UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA

CARRERA DE BIOLOGA
Mdulo: Metodologa Cientfica IV
Diversidad de lquenes y tardgrados en Bosque de pino-encino en La Joya,
Acajete, Ver.
Profesores
M. en C. Felipe de Jess Cruz Lpez
M. en C. Teresa Martnez Prez.
Grupo 2402

Equipo La Joya

Introduccin.

Mxico se ubica entre los cinco primeros de los 17 pases llamados

megadiversos, que albergan alrededor del 70 % de la diversidad biolgica
conocida del planeta (Mittermeier y Mittermeier, 1992). Pese a tener una superficie
que representa nicamente 1.5 % de la superficie del planeta, en Mxico se
encuentran 12 de cada 100 especies conocidas en el mundo, es decir, el pas
contiene entre 10 y 12 % de las especies (Conabio, 2006). Adems, una alta
proporcin de estas especies slo existen en nuestro pas (especies endmicas),
lo que da una mayor vala a su diversidad biolgica (Sarukhn et al., 2009).
Veracruz es considerado como uno de los estados megadiversos de Mxico,
ocupando el tercer lugar en este rubro, slo por debajo de Oaxaca y Chiapas.
Tiene alrededor de 8,000 especies de plantas y cerca de 1,500 especies de
vertebrados (peces, anfibios, reptiles, aves y mamferos) (Vazquez- Torrez, 2010)
La riqueza biolgica que distingue a Veracruz es el resultado de la complejidad
orogrfica, geolgica, de suelos y climas presente en la entidad que aunado a su
localizacin en la zona de transicin entre dos grandes regiones la nertica y la
neotropical, cada una con su flora y fauna especficas y su posicin geogrfica
frente al Golfo de Mxico, han producido un complejo mosaico de ecosistemas
naturales (Mrquez, 2009).
Entre los municipios ms diversos de Veracruz, que conservan el mayor nmero
de hectreas con vegetacin primaria, se encuentra Acajete con 5249.18 ha, que
se localiza en la franja de transicin de las zonas templado-hmeda y templadofra
Su riqueza est representada por minerales como los bancos de grava; entre su
vegetacin sobresalen el pino, oyamel, encino, liquidmbar y otras por lo
apreciado de su madera; adems de varios nacimientos de agua.
Dentro de este municipio se encuentra la localidad de La Joya, la cual cuenta con
un clima templado hmedo y bosques de pino-encino. Estos bosques se
encuentran amenazados constantemente por el desarrollo y contaminacin de las
actividades humanas, afectndolo en su extensin y funcionamiento bitico, de ah
que sea de importancia un conocimiento amplio de los organismos que habitan en
ellos y poder monitorear una baja en su diversidad biolgica, producto de la mano
del hombre (Smith, 2016).
Veracruz es el segundo estado de la repblica en cuanto a abundancia de
lquenes con 700 especies registradas (Herrera-Campos y col., 2014), siendo la
mayora de hbito folicolas. Los macro lquenes cortcolas son un componente
importante de la diversidad biolgica de los ecosistemas forestales llevan a cabo
funciones vitales en el ciclo de nutrientes al absorber cantidades significativas de
nutrientes de la atmsfera y contribuyen a la fijacin de nitrgeno, proveen hbitat,
alimento y material de anidacin para algunos animales (Prez-Prez y col, 2008).
Los lquenes son organismos simbiticos compuestos de una parte fngica, el
micobionte (Ascomycota o Basidiomycota) y una o ms partes fotosintticas que
pueden ser algas verdes, marrones y/o cianobacterias. Esta asociacin es

bastante particular; en la generalidad de los casos, los hongos que constituyen o

