Gripe OT-4

Orientaes Tcnicas
Profissionais de sade

Etapa de Mitigao
Diagnstico, vigilncia e tratamento

Actualizado em 21-09-2009*
Colheita de produtos biolgicos destinados
investigao laboratorial virolgica*

1. Condies de segurana
Os produtos biolgicos colhidos a doentes com sndroma gripal devem cumprir as
condies de segurana, segundo as recomendaes gerais descritas nos
documentos actualizados da Organizao Mundial da Sade (OMS), Guidance on
Regulation for Transport of Infectious Substances (WHO/HSE/EPR/2008.10).
Refora-se a necessidade do cumprimento das medidas de proteco individual
(documento Gripe OT-11), com o objectivo de reduzir o risco de transmisso
nosocomial.

2. Informaes gerais
O diagnstico laboratorial virolgico das infeces respiratrias depende da qualidade
dos produtos biolgicos colhidos, do seu transporte em tempo adequado ao laboratrio
e acondicionamento apropriado.
A excreo de vrus da gripe pandmica (H1N1) 2009 faz-se essencialmente pelo
tracto respiratrio, pelo que o diagnstico virolgico deste agente realizado,
preferencialmente, em amostras que contenham clulas epiteliais infectadas do tracto
respiratrio e em secrees.
Recomenda-se que as primeiras colheitas sejam efectuadas preferencialmente nos 3
primeiros dias aps o incio dos sintomas clnicos.
As investigaes laboratoriais relativas ao vrus da gripe pandmica (H1N1) 2009 so
coordenadas pelo Laboratrio Nacional de Referncia para o Vrus da Gripe, no
Instituto Nacional de Sade Dr. Ricardo Jorge, no mbito da Rede Nacional de
Laboratrios para o diagnstico da infeco pelo vrus da gripe pandmica (H1N1)
2009 1 .
Os resultados laboratoriais confirmados so comunicados de imediato, pelo
laboratrio, por e-mail, para o servio requisitante, excepto os que tiverem sido
efectuados por amostragem que sero posteriormente analisados para fins
epidemiolgicos.

1 Despacho n 16.548/2009, publicado no Dirio da Repblica, 2 srie N 139, de 21 de Julho.

1
*Documento sujeito a actualizao, apresentando-se as ltimas alteraes do texto a letra azul.

Gripe OT-4
Orientaes Tcnicas
Profissionais de sade

Etapa de Mitigao
Diagnstico, vigilncia e tratamento

Actualizado em 21-09-2009*
3. Produtos biolgicos
Os produtos biolgicos devem, preferencialmente, ser refrigerados a 4C.
Todas as amostras devem ser acompanhadas do formulrio Gripe OT- 4.1, bem como
da requisio de exames laboratoriais.
Os produtos biolgicos para o diagnstico laboratorial devem ser colhidos de acordo
com a seguinte ordem de prioridade:
1) Tracto respiratrio superior
aconselhvel o envio de duas amostras: exsudado (ou aspirado) nasofarngeo
e exsudado da orofarnge. Caso no seja possvel deve ser colhido exsudado
nasal.
2) Tracto respiratrio inferior
No caso de doentes entubados ou submetidos a broncoscopia - aspirado
endotraqueal e/ou lavado brnquico e/ou lavado bronco-alveolar.
Em situao de post-mortem pode ser colhido tecido da traqueia ou do pulmo
(por inciso ou agulha) e, quando possvel, das margens dos infiltrados intersticiais.
Se o tubo endotraqueal estiver colocado pode tambm ser colhido um aspirado
endotraqueal.
3) Sangue
A colher na fase aguda e convalescente da doena (pelo menos 10 a 14 dias aps
a primeira colheita).

4. Material de colheita e transporte

4.1. Material para os diferentes tipos de colheita

Recipiente colector de muco em plstico, esterilizado;

Zaragatoas (meio de transporte adequado preservao de vrus). No
devem ser utilizadas zaragatoas com haste de madeira (podem conter
inibidores ou substncias que destroem as partculas virais).
Tubos plsticos e cateteres;
Esptula para compresso da lngua;
Tubos secos;
Sistema de colheita de sangue.

Deve identificar-se cada um dos tubos com as iniciais do nome do doente (ou primeiro
e ltimo nome) e com a data da colheita.

2
*Documento sujeito a actualizao, apresentando-se as ltimas alteraes do texto a letra azul.

Gripe OT-4
Orientaes Tcnicas
Profissionais de sade

Etapa de Mitigao
Diagnstico, vigilncia e tratamento

Actualizado em 21-09-2009*
4.2. Meio de transporte para exsudados colhidos com zaragatoa
As zaragatoas devem ser enviadas em meio de transporte adequado preservao
de vrus, respeitando as indicaes do fabricante. Para esclarecimentos adicionais
dever contactar o Laboratrio Nacional de Referncia da Gripe do Instituto Nacional
de Sade Dr. Ricardo Jorge (INSA).

5. Procedimentos de colheita
5.1. Exsudado da nasofaringe / exsudado nasal colhidos em zaragatoa
Exsudado da nasofaringe - utilizar uma zaragatoa com uma haste fina e
flexvel que se introduz 5 a 6 cm, seguindo a base interior da narina na
direco da regio posterior da nasofaringe.
Exsudado nasal - introduzir a zaragatoa na narina paralelamente ao palato e
deixar nessa posio alguns segundos de forma a absorver as secrees. Em
seguida, introduzir um pouco mais fundo na mucosa nasal (2 a 3 cm no adulto
e at o doente lacrimejar) e rodar ligeiramente a zaragatoa.

