLLO
INTRODUCCIN:
OBJETIVO:
RESULTADOS:
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:
CONCLUSIN:
CUESTIONARIO:
1. Compare las caractersticas del almidn, glucgeno, celulosa y
quitina
2. Que factores pueden influir sobre el porcentaje del glucgeno en el
hgado
3. Qu importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimtica
4. Cules son las enzimas claves que participan en el metabolismo
de los carbohidratos.
BIBLIOGRAFA:

GUA DE
CASO CLINICO
Varn de raza blanca de 16 aos de edad lleg a la sala de urgencias
del hospital en estado estuporoso. Al efectuar el examen fsico se
observ que presentaba respiracin profunda y taquipnea, su aliento
tena olor a frutas y su piel y membranas mucosas estaban secas.
Datos de laboratorio
Sodio 128 mmol/L (138-145 mmol/L)
Calcio 10 mg/dL (8-25 mg/dL)
Potasio 6,1 mmol/L (3,1-5,5 mmol/L)
Fsforo 3,6 mg/dL (3.0 -4.5 mg/dL)
Cloruro 88 mmol/L (95-105 mmol/L)
Bicarbonato 9 mmol/L (21-27 mmol/L)
Urea en sangre 50 mg/dL (8-25 mg/dL)
pH 7,12 (7,35-7,45)
pCO2 28 mmHg (35-45 mmHg)
Glucosa srica 750 mg/dL (70-110 mg/dL)
Acetona srica 3+ (0)
Hematocrito 53% (42-45%)
Hemoglobina 17,6 g/d}L (14-16 g/dL)
Recuento leucocitos 12000/mm3 (4.300-10000 mm3)
Recuento eritrocitos 6 millones /mm3 (4,5-5,2/mm3)
Responde:
1. Identificar los datos de laboratorio y los signos y sntomas
anormales
2. Con base a los antecedentes clnicos de la paciente, las
observaciones clnicas y datos de laboratorio, el tipo de
intolerancia a la glucosa se clasificara como;
3. Por qu aumentan los cuerpos cetnicos?
4. Qu observaciones indican prdida de agua?
5. Qu parmetro nos indica un buen control sobre los estados de
glucemia en los ltimos 120 das.
PRACTICA N 5
SCHOCK INSULINICO EN CONEJO
EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA SANGUINEA

GUA DE
FENOMENOS DEL SHOCK INSULNICO

El trmino shock insulnico se utiliza para describir la hipoglicemia severa que
produce prdida del conocimiento y otros trastornos. La hipoglicemia se produce
cuando la glucosa del cuerpo se gasta con demasiada rapidez, cuando sta es
liberada en el torrente sanguneo con mayor lentitud que lo requerido por el
cuerpo, o cuando se libera demasiada insulina en el torrente sanguneo.
La insulina es una hormona producida por el pncreas en respuesta a mayores
niveles de glucosa en sangre, cuya funcin es reducir estos altos niveles de
glucosa. La hipoglicemia es relativamente comn en las personas diabticas. Se
presenta por un exceso de insulina oral o de medicamento oral antidiabtico,
cuando no se come lo suficiente, o por un incremento repentino del ejercicio sin
compensarlo con una mayor ingesta de alimentos. La hipoglicemia relativa, es
decir, cuando la glucosa en la sangre de un recin nacido est baja, es bastante
comn. Un beb nacido de una madre diabtica o con diabetes gestacional
(causada por el embarazo) puede presentar hipoglicemia severa. En estos casos
el nio es llamado "beb de madre diabtica". Si durante el embarazo el nivel de
azcar en la sangre de la madre es persistentemente alto, el pncreas del feto
interviene en el control del exceso de azcar produciendo insulina adicional.
Cuando el nio nace, ya no recibe ms glucosa de la madre, pero an produce
-mayor cantidad de insulina, y este exceso hace que el azcar en la sangre del
beb descienda a niveles peligrosos. Esto es una emergencia mdica que de no
tratarsepuede provocar convulsiones y daos al sistema nervioso del beb.
OBJETIVOS
-
Demostrar lo que pasa cuando se administra glucosa al conejo que se
encuentra en estado de shock.

Ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren como resultado de
la administracin de la insulina.