dan origen a los lquenes no pueden vivir aislados en la naturaleza; adems, una
especie determinada de hongos se asocia casi siempre a una especie tambin
determinada de alga. Parece ser que el hongo parasita a las clulas algales y
puede vivir tambin, en forma saproftica a expensas de las clulas algales que
mueren a consecuencia del parasitismo o de otras causas (Barcenas, 2007).
En los lquenes, se pueden distinguir tres partes: a) un talo, es decir la porcin
asimilativa de los lquenes; b) apotecios o fruto; c) espermogonios, o sea el
aparato reproductor macho. El talo de un liquen est formado en su mayor parte
por hifas fngicas entrecruzadas mientras que las algas se encuentran a menudo
limitadas a una capa sub-superficial y representan aproximadamente slo un 7%
del peso seco del liquen, por lo que el hongo es llamado macrobionte por constituir
la mayor parte del talo y el alga se le llama microbionte debido a que su presencia
es escasa, pero importante para la fotosntesis. Existen dos tipos generales de
talos liqunicos, de acuerdo con la distribucin de las clulas algales en el tejido
fngico: talo hommero en el cual las algas estn ms o menos uniformemente
distribuidas por todo el talo y talo hetermero en el cual las clulas algales forman
una capa diferenciada dentro del talo. La inmensa mayora de los lquenes
conocidos son del segundo tipo, y presentan un talo estratificado (Cruz, 2000).
En la naturaleza, los lquenes participan en los procesos de sucesin, fijacin de
nitrgeno atmosfrico y absorcin de fsforo y azufre; son utilizados por
mamferos, aves e insectos como alimento, en la construccin de sus nidos y
camuflaje. El hombre los usa como alimento, para la tincin de telas y fabricacin
de antibiticos, entre otros usos (Barcenas, 2007). Adems, son una fuente muy
rica de alimento para gran cantidad de invertebrados entre ellos los tardgrados o
tambin llamados osos de agua esto debido a su parecido con un pequeo oso
de patas con garras y su paso patoso y lento; son cosmopolitas, sus hbitats son
principalmente semiacuticos, a pesar de que todos los tardgrados necesitan
agua para su actividad vital, numerosas especies pueden sobrevivir incluso en
caso de ausencia temporal de agua. Por consiguiente, el mayor nmero de
tardgrados se descubri en la tierra, donde viven en musgos, lquenes, hojas y
suelos hmedos. Otros viven en el mar profundo o en las orillas, sobre algas, as
como en agua dulce. Poseen dos formas de reproduccin: sexual y por
partenognesis. Son ovparos y generalmente se alimentan de fluidos dentro de
clulas animales o vegetales, perforando las paredes celulares con los estiletes
orales que poseen.
Se encuentran divididos en cinco segmentos con cuatro pares de patas, cada una
de las cuales termina usualmente en garras, discos de succin o ambas. Su
cuerpo tiene simetra bilateral. Tienen un sistema digestivo completo y la cavidad
corporal est llena de un fluido tipo homocele que cumple de circulacin y
respiracin. (Bernal, 2009).

Antecedentes
En 1996, Rzedowski en su anlisis preliminar de la flora vascular para el bosque
mesfilo de montaa en Mxico, reporta 800 especies epfitas, de las cuales 200
son helechos y Lquenes.
En 2013, Herrera-Campos en su estudio Biodiversidad de lquenes Mexicanos en
el estado de Veracruz se han identificado 700 especies de lquenes, donde el
sustrato ms comn en el que se desarrollan son las cortezas de rboles
En 2011, Kaczmarek y colaboradores en su investigacin Nuevos registros
de tardigrada mexicanos solo se encontraron 37 especies reportados en 7
estudios entre los que se encuentran los estados de Campeche, Mxico, Chiapas
y Oaxaca
En 2008 Medel y colaboradores realizan un estudio en Veracruz en el que
estudian 34 taxones del gnero Xylaria, entre ellos 17 registros nuevos para
Mxico, algunos de ellos en Acajete.
En 2013 Garduo y colaboradores estudiaron la diversidad de lquenes en La
Joya, Veracruz encontrando de la familia mejor representada la Parmeliaceae, con
3 gneros, donde el ms abundante fue Parmelia del talo folioso, Evernia, para el
talo Fruticuloso y Leproloma del talo costroso, con respecto al talo squamuloso
solo se encontraron dos especies.
Justificacin
La diversidad en el Estado de Veracruz se debe a que tiene un posicionamiento
geogrfico que le permite tener una gran variedad de ecosistemas por lo que
presenta una gran diversidad de organismos, muchos de ellos probablemente
nunca antes catalogados en el pas o incluso en el resto del mundo, las cuales
pudiesen encontrarse amenazadas.
En localidades como La Joya, la agricultura afecta la estructura del suelo y la
biota, fundamentalmente, a travs de la reduccin de material orgnico que se
incorpora por encima de la tierra y de las races, por la roturacin del suelo debido
a las labores de cultivo y por la compactacin por el ganado. La simplificacin de
los sistemas agrarios mediante la eliminacin de vegetacin, particularmente
rboles y la cubierta del suelo, provoca la exposicin del suelo a las fuerzas
erosivas del sol, la lluvia y el viento, con la consecuente prdida del mismo.
La destruccin y la fragmentacin del bosque son las principales amenazas;
donde los potreros y los cultivos forman parte del paisaje actual (Williams et
al.,2002).