5.2. Exsudado da regio posterior da orofaringe colhido em zaragatoa

Desviar e comprimir a lngua com uma esptula e solicitar que o doente verbalize
aaa de forma a elevar a vula. Com o algodo da extremidade da zaragatoa esfregar
extensamente a parede farngea e os pilares da orofarnge (Figura 1). Evitar esfregar o
palato mole ou tocar com a zaragatoa na lngua para no provocar o vmito.

vula
Pilares Farngeos
Faringe posterior

Figura 1 - Esquema da colheita de exsudado da regio

posterior da orofaringe, com zaragatoa

3
*Documento sujeito a actualizao, apresentando-se as ltimas alteraes do texto a letra azul.

Gripe OT-4
Orientaes Tcnicas
Profissionais de sade

Etapa de Mitigao
Diagnstico, vigilncia e tratamento

Actualizado em 21-09-2009*
5.3. Aspirado da nasofaringe
As secrees da nasofaringe so aspiradas atravs de um cateter ligado a um
recipiente plstico, colector de muco, ajustado a uma fonte de vcuo. O cateter
inserido numa das narinas paralelamente ao palato (Figura 2). A fonte de vcuo
ligada e o cateter retirado lentamente, induzindo um movimento de rotao. O muco
da outra narina colhido com o mesmo cateter utilizando um procedimento idntico.
Nas crianas, este tipo de colheita mais fcil e seguro do que a colheita de
exsudados em zaragatoa.

Figura 2 - Esquema da colheita de

aspirado da nasofaringe

5.4. Sangue / Soro

Para estudo serolgico, na fase aguda da doena, devem ser colhidos, no adulto e
adolescente 3 a 5 ml de sangue em tubo seco, e nas crianas 2 ml, o mais
precocemente possvel, aps o incio dos sintomas.
Na fase de convalescena, deve ser programada e realizada uma segunda colheita,
entre o 10 e o 14 dia aps o incio dos sintomas.
A colheita de sangue deve ser efectuada, preferencialmente, utilizando um sistema de
vcuo e para tubos com tampa de rosca cujo nmero e tipo depende dos parmetros
analticos a estudar.

5.4.1. Separao do soro

Para a separao do soro a centrifugao deve ser realizada a 3.000 rpm, durante,
pelo menos, 5 minutos. No entanto, as amostras de sangue podem ser enviadas sem
centrifugao prvia.

5.4.1.1. Utilizao de tubos especficos para a separao do soro

Estes tubos contm um gel (com uma densidade intermdia entre as clulas
vermelhas e o plasma) e usualmente tambm um activador da coagulao.

4
*Documento sujeito a actualizao, apresentando-se as ltimas alteraes do texto a letra azul.

Gripe OT-4
Orientaes Tcnicas
Profissionais de sade

Etapa de Mitigao
Diagnstico, vigilncia e tratamento

Actualizado em 21-09-2009*
Aps a colheita do sangue deve agitar-se o contedo do tubo e, em seguida, permitir a
formao do cogulo. Procede-se depois a uma centrifugao que, semelhana dos
passos anteriores, deve seguir escrupulosamente as instrues do fabricante. Na
regio superior do tubo localiza-se o soro, separado do cogulo pela barreira de gel
(Figura 3).

Soro
Barreira de gel

Cogulo
Figura 3 - Resultados da separao do soro em tubos especficos, aps centrifugao.

5.4.1.2. Utilizao de outros tubos

Quando se utilizam tubos secos (sem qualquer aditivo) a separao do soro pode
processar-se depois de um perodo de repouso que no deve exceder as 12 horas e
que permitir a retraco do cogulo.
Aps a separao do sangue, o soro deve ser colocado num novo tubo, de preferncia
um criotubo, com tampa de rosca externa e com sistema de fecho em O-ring sobre a
qual se pode colocar parafilm.

6. Acondicionamento e envio
Aps as colheitas, os tubos devem ser bem vedados, as rolhas envolvidas em parafilm
e, seguidamente, desinfectados exteriormente com soluo de hipoclorito de sdio a
0,5%.
Os produtos biolgicos, devidamente identificados, devem ser acondicionados
seguindo as normas de embalagem de substncias infecciosas (Figura 4) e as
condies de transporte cujas instrues detalhadas podem ser consultadas no
documento actualizado da OMS, Guidance on Regulation for Transport of Infectious
Substances (WHO/HSE/EPR/2008.10).
Uma cpia do formulrio que consta do documento Gripe OT-4.1 (que ser
simplificado e permitir utilizao electrnica) e a respectiva requisio de exames,
devem ser colocadas entre o contentor externo e a cartonagem, preferencialmente
dentro de uma folha plstica.

5
*Documento sujeito a actualizao, apresentando-se as ltimas alteraes do texto a letra azul.

Gripe OT-4
Orientaes Tcnicas
Profissionais de sade

Etapa de Mitigao
Diagnstico, vigilncia e tratamento

Actualizado em 21-09-2009*

Figura 4 - Embalagem de substncias

infecciosas para transporte ao
laboratrio.

O transporte de amostras ao laboratrio deve ser feito, o mais rapidamente possvel,

atravs dos meios que a unidade de sade entender, desde que sejam cumpridos os
critrios de conservao e de segurana adequados para este tipo de amostras.
Na embalagem exterior deve ser assinalado de forma bem visvel a designao GSH
seguida do endereo do laboratrio, a que se destina.
Para esclarecimento de qualquer dvida resultante da leitura deste documento deve
ser contactada a Dra. Raquel Guiomar atravs do telefone n 21 752 6455 ou 21 751
9216.
Documento elaborado pelo Laboratrio Nacional de Referncia para o Vrus da Gripe,
INSA, em colaborao com o Grupo Operativo da Gripe da Direco Geral da Sade.

6
*Documento sujeito a actualizao, apresentando-se as ltimas alteraes do texto a letra azul.