GUA DE
Observar los efectos de un exceso de insulina en los conejos
Recordar los procesos bioqumicos que ocurren durante dicho proceso y

relacionarlo con episodios de la diabetes
EQUIPO
-
Balanza analtica
MATERIALES BIOLGICO
-
1 conejos en ayunas durante 24 horas
MATERIALES
Fiola de 100 ml
Jeringa de tuberculina
Tubos de ensayo
Algodn y alcohol
Vaso de precipitacin 100 ml
Materiales de limpieza
Agitadores de vidrio
Jeringa de 10 cc
Gradillas para tubos de ensayo

REACTIVOS
Glucosa anhidra
Insulina de accin rpida
Agua destilada
Adrenalina
TCNICA EXPERIMENTAL
-
El conejo es un animal muy sensible a la accin de la insulina, cuya

respuesta a esta hormona es muy diferente de la del perro. Por esta razn,
el conejo es el animal de eleccin en el ensayo biolgico oficial de
estandarizacin de las preparaciones insulnicas. Efectivamente, la
definicin de la unidad estndar de insulina est basada en la respuesta
observada con este animal.

El conejo deber estar en ayunas 24 horas antes del experimento. Se
inyectan 0.3ml de insulina por va subcutnea al comenzar la sesin de

GUA DE
laboratorio. No deben usarse preparados de insulina de absorcin lenta

-
(Insulina-Zn, Insulina-Zinc-portaminas).
Luego de media hora se le inyectan tambin por va subcutnea de 0,2ml
de insulina.
Mientras usted espera los dramticos efectos de la insulina, prepare una
solucin al 10 % de glucosa que se le administrar al animal y tenga lista
tambin una jeringa de 10 ml. Despus de un tiempo variable, pero
seguramente cerca de una hora despus de la segunda inyeccin de
insulina, el animal entrar en convulsiones. Antes de que esto ocurra el
animal habr pasado por una serie de cambios caractersticos, los cuales
recuerdan los cambios que experimenta un individuo con shock insulnico.

Si al animal no se le presta atencin posterior, puede ocurrir que no se
observe el perodo de convulsiones sino el periodo en el cual, el conejo en
estado comatoso permanece tranquilo. Algunas veces la muerte sobreviene
durante este primer ciclo de convulsiones. Muy pronto sin embargo, se
establece otro perodo de convulsiones, durante el cual el animal parece
encontrarse al borde de la muerte. El animal puede sobrevivir sin embargo
a esta nueva crisis.

Una vez que el animal ha superado esta primera crisis y estando, an en
estado comatoso, se le administran 10 ml de la solucin al 10% de glucosa
por va intraperitoneal.
Como el animal haba sido sobrecargado de insulina, la inyeccin de la
solucin de glucosa slo lo proteger en una forma temporal. En las horas
siguientes es seguro que el animal caer de nuevo en shock ms de una
vez. Usted tendr entonces la responsabilidad de protegerlo de la muerte.
Asegrese de que haya alimento en la jaula del animal. Dos inspecciones
deben hacerse del animal, la primera a las 2 3 horas y la segunda a las 6
horas. En cada una de estas visitas, como medida de proteccin, se
inyectan intraperitonealmente 10 ml de solucin al 10% de glucosa.
SNTOMAS DE HIPOGLICEMIA:

INFORME N5
SHOCK INSULINICO EN CONEJO
INTRODUCCIN:
OBJETIVO:
RESULTADOS:
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS:
CONCLUSIN:
CUESTIONARIO:
1. Defina el concepto de : shock, shock hipo glicmico
GUA DE

GUA DE
2. Qu cambios observ usted en la conducta del animal a medida que los

niveles de glucosa se acercaban al nivel del shock?
3. A qu nivel estaba la glucosa sangunea cuando el animal cay en
shock?
4. A cierto tipo de pacientes (esquizofrnicos) se les provoca shock insulnico
de un modo similar al que usted ha provocado en el conejo y parece que
estos pacientes son beneficiados por este tratamiento. Cree usted que es
el efecto sobre los msculos y sus correspondientes conclusiones lo que
busca el psiquiatra? Ser acaso el efecto sobre el sistema nervioso lo cual
conduce a cambios en la conducta an de un conejo?
5. Describa qu es lo que pasa cuando usted administra glucosa al animal que
se encuentra en estado de shock.
6. Usted debe ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren en un
animal como resultado de la inyeccin de insulina.
7. Para que utilizamos la adrenalina? Cul es su mecanismo de accin?
BIBLIOGRAFA:
PRACTICA N 6
INTERPRETACIN CLNICA
INTEGRACIN DE LAS RUTAS METABLICAS DE LOS HIDRATOS DE
CARBONOS
CASO CLNICO N1
Una nia de 14 aos de edad ingreso a un hospital infantil en estado de coma. La
madre refiri que la nia se encontraba con buena salud hasta dos semanas
previas al ingreso, cuando de forma repentina desarrollo fiebre moderada y una
ulcera en el cuello.
Subsecuentemente, disminuy su apetito y presento malestar general. Varios das
antes de su ingreso haba comenzado a quejarse de sed excesiva y a orinar muy
seguido por las noches. Su mdico familiar se encontraba fuera de la ciudad y la
madre se mostr reace a consultar con otro mdico; sin embargo, el da del
ingreso a la nia comenz con vmitos, se encontraba en estado letrgico y era
difcil mantenerla despierta, por lo que fue trasladada de inmediato al servicio de
urgencias. A la exploracin fsica se encontr deshidratada, con piel fra,

