LECTURAS SOBRE NUTRICIN (2004) 11 (2): 54-70

Ganador Primer Premio Concurso Jos Flix Patio

XIX Congreso Anual Avances en Metabolismo y Soporte Nutricional

Acciones anablicas e inmunomoduladoras

del factor de crecimiento similar a la
insulina - I durante estrs nutricional
Wilson Meja Naranjo1, Rosalina Bernal2, Myriam Snchez de Gmez3
1

Profesor asistente, Departamento de Nutricin y Bioqumica, Facultad de Ciencias Bsicas, Pontificia Universidad
Javeriana. Bogot, D.C.; 2 ND, Departamento de Nutricin y Bioqumica, Facultad de Ciencias Bsicas, Pontificia Universidad Javeriana. Bogot, D.C.; 3 Profesor asociado, director Grupo de Investigacin en Hormonas, Depto. de Qumica,
Universidad Nacional de Colombia, Bogot, D.C.
Palabras clave: IGF-I (factor de crecimiento similar a la insulina-1), GH (hormona de crecimiento), IGF-IR (receptor
para el factor de crecimiento similar a la insulina-1), GHR (receptor para la hormona de crecimiento), rhIGF-I (factor de
crecimiento similar a la insulina-1 recombinante humano), malnutricin proteica, sistema inmune.

Introduccin
Se ha sugerido que
los efectos
inmunomoduladores
de la hormona de
crecimiento (GH) y el
factor de crecimiento
similar a la insulina
(IGF-I) pueden ser
explicados en trminos
de sus acciones
anablicas/
somatognicas y
moduladoras del estrs
en clulas del sistema
inmune. El dficit de
protenas y caloras
induce un estado
catablico o de estrs
nutricional, con efectos
deletreos sobre el
sistema inmune. El
presente estudio
investig los cambios
sobre el eje GH/IGF-I
esplnico inducidos por
la malnutricin proteica
y el efecto de la infusin
de rhIGF-I. Se utilizaron
ratas normales en
crecimiento alimentadas con dietas
isocalricas que diferan
en el contenido de
protena (0%, 4%, 12%

El sistema inmune y el sistema endocrino comparten un conjunto comn de

ligandos y receptores. Las clulas del sistema inmune secretan molculas y poseen
receptores para una gran cantidad de hormonas y factores de crecimiento. De igual
forma, citoquinas como los interferones,
aunque se derivan de clulas inmunocompetentes, tambin tienen efectos hormonales en una gran cantidad de rganos.
Esta observacin sirve de base para ampliar el conocimiento bioqumico de cmo
y por qu hay una comunicacin
bidireccional entre los sistemas inmune y
endocrino.
Un gran cuerpo de evidencia sugiere que
la hormona de crecimiento (GH), el factor
de crecimiento similar a la insulina (IGF-I) y
sus receptores cumplen un papel importante en la funcin y homeostasis del sistema
inmune (1, 2). La hiptesis original propuesta para responder a la pregunta sobre
cmo la hipfisis o pituitaria regula el cre-

cimiento somtico, estableci que la GH

producida en la hipfisis estimulaba la sntesis de IGF-I en el hgado y de all era exportado a la circulacin para llegar a los
rganos blanco (3). El hgado es la fuente
primaria de IGF-I circulante, el cual fue
considerado como factor de importancia
crucial para el crecimiento posnatal y desarrollo. Hace dos dcadas se estableci que la expresin del IGF-I no se
limitaba al hgado, y que la sntesis de GH
no se restringa a la hipfisis (4). Las investigaciones han demostrado que los rganos linfoides como el timo, bazo y sangre
perifrica producen y responden a la GH
sintetizando y liberando IGF-I. La presencia de receptores para estas hormonas en
poblaciones linfocitarias, sugiere que,
adicionalmente al mecanismo tradicional
endocrino, existe un mecanismo local de
accin paracrino/autocrino para estas hormonas (5, 6).
La importancia de un mecanismo
paracrino/autocrino de accin del eje GH/
IGF-I ha cobrado mayor relevancia con el

