Antes de hablar de tinciones histolgicas debemos conocer cual es el proceso de

preparacin de un tejido histolgico

Se deben seguir los siguientes pasos:
OBTENCIN DE LA PIEZA
- Necropsias: son las piezas que se obtienen de un cadver. Para histologa normal es
necesario que se trate de un cadver fresco y que no haya sido atacado por ninguna
lesin, por lo menos el rgano que se quiere estudiar.
- Biopsias: son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de
estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnstico histopatolgico.
- Piezas operadas: los tejidos que han sido extrados de las intervenciones quirrgicas,
generalmente tumores u rganos inflamados, tambin pueden darnos material de
investigacin pero, como en el caso anterior, slo servirn para anatoma patolgica.

FIJACIN
La fijacin tiene por objeto matar las clulas y conservarlas, hasta donde sea posible,
en el estado en que se encontraban durante la vida. Por lo tanto es un mtodo
histolgico destinado a obtener preparados duraderos que conservan la estructura
morfolgica y qumica de las clulas y tejidos al estado vivo y que permite realizar,
posteriormente, los procedimientos de coloracin o de identificacin que facilitan el
completo conocimiento de su constitucin ntima.

Fijacin de la muestra.
Se llaman fijadores a las sustancias qumicas o a los agentes fsicos que se utilizan
para tal fin.
Cualidades que debe tener un fijador:
1. Actuar con rapidez, matando y fijando a las clulas antes de que aparezcan los
fenmenos agnicos o post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.).
2. Poseer alto poder de penetracin para asegurar la fijacin correcta hasta en las
capas profundas de la pieza a fijar.
3. Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que presentaban in vivo.
4. Permitir o favorecer el empleo de los procedimientos necesarios para su observacin
ulterior (ejecucin de cortes, coloracin, etc.).
5. Impedir la desaparicin de los elementos solubles durante la fijacin o despus de
ella.
6. No provocar o impedir la produccin de estructuras artificiales.
7. No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos friables o quebradizos.
Manera de actuar de los fijadores
Vara con la composicin o naturaleza de los mismos: coagulando las protenas sin
combinarse con ellas (alcohol, cido pcrico, yodo, calor), formando combinaciones
qumicas con las sustancias orgnicas (cido crmico y sus sales), o reducindose en
contacto con las mismas y originando en su seno un precipitado sumamente fino (cido
smico, bicloruro de mercurio, cloruro de oro).
La mayor parte de los fijadores actan como oxidantes, favoreciendo as la coloracin
ulterior de los tejidos (recurdese que stos, en su mayora, son reductores que
muchos colorantes se transforman en leucobases incoloras al combinar una molcula
de hidrgeno con su cromforo).
Fijadores qumicos
Son los ms utilizados; pueden ser fijadores simples, constituidos por una sola
sustancia qumica, y fijadores compuestos o mezclas fijadoras cuando varias
sustancias intervienen en su constitucin.
FIJADORES SIMPLES:
a) Formol al 10%, es el ms usado. Su empleo es aconsejable en todos los casos en
que no se disponga de un fijador especial, principalmente cuando se trata de fijar
rganos o tejidos para estudios histolgicos topogrficos.
b) Alcohol etlico absoluto o de 96%, se usa generalmente en microqumica.

c) Alcohol metlico, se lo emplea con frecuencia para fijar frotis desecados (sangre,
mdula sea, ganglio, bazo, lquidos de puncin, etc.).
d) cido smico al 1 2%, es poco penetrante pero enrgico, conserva muy bien
estructuras celulares.
e) Bicromato de potasio al 3-5%.
FIJADORES COMPUESTOS:
En su composicin intervienen un nmero variable de fijadores simples racionalmente
elegidos con el fin de completar la accin de cada uno de ellos o atenuar sus defectos.
a) Lquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-actica.
b) Lquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimado-actica.
c) Lquido de Helly, mezcla Zenker-formol.
d) Lquido de Bouin, mezcla picro-formos-actica.
e) Liquido de Duboscq-Brasil, o Bouin alcohlico.
FIJADORES FSICOS:
1. Desecacin.
2. Calor seco.
3. Calor hmedo.
4. Fro.
5. Congelacin y desecacin.
DESHIDRATACIN E INCLUSIN EN PARAFINA
Deshidratacin
Las piezas al ser retiradas del fijador, o despus de haberlas lavado, estn embebidas
en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar,
debemos deshidratar los tejidos sumergindolos en lquidos anhidros, vidos de agua.
Para evitar alteraciones provocadas por una deshidratacin brusca, se aconseja
proceder escalonadamente utilizando, preferentemente, alcohol etlico de graduacin
creciente.

Se dispone una lmina en un cassette de deshidratacin.

