UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

Nombre: David Lagla
Curso: Quinto Qumica Farmacutica
Tema: Preguntas HPLC
Cul es la diferencia fundamental en lo que se refiere a los
detectores que influye en la fase mvil del HPLC y de CG
(cromatografa de gases)?
En el CG es muy simple encontrar detectores que diferencien la muestra de
la fase mvil ya que es un gas inerte. En HPLC es necesario encontrar
dispositivos que diferencien el soluto en solucin de la fase mvil. El ms
sensible es el detector de fluorescencia (pag 4 Introduccin al HPLC)
Cmo se mide la eficacia de una columna cromatografa en el
equipo de HPLC?
R: Se mide por el nmero de platos tericos por metro
La medida cuantitativa de la eficiencia es el nmero de platos tericos,
obviamente el nmero de platos tericos efectivos aumenta con la longitud
de la columna, por lo tanto para comparar diferentes fases estacionarias es
ms conveniente considerar la altura del plato equivalente.
Qu funcin cumple la precolumna?
R: Se la utiliza con el fin de que se queden ah partculas o suciedades que
podran afectar a la columna.
Para el funcionamiento continuo y en buenas condiciones de la
bomba que se recomienda?
R: Deben filtrarse previamente los disolventes con un filtro de 0,2 -0.5 um
Si el filtro se bloquea y la bomba contina trabajando pero no puede aspirar
disolvente, la bomba comenzar a aspirar aire. Eso producir perturbaciones
peridicas en la lnea base, flujo inestable y hasta fallo completo en la
bomba
Cmo comprobar si un filtro est bloqueado?
R: Desconectndolo del desgasificador y ver si sale dv., (ya q un filtro
bloqueado no afecta a la lectura de Presin en la bomba.)
Qu caracterstica tienen los disolventes en HPLC?
R: Debe ser compatible con el detector.
Adems

Puntos de Ebullicin intermedios

Alta Pureza

Miscible con otros solventes para formar mezclas tiles

No degradar o disolver la fase estacionaria

Tener baja viscosidad para reducir las cadas de presin

Cules son los beneficios de utilizar metanol en fase reversa?

Tiene un mayor poder de disolventes de sales y reactivos de apareamiento
inico, es un solvente barato y poco toxico para HPLC
Para obtener buenos resultados por el mtodo de gradiente que se
debe tomar en cuenta?

Determinar la composicin inicial y final del solvente.

Ajustar el tiempo del gradiente.

Determinar la forma del gradiente (lineal, cncava o convexa).

Ajustar la velocidad del flujo para mejorar la resolucin.

Regresar a las condiciones iniciales la columna.

Por qu se ensanchan los picos a medida

cromatografca se desplaza por la columna?

que

la

banda

Tiene lugar cuando se transporta el soluto a travs de tubos como los que
se utilizan en los sistemas de inyeccin, en los detectores y en los tubos que
conectan los distintos componentes del sistema
El ensanchamiento proviene de la diferente velocidad de flujo que hay entre
las capas de lquido adyacentes a las paredes del tubo y las del centro.
Como consecuencia, la parte central de una banda de soluto se mueve con
ms rapidez que la periferia.
A que se denomina una columna de guarda o precolumna?
Una columna rellena de fase estacionaria dispuesta antes de la columna
analtica para evitar la disolucin y deterioro de sta y debe estar
compuesta del mismo materia que la columna
Una muestra de un cido dbil tiene un pKa de 4,3. Si queremos
aumentar su retencin sobre una columna de octadecl slice Qu
deberamos hacer?
Tamponar a pH = 2,5 la fase mvil
Un rango de pH entre 2 y 4 suele ofrecer las condiciones de retencin ms
estables frente a pequeos cambios de pH y es el recomendado como punto

de partida del desarrollo de mtodos para la mayora de las muestras,

incluidos los compuestos bsicos y los cidos dbiles tpicos.

La selectividad o factor de separacin en HPLC est relacionado?

Con la naturaleza de la fase mvil y de la fase estacionaria
Adems de sistema de inyeccin por jeringas como se lo puede
remplazar?
Se lo puede hacer mediante vlvulas de inyeccin o loop que son de flujo
constante y depende de la medida del loop que se conecten en el equipo.