Se ha reportado que en el estado de Veracruz se la segunda tasa ms alta de

deforestacin del pas, ya que se tiene una prdida, durante el periodo de 1984 a
2000, del 35 % de los bosques, equivalente a 47 000 ha al ao; probablemente
Veracruz es el estado con mayor nmero de especies amenazadas. Esta
deforestacin ha provocado, a su vez, ciclos de inundacin y sequa que cada vez
son ms fuertes. Tambin ha causado que ms del 40 % del estado tenga
problemas graves de erosin, cuya tasa supera una prdida de suelo
correspondiente a 10 t ha al ao. Lo anterior, sin lugar a duda, ha resultado en una
prdida importante de la biodiversidad, (Landeros-Snchez, C., 2011).
Conocer la diversidad biolgica de nuestro entorno es fundamental para entender
la evolucin del mismo, a la vez que para conocer sus relaciones ecolgicas y as
poder disear estrategias y soluciones para la conservacin de estos recursos.

Por cierto
Objetivos
General:
Analizar la diversidad de lquenes y tardgrados presentes en la localidad de La
Joya, Municipio de Acajete, Veracruz.
Particulares:
Determinacin de riqueza de lquenes y tardgrados en el Bosque de pino-encino
de La Joya, Acajete, Ver.
Determinacin de abundancia de lquenes y tardgrados en el Bosque de pinoencino de La Joya, Acajete, Ver.
Determinacin de distribucin de lquenes y tardgrados en el Bosque de pinoencino de La Joya, Acajete, Ver.
Caracterizacin con base en los parmetros fsicos y qumicos, el suelo de del
Bosque de pino-encino de La Joya, Acajete, Ver.
rea de Estudio.
La comunidad de La Joya se encuentra ubicada dentro del municipio de Acajete,
dentro de la Regin Terrestre Prioritaria Pico de Orizaba-Cofre de Perote (RTP122). Sus coordenadas geogrficas son 19 36 60 N y 97 2 41W, y una altitud
de 2233 msnm (Figura 1). Presenta un clima templado hmedo con lluvias todo el
ao C(f), temperatura anual de 16 C con una mxima promedio de 22 C,
precipitacin media anual mayor a los 500 mm, suelos del tipo Andosol mbrico
(ANu) y Cambrisol crmico (CMx). El tipo de vegetacin dominante es el bosque
mesfilo de montaa, siendo los gneros predominantes: Liquidamar, Quercus,
Fagus y Pinus. Es el ecosistema tropical con menor superficie a nivel mundial,
pero es el ecosistema que alberga la mayor diversidad de especies de flora y
fauna en relacin a su rea (CONABIO, 2008; CONABIO, 2010).

Materiales
y
Mtodo.
Para lquenes
1. Recolecta de especmenes sobre una amplia variedad de sustratos (rboles,
troncos cados, rocas, musgo, suelo, hojas, etc.); sta actividad se lleva a cabo
con una cuchilla o pual, los cuales ayudan a retirar un fragmento del sustrato
junto con el espcimen, especialmente los que viven sobre corteza o suelo
(crustceos).
2. Para recolectar los que viven sobre rocas se necesita un cincel y un mazo,
mientras que una podadora es til para cortar ramas pequeas. Una lupa 10x es
esencial para observar algunas de las caractersticas morfolgicas ms
importantes.
3. Cuando se trata de lquenes folcolas (sobre hojas), se deben tomar las hojas
enteras y someterlas al procesamiento habitual que se sigue para estos rganos
vegetales
4. Se registran los datos ecolgicos bsicos para cada espcimen, tal como tipo
del sustrato, especie del hospedero (si sabemos el nombre cientfico o vulgar de la
planta donde recolectamos el liquen), y exposicin o ndice de luz (en cinco
categoras: si el espcimen es recolectado en un lugar totalmente sombreado le
asignamos 1; si est semi-expuesto le asignamos 3 y si lo encontramos en un sitio
completamente expuesto a la luz le asignamos 5).
5. Tomar fotografas de los especmenes.