Deshidratacin en alcoholes sucesivos.

Impregnacin por un disolvente de la parafina (aclaracin)
Las piezas perfectamente deshidratadas se sumergen en el disolvente, xilol o toluol
(este ltimo es el que nosotros utilizamos). Al agregar el toluol, no debe aparecer
ninguna turbidez. Si se pone blanco-lechoso es que la deshidratacin no ha sido bien
lograda y debemos repetir el bao de alcohol absoluto cerciorndonos que realmente lo
sea: una gota de alcohol agregada a unos ml de toluol no debe enturbiarlo.

Penetracin de la parafina
Se sumergen las piezas en parafina (56-58 de punto de fusin), mantenida lquida en
la estufa a no ms de 62C. Despus de 1 a 2 horas se renueva la parafina.

Penetracin de la parafina a 56-58C.

Inclusin definitiva o formacin del bloque
En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se vierte la parafina
fundida, del mismo punto de fusin de la que ha servido para la penetracin. Se
colocan las piezas orientndolas y luego se pone el molde en heladera.

Barras de Leuckart
A los 15-30 minutos la parafina se habr solidificado completamente, recortamos los
bloques en forma de pirmide cuadrangular truncada, lo adherimos a un taquito de
madera mediante una esptula calentada con la llama de un mechero y ya podemos
realizar los cortes con el micrtomo.

Factura del taco para cortar.

OBTENCIN DE CORTES

El objeto de la inclusin que hemos descripto anteriormente es hacer posible la

reduccin del tejido a cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de
la luz para examinarlo al microscopio. Los micrtomos son instrumentos de gran
precisin que nos proporcionan cortes delgados parejos y de espesor graduable. Los
cortes ms corrientes son los de 4-6 micrones.
Consideraremos cuatro tipos de micrtomos: el de deslizamiento, el tipo Minot, el de
congelacin, y el cristato o critomo.
- Tipo deslizamiento: en este caso la pieza queda fija mientras la cuchilla se desliza por
unas guas especiales merced a un soporte al que se sujeta la cuchilla con unos
tornillos.
- Tipo Minot: en este caso la cuchilla queda fija y es la pieza la que se desliza sujeta a
una platina, sta se desliza verticalmente cuando se hace girar una manivela. Permite
obtener cortes seriados en forma de cinta.

Corte en micrtomo tipo Minot.

- Tipo congelacin: se parece al de deslizamiento, pero la cuchilla o navaja, en lugar de

deslizarse, gira sobre un eje. Por otra parte, el aparato se caracteriza por tener un
sistema de congelacin colocado debajo de la platina que utiliza la expansin brusca
del anhdrido carbnico contenido en un cilindro con el cual se comunica.

- Cristato: consta de un micrtomo tipo Minot incluido en una cmara de congelacin.

El volante de inercia que controla la realizacin del corte permanece en el exterior,
mientras que la cuchilla y el mecanismo de avance estn situados dentro de la cmara
fra (normalmente a -20 C). Pese a la disposicin horizontal de la cuchilla, la obtencin
de secciones seriadas es posible gracias a la existencia de un sistema antienrollamiento que obliga al corte a deslizarse sobre la superficie de la cuchilla. En los
modelos ms modernos es posible optar por el corte manual o motorizado, as como
enfriar rpidamente la muestra a -60 C gracias a la existencia de una placa de
congelacin instantnea. Frente al micrtomo convencional de congelacin, el cristato
posee la gran ventaja de permitir la obtencin de cortes mucho ms delgados (por lo
general de 4 m y, en manos experimentadas, hasta 2 m).

Los cortes de parafina se extienden, al obtenerlos del micrtomo, en agua tibia

contenida en un cristalizador. En ese mismo agua se introducen portaobjetos,
previamente desengrasados, cubiertos con una capa de adhesivo de Mayer y, con la
ayuda de una aguja histolgica, se colocan los cortes sobre el portaobjetos y a
continuacin se lo levanta.

COLORACIN
Luego de realizado el corte, se procede a rehidratarlo para permitir su coloracin.
Colorantes: reciben esta denominacin las sustancias que pueden conferir color a otros
cuerpos.
Coloracin: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una sustancia
colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la
solucin colorante.

Batera de Coloracin H&E.

MONTAJE
Luego de la coloracin, se deshidrata el corte y se procede a la aclaracin y montaje
definitivo, dado que nos hemos propuesto hacer un preparado en condiciones de ser
observado y protegido del ambiente para evitar su deterioro.
La deshidratacin se realiza con alcoholes de graduaciones crecientes.
La aclaracin se realiza con xilol o carboxilol. El objetivo de este paso es impregnar el
corte con un disolvente del Blsamo de Canad, que al mismo tiempo le confiere un
ndice de refraccin semejante al del vidrio.
Para el montaje se limpia el portaobjeto alrededor del corte y se deposita sobre el
mismo una gota de Blsamo de Canad disuelto en xilol y se cubre con un cubreobjeto.
Se deja secar unas horas antes de su observacin al microscopio.

