UNIVERSIDAD DE BOYACA

Sogamoso

SIEMBRA BACTERIANA
DE AGUA DEL CAO RIO
CHIQUITO

GERZON REYES
YULIANA ORDUZ
JENNIFER MEDINA
GEOVANNY PINZON

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

Realizar la respectiva siembra de agua del cao rio chiquito en los

medios de cultivo correspondientes a la anterior prctica.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Identificar los pasos necesarios para la siembra de la muestra a analizar

en los medios de cultivo.
Dar un buen manejo de esterilizacin a la zona la cual se va a trabajar,
para as obtener buenos resultados en los medios de cultivo.
Tener un buen manejo en los instrumentos utilizados en la prctica
correspondiente al laboratorio.

MARCO TEORICO
Tcnicas de Inoculacin
Las tcnicas para inocular las muestras en los diferentes medios de cultivo
varan, dependiendo del objetivo.
Esterilizacin del Asa Bacteriolgica
Las asas bacteriolgicas bsicamente son alambres unidos a un mango que
permite manipularlas. El alambre puede ser de diferente material, (ferro
nquel, nicromo, platino, etc.) y la forma (recta, curva, etc.,) dependiendo de la
necesidad.
Para su esterilizacin se utiliza calor seco (llama), y se procede as:
- Prender el mechero - Tomar el asa bacteriolgica por el mango y colocarla en
posicin vertical, sobre la llama del mechero, hasta que el alambre quede al
rojo vivo. - Dejar enfriar o enfriar dentro del medio de cultivo, antes de tomar
las colonias.
Inoculacin en Medios de Cultivo en Tubo de Ensayo
1. Siembra en Medio Lquido (Caldo) - Obtener la muestra con asa
bacteriolgica o escobilln - Introducir en el caldo de cultivo, haciendo
movimientos de rotacin. 2. Siembra en Agar Inclinado (pico de flauta) Obtener la muestra con asa - Hacer estras en la superficie del medio 3.
Siembra en Agar semislido (taco) - Obtener la muestra con asa recta - Hacer
una picadura por el centro, hasta la mitad del medio
Medios en Caja de Petri
Siembra por agotamiento:
El objetivo de esta tcnica es diluir la muestra de tal manera que al final se
obtenga colonias separadas para poder iniciar el estudio de identificacin y
sensibilidad a los antimicrobianos. 1. Obtener la muestra con escobilln o asa y
suspenderla en un extremo de la placa de agar, haciendo estras (lneas) de un
extremo a otro (primer cuadrante) 2. Flamear el asa, enfriar en el extremo e
iniciar estras desde el cuadrante primero y extenderlas hasta el cuadrante dos
3. Flamear el asa, enfriar en el extremo e iniciar estras desde el cuadrante dos
y extenderlas hasta el cuadrante tres 4. Flamear el asa, enfriar en el extremo e
iniciar estras desde el cuadrante tres y extenderlas hasta el cuadrante cuatro.
Siembra en cuadrcula:
El objetivo de esta tcnica es hacer recuento de unidades formadoras de
colonias (UFC) 1. Obtener la muestra con asa calibrada o pipeta automtica
que dispense una cantidad exacta y distribuirla con el asa en lnea recta por
todo el centro 2. Hacer estras de extremo a extremo en sentido contrario a la

lnea de inculo 3. Girar la placa y hacer estras de extremo a extremo, en

sentido contrario a las anteriores

MARCO TEORICO
PREPARACION DE MEDIOS Y SIEMBRA DE BACTERIAS EN MEDIOS DE
CULTIVO

FUNDAMENTO:
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y
otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de
los microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los
microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es tambin muy
grande. La mayora de los medios de cultivo se comercializan en forma de
liofilizados que es preciso rehidratar. La preparacin de un medio de cultivo se
reduce en general a pesar la cantidad de medio y re-disolverla en agua
destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las instrucciones del
fabricante. Las sustancias termolbiles se esterilizan por filtracin y se aaden
al resto de los componentes previamente esterilizados en la autoclave.
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:
1. Agar. Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene
de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.
2. Azcares. Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los ms
empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.
3. Extractos. Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o
vegetales obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura, de
malta, etc.