6. Las muestras recolectadas se almacenan en bolsas de papel (nunca de

plstico)
7. Durante la recolecta se deben tomar adems los siguientes datos:

Localidad: pas, rea de conservacin, rea protegida, coordenadas

geogrficas.

Hbitat: Descripcin breve del tipo de bosque, orillas de camino,

reas de pastoreo, iluminacin.

Sustrato: suelo, roca, corteza (en lo posible el nombre cientfico y/o

vulgar del rbol), hojas (en lo posible el nombre cientfico y/o vulgar del
rbol, arbusto, hierba, liana, etc.).

Altitud: Sobre el nivel del mar. Fecha: Cuando se realiz la coleccin;

especificar da, mes y ao. Recolector y nmero de coleccin: Nombre y
apellido del recolector o recolectores, y el nmero de coleccin.

Preservacin: Los especmenes recolectados se deben secar al aire

libre o con un deshidratador de alimentos a temperaturas no mayores de
40 grados centgrados. Los lquenes crustceos deben ser prensados
en una prensa de las mismas que se utilizan para plantas vasculares .

A cada espcimen es recomendable hacerle una descripcin breve

(color, tamao, presencia de estructuras morfolgicas, forma, etc.) junto
con los datos de campo.

Se guarda cada espcimen en un sobre de peridico y se marca con

el nmero de coleccin correspondiente al recolector revisin. Los
especmenes trados del campo se revisan para ver si estn bien secos
y si no tienen ningn nivel de contaminacin. Cada espcimen es
guardado en un sobre de papel bond de aproximadamente 16 cm de
largo x 11 cm de ancho y estos sobres llevan dentro una cartulina
barnizable nmero 16 de 14.3 cm de largo x 9.5 cm de ancho. Los
lquenes crustceos son pegados con cola blanca sobre esta cartulina y
se mantienen fuera hasta que el espcimen pegue bien y luego son
guardados nuevamente dentro del sobre.
Identificacin
-Para la identificacin de las especies liqunicas se utilizaran claves taxonmicas
as como la observacin en microscopio ptico y estereoscpico de las estructuras
somticas y reproductoras:
A) Talo: Tipo, tamao, largo y ancho en cm, el color del talo.
B) Lbulos: presencia ausencia y el ancho en mm.
C) Aspecto de la corteza superior: lisa, rugosa con fisuras, manchas y pruina.
D) Cifelas pseudocifelas: presencia ausencia.
E) Tomentos: presencia o ausencia.
F) Rizinas: presencia o ausencia.
G) Rizinas: tipo simple, dicotmica o escuarrosa.
A) Estructuras de reproduccin vegetativa:
1. Soredio: posicin marginal o laminal

2. Isidio: posicin marginal laminal.

B) Estructuras de reproduccin sexual:
1. Apotecios: tamao (dimetro en mm) y color del himenio.
2. Apotecios: tipo: lecanorino, lecideno lireliforme.
2.-Peritecios.
3.-Podecios: tipo simple ramificado y altura (mm).
C) Esporas: tipo, color y tamao (largo y ancho en m).
-Pruebas qumicas
A) Coloracin: Se aplica en corteza superior y mdula. Indica el tipo de sustancias
liqunicas.
Soluciones:
Hidrxido de potasio al 5%, que se simboliza como K.
Hipoclorito de calcio en solucin saturada o en su defecto, hipoclorito de
sodio (blanqueador comercial con un 5% de cloro libre, se representa como
C.
Parafenil-n-diamina al 5% en alcohol absoluto, cuyo smbolo es la P.
Primero se agrega el hidrxido de potasio y despus se adiciona el
hipoclorito de calcio, representndose como KC. Se aplica una gota de
cada reactivo con ayuda de tubos capilares.
B) Micro cristalizacin a partir de fragmentos de talo:
Identificacin de los cidos liqunicos, a partir de la capacidad de las sustancias
para reaccionar a productos qumicos, formando cristales.
Se colocan fragmentos de talo sobre un portaobjeto
Se agregan gotas de acetona varias veces hasta evaporar.
Se debe de detectar un residuo amarillento o blanco, con aspecto de polvo
o de goma.
Se retira el talo y se adiciona una gota de un sistema de soluciones sobre
el residuo y se coloca un cubreobjetos.
Se coloca el portaobjetos sobre una flama hasta detectar burbujas, para
posteriormente enfriarlo.
Se observan las orillas y el centro del portaobjetos a aumento x100, siendo
los primeros cristales los primeros en aparecer y los segundos los ltimos.
Se deben comparar con fotografas o descripciones posteriores.
Esto se hace con cada sistema de soluciones.
Los sistemas de diluciones pueden ser los siguientes:
GE= Glicerina-cido actico (1:3 v/v)
GAW= Glicerina-etanol-agua (1:1:1 v/v)
GAoT= Glicerina-etanol-o-toluidina (2:2:1 v/v)
GWPy= Glicerina-agua-piridina (1:3:1 v/v)
GAQ= Glicerina-etanol-quinolina (2:2:1 v/v)