DIAGRAMA DE TECNICA HISTOLOGICA

A continuacin veremos cuales son los tistintos ripos de tinsiones que existen en la
histologa.
Tipos de tinciones
Existen mltiples mtodos de tincin histolgica, unos generales y otros especficos,
que permiten poner de manifiesto tanto la topografa tisular, como tipos celulares
concretos, determinados orgnulos o estructuras intracelulares.
Las tinciones histolgicas propiamente dichas utilizan colorantes, la mayor parte de
ellos derivados de la industria textil, que se eligen en funcin de su capacidad de
interaccionar con los diferentes constituyentes de los tejidos. Tcnicas de tincin ms
complejas como las histoenzimticas o inmunocitoqumicas se basan en el empleo de
sustratos, lectinas, anticuerpos, etc.
Que es un colorante?
Un colorante es una molcula que tiene la capacidad de absorber radiaciones
electromagnticas dentro de la regin del espectro visible es decir entre 400 y 650 nm.
Los colorantes que absorben todas las radiaciones entre estos mrgenes, no
transmiten ningn tipo de luz y se ven por lo tanto de color negro. Aquellos colorantes
que absorben una franja ms estrecha, transmiten un color determinado. Por ejemplo el
cido pcrico absorbe predominantemente la luz azul-violeta del final del espectro
visible, dando como resultado una luz transmitida de color amarillo.
Cundo se habla de un buen mtodo de tincin?

Un buen mtodo de tincin es aquel que cuando se reproduce da un alto porcentaje de

xito con resultados equiparables. Todos lo mtodos de tincin requieren siempre una
adapatacin o modificacin para ser utilizados correctamente. Para reproducir un
mtodo de tincin hay que utilizar siempre reactivos, colorantes y agua destilada de
calidad y preparar las soluciones colorantes en material de vidrio extremadamente
limpio. Conviene tener presente que la tcnica de tincin en s misma no es una tcnica
aislada sino que forma parte integral de todo el proceso histolgico.
Los protocolos de tincin deben escribirse de forma concisa, anotando de forma muy
precisa indicando claramente todos los pasos necesarios para preparar todas las
soluciones empleadas, tiempos de actuacin, temperatura, condiciones, etc...
Puede la fijacin interaccionar con la tcnica de tincin?
Los diferentes fijadores interactan de forma diferente sobre las molculas que
componen los tejidos produciendo modificaciones. En un mismo tejido, los colorantes
se comportan de forma diferente en funcin del grado de fijacin y de la naturaleza del
fijador utilizado. Por ejemplo, se conoce que tanto la formalina como el tetroxido de
osmio inducen basofilia en los tejidos, mientras que las soluciones colorantes a base de
dicromato inducen acidofilia. En comparacin con la formalina, el fijador de Carnoy
incrementa la avidez del tejido por los colorantes, mientras que el fijador de Zenker
disminuye el grado de coloracin.
Que es una tincin progresiva y una tincin regresiva?
Una tincin progresiva es aquella en las que los cortes histolgicos se sumergen en la
solucin colorante durante el tiempo necesario hasta que adquieren el grado de tincin
deseada. Cuanto ms tiempo estn los cortes en la solucin colorante, ms fuerte es la
tincin. Una tincin regresiva es aquella en la que los cortes se "sobretien" dejndolos
en la solucin colorante durante un tiempo excesivo y posteriormente se procede a
retirar el exceso de colorante (proceso que se llama "diferenciacin") mediante
tratamiento con una solucin cida o alcohlica. En este caso se ajusta el tiempo de
diferenciacin.
Qu diferencia hay entre una tincin fsica y una tincin qumica?
En una tincin fsica, el colorante se disuelve en el sustrato. Por ejemplo el Sudn III se
disuelve en las grasas, y es empleado para demostrar gotas lipdicas. En una tincin
qumica, el colorante interacciona qumicamente con el sustrato a travs de fuerzas de
van der Waals, puentes de hidrgeno, enlaces covalentes o enlaces electrostticos.

Qu es una tincin directa y una indirecta?