4. Peptonas. Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin qumica o

enzimtica de protenas animales o vegetales.
5. Fluidos corporales. Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos
microorganismos patgenos.
6. Sistemas amortiguadores. Son sales que se aaden al medio para
mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej.:
fosfatos bisdicos o bipotsicos.
7. Indicadores de pH. Son indicadores cido-base que se aaden para
detectar cambios de pH en el medio.
8. Agentes reductores. Sustancias que se aaden al medio para crear las
condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o
anaerobios. Ej.: cistena y tioglicolato.
9. Agentes selectivos. Sustancias como el cristal violeta, las sales biliares
etc. que a determinadas concentraciones en el medio actan como agentes
selectivos frente a determinados microorganismos.
Tipos de medios de cultivo.

POR su CONSISTENCIA:

a) Slidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus

componentes, normalmente agar. Se preparan en placas de Petri o en tubos en
slant (tubos con la superficie del medio inclinada).
b) Lquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o erlenmeyers.

POR SU COMPOSICIN:

a) Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de

microorganismos.
b) Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un
determinado grupo de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el
crecimiento del resto.
c) Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo
microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los dems.

de

d) Medios diferenciales. Son aquellos en los que se pone de relieve alguna

propiedad que un determinado tipo de microorganismos posee.

Siembra de microorganismos

En trminos microbiolgicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el

cual se lleva una porcin de una poblacin de microorganismos (inculo) de un
cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su crecimiento.

PARA UNA CORRECTA REALIZACIN DE LA SIEMBRA SON NECESARIAS

CIERTAS CONDICIONES:
1) Que se lleve a cabo con instrumentos estriles sobre medios de cultivo
estriles. Para estudiar una bacteria determinada, es necesario destruir todos
aquellos microorganismos que pudieran encontrarse en el medio y en los
instrumentos de trabajo. Esto se consigue con la ESTERILIZACION, proceso
que consiste en conseguir que todos los microorganismos presentes mueran
desde el punto de vista microbiolgico.
La esterilizacin
Se utilizan dos tipos principales de esterilizacin:
Por MTODOS FSICOS (calor, filtracin, radiaciones).
Por MTODOS QUMICOS (empleo de soluciones qumicas).
Los medios de cultivo se esterilizan en el AUTOCLAVE, el cual hace uso del
calor hmedo. La autoclave es un aparato que permite elevar la presin y la
temperatura con lo que se consigue un aumento en la temperatura de
ebullicin del agua. Normalmente, se lleva la presin a 1 atmsfera (por
encima de la ambiental) lo que corresponde a una temperatura interior de
126C, mantenindolo en estas condiciones durante 20 minutos.
Todo el material de vidrio (pipetas, tubos, varillas, etc.) se esteriliza con calor
seco, siendo el "horno Pasteur" el aparato ms empleado (se somete a
temperaturas de 140-180 C durante 2h-3h).
En el caso de objetos metlicos, como el asa de siembra, que se esterilizan en
el momento de su utilizacin, se mantienen en la llama hasta que se pongan al
rojo, teniendo la precaucin de enfriarlos antes de su uso.
2) Que el inculo no se contamine, modifique o destruya: Normalmente se
emplea el calor directo, flameando las bocas de los tubos de ensayo, matraces,
pipeta, etc. antes y despus de su utilizacin, a pesar de estar esterilizados
previamente.
3) Que las condiciones ambientales durante el proceso sean lo ms prximas a
la esterilidad para evitar contaminaciones durante el manejo del instrumental y
de los medios de cultivo.
Esto se resuelve con el uso de cabinas estriles (con flujo de aire y luz
ultravioleta). Cuando no se dispone de ellas, se utiliza un mechero Bunsen que,
debido a que fuerza la circulacin del aire en sentido vertical y hacia arriba, es
capaz de crear un ambiente semiestril en la zona inmediata alrededor y

debajo de la llama, de forma que los riesgos de contaminacin disminuyen

considerablemente.
1) PREPARACIN DE MEDIOS

Preparacin de medio lquido en tubo (caldo).