54

Lecturas sobre Nutricin N 45

y 20%); los animales

del mismo grupo
dietario fueron
aleatoriamente
divididos en dos grupos
y durante siete das
recibieron infusin
continua de rhIGF-I o
vehculo. La malnutricin proteica disminuy
los niveles sricos de
IGF-I, la protena de
unin IGFBP-3, insulina
y GH; mientras que los
niveles de IGFBP-1 se
incrementaron. En el
bazo el porcentaje de
clulas B, el mRNA para
el IGF-IR, IGFBP-3, -4 y
-6 fueron
incrementados por la
falta de protena
dietaria; mientras que
los niveles del mRNA
para el IGF-I no
cambiaron. La administracin exgena de
rhIGF-I redujo los
niveles de insulina y GH
e increment la
expresin del GHR y los
niveles circulantes de
IGFBP-1 y -3. La
infusin de rhIGF-I
increment en 20% el
balance de nitrgeno
en animales que
consumieron dieta con
alto contenido de
protena. En conclusin,
se demostr que el
rhIGF-I estimula el
anabolismo en el bazo
a expensas del
catabolismo inducido
por la restriccin de
protena. El incremento
en la expresin de los
genes del eje GH/IGF-I
durante la malnutricin
proteica puede estar
capturando el IGF-I
circulante o el producido localmente como
manera de compensar
los bajos niveles
causados por el estrs
nutricional. Este
incremento puede
tambin afectar la
homeostasis de la
poblacin linfocitaria y
prevenir que la
restriccin proteica
ejerza mayores efectos
sobre la funcin
inmune.

reciente hallazgo de que ratones

knockout para el IGF-I heptico no difieren en peso corporal y tamao de sus respectivos controles silvestres. Estos
estudios han demostrado que el hgado
produce la mayor cantidad del IGF-I circulante (75% aproximadamente), pero
esta forma endocrina no es esencial para
el crecimiento posnatal y el desarrollo.
Adems, sugiere que el IGF-I producido
localmente puede estar mediando los
efectos promotores de crecimiento (7). Esta
evidencia da soporte a la idea que la GH y
el IGF-I producidos localmente cumplen
varias funciones, incluyendo la regulacin
del crecimiento corporal, mantenimiento,
funcin y reparacin de tejidos especficos, incluidos los del sistema inmune.
Varios estudios sugeran que el eje GH/
IGF-I tena una funcin importante en el
control de la linfopoyesis y la funcin inmune. Experimentos realizados en animales hipofisectomizados demostraron que
la funcin inmune humoral y celular estaba deprimida, y slo el tratamiento con
estas hormonas, recuperaba la funcin (8).
Sin embargo, el uso de modelos mutantes
que poseen un defecto endocrino ms limitado y selectivo para estas hormonas,
ha demostrado que ni la funcin inmune
celular, ni la humoral, ni la linfopoyesis se
ven afectadas por la deficiencia de GH o
de IGF-I o de ambos (9). Este hallazgo ha
llevado a proponer una nueva hiptesis,
segn la cual, ninguna de estas hormonas son inmunorreguladoras obligadas del
sistema inmune y, por el contrario, sus funciones se deben buscar por sus acciones
somatognicas y anablicas. Este ltimo
postulado plantea entonces una funcin
nueva, como lo es el posible papel de hormonas anablicas en la adaptacin al
estrs en muchas clulas, incluidas las del
sistema inmune.
La nutricin es un determinante de
la respuesta inmune y el dficit de pro-

tena y caloras tienen efectos deletreos

en el sistema de defensa de un organismo. Se sabe que tanto el consumo de
protena como de energa, son crticos
en la regulacin del eje endocrino GH/
IGF-I. El estrs nutricional inducido por
la deficiencia de protena o calora en la
dieta causa un estado de resistencia global a la accin de la GH, pero los mecanismos bioqumicos responsables han
sido poco estudiados (10). A la luz de la
nueva hiptesis que atribuye a la GH y
al IGF-I un papel regulador del estrs,
es importante identificar los cambios en
el eje local autocrino/paracrino de estas
hormonas, en clulas del sistema inmune bajo estrs nutricional. El modelo
animal de ratas ha sido ampliamente utilizado en las investigaciones para responder a la pregunta de cmo la GH y el
IGF-I regulan el crecimiento, desarrollo
y metabolismo. La malnutricin reduce
los niveles sricos de IGF-I y GH. El IGFI circulante (endocrino) procede en su
gran mayora (75%) del hgado. No se
conoce muy bien el efecto de la deficiencia de protena sobre el eje GH/IGF-I en
el sistema linfoide, as como tampoco se
ha caracterizado el efecto de la deficiencia de protena en la dieta sobre los receptores para GH e IGF-I en las
diferentes poblaciones celulares linfocitarias, lo cual es importante para comprender las acciones reguladoras de
estas hormonas en el sistema inmune en
condiciones de estrs nutricional. El objetivo de la presente investigacin fue
estudiar el efecto del nivel de protena
en la dieta y la administracin de IGF-I
sobre el eje GH/IGF-I en tejido linfoide
en el modelo experimental de ratas normales. La hiptesis de la presente investigacin establece que la actividad
anablica del eje local GH/IGF-I podra
estar modulando autocrina/paracrinamente los cambios inducidos por la deficiencia de protena para preservar la
homeostasis del sistema inmune.