C) Anlisis de fluorescencia:
Algunos lquenes presentan fluorescencia en la corteza superior y con ayuda de
una lmpara de luz ultravioleta se puede observar el color de la fluorescencia
emitida. Por ejemplo, la liquexantona da una fluorescencia naranja brillante. Se
debe proteger la vista de la lmpara ultravioleta.
Tardgrados
Recolecta
Se deber mantener en agua la muestra del sustrato durante un perodo de tiempo
determinado, para activar a los tardgrados que puedan estar en criptobiosis.
Posteriormente hay que recogerlos con un tamiz de luz de malla conocida y
suficientemente pequea como para retener tanto a los tardgrados como a sus
huevos (la luz de malla debe estar entre 50 mm y 1,2 mm y finalmente se debe
estudiar el material recogido en el tamiz, utilizando una lupa para separar los
tardgrados y sus huevos (sin importar el medio del que proceden las muestras).
Tardgrados marinos
Los tardgrados marinos no son nadadores y necesitan algn tipo de sustrato
sobre el que mantenerse; por ello habitan el fondo, el litoral marino u otras
superficies sobre las que puedan engancharse (algas, otros invertebrados, etc). El
mtodo de recoleccin de este tipo de tardgrados es el mismo que el utilizado
para otros animales bentnicos (Ramazzotti, et al. 1983). Se arrastran por el fondo
dragas con mallas muy finas donde quedan atrapados los tardgrados de la
superficie del fondo y los macrfitos, algas, musgos sumergidos, etc. (Lincoln,
1979). Para recoger los tardgrados de las muestras marinas hay que someterlos a
un shock con agua dulce que permite separar fcilmente los animales de los
sustratos a los que se sujetan (Mobjerg, 1996) . Despus lavar y tamizar el
material, para separar los tardgrados mediante flotacin (op cit). Es aconsejable
estudiar el material fresco, pues esto facilita la identificacin de los animales (op
cit).
Tardgrados dulceacucolas-intersticiales
Se extraen del agua fretica, as que cualquier mtodo utilizado para estudiar la
meiofauna intersticial, sirve para los tardgrados: mtodo de Bou-Rouch, (Bou y
Rough, 1967), mtodo de Karaman-Chappuis (Karaman, 1935; Chappuis, 1942).
Estos mtodos consisten, a grandes rasgos, en excavar un agujero cerca de una
masa de agua (ro, lago, arroyo, etc.) y extraer una determinada cantidad de agua,
que despus hay que tamizar y estudiar. Esto tiene dos desventajas: (1) tiene un
efecto selectivo sobre los tardgrados recolectados, ya que es ms fcil arrastrar a
los individuos juveniles a travs de los granos de arena que a los de mayor
tamao, y (2) para asegurarse un muestreo representativo hay que tomar mucha
cantidad de agua, con el enorme esfuerzo que ello implica, tanto en la recoleccin
del material, como en su estudio. Al igual que en la observacin de los tardgrados
marinos es aconsejable identificar el material fresco porque es ms sencillo (op
cit).