1. Pesar y rehidratar el medio.

2. Distribuirlo con una pipeta en los tubos (sin llenarlos ms de 1/3 de su
volumen).
3. Autoclavar.
4. Sacar de la autoclave y dejar enfriar.
Todos los medios se guardan en nevera a 4C.

2) REALIZACIN DE LA SIEMBRA
1.- Marcar el material con el nombre de la pareja y grupo.
2.- Realizar la siembra, como sigue:
a) Siembra en medio lquido: Se introduce el asa de siembra en el tubo con
cultivo crecido y se toma un inculo que se lleva al tubo estril con medio
lquido (agitndola en el seno del medio), tomando las precauciones
mencionadas anteriormente.
b) Siembra en placa: Dividida la placa en tres partes, sembrar en cada tercio el
inculo tomado de los cultivos crecidos. Se introduce el asa de siembra en el
tubo con cultivo crecido y se toma una gota de inculo que se extiende sobre el
agar de la placa deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag.
c) Siembra en agar inclinado: Se introduce el asa de siembra en el tubo con
cultivo crecido y se toma un inculo que se extiende sobre el agar inclinado
deslizando el asa suavemente por su superficie en zig-zag. En el caso del
medio TSI, la siembra se deber realizar tanto en superficie (aerobiosis) como
en la profundidad del agar (anaerobiosis).

3) INCUBACIN de los medios sembrados a 37 C hasta que haya habido

crecimiento bacteriano.
4) OBSERVACIN DE LOS RESULTADOS:
En primer lugar, observar a simple vista diversas caractersticas como el color
y el borde de las colonias crecidas en el agar as como el olor y la turbidez del
medio ya que en algunos casos suelen ser tpicos de un determinado tipo de
microorganismo y pueden servir de ayuda a la hora de su identificacin.

El siguiente paso sera la observacin al microscopio, que ser objeto de otra

prctica

RECUENTO DEL NMERO DE BACTERIAS POR MILILITRO

Introduccin
El mtodo que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones sucesivas de la
muestra en condiciones de esterilidad con objeto de sembrar despus
cantidades conocidas de las mismas en una serie de placas de petri.
Considerando que alguna de las diluciones ser tal que al distribuir una parte
de ella en la placa, originar colonias separadas. Contando el nmero de
colonias, el volumen sembrado en la placa y la dilucin correspondiente,
podremos calcular el nmero de unidades formadoras de colonias presentes en
la muestra inicial.

Material
- Muestra
- Pipetas automticas.
- Tubos eppendorf.
- Placas de agar LB.
Mtodo

A partir de la muestra hacer una serie de 4 diluciones decimales en

condiciones de esterilidad.

Extender 25 l de las diluciones 10 -2, 10-4, 10-6 y 10-8 en una placa e

incubar toda la noche. A partir del nmero de colonias presentes en cada
dilucin, calcular el nmero de bacterias por ml en el cultivo original.

EFECTO DE LAS
MICROBIANO

ALTAS

TEMPERATURAS

SOBRE

EL

CRECIMIENTO

Fundamento
Las altas temperaturas provocan efectos letales o subletales sobre los
microorganismos. Una bacteria sometida a una temperatura superior a la que
normalmente crece, sufre, en primer lugar, daos en sus protenas y cidos
nucleicos. Estos primeros daos impiden que la bacteria se reproduzca y, por

consiguiente, forme una colonia sobre un medio de cultivo adecuado. Sin

embargo, si el tratamiento es corto en duracin y se efecta a una
temperatura no excesivamente alta, los daos que la bacteria sufre son
reparables y, por eso, se habla de efectos subletales. Cuando el tratamiento es
ms fuerte, en temperatura o en duracin, los daos se hacen irreparables y la
bacteria pierde de forma irreversible su capacidad de formar colonias. Se habla
entonces de efecto letal.