55

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

Materiales y mtodos
Diseo experimental
Ratas macho de la raza SpragueDawley de 5 semanas de edad se obtuvieron del Instituto Nacional de Salud,
Bogot, D.C. Luego de una semana de
preadaptacin las ratas fueron mantenidas individualmente en cajas metablicas, con libre acceso a agua y a su
respectiva dieta durante un perodo de 12
das. Las ratas se alimentaron con cuatro
dietas diferentes en el contenido de protena (ICN, USA): 0, 4, 12 y 20%. (Las dietas son isocalricas y proporcionan 3.8
Kcal/g dieta). Para cada animal se pes
la racin que consumira durante todo el
experimento; al final, la parte no consumida fue nuevamente pesada. Los animales cuyo peso estaba alrededor de 120
g fueron aleatoriamente asignados a cada
una de las 4 dietas. El da 5 del experimento, una bomba miniosmtica, Alzet
2002, fue implantada en la espalda del
animal bajo anestesia (Rompun: Ketalar:
Salina 1:2:3). La minibomba liberaba 28
l/da, la cual se llen con aproximadamente 300 l de solucin de IGF-I recombinante (suministra 250 g/da de rhIGF-I)
o vehculo (cido actico 0.1 M). De esta
forma por cada dieta se tenan dos grupos, uno recibiendo infusin de rhIGF-I y
el otro vehculo durante 7 das. Al final del
perodo los animales fueron sacrificados
y los respectivos tejidos procesados y
analizados de acuerdo al protocolo experimental. Los protocolos y procedimientos de ciruga estuvieron conformes a las
normas para utilizacin de animales de
experimentacin del Instituto de
Biotecnologa de la Universidad Nacional
de Colombia y del Instituto Nacional de
Salud, Bogot, Colombia.
Muestras de sangre fueron tomadas
del plexo orbital usando anestesia con ter
el da 0,5 y 12. 0,5 mL de sangre fueron
tomados, se obtuvo el suero el cual se

56

alicuot y guard a 20C hasta ser procesado para las determinaciones hormonales y protenas de unin del IGF-I.
Aproximadamente un 10% del bazo, fue
procesado para obtener suspensiones
celulares y procesadas por citometra de
flujo para la determinacin de subpoblaciones linfocitarias y receptores de GH e
IGF-I. El resto de tejido fue congelado inmediatamente en nitrgeno lquido y procesado para los estudios de expresin de
mRNA.
La orina y las heces fueron recolectadas diariamente para cada animal. Un
pool se hizo para los cinco primeros das
del experimento, y otro pool para los 7
das restantes. El contenido de nitrgeno en orina y heces fue realizado siguiendo el mtodo estandarizado en el
laboratorio descrito en Snchez-Gmez
et al., 1999 (11).

Modelo estadstico
La dieta fue aleatorizada dentro del tratamiento. Tratamientos: T1, T2. Dietas: d1,
d2, d3, d4. Dado que el experimento no
poda ser completado al mismo tiempo los
grupos fueron escogidos al azar, 12 ratas
cada vez. Dos ratas eran escogidas cada
vez hasta completar 6 animales por grupo: T1d1, T1d2, T1d3, T2d1, T2d2, T2d3.
Los resultados fueron analizados usando
anlisis de varianza de dos vas ANOVA.
Las comparaciones mltiples entre las
medias se realizaron usando la prueba de
Duncan, seguido de la prueba no
paramtrica Wilcoxon usando el programa SAS (SAS Institute, Inc., 1999). Las diferencias se consideraron significativas
cuando los valores de P < 005.