Tardgrados musccolas
La recoleccin de musgos, lquenes, hepticas, herbceas, etc., donde pueden
encontrarse tardgrados, consiste en separarlos de su sustrato e introducirlos en
un sobre de papel o similar, para evitar la humedad, de forma que pueda quedar
almacenado el tiempo necesario. No es aconsejable el uso de bolsas de plstico,
ya que cualquier rastro de humedad favorecer la aparicin de hongos y/o la
putrefaccin de la muestra. Si el material recolectado est muy hmedo y no se va
a examinar en breve, hay que secarlo (mediante una estufa o con papel secante) y
una vez seco se almacena en sobres de papel hasta su estudio (op cit). Para la
obtencin de los tardgrados se pone la muestra, fresca del campo o previamente
secada, en un recipiente con agua durante varias horas para revertir la
anhidrobiosis. La muestra se lava con agua del grifo y se escurre para recoger los
animales, los huevos y los quistes en un tamiz de luz de malla conocida y
suficientemente pequea (Kinchin, 1987; Nelson, 1991).
Para el estudio de musgos, y otros medios, localizados en zonas con agua
constante (arroyos) se guarda el material en una botella o en un tubo, con agua
del lugar donde se ha recolectado. Este material se debe examinar lo antes
posible, ya que los tardgrados de estos medios estn desprovistos de la
capacidad de entrar en criptobiosis. En caso de que su estudio no pueda ser
inmediato, se lava y escurre el material al mximo (se debe vigilar, mediante la
observacin con lupa, que no queden tardgrados en el material) y se fija con
formalina neutralizada o con Bouin diluido (op cit).
Tardgrados edficos y de hojarasca
Las muestras de suelo se pueden recoger con un tubo metlico (u otra estructura)
de material resistente y de bordes afilados, para clavarlo en el suelo (op cit). El
cilindro de arena contenido en el tubo se saca con una varilla. Puesto que el tubo
metlico tiene dimensiones conocidas se pueden realizar estudios cuantitativos.
Como en los otros casos, es mejor estudiar el material lo antes posible, pero si no
va a hacerse de inmediato, se guarda en bolsas de papel. Hallas y Yeates (1972)
modificaron las tcnicas de extraccin de nematodos del suelo, mediante
centrifugacin en agua con sacarosa, para recolectar los tardgrados edficos. La
recoleccin de hojarasca de los estratos ms superficiales donde pueden
encontrarse los tardgrados, hasta los 5-10 cm (op cit), no requiere ninguna
precaucin especial. Al igual que en otros casos, la muestra ha de mantenerse
seca para evitar que se pudra y/o crezcan hongos. Como en el caso del suelo,
para el estudio de los tardgrados que estn en hojarasca, se pone la muestra en
un recipiente con agua durante unas horas y se tamiza con una luz de malla lo
suficientemente pequea como para recoger los tardgrados y sus huevos
(Ramazzotti, 1983; Nelson, 1991).
Identificacin de Tardgrados.
Para identificar algunas caractersticas morfolgicas, se harn preparaciones o
fijaciones, que despus utilizaremos para ubicarlos en una clave taxonmica:

Colorantes
El rojo neutro se utiliza como colorante vital.
El azul de metilo produce coloracin no selectiva de los msculos y de las fibras
nerviosas. ste se debe usar en soluciones muy diluidas y con cuidado, ya que es
un producto venenoso para los tardgrados.
El carmn actico se usa para la coloracin in toto; su efecto se debe seguir al
microscopio para evitar una coloracin muy intensa, y puede usarse sin haber
fijado previamente al animal o al huevo; tiene el inconveniente de que destruye
gran parte de los estiletes y las piezas duras (op cit).
El mtodo de Del Rio Hortega, se tie selectivamente de marrn a amarillo los
rganos y las clulas, particularmente las fibras nerviosas.
La hematoxilina frrica se utiliza como colorante postvital para la observacin de
las gnadas (Rodrguez Roda, 1952).
Fijacin
La fijacin de los tardgrados acuticos y terrestres se har con formalina, a una
concentracin del 5-10% (Lincoln, 1979).
Se neutralizara con carbonato de magnesio para evitar que se deshagan las
piezas calcreas (op cit). Si se va a realizar preparaciones con lquido de Hoyer,
no es recomendable fijar con formalina (Nelson, 1991).
El lquido de Bouin diluido tambin se utilizara como fijador y como conservante de
tardgrados. Los mejores fijadores para realizar estudios histolgicos son el cido
smico y el cido actico al 2% (op cit).
Los tardgrados recolectados en musgos, lquenes, hepticas, etc. se pueden fijar
con alcohol 70-80% (op cit), con agua hirviendo en pequeas cantidades (Nelson,
1982; Nelson, 1991) o con lquido de Carnoy (metanol de 96 y cido actico puro,
que tambin sirve como conservante. Los tardgrados recolectados de grandes
volmenes de agua se conservan mejor en formalina tamponada (5-10%) o en
glutalaldehido (op cit).
Preparaciones permanentes
Los dos mtodos ms extendidos para hacer preparaciones permanentes con
tardgrados son: con lquido de Faure (50 cc de agua destilada, 50 g de hidrato de
cloral, 20 cc de glicerina y 30 g de goma arbiga) o con polivinil lactofenol. Las
preparaciones realizadas con el lquido de Faure, y posteriormente selladas, se
conservan perfectamente durante mucho tiempo, al menos varias decenas de
aos, aunque pueden aparecer cristalizaciones que daan las preparaciones. El

