UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE

MXICO
FACULTAD DE QUMICA
LABORATORIO DE BIOQUMICA BSICA
PROFESORA: QFB. CYNTHIA ELENA ENRQUEZ
GARCA
REPORTE 7: CUANTIFICACION D EPROTEINA POR EL
METODO DE LOWRY
INTEGRANTES:
-

ALEJANDRA SNCHEZ PIA

JANETTE MARIE ARIZMENDI BECERRA
ADRIANA PLATA BECERRIL
YARITZA GONZALEZ CEDILLO
GRUPO: 42

LICENCIATURA: QUIMICO FARMACUTICO BILOGO

FECHA: 20/MARZO/2016

OBJETIVO
Cuantificar la protena obtenida en la prctica nmero 6 (la fraccin gamaglobulina obtenida del suero sanguneo) por el mtodo de Lowr y.
MARCO TEORICO
Mtodo de Lowry
El mtodo de Lowry (1951) es un mtodo colorimtrico de valoracin cuantitativa de las
protenas. A la muestra se aade un reactivo que forma un complejo coloreado con las
protenas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentracin de protenas,
segn la ley de Lambert-Beer A= .l.c Este mtodo consta de dos etapas: 1) Los iones
Cu2+, en medio alcalino, se unen a las protenas formando complejos con los tomos de
nitrgeno de los enlaces peptdicos. Estos complejos Cu2+-protena tienen un color azul
claro. Adems, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la protena,
exponindose los residuos fenlicos de tirosina que van a participar en la segunda etapa
de la reaccin. El Cu2+ se mantiene en solucin alcalina en forma de su complejo con
tartrato. 2) La reduccin, tambin en medio bsico, del reactivo de Folin-Ciocalteau, por
los grupos fenlicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayora de las protenas,
actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del reactivo de FolinCiocalteau es el cido fosfomolibdotngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los
grupos fenlicos da lugar a un complejo de color azul intenso.

Gamma globulina.
La gamma globulina es un tipo de globulina denominada as por aparecer en ltimo lugar
al separar las protenas del suero sanguneo. El principal tipo de gamma globulina es el
de los anticuerpos o inmunoglobulinas.

Albmina srica bovina.

La BSA es una protena ampliamente utilizada en la industria biomdica. Muy soluble en
agua y su punto isoelctrico es de 4,78. El peso molecular, basado en la informacin
sobre secuencia aminoacdica, se establece en: 66,430 kD. Es una cadena polipptica
simple, constituida por 583 aminocidos residuales. A pH 5 7 contiene 17 puentes
disulfuro intracadena y 1 grupo sulfhidrilo.

PROCEDIMIENTO
Preparacin de la curva patrn de Lowry
Hacer
una
dilucin
1:100 de la
Albm ina
srica
bovina (ASB)
al 22%
(tubo 1)

A cada
tubo(adicionado
s 0.2 mL)
agregar 4mL del
Reactivo A

a partir de
ella preparar
una serie de 5
tubos en
donde se
realicen
diluciones

1:200 (tubo
nm . 2),
1:400 (tubo
nm . 3),
1:800 (tubo
nm . 4),
1:1600 (tubo
nm . 5),
1:3200 (tubo
nm . 6)

Agitar tubos y
dejar reposar 10
minutos a
temperatura
ambiente

Agregar 0.4 mL
de Reactivo B

REACTIVO A
es
una
m ezcla
de
Carbonato de Sodio al
2% en NaO H 0.1N con
el Sulfato de Cobre y el
Tartrato de Sodio y
Potasio en una relacin
de 10:0.1:0.1

TOM AR
ALICUO TAS
D E 0.2m L DE
CADA TU BO

Agitar tubos y
dejar reposar 30
minutos.
leer tubos
520nm

REACTIVO B

es el reactivo de
Folin-Cicalteau con
agua
en
una
relacin de1:1.

OBSERVACIONES
Al agregarle a los tubos (con 0.2 mL. de solucin de ACB) el reactivo A, se observ un
color lila, que se fue diluyendo desde el tubo 1 al tubo 6, el tubo 7 fue lila intenso.
Despus a esos mismos tubos ya con el reactivo A, se le agrego un segundo reactivo
(reactivo B), se observ un color azul que se fue diluyendo del tubo 1 al tubo 6, el tubo 7
se form un color azul intenso, lo cual estaba muy concentrado, por lo tanto se diluyo de
3:1 para que estuviera dentro del rango del color y as poder medir su absorbancia.

