MANUAL PRCTICO DE MICROBIOLOGA - Tomo II: Microbiologa Ambiental II

Manacorda A. M., Cuadros D. P y lvarez A. S.

Ao 2007

Captulo 10
MICROORGANISMOS DEGRADADORES DE HIDROCARBUROS*
Objetivos
Tomar conocimiento de la existencia en el suelo de microorganismos con capacidad para
degradar hidrocarburos.
Conocer las tcnicas microbiolgicas para realizar recuento y aislamiento de
microorganismos hidrocarburolticos.
Introduccin
La contaminacin por hidrocarburos tiene un pronunciado efecto sobre las propiedades de los suelos,
derivando en procesos de salinizacin, toxicidad sobre la comunidad microbiana nativa y mortandad de
la vegetacin por fitotoxicidad. Los hidrocarburos son compuestos orgnicos que contienen carbono e
hidrgeno.
Diversas bacterias, e incluso mohos y levaduras, pueden utilizar hidrocarburos como fuente de energa
y carbono para su crecimiento y reproduccin. Este proceso, que se da en forma natural en el suelo, es
aprovechado y optimizado para lograr la recuperacin de los suelos contaminados. De denomina
biorremediacin al empleo de microorganismos y la incentivacin de su metabolismo para eliminar los
contaminantes o al menos convertirlos en compuestos qumicos menos agresivos.
La biodegradacin puede realizarse por inoculacin microbiana, bioaumentacin, o por bioestimulacin
de las actividades microbianas naturales. La bioaumenacin constituye una estrategia donde son
incorporados al suelo microorganismos con probadas capacidades metablicas de degradar el
contaminante implicado. Pudiendo ser estos autctonos del suelo a recuperar, multiplicados en
condiciones controladas, o microorganismos alctonos o exgenos, con capacidades genticas
especficas para la metabolizacin del compuesto. Por otro lado, la bioestimulacin consiste en una
modificacin ambiental capaz de suprimir algn factor limitante que est restringiendo la velocidad de
crecimiento microbiano.
La finalidad de este Trabajo Practico es identificar microorganismos con capacidad de degragadar
hidrocarburos y aplicar tcnicas de recuento a partir de diferentes tipos de suelos.
Procedimiento
Recuento de microorganismos degradadores de hidrocarburos
Realizar diluciones sucesivas de un gramo de la muestra (suelo- agua) en 9 ml de agua destilada (A.D)
10
hasta obtener una dilucin de 10
(1: 10.000.000.000).
Sembrar los tubos con Medio Mnimo para Microorganismos Hidrocarburolticos (MMMH) con 0,1 ml
de las correspondientes diluciones de la muestra. El medio consiste en una solucin de sales, con
elementos qumicos que funcionan como elementos limitantes para el desarrollo de los
microorganismos.
*

Sinonimia: microorganismos hidrocarburolticos

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Manacorda A. M., Cuadros D. P y lvarez A. S.

Ao 2007

Agregar en forma asptica 0,1 ml de kerosene estril como nica fuente de carbono y energa.
Incubar a temperatura ambiente durante 40 das e interpretar los resultados.
Se toman como positivo aquellos tubos en los que se visualice desarrollo microbiano (turbidez del
medio) y cambio de color (de rojo a amarillo) debido a la acidificacin del medio producida por el
metabolismo microbiano.
Aislamiento e Identificacin
De un tubo positivo de MMMH sembrar en placas con medio mnimo agarizado (Agar-agar 1,2 %).
Dichas placas deben tener kerosene como nica fuente de carbono y energa. El mismo se aplica
embebiendo papeles de filtro, colocados en la tapa de la placa (antes de la esterilizacin de la misma.
Incubar de 7 a 10 das. Repicar una colonia a Agar en pico de flauta y otra a un mismo medio mnimo
agarizado con kerosene.
Bibliografa
Altamirano, Maria Gabriela. 2000. Ecologa Microbiana de la Comunidad Hidrocarburoltica en Suelos
Regionales Contaminados con Petrleo. Tesis de Maestra. Fac. de Ingeniera. UNCo.
Madigan, M. T, Martinko, G. M., Parker, J., 2004. Brock, Biologa de los Microorganismos.10 ed.
Editorial Prentice Hall INC.