lquido de Faure conserva bien las preparaciones teidas previamente con carmn
actico. El polivinil lactofenol permite una mejor extensin de los animales y
conserva mejor las estructuras cuticulares de Eutardigrada respecto a los
resultados obtenidos con el lquido de Faure . Sin embargo, con este producto
pueden aparecer espacios con aire que daan al tardgrado, pero a diferencia con
el lquido de Faure, donde tambin pueden aparecer espacios con aire, los daos
son irrecuperables (Ramazzotti, 1983). El polivinil lactofenol tambin requiere que
la preparacin sea sellada para su conservacin. El medio de Hoyer (50 cc de
agua destilada, 30 g de goma arbiga cruda, 150 g de hidrato de cloral, 20 g de
glicerina, 1 g de ioduro de potasio, 2 g de yodo; Nelson y Schuster, 1981) deja a
los especmenes transparentes y extendidos, pero la preparacin se debe sellar
para asegurarse de que sea permanente (op cit).

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retos de la biodiversidad, Comisin Nacional para el Conocimiento y Uso de
la Biodiversidad, Mxico, pp. 63-73.

Anexos

La identificacin de los especmenes generalmente se lleva a cabo en dos pasos;

uno es la identificacin provisional que se le da a los especmenes en el campo, o
bien cuando llega a la institucin respectiva y es revisada por el Profesor en el
microscopio estereoscopio, observando las estructuras macroscpicas (color del
talo, tamao, forma, cuerpos fructferos, presencia o ausencia de soredios e
isidios, color de la superficie inferior y superior, presencia o ausencia de cilios,
rizinas, cifelas, seudocifelas, mculas, etc.). Otra es la identificacin final que se
lleva a cabo con el estudio de las estructuras microscpicas y el uso de claves
taxonmicas. El estudio microscpico incluye cortes verticales del talo y de los
cuerpos fructferos, los cuales pueden ser teidos con Lactofenol Azul o Azul de
Algodn para observar mejor sus componentes. El estudio microscpico tambin
es llevado a cabo por los expertos internacionales que visitan la institucin. Los
lquenes poseen una serie de componentes qumicos que nos ayudan a
determinar grupos complejos de especies. Estas se estudian sistemticamente
utilizando mtodos sencillos o complejos que permiten detectarlas en el tejido
cortical del talo o en las paredes celulares. La quimiotaxonoma en lquenes se ha
enfocado en el uso taxonmico de los datos de metabolitos a nivel de especie.
Dentro de los compuestos se encuentran los llamados cidos liqunicos y otros
tipos de sustancias. Las sustancias liqunicas nunca ocurren en grandes
cantidades, por lo cual su deteccin e identificacin involucran tcnicas
especiales, como lo son:
Test de coloracin: orientado exclusivamente a detectar macroscpicamente la
presencia de grupos de compuestos qumicos, evidenciando cambios de color (en
el talo, corteza y mdula). Los cambios de coloracin se consideran positivos e
indican la presencia de un grupo de compuestos determinados; se considera
negativo si no hay cambio de color. 26
Test C: se emplea como reactivo una solucin acuosa saturada de hipoclorito
de calcio. Como sustituto se usa un blanqueador lquido comercial con cloro
activo.
Test K: se usa como reactivo una solucin acuosa de hidrxido de potasio. Esta
solucin se prepara al 10-25% y es ms estable que el test C
Test KC: es una mezcla de hipoclorito de calcio con hidrxido de potasio.
(Primero se aplica K e inmediatamente C.)

Claves de identificacin de lquenes

-Barreno, E. y Prez-Ortega, S., 2003.Claves para la identificacin de los gneros y
especies.
Recuperado
de:
http://www.uv.es/barreno/Clave_de_generos_y_especies.pdf
-Nelson D. Tardigrada pp. Ecology and Classification of North American
Freshwater Invertebrates Academic Press, 1991