INMUNOENSAYO POR QUIMIOLUMINISCENCIA (CLIA)

Quimioluminiscencia (CLIA por su nombre en ingls: ChemiLuminescent Immuno Assay ) es el fenmeno

por el que, en ciertas reacciones qumicas, la energa liberada no slo es emitida en forma de calor o de
energa qumica, sino tambin en forma de luz.
La quimioluminiscencia es un fenmeno que se produce cuando, en una reaccin qumica, los electrones
saltan de las capas ms altas de los tomos a las ms bajas.
Se entiende adems, que la quimioluminiscencia es la propiedad que tienen algunas sustancias qumicas para
emitir luz. Estas sustancias son, por ejemplo, las que se emplean para los nmeros de los relojes que brillan
en la oscuridad, o las que de forma natural tienen algunos animales, como las lucirnagas.

Adems tienen su aplicacin en la medicina, en esta rea por lo general se emplean para detectar la
existencia de sustancias qumicas en las biopsias de tejidos.

La quimioluminiscencia, como se puede ver, es algo propio de los laboratorios. No hay ninguna prueba que
se aplique a los enfermos que se base en la quimioluminiscencia.
En el laboratorio clnico los sistemas que llevan a cabo esta reaccin fueron especialmente diseados para
realizar inmunoensayos con tecnologa automatizada de vanguardia como lo es la quimiolumiscencia, mtodo
de lectura con mayor sensibilidad que ELISA, basndose en el principio de emisin de energa luminosa a
travs de una reaccin qumica (Enzima Sustrato).
La gama de pruebas que conforman su men permite realizar diferentes perfiles de casi todas las reas del
laboratorio clnico, empleando reactivos de alta calidad que permiten obtener resultados muy confiables.
La quimioluminiscencia se produce mediante la generacin de especies electrnicamente
excitadas en el transcurso de diversas reacciones qumicas que, en general, implican oxidacin.
Ocurre cuando uno de los productos intermedios o finales de una reaccin es quimioluminiscente
y, por tanto, emite radiaciones electromagnticas al desactivarse, pasando de estado excitado a
estado fundamental. La medida de la quimioluminiscencia directa puede realizarse con un
luminmetro, que desde un punto de vista econmico es ms accesible que un fluormetro. La
mayora de las reacciones quimioluminiscentes son de tipo oxidativo. En ellas se oxida un
sustrato. Por ello, los compuestos quimioluminiscentes se utilizan, junto con sustratos oxidables
y con oxidantes como O2, perxido de hidrgeno (H2O2), ATP y NADH(H) y as es posible medir
la concentracin de componentes de las reacciones quimioluminiscentes (NADH, FMN, aldehdos,
oxgeno), o como indicadores de sustratos o enzimas que participan en reacciones en las que
se produce o consume alguno de los componentes de la reaccin luminiscente (deshidrogenasas,
aminotransferasas, malato, oxalacetato, glucosa y otros). Algunos compuestos luminiscentes que
participan en muchas reacciones son:
Luminol (5-amino-2,3-dihidroftalazina-1,4-diona) y sus derivados. Sus caractersticas
luminiscentes dependen mucho de la posicin del grupo amino. Precisan de un oxidante fuerte
(H2O2, O2, ClO o MnO4 ), y para conseguir la mxima eficacia necesitan un catalizador o
cooxidante (Cu2+, Fe(CN6) 3 o el grupo hemo). El grupo hemo es su catalizador ms eficaz, y el
mejor medio es el tampn de carbonato, con un pH ptimo cercano a 11 (Figura 6A).
steres de acridinio. Estos derivados presentan ventajas con respecto al luminol, ya que la
reaccin quimioluminiscente se produce slo con H2O2 en medio alcalino. En ella se produce su
destruccin oxidativa originndose N-metilacridona en estado excitado (Figura 6B). Se emplea
mucho para marcar protenas en inmunoanlisis. Presentan una especficidad muy alta.
Lucigenina. Se oxida por el H2O2 en disolucin bsica en presencia de iones metlicos que
actan como catalizadores, tal es el caso del Pb2+. Se emplea en una reaccin enzimtica en la
que participa la enzima xantina-oxidasa.
Luminol:

El luminol (C H N O ) es un compuesto qumico polvoriento que es capaz de

producir quimioluminiscencia cuando reacciona con algunos agentes oxidantes (habitualmente
con perxidos, que son compuestos cuyos enlaces son oxgeno-oxgeno y exhiben una valencia de -1
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en dicho elemento), iluminando con un tono azul que resplandece de una forma digna de ver (lstima
que el brillo solo tarde unos 30 segundos).
El producto de la quimioluminiscencia del vdeo inferior resulta de reaccionar dos
disoluciones, A y B. La disolucin A est compuesta por luminol e hidrxido de sodio o sosa
custica
(NaOH);
la disolucin
B est
compuesta
por ferricianuro
potsico (K [Fe(CN) ]) y perxido de hidrgeno o agua oxigenada (H O ). El luminol y
el H O reaccionan y liberan energa fotnica formando la quimioluminiscencia con un color azulado y
brillante, mientras que el ferricianuro potsico y el NaOH han actuado como catalizador en la
reaccin.
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Las reacciones quimioluminiscentes se utilizan con xito para la deteccin sensible de analitos
de inters en clnica tras su separacin por cromatografa de lquidos (5). Ventajas: estabilidad de
los compuestos quimioluminiscentes, bajo lmite de deteccin y elevada especificidad. Esta
metodologa es sencilla, rpida y con gran intervalo de respuesta lineal, adems de no requerir
instrumentacin sofisticada. Desventajas: las enzimas empleadas como marcadores que
catalizan reacciones quimioluminiscentes pueden inactivarse durante las reacciones de marcaje.
Slo podrn marcar antgenos de bajo peso molecular.

Cules son las ventajas de la Quimioluminiscencia?

Mejor rendimiento
La ventaja de CLIA es aumento de la sensibilidad y rango dinmico, lo que permite la deteccin de
concentraciones de analito ms bajos y el diagnstico temprano de la enfermedad. (IVD Tecnologa octubre
2004).
En el caso de la Marca Monobind, utiliza Luminol en su reactivo trazador para aumentar la fuerza de la seal y
producir una reaccin brillo de larga duracin que es superior a otros sustratos. Esto resulta en un ensayo
hasta 100,000 veces ms sensible que el ELISA.
El Rango dinmico de CLIA se mejora ms all de ELISA con una mejor linealidad y la discriminacin de la
seal. Mientras ELISA no puede leer por encima de 3.0 O.D. por lo que requiere dilucin de la
muestra, CLIA puede leer un rango dinmico de que aumenta 106 o 107 veces significativamente la linealidad
del ensayo y la reduccin de desbordamiento.
Adems, bajo fondo (alta relacin seal a ruido) permite una interpretacin ms clara de bajas
concentraciones de analito.
Larga Vida

Los sustratos CLIA tienen una vida til de 3 aos, muy superior a la fluorescencia y RIA, y al igual que todos
los productos AccuBind ELISA tienen una vida de 18 meses al momento de fabricarlos. Monobind
proporciona 12 meses de vigencia desde la fecha de embarque.
Resultados ms rpidos
Los tiempos de incubacin son ms reducidos que en los mtodos de ELISA, tpicamente por 30 minutos o
ms, aadiendo un tiempo valioso a los horarios del usuario y por lo tanto hay un aumento de su
productividad.
Fcil Adopcin
Monobind CLIA sigue los mismos procedimientos que ELISA, con la excepcin de la solucin de parada y
tiempos de incubacin ms cortos, lo que hace que sea fcil para los usuarios actuales Monobind ELISA para
adoptar CLIA en rango analito total o parcial. [enlaces mismos procedimientos para ver los tipos de ensayo]

POR QU PREFERIR CLIA EN LUGAR DE ELISA?

Breve comparacin de las metodologas de ELISA y CLIA

CONCLUSIN Debido a los hbitos de vida, la exposicin a agentes txicos perjudiciales para la
salud, las mutaciones, la herencia gentica y, por otra parte, al desarrollo de nuevas
metodologas analticas y al avance de la farmacologa, hoy en da se diagnostican nuevas
patologas antes desconocidas o con poca prevalencia. Eso hace que los parmetros anormales
de algunas patologas puedan cambiar, y que los mtodos para su deteccin tambin lo hagan
con el fin de conseguir la determinacin de bajas concentraciones y unos valores representativos
del valor exacto del biomarcador. La luminiscencia (Tabla II) responde a la sensibilidad y
especificidad requerida para el anlisis de algunas molculas presentes a bajas concentraciones
en los fluidos biolgicos. De 2003 a 2008 ha aumentado el estudio de biomarcadores de
enfermedades cardiovasculares, neurodegenerativas y de exposicin a txicos, mientras que el
de cancergenos ha disminuido sensiblemente, como lo pone de manifiesto la consulta en las
bases de datos ms utilizadas en la bsqueda bibliogrfica. Sera deseable que se pudieran
conocer biomarcadores predictivos en los estados ms bajos de las diferentes patologas, o bien,

cuando stas an no se han desarrollado y, sin embargo, se sospecha su potencial futuro por un
claro componente gentico. Por todo ello, la investigacin en el campo de las metodologas
analticas que permitan la deteccin sensible y selectiva de estos biomarcadores debe caminar
en paralelo con la investigacin de aquellos.