LA PRUEBA DE PYR

1. INTRODUCCIN
PYR es un mtodo colorimtrico rpido para la identificacin presuntiva de ciertos grupos
de bacterias en base a la actividad de la enzima arilamidasa pyrolidonyl. L-piroglutmico
cido beta-naftilamida se impregna en el disco de prueba o de la tarjeta y sirve como
sustrato para la deteccin de arilamidasa pyrolidonyl. La hidrlisis del sustrato
rendimientos beta-naftilamida que se combina con el reactivo de PYR (p-dimetilaminocinamaldehdo) para formar un color rosa brillante de color rojo cereza. A las pruebas
positivas de PYR permite la identificacin presuntiva de estreptococos del grupo A
(Streptococcus pyogenes) y el grupo D enterococos. Adems, los investigadores han
determinado que la actividad PYR es una prueba clave para la diferenciacin de algunas
especies de Staphylococcus coagulasa negativos y para algunos gneros de la familia
Enterobacteriaceae.
Es una prueba rpida, utilizada fundamentalmente para la identificacin de Streptococcus
pyogenes y Enterococcus spp.

Es til para la caracterizacin preliminar de

Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos similares a estreptococos. Dentro del

Gnero Enterococcus se obtiene realizando una serie de pruebas bioqumicas basadas
en la utilizacin de distintos azcares y aminocidos.
2. FUNDAMENTO
La prueba del PYR permite la identificacin presuntiva de ciertas bacterias en base a la
actividad enzimtica l-pirrolidonilarilamidasa (PYRasa). Los microorganismos que
contienen esta enzima hidrolizan en forma rpida el sustrato presente en los discos y
liberan un grupo pirrlico que reacciona con el reactivo cinamaldehdo originndose un
compuesto de color rosado-rojizo.Constituye una prueba altamente sensible y de utilidad
como los discos de Bacitracina 0.04 U (REF B1240427) y la prueba de tolerancia a la sal
(REF Enterococos Medio Hipertnico). Tambin se la utiliza junto con la prueba de
leucinoaminopeptidasa (Discos de L.A.P. REF B1241424) y los discos de Vancomicina 30
g (REF B1134027) para la identificacin de cocos Gram positivos catalasa negativa no
productores de beta hemlisis. Debe tenerse en cuenta que algunas especies de
estafilococos (Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus scheleiferi, Staphylococcus

haemolyticus y Staphylococcus intermedius) son generalmente PYRasa positivo, por lo

que se puede utilizar esta prueba en su identificacin. Reacciona con el reactivo revelador
N-N dimetilamino cinamaldehido
3. COMPOSICIN
-

Discos impregnados con el sustrato pirrolidonil beta naftilamida

Reactivo revelador: solucin de p-dimetilamino cinamaldehdo

4. OBJETIVOS:
-

Realizar la prueba presuntiva especifica para los estreptococos B- hemolticos y la

mayor parte de las especies de Enterococcus.

Diferenciar el Streptococcus pygenes de otras especies de Streptococcus y de la
especie de Enterococcus.

5. PARTE EXPERIMENTAL
5.1.
Materiales
Papel impregnado(discos) en una solucin de (Pirrolidonil-beta-naftilamina). Listo

para usar. El envase contiene slica gel como desecante.

Revelador: 1 ml de solucin acuosa de p-dimetil-aminocinnamaldehido.
Solucin fisiolgica estril.
Agar Sangre.
Agua destilada.
Gotero plstico para el agregado del revelador.
Placa de petri.
Tubos de ensayo
Asa.
Cronmetro.
Bao Mara.
Mecheros

5.2.

Procedimiento
Siembra
A partir de un cultivo puro de agar sangre del microorganismo en
estudio, del cual se ha identificado que son cocos Gram positivos
catalasa negativa, hacer una suspensin densa en 50 Ul de

solucin fisiolgica estril y agregar un disco de PYR.

Dejar que los discos tomen temperatura ambiente.

 Tomar un tubo de hemlisis, agregar 0,2 ml de agua destilada y realizar una

suspensin bien densa, tomando 3 ms colonias del cultivo puro.
Colocar en bao Mara a 37C y agregar 1 disco de PYR-Enterococos.
Agitar el tubo teniendo la precaucin de que el disco quede sumergido en la
suspensin. Mantener a 37C durante 30 minutos.
Luego agregar una gota de la solucin Reveladora y observar el cambio de color
del disco, durante 5 minutos.

Incubacin
En aerobiosis a 35 37C durante 30 minutos. Cuando se utiliza
para diferenciar Staphylococcus, la incubacin se debe realizar,
segn algunos investigadores, en aerobiosis, a 35 37C durante 2
horas.

5.3.

Estabilidad y conservacin
Los discos Diferenciales PYR-Enterococos son estables hasta la fecha
que indica el envase, conservados refrigerados entre 2-10C.

5.4.

Muestra
No se deben utilizar cultivos mezclados o especmenes clnicos
directos, para la realizacin de la prueba de PYR-Enterococos.

5.5.

Interpretacin de los Resultados

Agregar dos gotas de reactivo cinamaldehido y dejar a temperatura a
ambiente hasta 5 minutos. Observar el color desarrollado:
Positivo: presencia de actividad enzimtica pirrolidonilarilamidasa:

disco color rosado a rojo.

Negativo: ausencia de actividad enzimtica pirrolidonilarilamidasa:
disco y/o solucin color amarillo o incoloro.

5.6.

5.7.

Cepas de control resultado

Enterococcus faecalis (+)
Streptococcus pyogenes (+)
Staphylococcus aureus (-)
Cuidados
Dejar que el envase tome temperatura ambiente antes de su uso, para
evitar condensacin de humedad dentro del mismo.
Despus de su uso tapar bien y colocar el envase dentro del refrigerador.
No utilizar discos cuyo vencimiento haya expirado.
Utilizar una suspensin bien densa para evitar resultados falsos negativos.

6. BIBLIOGRAFA
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b12/pyraenterococos.htm.Manual de instrucciones
Brizuela lab. J.Clin. Microbiol., 22:772-777, 1985.
Ficha tcnica de laboratorio Britania.

ANEXOS

Positivo: presencia de actividad enzimtica pirrolidonilarilamidasa:

disco color rosado a rojo.

Negativo: ausencia de actividad enzimtica pirrolidonilarilamidasa:
disco y/o solucin color amarillo o incoloro.

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA
SALUD
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUMICA
TEMA:

PRUEBA DE PYR

DOCENTE: Q.F. MARIELLA GUERRERO BENAVIDES.

PRESENTADO POR LOS ALUMNOS:

MELISSA OBLITAS CCAHUATA.
BRYAN PAL TITO CALDERN.
KATHERINE LAGOS DEZA.
KATHERINE RONDON MEDINA.
CINTHIA CALDERON
RONALD COROPUNA
AREQUIPA _ 2016