AISLAMIENTO Y CARACTERISTICAS DE UN BACTERIOFAGO (VIRUS DE

BACTERIAS)
Los virus son demasiado pequeos para poder ser vistos con el microscopio
ptico y nicamente son visibles gracias al mayor poder de resolucin que
ofrece el microscopio electrnico. Los virus estan compuestos de un genoma,
bien en forma de DNA o RNA, y de protenas. Son parsitos obligados y
necesitan de la maquinaria metablica de la clula huesped para la replicacin
de su material gentico. En esencia un virus consta de cido nucleico rodeado
por una cubierta de protena, llamada cpsida.
Los bacterifagos son virus de bacterias que presentan todas las
caractersticas de estructura y ciclo vital que presentan los virus animales o
vegetales. Se han descubierto especies de bacterifagos que atacan
selectivamente a prcticamente todas las bacterias importantes conocidas. El
bacteriofago Lamba () es uno de los bacterifagos ms estudiados de los
especficos de E. coli. Infecta la clula unindose al receptor de la maltosa
(protena que permite que la maltosa entre en la clula) y una vez unido
inyecta su ADN de cadena doble en la clula bacteriana. En el interior de la
bacteria este ADN puede o bien integrarse en el cromosoma bacteriano y sus
genes quedan reprimidos, o bien se expresar sus genes y sintetizar nuevos
fagos. En el primer caso se habla de ciclo lisognico y en el segundo de ciclo
ltico.

DILUCIONES DECIMALES
Primero se prepara el MACERADO INICIAL. El procedimiento ms
frecuentemente empleado para este fin consiste en la utilizacin de un
homogenizador de paletas tipo "stomacher" en el cual se homogenizan
diluyente y muestra y, de esta forma se prepara una suspensin ms o menos
homognea de alimento y microorganismos que permite la preparacin
posterior de las oportunas diluciones que posteriormente sern utilizadas en
los diversos mtodos de recuento. Para ello se pesan aspticamente 10 g del
alimento. La pesada suele realizarse en bolsa de plstico para stomacher. Se
aaden a la bolsa 90 ml de diluyente estril y se homogeniza el alimento con el
diluyente en Stomacher durante 2 minutos.

As conseguimos el macerado inicial que es la dilucin 1:10. Si es posible es

mejor pesar 25 g de alimento. Aadir 225 ml de diluyente estril y proceder
como en el caso anterior homogenizando en Stomacher durante 2 minutos.
Para preparar las DILUCIONES DECIMALES, aadir 1 ml de macerado inicial
(tambin llamado dilucin madre o dilucin 1:10) a un tubo con 9 ml de
diluyente, homogenizar usando un agitador excntrico de tubos de ensayo
durante 20 segundos o agitando manualmente. De esta forma hemos
preparado la dilucin 1:100 10 -2. Repetir la operacin anterior transfiriendo 9
ml de la dilucin 1:100 a un tubo con 9 ml de diluyente para preparar la
dilucin 1:1000 10-3 Repetir la operacin anterior tantas veces como sea
necesario hasta conseguir el nmero de diluciones deseado. El nmero de
diluciones que se necesita depende de lo contaminado que este el alimento. De
un alimento del que se sospecha un nmero alto de microorganismos/g hay
que hacer ms diluciones que de uno poco contaminado.
Para los mtodos de ausencia / presencia no es necesario preparar las
diluciones decimales, stas se utilizan para los mtodos de contaje.

MTODOS DE SIEMBRA
Siembra en masa
Se caracteriza porque durante la incubacin las colonias crecen en el interior
de la masa del agar.
1. Se deposita 1 mL de la muestra (si es lquida) o de cada dilucin en placas
estriles, vacas.
2. Se agrega a cada placa 15 a 20 mL del medio de cultivo a emplear,
previamente fundido y mantenido a unos 47C.
3. Se agita moviendo la placa tapada sobre la superficie de la mesa con
movimientos circulares y de vaivn (siempre sin levantar la placa de la mesa).
Con esto se consigue mezclar el inculo con el agar.
4. Se deja solidificar el agar a temperatura ambiente (esperar al menos media
hora) y se llevan las placas a incubar (la temperatura y el tiempo de incubacin
elegidos vara segn el tipo de microorganismos).
5. Pasado el tiempo de incubacin las colonias habrn crecido dentro del agar
(en la masa del agar). Elegir de entre todas las placas las dos correspondientes
a aquella dilucin que presenten un nmero de entre 30 y 300 colonias /placa
(esto proporciona una precisin estadstica suficiente y no es engorroso de
hacer). Para realizar el contaje, se utiliza un cuenta-colonias; se pone la placa
de Petri con la base hacia arriba y, si es preciso, se divide en sectores
marcando mediante un lpiz graso a lo largo de los dimetros. El nmero de
unidades formadoras de colonia o UFC/g (o ml en muestras lquidas) de la
muestra original ser:

