INVESTIGACION DE

COLIFORMES EN EL
AGUA

AO DE LA PROMOCIN DE LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y COMPROMISO CLIMTICO

Docente : Jhon Garca Lpez

ALUMNA : Luca Guadalupe Nez Dvila

INGENIERIA AMBIENTAL B IV ciclo

INTRODUCCIN
Uno de los principales requisitos para que el agua sea apta para
consumo es que est libre de bacterias patgenas para el hombre.
Generalmente, los anlisis de rutina no estn dirigidos a la bsqueda
directa de microorganismos causantes de enfermedades que se
transmiten a travs del agua (ejemplo: fiebre tifoidea, clera, etc.).
En el anlisis microbiolgico se busca detectar la presencia de
microorganismos caractersticos del intestino de mamferos. La
presencia de stos indicara contaminacin fecal en las fuentes de
agua utilizadas
El mtodo que usaremos en del nmero ms probable, en el cual
consiste en hacer diluciones seriadas de cada muestra de agua
recolectada. Asimismo se utiliza como indicador de contaminacin el
recuento de bacterias totales.

MATERIALES:

Vasos estriles
Medio de cultivo Agar Endo
Caldo verde brillante
Mtodo NMP(nmero ms probable)
Diluciones seriadas
50 Tubos de ensayo estril
Bureta estril
Fiola
Agua destilada estril
Matraz estril
Campana de Durham estril
Pipeta de 1mm,5mm y 10 mm estril
Cocina
Balanza
Autoclave
Viales

MTODO Identificaciones
MTODO DEL NUMERO MS PROBABLE
El mtodo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de
atributos especficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones
consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes.

TINCION GRAM

PROCEDIMIENTOS Y
RESULTADOS:

Las muestras de agua tienen una duracin de 48 horas, pasando las 48

horas el agua ya no es til.
El mtodo que usamos para detectar coliformes es el NMP (nmero ms
probable), para realizar el anlisis se tiene que realizar las diluciones en
medio caldo verde brillante.
1- CALCULOS PARA PREPARAR CALDO VERDE BRILLANTE
40 gr
X

1000 ml
270 ml
X=10,8 gr

Pesar 10,8 gr de caldo verde brillante, echar en un matraz estril, agregar

agua estril y disolverlo, colocarlo en el calentador en mxima potencia
(370),

enfriar

colocarlo

en

autoclave

para

esterilizar.

PH del caldo verde brillante es 6,75.

DILUCIONES
Recogimos 10 muestras de agua, cada muestra va a contar con 5 diluciones
por lo tanto habr 50 diluciones. Usamos tubos de ensayo estriles y en
cada tubo pequeo debe tener 4.5ml de agua estril y 0,5 de muestra de
agua recolectada. Siendo: 10-1,10-2,10-3,10-4,10-5 De cada muestra usamos
10-3,10-4, 10-5para inocularlas en caldo verde brillante.
En todas las muestras se siguen los siguientes pasos: flamear el tubo antes
y despus de haber agregado 4,5 ml de agar caldo verde brillante y 0,5 ml
de muestra de agua, repitiendo con cada dilucin, teniendo 30 tubos de
ensayo con caldo verde brillante y muestra. Por ultimo flamear antes y
despus de agregar la campana invertida.
Colocar en la estufa a 37 C por 48 horas. Ya pasando las 48 horas sacar de
la estufa y ver qu cambios se muestran.

amarillo

Amarillo claro y turbidez

Igual color

DILUCIONE

10-3

10-4

10-5

0
0
1

1
0

1
0

1
0

0
0
0
0

0
1

S
CAMBIOS
M1
M2
M3
M4
M5
M6
M7
M8
M9
M10

Agar Endo
Clculos:
51 gr

1000ml

100
X= 51 x 100/1000
X=5,1 gr

Pesar 5,1 gr de agar Endo, agregar en un matraz 100 ml de agua estril,

disolverlo y colocarlo en el calentador a mxima potencia 370 luego
enfriarlo

colocarlo

en

autoclave.

Usamos 20 viales que son el nmero de muestras que cambiaron su color.

Los viales deben estar esterilizados, flamear y vaciar en cada vial el agar
hasta la mitad, se tapa y se inclina.
Ya seleccionados los tubos que han cambiado que son 20 se pasa a
sembrar en los viales.

Flamear la hace bacteriolgica y la boquilla del vial antes y despus de

sembrar las muestras con caldo verde brillante que cambiaron de color.
Dejar en la estufa por 48 horas.
Pasando las 48 horas.

TINCION GRAM
Limpiamos el portaobjetos con algodn y ron de quemar, es un hecho que se debe
limpiar porque si no la muestra sale encima de otro
La secamos y aadimos una gota de agua destilada, extender y despus se fija en
el mechero que contiene ron de quemar, tambin se fija el ansa de siembra en el
mechero y se deja que enfri unos segundos y se introduce en cada caja preti,
donde se encuentra el agar con las dos muestras
Despus de este proceso, se vuelve a fijar en el mechero; y consecutivamente se
pasa a la tincin en el siguiente orden
PROCESO DE TINCIN
1. Se le agrega VIOLETA DE GENCIANA (2 minutos) - se enjuaga con agua
destilada
2. Se le agrega LUGOL (2 minutos) - se enjuaga con agua destilada
3. Se le agrega ALCOHOL (2 minutos) se enjuaga con agua destilada se le
agrega SAFRANINA (2 minutos) se enjuaga con agua destilada se fija
cada muestra
4. se le agrega una gota de ACEITE DE INMENCION (para poder tener una
mejor visin de la muestra )
Y finalmente se posa en el MICROSCOPIO para poder observar claramente
cada

muestra.

Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativos. En la tincin, las
Gram positivas se observarn de color azul-violeta, y las Gram negativas de
color rosa.

RESULTADOS:

MUESTRAS
M1
M2
M3

BACTERIAS
10-3
Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia coli

10-4
Pseudomona
Escherichia coli
Escherichiacoli y

10-5
Pseudomona
Escherichia coli
contaminada

Pseudomona
M4
M5
M6
M7
M8
M9
M10

Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia coli
Pseudomona

Pseudomona
Escherichiacoli
Escherichia coli
Pseudomona

Escherichia coli
Pseudomona
Escherichia coli

E. COLI:

La Escherichia coli (pronunciado /eske'rikia 'koli/), tambin conocida

por
la abreviacin de
su
nombre, E.
coli,
es
quizs
el
organismo procariota ms estudiado por el ser humano. Se trata de
una enterobacteria que se encuentra generalmente en los intestinos
animales, y por ende en las aguas negras, pero se lo puede encontrar
en todos lados, dado que es un organismo ubicuo.
Esta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto
del proceso digestivo, adems de producir las vitaminas B y K. Es un
bacilo
que
reacciona
negativamente
a
la tincin
de
Gram (gramnegativo), es anaerobio facultativo, mvil por flagelos
peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz
de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.
Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos
gentica y biologa molecular.

de

PSEUDOMONA:

Pseudomonas es un gnero de bacilos rectos o ligeramente

curvados, Gram
negativos, oxidasa positivos, aerbicos estrictos
aunque en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor de
electrones. El catabolismo de los glcidos se realiza por laruta de
Etner-Doudoroff y el ciclo de los cidos tricarboxlicos. Algunos
miembros
del
gnero
son psicrfilos,
mientras
que
otros
sintetizan siderforos fluorescentes de color amarillo-verdoso con
gran valor taxonmico. Es comn la presencia de plsmidos y no
forman esporas.

CUESTIONARIO:
1. Qu es un organismo indicador, y que propiedades debera tener?
Un indicador microbiolgico es un microorganismo que su presencia permite
determinar la existencia de un patgeno. Este indicador se usa
mayoritariamente en la determinacin de contaminacin de las aguas.

No encontrarse en agua no contaminada.

Estar presente en el agua contaminada manteniendo una
correlacin con los patgenos.

Ser ms abundante que los patgenos.

Sobrevivir en el agua ms tiempo que los patgenos.
No multiplicarse en el agua.
Ser detectado, de la forma, ms rpida, fcil y econmica.
En lo posible tener criterios microbiolgicos comunes
internacionalmente.

2. Cmo se define a un coliformes? Cmo se relaciona esta definicin

con las pruebas presuntivas, de confirmacin y finales?
Coliforme designa a un grupo de especies bacterianas que tienen ciertas
caractersticas bioqumicas en comn e importancia relevante
como indicadores de contaminacin del agua y los alimentos
Grupo de bacterias cuyo representante ms importante, desde el punto de vista
sanitario, es la echerichia coli

3. Cmo se diferencia entre coliformes y coliformes fecales laboratorio?

Los coliformes son un grupo de bacterias cuyo representante ms
importante, desde el punto de vista sanitario, es la echerichia coli
Los coliformes fecales son microorganismos con una estructura
parecida a la de una bacteria comn que se llama echerichia coli y
se transmiten por medio de los excrementos. La echerichia es una
bacteria que se encuentra normalmente en el intestino del hombre y
en otros animales.
Hay diversos tipos de echerichia, algunos no causan daos en
condiciones normales y otros pueden causar hasta la muerte
4. En que tipo de medio es mejor usar enterococos que coliformes
fecales como organismos indicadores?
El agar BARNES

CONCLUSIONES
La metodologa utilizada para realizar el anlisis del suelo, fue fcil de
ejecutar, sencilla, muy didctica.
Los suelos con escasa biomasa, muestran una baja capacidad de
infiltracin como consecuencia de su bajo contenidos en materia
orgnica, siendo altamente susceptibles a los procesos erosin hdrica.
Esto es lo que sucede con la muestra que estudiamos, ya que la parcela
fue tomada en una zona afectada seriamente por procesos erosivos.

RECOMENDACIONES

Se recomienda orden y tener el material adecuado y usar siempre el

mandil y los guantes y para el uso de cultivo, en el proceso es
necesario una mascarilla, para evitar algn tipo de contaminacin

Se recomienda esterilizar todos los materiales a usar, debido que

existe contaminacin en la atmosfera y esto puede alterar los
resultados requeridos, una forma de una buena esterilizacin al
100% es usando el autoclave vertical.

Antes de todo procedimiento a realizar en el laboratorio se debe

desinfectar correctamente las mesas, con algodn y ron de quemar,
para as evitar algn tipo de contaminacin en los resultados
esperados.

Se recomienda que despus de cada uso del material o instrumento

de laboratorio se lave correctamente y se coloc en el lugar
respectivo.

ANEXOS

LINCOGRAFA
http://tagaragunche.com/Chijere/index.php?mod=conclusiones
http://es.wikipedia.org/wiki/Indicador_microbiol%C3%B3gico
http://es.slideshare.net/lucasburchard/coliformes