GUA DE
respiracin profunda y suspiros (respiracin de KASSMAUL), adems de que su

aliento tena un olor extrao a frutas. Su tensin arterial era e 90/60 mmHg y su
pulso de 115/min; no logro despertar.
Resultados de laboratorio:
A. En suero o plasma:
a. Glucosa 35mmol/L (3.6 a 6.1 mmol/L)
b. -Hidroxibutarato 13.0 mmol/L (<0.25 mmol/L)
c. Acetato 2.8 mmol/L (< 0.2 mmol/L)
d. Bicarbonato 5 mmol/L (24 a 28 mmol/L)
e. Nitrgeno ureico 12 mmol/L (2.9 a 8.9 mmol/L)
f. Potasio 5.8 mmol/L (3.5 a 5.0 mmol/L)
g. Creatinina 160 ummol/L (6 a 132 ummol/L)
B. En orina:
a. Glucosa ++++
b. Cuerpos cetonicos ++++
SEGN EL CASO CLNICO, DESARROLLE:
1. Signos y sntomas
2. Diagnostico
3. Base bioqumica
4. Discusin
5. Solucin
CASO CLNICO N2
La paciente era una nia de 12 aos que presentaba una distensin abdominal
muy importante. Tena antecedentes de episodios frecuentes de debilidad,
sudoracin y palidez que desaparecan comiendo. Su desarrollo haba sido algo
lento se sent al ao de edad y camin sin ayuda a los 2 aos y su rendimiento
escolar era pobre.
La exploracin fsica revel presin arterial de 110/58 mmHg (14,7/7,7 kPa),
temperatura de 38 C, peso de 22,4 Kg. (bajo) y talla de 128 CMS (baja). La

GUA DE
paciente presentaba unas auscultaciones pulmonares y cardiacas normales. Se

observ una dilatacin venosa leve en el abdomen distendido. El hgado estaba
aumentando de tamao con una consistencia firme y lisa y llegaba hasta el pelvis.
No se palpaba el vaso ni los riones. El resto de la exploracin fsica estuvo dentro
de los lmites normales, salvo por el escaso desarrollo muscular.
A. En suero o plasma:
a. Glucosa 2,8 mmol/L (3,9 - 5,6 mmol/L)
b. Lactato 6.6 mmol/L ( 0.56- 2.0 mmol/L)
c. Piruvato 0.43 mmol/L (0.05 0.10 mmol/L)
d. cidos grasos libres 1.6 mmol/L (0.3- 0,8 mmol/L)
e. Triglicridos 3.15 g/l (0,3 -0,8 g/L)
f. Cuerpos cetonicos totales 400 mg/L (30 mg/L)
g. pH 7,25 (7.35 -7,44)
h. CO2 total 12 mmol/L (24-30 mmol/L)
1. Signos y sntomas
2. Diagnostico
3. Base bioqumica
4. Discusin
5. Solucin
CASO CLNICO N3
Varn de 35 aos que es trado a urgencia de forma involuntaria tras llevar una
semana con importantes alteraciones conductuales en su domicilio. A su llegada
presenta mal estado general, aspecto muy deteriorado y agitacin psicomotriz con
discurso incoherente. Los familiares con los que vive refieren que lleva unos das
con comportamientos extraos, se pasa el da tumbado en la cama, apenas se
mueve, se re y parece que habla solo, mostrndose agresivo hacia ellos. Refieren
que nunca ha hecho seguimiento ni tratamiento psiquitrico, aunque perdieron el
contacto con l durante 10 aos y lo han retomado hace 5 meses. Vivi en Piura

GUA DE
donde parece que tuvo un ingreso con posibles diagnstico de esquizofrenia.

Niegan hbitos txicos. Parece que desde hace 5 aos lleva una dieta estricta a
base de frutas y algunas verduras.
En la exploracin fsica se pone a manifiesto palidez cutnea, no caquctico,
sequedad de mucosas. Consciente y reactivo, afebril, no rigidez en la nuca, no
adenopatas.
Presin arterial 110/70 mmHg. Abdomen blando depresible, no
mase ni megalias, no doloroso a la palpacin.

Extremidades, pulsos conservafos, no edemas, no datos de trombosis venosa
profunda, moviliza las 4 extremidades.
1. Signos y sntomas
2. Diagnostico
3. Base bioqumica
4. Discusin
5. Solucin

GUA DE

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