Pruebas Bioqumicas

Prueba triple azcar hierro

Composicin

Extracto de carne
Extracto de levadura
Peptona
Proteasa
Lactosa
Dextrosa
Sulfato ferroso
Cloruro de sodio

Tiosulfato de sodio
Agar
Agua destilada
Indicador: Rojo de fenol
o cido: amarillo
o Alcalino: rojo
o Medio no inoculado:
naranja rojizo (pH =7.4)

Fundamento Bioqumico: Observar si una bacteria es capaz de producir

la enzima tiosulfato reductasa para reducir el tiosulfato de sodio a cido
sulfhdrico y desdoblar uno, dos o los tres carbohidratos.

El agar AHK es un medio diferencial, principalmente para Enterobacterias,

que determina la fermentacin de hidratos de carbono y la produccin de
cido sulfhdrico.

Resultados:

1. Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo

solamente fermenta la glucosa.
2. Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, y lactosa.
3. Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4. La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5. El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.

Pico Alcalino
Fondo
Alcalino

Pico alcalino
Fondo cido
Produccin
de H2S

Pico alcalino
fondo cido
No H2S

Pico cido
Fondo cido
Produccin
H2S

Pico acido
fondo cido
No H2S

Alcaligenes
Psudomonas
Acinetobact
er

La mayoria
de
Salmonella
Arizona
Citrobacter

Shigella
Algunas
Proteus

Citrobacter
Arizona
algunos
Proteus

Escherichia
Klebsiella
Enterbacter

Prueba Lisina Hierro

Peptona
Extracto de levadura
Dextrosa
L-lisina
Purpura de bromocresol

Fundamento Bioquimico: Observar si una bacteria es capaz de

descarboxilar la lisina por medio de la Lisina Descarboxilasa y producir
cido sulfhdrico por la enzima Tiosulfato Reductasa.

Resultados:

1. Descarboxilacin de la lisina:
Prueba positiva: pico violeta/fondo violeta
Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo
2. Desaminacion de la lisina:
Pico rojizo/fondo violeta
3. Produccin de cido sulfrico:
Positivo: ennegrecimiento del medio

Tiosulfato de sodio
Sales de amonio citrato hierro
o Acido: color amarillo
o Alcalino: color violeta
o No inoculado: color
violeta (pH =6.0)

Ejemplos:

Tubo 1: Citrobacter

Tubo 2: Proteus, Providencia,

Morganella

Tubo 3: Escherichia,
Enterobacter, Klebsiella

Tubo 4: Salmonella,
Edwarsiella

Prueba Simmons Citrato

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la

capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.

Composicin

Fosfato monoamnico
Fosfato dipotsio
Cloruro de sodio
Citrato de sodio
Sulfato de sodio/magnesio
Azul de bromotimol
o cido: amarillo
o Alcalino: azul
o Neutro: verde

En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de

nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono, su uso lleva a
aumentar la alcalinidad
Prueba
Negativa o
No

Prueba
Positiva

 Prueba SIM

Destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de

hidrogeno en un mismo tubo. Es til para diferencias miembros de la familia
Enterobacteriaceae.

Composicin:

Triptena
Peptona
Sulfato de hierro y amonio
Tiosulfato de sodio

Fundamento bioqumico: El triptfano es un aminocido constituyente de

muchas peptonas, y particularmente de la Triptena, que puede ser oxidado
por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un
conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina
con el aldehdo del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un
compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este
medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra,
mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la
formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato
siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.

Resultados:

1. Movilidad:
Positivo: presenta turbidez o crecimiento ms all de la lnea de siembra.
Negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.
2. Produccin de H2S
Positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la lnea de
siembra o en todo el medio
Negativo: el medio permanece sin cambio de color.
3. Prueba del Indol: Agregar al medio 3 a 5 gotas de Indol Reactivo.
Positivo: Color rojo
Negativo: El color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.