En una tincin directa el colorante interacciona directamente con el sustrato. En una
tincin indirecta se hace interaccionar en primer lugar a una sustancia qumica
denominada "mordiente" con el sustrato la cual permite la posterior interaccin del
colorante. Usualmente los mordientes son sales, hidrxidos o alumbres de metales
bivalentes o trivalentes.
Qu es una tincin tricroma?
Las tinciones pueden ser simples cuando se utiliza un solo colorante, o mltiples
cuando se usan dos o ms colorantes. En una tincin tricroma se emplean tres
colorantes, cada uno de ellos con unas particularidades, de tal manera que se consigue
teir con colores diferentes, estructuras diferentes, permitiendo as su rpida
identificacin en el microscopio.
Qu es una tincin supra vital?
Es aquella que se realiza sobre clulas frescas, recin obtenidas, con objeto de realizar
una observacin de las estructuras teidas con las clulas vivas. Por ejemplo, se puede
teir las mitocondrias de clulas vivas con el colorante Verde Jano y observarlas con el
microscopio mientras las clulas permanecen vivas.

Qu es una tincin vital?

Es aquel procedimiento por el cual un colorante no-txico, como el Carmn de litio o el
Azul Tripn, se inyecta en un organismo vivo para estudiar procesos vitales de clulas
capaces de acumularlo por pinocitosis o fagocitosis.
En qu consiste una tincin negativa?
Esta forma de tincin se basa en que el colorante no-tie la estructura que se desea
estudiar, de tal forma que la morfologa externa o los contornos de esa estructura
quedan delimitados por el propio colorante que se encuentra a su alrededor.
Qu es una tincin de cortes "en flotacin"?
Usualmente los cortes histolgicos se montan sobre portaobjetos antes de ser teidos
lo cual facilita su manipulacin. Sin embargo en ocasiones, sobre todo cuando se
utilizan cortes gruesos de 30-50 micras, obtenidos con un criostato o con un vibratomo,

conviene realizar determinado tipo de tinciones "en flotacin". Para ello los cortes de
tejido se mantienen sumergidos (en flotacin) en el interior de la solucin colorante lo
cual permite la accesibilidad del colorante por ambas superficies. Este tipo de tcnica
es poco comn cuando se utilizan colorantes pero es habitual cuando se realizan
tcnicas de tincin histoenzimticas o inmunocitoqumicas.
Qu es una tincin en placa?
Es aquella que se realiza utilizando placas de cultivo celulares. Es decir, la tincin se
realiza sobre clulas que se han mantenido vivas en condiciones in vitro.
En qu consiste una tincin "en bloque"?
En ocasiones, en algunos tipos de impregnaciones metlicas, tcnicas de Golgi, etc...
Conviene realizar la tincin no sobre cortes histolgicos sino sobre la pieza o bloque de
tejido. Para ello el bloque de tejido se sumerge en la solucin colorante durante un
tiempo determinado. Los resultados finales no se pueden valorar, sin embargo, hasta
que no se han confeccionado los cortes y se realiza la observacin microscpica.
Qu es una tincin para microscopa electrnica?
Para la observacin de los cortes ultra finos con el microscopio electrnico de
transmisin, es preciso "contrastar" los cortes con objeto de incrementar las diferencias
de densidad electrnica de las diferentes partes de la muestra. Para ello se recurre al
empleo de sales de metales pesados como uranio, wolframio o plomo.

Qu es una tincin histoenzimtica?

El objetivo de una tincin histoenzimtica es detectar la presencia de un enzima. Para
ello se recurre a una serie de reacciones qumicas que demuestran la presencia del
producto de la activida de enzimtica.
Qu es una tincin inmunocitoqumica?
Las tinciones inmunocitoqumicas o inmunohistoqumica pretenden detectar la
presencia de una molcula con caractersticas antignicas. Para ello se recurre al
empleo de anticuerpos que interaccionan directamente con los antgenos. Estos

anticuerpos pueden estar marcados con una sustancia fluorescente y en este caso se
trata de una tincin de inmunofluorescencia.

TECNICAS DE TINCIONES HISTOLOGICAS

Hematoxilina-eosina
La hematoxilina es un colorante catinico mientras que la eosina es un colorante
aninico perteneciente a los xantenos. Se teirn los ncleos de azul, citoplasmas en
rosa, msculo en tonos rojizos a rosados fucsia, glbulos rojos en naranja o rojo y la
fibrina en rosa intenso.

1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

5- Lavar en H2O-2min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

6-Eosina alcohlica-1min.

3- Lavar en H2O destilada.

7-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

4- Hematoxilina-5min.

8- Montaje.

Giemsa
La tcnica radica en la disociacin controlada de las sales de eosinato que ocurre al
insolubilizar la mezcla del giemsa por disolucin en H2O destilada; la eosina as
liberada colorea el componente extracelular y determinadas extructuras acidfilas; y los

derivados de azur, las estructuras de carcter basfilo. La cromatina nuclear adopta

una tincin azul violeta.
1- Desparafinar.
Estufa durante 30 min. a 60C
Sumergimos en xilol durnate 10 o 15 min.

7- Alcohol de 96- 2-3 pases rpidos.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96 -5min.
Alcohol 70 -5min.