Nmero de UFC/g = Nmero de colonias x factor de dilucin

Siembra en superficie
Se caracteriza porque durante la incubacin las colonias crecen en la
superficie del agar.
1. Se utilizan placas previamente preparadas que contienen el medio de
cultivo solidificado (unos 15 ml/placa).
2. Se deposita en la superficie del agar 0,1 ml de la muestra o de cada
dilucin.
3. Luego de realizada la descarga de la muestra, se procede a extenderla sobre
toda la superficie de las placas, usando un asa de Drigalski estril.
4. Esperar 2 3 minutos a que se seque el inculo.
5. Se llevan las placas a incubar y se procede de la misma manera que en el
caso anterior.

TOMA DEL INCULO

Una vez que las colonias han crecido, puede ser necesario su confirmacin.
Si la muestra proviene de un medio lquido, el inculo se toma agitando el
suavemente el asa dentro del mismo, quedando la muestra adherida por
tensin superficial en el extremo del filamento del asa de siembra.
Si el medio es slido y se encuentra en superficie la muestra a sembrar (placa
Petri), tome una pequea porcin de cultivo mediante un ligero roce con el asa
de siembra.
Si la muestra se encuentra en la profundidad del agar (tubo con agar en pico
de flauta), hunda el filamento dentro del medio hasta tomar una pequea
porcin de la misma. Flamee la boca del tubo antes de taparlo y colquelo en
el soporte necesario

TRANSFERENCIA
La tcnica que se aplica depende de la consistencia de los medios de cultivo y
del tipo de recipiente que los contiene. Se pueden presentar los siguientes
casos:
- Siembra de medio lquido a medio lquido: El procedimiento se puede realizar
con asa en anillo, aguja o pipeta y en tubos de ensayo, matraces o frascos.
- Siembra de medio slido a medio lquido: El procedimiento se puede realizar
con asa en anillo o aguja y en tubo de ensayo, matraces o frascos.
- Siembra de medio slido a medio slido: El procedimiento se puede realizar
con asa o aguja y en tubo de ensayo, ya sea en superficie o en profundidad o
en placa Petri, en superficie.
- Siembra de medio lquido a medio slido: El procedimiento se puede realizar
con asa en anillo, aguja o pipeta y en tubo de ensayo, ya sea en superficie o en
profundidad o en placa Petri, ya sea en superficie o por homogenizacin.

Tcnica de transferencia en tubos de ensayo.

Tcnica para medio lquido

Los dos tubos, el que contiene el medio de cultivo sin sembrar y el que
contiene los microorganismos a transferir, se toman con una mano, con las
bocas colocadas a la misma altura.
Se sostienen con los dedos ndice, medio y anular apoyndolos en el dedo
meique, y se los sujeta con el dedo pulgar muy cerca de la base para permitir
la visualizacin de toda la superficie del cultivo.
Con los dedos pulgares e ndice (como un lpiz) de la otra mano, se toma la
pipeta estril o el mango de Koll con su aguja o asa en anillo y se esteriliza.
Se destapan los tubos con los dedos libres de la mano que sujeta el asa, de la
siguiente manera: el tapn del tubo ms alejado del operador (que es el que
contiene la muestra) entre el dedo meique y la palma de la mano; el tapn
del tubo ms cercano al operador (que contiene el medio de cultivo estril)
entre el meique y el anular.
Se flamean las bocas de los tubos, se toma el inculo; se siembra; se flamean
nuevamente las bocas de los mismos y se tapan respetando las procedencias
de los tapones y se quema el asa.
Como el inculo procede de un medio lquido, antes de realizar la transferencia
se debe agitar el tubo para poner en suspensin a los microorganismos que
pudieran estar depositados. Si la siembra se realiza en medio lquido, se agita
el tubo sembrado para distribuir homogneamente el inculo.