Tubo A: Indol positivo y H2S positivo

Tubo B: Indol negativo y H2S positivo
Tubo C: Indol Positivo y movilidad positivo
Tubo D: Control negativo

Prueba de Nitratos

Determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos o

en nitrgeno libre.

La reduccin de nitrato en nitrito y en gas nitrgeno tiene lugar

generalmente en condiciones anaerobias, en las cuales un organismo

obtiene su oxigeno del nitrato. El oxgeno sirve como acepto final de

electrones. Las enzimas responsables de ambas reducciones se
denominan nitrato y nitrito reductasa

Composicin:

Peptona
Cloruro de sodio
Extracto de carne
Nitrato de potasio

Fundamento bioqumico: la reduccin de nitrato a nitrito est indicado por

la aparicin de color cuando el nitrito reacciona con los dos reactivos. La
reaccin de color resultante se debe a la formacin de un compuesto
diazoico. P-sulfobenceno-azo-alfa-naftilamina (color rojo).

Resultados:

1. Positivo: rosa a rojo intenso, el microorganismo reduce nitratos a nitritos

2. Negativo: ausencia de color rosa-rojo, se debe agregar unos granallas de
zinc y observar el color producido.
I.
Positivo: ausencia de color rosa-rojo luego del agregado de Zinc, el
microorganismo redujo los nitratos a gas nitrgeno.
II.
Negativo: desarrollo del color rosa-rojo luego del agregado de zinc, el
microorganismo no reduce los nitratos

Prueba de la Ureasa

Medio utilizado para la identificacin de microorganismos, en base a la

actividad uresica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea,
tales como Proteus, otras enterobacterias y estafilococos.

Composicin:

Peptona

Urea

Glucosa

Cloruro de sodio

Fosfato mono potsico

Rojo fenol

Fundamento bioqumico: Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de

la enzima ureasa liberando amonaco y dixido de carbono. Estos
productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de fenol del amarillo al
rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa,
acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que
hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.

Resultados:

1. Microorganismos que hidrolizan la urea: el medio de cultivo es de color

rosado-rojo
2. Microorganismos que no hidrolizan la urea: el medio de cultivo permanece
de color amarillo

Ejemplos:

Positivo: Proteus y Klebsiella(rosa dbil)

Negativo: Escherichia, Shigella, salmonella

Prueba Voges Proskauer

Determina la capacidad de algunos organismos para producir porductos

finales neutros como la acetona. Esta fermentacin de la glucosa es
caracterstica de E. aerogenes

Composicin:

Polipeptona
Dextrosa
Fosfato de potasio
Agua destiliada

Fundamento Bioqumico: La reaccin de VP se basa en la deteccin de

acetona como producto final neutro derivado del metabolismo de la
glucosa. sta es metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la
gluclisis. A partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas
vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3butanediol) que es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en
las bacterias. La formacin de acetona y butilenglicol es una va alternativa
del metabolismo del cido pirvico. Las bacterias que utilizan esta va
producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que son insuficientes
para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para
producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de
Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM
negativas y viceversa.

Resultados:

1. Positivo: rosa-rojo en la superficie del medio.

2. Negativo: Amarrillo, tambin puede formarse un color cobrizo

Prueba Rojo Metilo

Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos (actico, frmico,

etc.), relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio
de pH se detecta aadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo.

Composicin:

Polipeptona
Glucosa
Fosfato dipotsico
Agua destilada
Rojo de metilo(indicador)

Resultados

1. Positivo: rojo en la superficie del medio, algunas bacterias pueden producir

menores cantidades de cido a partir del sustrato por ello es posible que
aparezca un color naranja, esto indica una prueba positiva (pH=4.4)
2. Negativo: amarillo o naranja (pH=6.0)

Ejemplos:

Positivo: Escherichia Coli, algunas especies de Yersinia

Negativo: Enterobacter Aerogenes, Enterobacter Cloacae, Klebsiella

Resultados: INVIMiC