8- Alcohol isoproplico -3 min.

3- Lavar en H2O destilada.

9 - Alcohol isoproplico -3 min.

4- Solucin Giemsa al 20 %- 45 min.

10- Xilol.

5 -Lavar con agua corriente 5 - 10min.

11- Montar.

6-Alcohol 70 - 2-3 pases rpidos

Gram
Permite la observacin de bacterias, pero no su identificacin especfica. Permite
observar su morfologa, e incluso si una vez teidos son gram + gram - cido
alcohol resistentes. Tie los organismos Gram+ de azul negruzco, Gram- de rojo y el
fondo rosa.

SOLUCIONES:
1.- Solucin Cristal Violeta:
-Cristal violeta-------------------------------------------2 gr.
- Alcohol96 -------------------------------------------20 ml
- Agua destilada --------------------------------------78 ml

2.- Solucin Lugol:

- Yodo ----------------------------------------------1.5 gr.
- Yodato potsico ---------------------------------3 gr.
- Agua destilada --------------------------------450 ml
4.- Solucin Fucsina bsica al 0.5 % :
- Fucsina bsica---------------------------------------3.- Solucin de Eter Acetona :
0.5 gr.
- Etil-ter ( concentrado ) ------------------------------125 ml - Alcohol95 ---------------------------------------------5
- Acetona--------------------------------------------------375 ml. ml
- Agua destilada ---------------------------------------95
ml
5.- Solucin de cido pcrico acetona :
6.- Solucin Acetona xilol:
-cido pcrico------------------------------------------------0.1
-Acetona --------------------------------------------50 ml
gr.
- Xilol -------------------------------------------------50 ml
- Acetona---------------------------------------------------100 ml

TCNICA:

1.- Desparafinar e hidratar.

8.- Lavar en agua corriente

9.- Sumergir en acetona para que

empiece la diferenciacin, y continuarla
2.- Solucin cristal violeta ( filtrado ) - 2
con la solucin de acetona-cido
min.
pcrico, hasta que los cortes estn
amarillo-rosado.

3.- Lavar rpidamente con agua

corriente.

10.- Lavar rpidamente en acetona.

4.- Solucin Lugol -1 min.

11.- Lavar en solucin acetona-xilol.

5.- Lavar en agua corriente.

12.- Aclara con xilol

6.- Decolorar con solucin ter-acetona,

gota a gota, hasta que no suelte ms
13.- Montar.
color.

7.- Solucin Fucsina bsica ( filtrada ) 3 min.

Tricromico de Masson
Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. Se observan tres
colores distintos; tejido conjuntivo de verde, tejido muscular de verde pardo, eritrocitos
de rojizo, ncleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa.
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

7- cido fosfomolbdico 5 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

8- cido fosfomolbdico 5 min.

3- Lavar en H2O destilada.

9- Verde luz 5-7 min.

4- Hematoxilina de Weigert 5 min.

10-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Xilol.

5- Lavar con agua corriente 10 min.

11- Montaje.

6- Fucsina de Ponceau 5 min.

Tincin para reticulina

1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.
3- Lavar en H2O destilada.

11- Lavar con agua destilada 1-2 pases.

12- Formol al 10 % -5 min.

13- Lavar con agua destilada 1-2 pases.

4- Permanganato potsico al 1% -1 min. 14- Cloruro de oro al 0.2%-2 min.

5- Lavar con agua destilada 1-2 pases

15 Lavar con agua destilada 1-2 pases.

6- Metabisulfito potsico al 2% - 1 min. 16 Metabisulfito potsico al 2%-2 min.

7- Lavar con agua destilada 1-2 pases

17- Tiosulfato sdico al 2%-- 1 min.

8 - Alumbre frrico al 2% - 2 min.

18- Lavar con agua corriente 5 min.

19-Deshidratar.
Alcohol de 70
9- Lavar con agua destilada -1-2 pases. Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.
10- Reactivo de Wilder - 2 min.

20- Montaje.

RESULTADOS:
Reticulina: negro.
Ncleos: grisceo.
Colgena: prpura grisceo.

PAS
Se usa como tcnica de rutina para observar las membranas basales que separan el
tejido epitelial del corin. Tie los ncleos de color azul, el glucgeno de color prpura y
el material PAS + (polisacridos simples, mucopolisacridos neutros, mucoprotenas,
glucoprotenas y glucolpidos) rojo rosa.

SOLUCIONES:

1 .- cido peridico al 0.5 %

2.- Hematoxilina de Mayer

3.- cido sulfuroso :

4.- Reactivo de Shiff

- Metabisulfito sdico al 10 %
------------------6 ml.

- Fucsina bsica
-----------------------------------1 gr.