RESULTADOS
- CONCENT RACIONES
TUBO 1
22g
100mL
Xg

0.1mL

X= 0.022g
TUBO 2
0.022g
1mL
Xg

0.5mL

X= 0.011g
TUBO 3
0.011g
1mL
Xg

0.5mL

X= 0.0055g
TUBO 4
0.0055g
1mL
Xg

0.5mL

X= 0.00275g
TUBO 5
0.00275g 1mL
Xg

0.5mL

X= 0.001375g

TUBO 6

0.001375
g
Xg

1mL
0.5mL

X= 0.0006875g

- CURVA PATRN
Concentraci Absorban
n
cia
0.022
0.77
0.011
0.425
0.0055
0.316
0.00275
0.254
0.001375
0.221
0.0006875
0.133

Absorvancia
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5

ABSORVANCIA 0.4
0.3
0.2
0.1
0

0.01

0.01

0.02

0.02

0.03

CONCENTRACIN

El tubo 7 contena la gammaglobulina, tuvo una absorbancia

de 0.531, la diluimos 3:1 con agua destilada, tuvo una
concentracin de 0.014g obtenida de la grfica, se multiplico
por 3 para obtener la concentracin de la gammaglobulina sin
diluir y fue de 0.042g.

CONCLUSIONES
Cuanto mayor sea la concentracin de protena de la muestra ms intenso ser el color
formado porque existirn ms enlaces peptdicos para formar el complejo de coordinacin
y habr ms tirosinas y triptfanos que reduzcan el reactivo de Folin.
Mediante una recta patrn elaborada enfrentando la absorcin a la concentracin de
protena y conociendo la absorcin de la muestra problema, se puede determinar la
concentracin de protena, para lograr esto, se requiri diluir 3:1 la concentracin obtenida
de la protena, ya que su absorcin no se interpolaba dentro de la recta.

Algunas de las caractersticas del mtodo de Lowry para la determinacin de protenas en

solucin son: es de 10 a 20 veces ms sensible que la estimacin por absorcin a 280
nm, es varias veces ms sensible que la reaccin con Ninhidrina y tambin es 100 veces
ms sensible que la reaccin de Biuret. Presenta pocas interferencias, aunque hay que
tener en cuenta que el triptfano, la tirosina, la mayor parte de los fenoles, el cido rico,
la guanina y la xantina reaccionan con el reactivo de Folin para producir color.
Una desventaja que presenta es que la intensidad del color vara con las diferentes
protenas. En este sentido es menos constante que la reaccin de Biuret pero ms que la
absorcin a 280nm.
CUESTIONARIO
1. Qu otros mtodos existen para cuantificar protenas sricas?
- Mtodos de absorcin
- Mtodos Derivados colorimtricos
Biuret
Lowr y
Bradford
BCA
- Mtodos derivados Fluorimtricos
O-ftalaldehido
2. Cules son las ventajas y las desventajas de usar el mtodo de
Lowr y?
- Ventajas: Tiene bastante sensibilidad.
- Desventajas: No todas las protenas reaccionan igual muestra muchas interferencias
como detergentes no inicos, sulfato amnico etc.
3. Por qu se deben realizar las lecturas en el espectrofotmetro a 520
nm?
- Porque la absorcin se mide en 500 y 520nm y es visible para el ojo
humano.
Ejercicios de integracin
1. Reporte los clculos realizados para obtener las concentraciones de
Albm ina srica bovina que se empelaron para realizar la curva patrn.
Los clculos se encuentran en el apartado de resultados de la prctica
correspondiente.
2. Qu propsito tiene realizar una curva patrn?
La curva de calibracin permite estimar, a partir de una absorcin o transmitancia
dada, la concentracin de una solucin.
3. Si no tuviera Albmina srica bovina, que otra protena se recomienda
para obtener las concentraciones de la curva patrn.
-Globulina
4. Explique qu quiere decir extraccin por precipitacin salina (salting
out)?
Es un fenmeno fsico-qumico basado en las interacciones electrolito-no electrolito,
en el cual a altas concentraciones salinas (o alta fuerza inica) algunos solutos
como protenas o polmeros precipitan debido al aumento de las interacciones

hidrofbicas entre ellos. Este fenmeno est vinculado al fenmeno cosmotrpico

ejercido por algunas sales. La concentracin salina y el tipo de sal requerida para la
precipitacin varan de soluto a soluto. Este fenmeno es empleado para la
separacin de protenas.
BIBLIOGRAFIA

O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr y R.J. Randall. J. Biol. Chem. (1951)
Stoscheck CM. Quantitation of Protein. 1990. Methods in Enzymology.
Peterson GL. 1977. A simplification of the protein assay method of Lowry et al.
which is more generally applicable. Analytical Biochemistry.