Para realizar la agitacin se toma el tubo cerca del extremo superior con los
dedos ndice y pulgar y se golpea suavemente la base del mismo sobre el dedo
ndice de la otra mano con una amplitud de 5 cm. Otra forma consiste en hacer
rotar los tubos entre las palmas de las manos.

Tcnica de transferencia en placa Petri.

La siembra en placa Petri, puede hacerse:

1) En superficie:
a. Por estra central: Se levanta la tapa lo suficiente como para permitir la
introduccin del asa con la carga de microorganismos, inicindose la estra en
el borde del medio ms alejado del operador y se la extiende hasta llegar al
centro de la placa, luego se gira sta 180 y se contina realizando otra estra
de la misma manera. Esta divisin evita el obstculo del borde de la placa

b. Por estra en cuadrantes: Se divide la placa en cuatro sectores y se

siembra en estra cada uno de ellos, partiendo del borde de la placa hacia el
centro. El cuadrante a sembrar debe ser el ms alejado del operador y el
inculo en cada caso puede ser el mismo (la misma especie) o distinto
(diferente especie) para cada cuadrante.

c. Por diseminacin con esptula de Drigalsky: Se deposita sobre el

medio slido contenido en la placa, una asada o una gota con pipeta del
material a sembrar, que luego se extender por toda la superficie del medio
con una esptula de DRIGALSKY.

La esptula se introduce inmediatamente despus de su uso en un

recipiente para su esterilizacin en autoclave o en formaldehdo al 5 %.

d. Por diseminacin con hisopo: Se sumerge en el caldo de cultivo, se

escurre el exceso de lquido sobre la pared interior del tubo y se estran ambas
mitades de la placa de Petri, partiendo de los bordes hacia el centro, luego se
gira 90 y se estran nuevamente ambas mitades, finalmente se gira 45 y se
estran ambas mitades.

METODOLOGIA
Materiales empleados para llevar a cabo el proceso:
Implementos

Mechero
Tubos de ensayo
Tarro schott
Cajas de petri
Papel vinipel
Pipetas
Asa de siembra esterilizada
Incubadora
Nevera

Componentes

Solucin salina
Agua de cao rio chiquito

PASOS PARA LA SIEMBRA BACTERIANA DE AGUA DE CAO:

1. Se recolecto una muestra de 200 mililitros aproximadamente de agua
del cao rio chiquito para ser llevada al laboratorio y hacer la respectiva
siembra bacteriana
2. En la prctica de siembra bacteriana los integrantes del grupo de
laboratorio utilizo las medidas cautelares para la buena elaboracin del
procedimiento del cual se iba realizar.
3. Se esterilizo la zona a trabajar, por medio de los mecheros y el alcohol.
4. Se retiraron de la muestra recogida del cao rio chiquito 10 mililitros los
cuales fueron llevados al schott el cual contena 90 mililitros de solucin
salina.
5. Luego de agitar la solucin 17 veces, se tom 1 mililitro del schott y se
deposit en un tubo de ensayo el cual era la muestra de 10 -2,
continuamente de ese primer tubo de ensayo se tom 1 mililitro y se
deposit en el segundo tubo de ensayo lo cual fue llamada 10-3
6. Despus, Con la micro pipeta se tom 2 mililitros del tubo de 10 -2, luego
se adicionaron en una caja de Petri 1 mililitro y en otra caja el otro
mililitro del tubo de 10-2, as mismo se repiti el procedimiento con el
tubo de 10-3, estas cajas fueron marcadas dependiendo el tubo de
ensayo de donde fueron adicionados, para as al momento de analizarlas
conocer la concentracin respectiva de cada cultivo.
7. Se tom la aza esterilizada y se esparci en cada uno de los medios de
cultivo donde fueron aplicadas las concentraciones bacterianas
correspondientes.
8. Las 4 cajas de Petri junto con la caja de control fueron selladas con el
papel vinipel y llevadas a la incubadora donde se iba realizar el
crecimiento bacteriano.
9. Al tercer da de haber realizado el procedimiento anterior observamos
las diferentes bacterias que crecieron en los medios de cultivo y luego
de esto fueron llevadas las 5 cajas de Petri a la nevera.