- cido hidroclrico 1N al 10 %
----------------5 ml

- Metabisulfito sdico anhidro

------------------1 gr.

- Agua destilada
--------------------------------100 ml

- Agua destilada ----------------------------------200 ml

- cido hidroclrico 1 N
-------------------------20 ml
Hervir el agua destilada, aadir la fucsina
bsica, agitar y enfriar a 50C.
Filtrar y aadir cido hidroclrico, enfriar a
25C
Aadir metabisulfito sdico.
sta solucin est lista para usarse cuando
se torna casi incolora, lo cual puede llevar
hasta 2 das, en un lugar oscuro.

TCNICA:

1.- Desparafinar e hidratar.

7.- Hematoxilina de Mayer ------------ 10

min.

2.- cido peridico al 5 % --------------5

min.

8.- Lavar con agua corriente -----------5

min.

3.- Lavar en agua corriente--------------5

min.

9.- Deshidratar.

4.- Reactivo de Shiff --------------------- 15

min.

10.- Aclarar con xilol.

5.- Bisulfito sdico al 2 % ------------------5

11.- Montar.
min.

6.- Lavar en agua corriente --------------5

min.

Elstica de Van Gieson

Es una tcnica para la coloracin de fibras colgenas y elsticas. El colgeno parece

que capta un colorante cido. Tie el colgeno de rojo, ncleos y fibras elsticas de
negro y citoplasma de amarillo.

SOLUCIONES:
1.- Hematoxilina de Verhoeff:

2.- Solucin de Picrofucsina:

- Hematoxilina alcohlica:

- Fucsina cida al 1 %
----------------------------1.3 ml

Hematoxilina ------------------------------------10
gr.
- cido pcrico a saturacin
---------------------- 9.7 ml
Alcohol96 -------------------------------------100
ml
-Cloruro frrico al 10 %:
Cloruro frrico ----------------------------------10
gr.
Agua destilada
----------------------------------100 ml
- Yoduro potsico al 10 %:
Yoduro potsico --------------------------------10
gr.
Agua destilada
----------------------------------100 ml
- Alcohol 50

TCNICA:

1.- Desparafinar e hidratar

6.- Picrofucsina -------------------1 pase

2.- Hematoxilina de Verhoeff ---------30

min.

7.- Deshidratar

3.- Lavar ----------------------------------1 pase 8.- Aclara con xilol

4.- Cloruro frrico al 1 % ---------------1

pase

5.- Lavado en agua corriente ---------1

pase

9.- Montar

Azul Alcian

SOLUCIN:

Azul alcian---------- 1 gr.

Acido actico------- 3 c.c
Agua destilada----- 97 c.c

TCNICA
1-. Desparafinar.
Estufa durante 30 min. a 60C
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

5- Lavar con agua corriente

10 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

6 - Azul alcian al 2% - 10 min.

3- Lavar en H2O destilada.

7-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

4-. Hematoxilina de Harris 10 min.

8- Montaje.

Grocott
Para la tincin de hongos (candida, aspergillus).
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.
2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.
3- Lavar en H2O destilada

10- Lavar con agua destilada 6 pases.

11- Cloruro de oro al 0.2 % - 2-5 min.

12 Lavar con agua destilada 5 min.

4- Solucin de cido crmico al 4% - 1

13- Tiosulfato sdico al 2% - 2-5 min.
hora

5- Lavar en agua corriente 5 min.

14- Lavar con agua corriente

6 Bisulfito sdico al 1% - 1 min.

15- Solucin verde luz al 1% - 30-40 seg.

7- Lavar agua corriente 5 min.

16-Deshidratar.
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

8- Lavar con agua destilada 3-4 pases

17- Montaje.

9- Solucin argntica de trabajo:

En estufa 60--------------------------------- 1
hora
En microondas (descongelacin) -------- 1-2
min.

Hierro coloidal
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

7- Mezcla ferrocianuro-clorhdrico 20
min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

8- Lavar con agua corriente -5 min.

3- Lavar en H2O destilada.

9- Lavar en agua destilada 3-4 pases.

4- Solucin actica 3 min.

10- Si se desea se puede contrastar

con:
Van Gieson 10 min.
Rojo neutro 10 min.

5 - Solucin de trabajo de Hierro

coloidal 1 hora.

11-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

6- Solucin actica 4 lavados ( 3

min./lavado )

12- Montaje.

Mucicarmin de Mayer
Las mucinas o mucoprotenas son protenas con H.C. en una proporcin superior al 4
%. La tcnica del mucicarmn de Mayer sirve para identificar globalmente las mucinas,
pero no reconoce su naturaleza bioqumica.
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

6 - Solucin diluida de mucicarmn ( 1:4

) 30 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

7 - Lavar con agua corriente 10 min.

3- Lavar en H2O destilada.

8-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

4- Teir con Hematoxilina de Weigert 10

9- Montaje.
min.

5 - Lavar con agua corriente 3 min.

Hemalumbre de Mayer

1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

5-Lavar con agua corriente 5 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

6 Contracolorear ( si se quiere ) con

hematoxilina-eosina u otro colorante.

3- Lavar en H2O destilada.

7-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

4- Colorear con hemalumbre de Mayer

8- Montaje.
de 5 -10 min.

Orceina
ORCEINA (fibras elsticas, virus, hepatitis, cobre)
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

7- Solucin de Orcena --1:30 h. en

estufa.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

8 - Lavar en agua corriente y dejar

secar.

3- Lavar en H2O destilada

9 - Alcohol clorhdrico al 1% ---- 1 pase

4- Permanganato potsico ----10 min.

10- Deshidratar a partir de alcohol

absoluto.

5 - cido oxlico al 2 % - 1 pase

11- Xilol

6- Lavar en agua corriente

12- Montar

Perls
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

6 - Hematoxilina de Mayer -10 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

7- Lavar en agua corriente hasta que

vire.

3- Lavar en H2O destilada.

8- Eosina 1 pase.

4 - Reactivo de perls 30 min.

9-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

5 - Lavar con agua corriente 5 min.

10- Montaje.

RESULTADOS:

Hierro: azul.

Rojo congo
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

7- Lavar en agua corriente - 5 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

8- Yoduro potsico --3-4 min.

3- Lavar en H2O destilada.

9- Lavar con agua corriente.

10-Deshidratar.
Alcohol de 70
4- Hematoxilina de Carazzi o de Weigert
Alcohol de 96.
10 min.
Alcohol absoluto.
Xilol.
5- Lavar en agua corriente - 10 min.

11- Montaje.

6- Solucin Rojo Congo - 10 min.

(en el momento del uso se cogen 8 ml de
rojo congo y se mezclan con 2 ml de
glicerina. Filtrar)

Plata metenamina o Hexamina

1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

9- Tiosulfato sdico o hiposulfito

sdico 5 min.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

10- Lavar en agua destilada.

3- Lavar en H2O destilada.

11- Hematoxilina de Mayer 10 min.

4- cido per ydico al 0.5 % - 15 min.

12- Lavar en agua corriente

5- Solucin de Ag-Metenamina:
. En estufa - 60 min.
(controlar la tincin hasta que alcance un
color tabaco y comprobar al microscopio
que se han teido los glomrulos)

13- Eosina - 3 min.

.En microondas - 1-2 min.

(descongelacin)

6-Lavar en agua corriente

14-Deshidratar.
Alcohol de 70
Alcohol de 96.
Alcohol absoluto.
Xilol.

7- Cloruro de oro al 0.2 % -- 2 min.

15- Montaje.

8- Lavar en agua destilada.

Sudan III
1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60.
Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

5- Lavar con agua corriente.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min.
Alcohol 96-5min.
Alcohol 70-5min.

6- Hematoxilina o carmn (para el

contraste)--5-10 min.

3- Lavar en H2O destilada.

7- Lavar en agua corriente 5 min.

4 Sudan III + 40 gotas de rojo escarlata 8- Montaje en glicerina levulosa,

- 24 horas.
gelatina, etc.

RESULTADO:
Las grasas neutras se tien.

Violeta de Cresilo
1- Desparafinado.
Estufa durante 30 min.a 60.
Sumergimos en xilol durante 10-15 min.

4- Violeta de cresilo 0.1% entre 20-30

min.

2-Deshidratacin.
Alcohol absoluto durante 5 min.
Alcohol 96 5 min.
Alcohol 70 5 min.

5- Lavar en agua corriente.

3- Lavar en H2O destilada.

6- Montar en medio acuoso.

Tincin de Semifinos

Contraste de Ultrafinos

Verde de Metilo - Pironina

Se trata de una solucin de Verde de Metilo asociada con Pironina G segn

TarfKurnick.
Colorante Histolgico.
Empleado para la investigacin histolgica del cido nucleico contenido en los
tejidos, as como para demostrar la presencia de clulas de la serie linftica y
clulas plasmticas.
Tambin es til en la identificacin de clulas plasmticas y RNA en secciones
de tejidos y preparaciones citolgicas.

Mucicarmin

Mucicarmn Concentrada Biopur

Actica de Tartrazina Biopur
Colorante Histolgico.
Usado en la identificacin de sitios de tumores primarios, ayudando a la
distincin de clulas escamosas indiferenciadas mucina-negativas de los
adenocarcinomas mucina-positivos.
RESULTADOS
La cpsula de los criptococos (hongos) se tie de rosa oscuro.
La tartrazina tie el citoplasma de amarillo.