DISCUSION DE RESULTADOS
Se observ que la caja de control no presentaba puntos, esto quiere decir que
no se contamino a la hora de realizar el cultivo. Esto no se observ
inmediatamente ya que las cajas de Petri no se encontraban en un medio con
condiciones adecuadas para que se generar el crecimiento bacteriano, por
esta razn se ingresaron dichas cajas a la incubadora y al pasar tres das se
observ un mnimo crecimiento de organismos en las cuatro cajas, donde se
sembr el cultivo, en la caja de control no creci ningn tipo de especie tipo de
especie.
1

Segn un anlisis microbiolgico en aguas que hizo el Dpto. Ingeniera

Qumica y Ambiental de la UPCT (Universidad Politcnica de Cartagena) los
fundamentos que inciden en la flora bacteriana son:
La acidez disminuye el contenido de microorganismos.
La materia orgnica lo aumenta.
Mucho oxgeno disuelto disminuye los microorganismos anaerobios.
Las sales, si son abundantes, producen que el agua sea casi estril.
Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo bacteriano.
La filtracin disminuye el nmero de microorganismos.
La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido bacteriano.
La turbidez hace que el contenido bacteriano pueda aumentar, ya que los
rayos U.V. no manifiestan su accin.
Los protozoos fagocitan bacterias y as disminuyen el nmero de estas.
En la muestra de 10-3 se observ una mancha blanca que cubra toda la parte
superior del cultivo, lo cual se pudo analizar que hubo una bacteria ms
agresiva respecto a la otra haciendo que no creciera igual ya que tena menos
mecanismos de defensa, por los fundamentos que inciden en la flora
bacteriana mencionados anteriormente deducimos que los protozoos fueron los
que no dejaron crecer a las bacterias.
En la muestra de 10-2 hubo una variedad de colonias presentes en el cultivo, al
ser la caja de Petri ms concentrada los organismos fueron presentndose con
mayor rapidez, en mayor cantidad y se pudieron ver con mayor detalle.

1 http://www.upct.es/~minaeees/analisis_microbiologico_aguas.pdf

CONCLUSIONES

Aprendimos a realizar la siembra bacteriana para la muestra de agua del

cao rio chiquito con sus respectivos parmetros y procedimientos, los
cuales debe tener medidas de limpieza y esterilizacin para la hora de
su proceso.

Se debe dejar el cultivo preparado dentro de la incubadora por un

tiempo apropiado para su crecimiento bacteriano y as tener un mejor
resultado en nuestro anlisis microbiano.

En las 4 respectivas cajas de Petri donde fueron aplicadas las

concentraciones se observa que ah un crecimiento ms grande en los
medios de cultivo de 10-2 que en los medios de cultivo de 10-3

El proceso de manejo y esterilizacin del medio e implementos juega un

papel importante en la siembra del cultivo, ya que una buena siembra
no debe estar contaminada.

El mal manejo de los implementos y el no seguir los pasos puntuales

puede interferir a la hora del crecimiento de colonias puesto que en la
siembra del cultivo y posterior crecimiento de los microorganismos no
solo crece las colonias presentes en la muestra sino que tambin los
organismos bacterianos del ambiente.

ANEXOS

BIBLIOGRAFIA
http://www.medicina.unal.edu.co/Departamentos/microbiologia/Docs/W_IDENTIFI
CACION_BACTERIANA%20I%2014.pdf

http://www.analizacalidad.com/docftp/fi148anmic.pdf
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf
http://www.medicina.unal.edu.co/Departamentos/microbiologia/Docs/W_IDENTIFIC
ACION_BACTERIANA%20I%2014.pdf