Ziehl

Fucsina Bsica

Decolorante
Azul de Metileno
Mtodo tradicional para la deteccin del bacilo tuberculoso. Para empleo con
esputo, concentrado o por extensin directa, lquido cefalorraqudeo u otros
fluidos corporales, incluyendo orina cateterizada y material homogeneizado de
tejidos.

Shorr Coloracion del Papanicolaou

Coloracin de Papanicolaou
Se trata de una tcnica citolgica compuesta por 3 soluciones:
Hematoxilina Biopur
Colorante nuclear. Las caractersticas y recomendaciones para el uso de
Hematoxilina Biopur fueron expuestas en la seccin anterior. Rogamos referirse
a la misma para informacin adicional.
OG Biopur
Se trata de una solucin alcohlica de cido fosfotngstico y Orange G. El cido
fosfotngstico acidifica la solucin y aumenta la unin del Orange G a zonas
citoplasmticas densas.
EA Biopur
Se trata de una solucin alcohlica, fotoestable que elimina los problemas
causados por las tradicionales e inestables frmulas numeradas EA-36/50/65/etc.
No requiere filtracin. Listo para usar.
Tie selectivamente el citoplasma de clulas que tuvieron actividad metablica
poco antes de la recoleccin de la muestra. Tie de rosa a rojo las clulas
escamosas superficiales, cilios, nucleolo y eritrocitos.

Feulgen

Tcnica utilizada en histologa para teir selectivamente el DNA de las clulas.

Esta tcnica consiste en la hidrolizacin del DNA mediante una dilucin dbil de
cido clorhdrico que libera las bases pricas, quedando libres los radicales
aldehdos de las pentosas, y en la coloracin con leucofuscina, que pone de
manifiesto los grupos aldehdo.

Tincion Fluorescente

PARA LA TINCIN FLUORESCENTE

Solucin de Auramina
Solucin 1
Manipular la auramina con guantes, debe evitarse todo contacto porque es cancergena
- Auramina 0,1 g
- Etanol 95% 10 ml
Disolver la auramina en el etanol
Solucin 2
- Cristales de fenol 3 g
- Agua destilada 87 ml
Disolver los cristales de fenol en el agua.
Mezclar las soluciones 1 y 2. Guardar el colorante as preparado en una botella color
mbar bien tapada, alejada del calor y de la luz. Rotular con el nombre Solucin de
Auramina-O y las fechas de preparacin y vencimiento. Almacenar a temperatura
ambiente no ms de 3 meses. No filtrar con papel. Puede detectarser alguna turbidez
que no afecta la coloracin.
Solucin decolorante
- cido clorhdrico 0,5 ml
- Etanol 70% c.s.p. 100 ml
Agregar siempre el cido al alcohol, suavemente, y no al revs porque la temperatura
de la solucin aumenta explosivamente. Rotular la botella con el nombre del reactivo y
con las fechas de preparacin y vencimiento. Almacenar a temperatura ambiente.
Colorantes de contraste
Pueden usarse solucin de permanganato de potasio o solucin de naranja de acridina.
Solucin de Permanganato de potasio
Permanganato de potasio 0,5 g
Agua destilada
100 ml
Disolver y guardar en una botella color mbar bien tapada. Rotular con el nombre y las
fechas de preparacin y vencimiento. Almacenar a temperatura ambiente no ms de 3
meses.

Solucin de naranja de acridina

Fosfato dibsico de sodio anhidro 0,01 g
Agua destilada
100 ml
Naranja de acridina
0,01 g
Disolver el fosfato de sodio en agua destilada. Agregar el naranja de acridina y disolver.
Guardar el colorante as preparado en una botella color mbar bien tapada alejada del
calor y de la luz. Rotular con el nombre y las fechas de preparacin y vencimiento.
Almacenar a temperatura ambiente no ms de 3 meses.

REFERENCIAS

Horobin RW, Kiernan JA (2002) Conn's Biological Stains. A Handbook of Dyes Stains
and Fluorochromes for Use in Biology and Medicine. 10th ed. Oxford: BIOS. ISBN 185996-099-5
http://elprofedebiolo.blogspot.mx/2010/01/tecnicas-de-tincion.html
http://es.scribd.com/doc/15606061/Tarea-4-tincion
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n
http://html.rincondelvago.com/histoquimica.html
http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/5-histoquimica.php
http://www.bu.edu/histology/m/append02.htm
http://www.uam.es/departamentos/medicina/patologia/Tecnicas.htm
http://www.uv.es/histomed/practicas/04-adip/04-adip.htm
Penney DP, Powers JM, Frank M, Churukian C (2002) analysis and testing of Biological
Stains - the Biological Stain Commission Procedures. Biotechnic & Histochemistry 77:
237-275.