Resultados
Efecto del consumo variable de protena en la dieta y administracin continua de rhIGF-I sobre el peso corporal y
consumo de alimento.

Lecturas sobre Nutricin N 45

Durante los cinco primeros das las

ratas alimentadas con dieta 0% protena
perdieron 2.8 0.25 g. Los animales que
consumieron las dietas 4, 12 y 20%, ganaron 0.9 0.5 g, 5 0.6 g y 6 0.6 g
respectivamente (figura 1A). Para el da 12,
luego de recibir infusin continua de rhIGFI durante 7 das, las ratas alimentadas con
dieta 20% obtuvieron un aumento significativo del 40% en peso corporal comparado con su respectivo grupo control (5.9
0.18 vs. 4.1 0.48; P < 0.05). En los

otros tres grupos dietarios no se observ

ningn efecto significativo de la administracin continua de rhIGF-I sobre el peso
corporal (figura 1B).
Durante los cinco primeros das, las
ratas alimentadas con dieta libre de protena consumieron significativamente menos alimento, 10.6 g/da (P < 0.01)
comparado a 13.2, 14 y 12.4 g/da consumidos por los animales que fueron
alimentados con dietas 4, 12 y 20% res-

Figura 1
Efecto del contenido de protena en la dieta en ratas normales durante 5 das
(A) y de la administracin continua de rhIGF-I (barras negras) o vehculo
(barras abiertas) durante 7 das (B). Los valores estn expresados como
la media sem para n=6 ratas en cada grupo a rhIGF-I vs. vehculo
alimentados con la misma dieta P < 0.05.

Tabla 1
Estado nutricional de ratas con infusin continua de rhIGF-I o vehculo
% protena en dieta

12

20

Vehculo

Consumo totala
Consumo/PCc

8 0.8b
0.49 0.05

11 0.83
0.57 0.04

13.8 0.56
0.57 0.02

12.3 0.43
0.58 0.04

rhIGF-I

Consumo totala
Consumo/PCc

7.2 0.73b
0.47 0.04b

9.2 1b
0.5 0.04b

13.7 0.97
0.59 0.02

17.1 0.9
0.79 0.07

Los valores estn expresados como la media SEM de n = 6 ratas en cada grupo. aConsumo
de alimento (consumo da(g)/animal). cConsumo de alimento (Consumo(g)/Peso final
corporal(g)/animal) b P < 0.01 vs. Vehculo o rhIGF-I 20%.

57

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

pectivamente. Durante los 7 das de infusin continua de rhIGF-I el consumo de

alimento fue significativamente ms bajo
en los grupos que consumieron 0 y 4% de
protena comparado con los alimentados
con 12 y 20% de protena (tabla 1). Los
animales que recibieron infusin continua
de rhIGF-I y alimentados con 20% de protena mostraron un incremento significativo (P < 0.05) en el consumo total de
alimento y en la relacin de consumo y
peso corporal comparado a su respectivo
control que recibi infusin de vehculo.

Balance de nitrgeno
El comportamiento anterior se corrobor mediante el balance de nitrgeno.
Para el da 5, las ratas alimentadas con
dieta 0% de protena presentaban balance negativo (-18.2 5 mgN/kg/da) (figura 2A). Para el da 12, este balance, se
redujo para el grupo que recibi rhIGF-I a
-9.3 1 y para el que recibi vehculo a 6.3 1.5 mgN/kg/da, sin diferencia significativa entre estos dos grupos. La
interaccin entre contenido de protena en

Figura 2
Balance de nitrgeno en ratas alimentadas con dietas 0, 4, 12 y 20% de
contenido de protena durante 5 das (A) y efecto de la administracin
continua durante 7 das de rhIGF-I (barras negras) o vehculo (barras
abiertas) (B). Los valores estn expresados como la media sem para n=6
ratas en cada grupo. a rhIGF-I vs. vehculo en la misma dieta P< 0.05.

58

Lecturas sobre Nutricin N 45

la dieta e infusin de rhIGF-I fue estadsticamente significativa (P < 0.05) en las ratas alimentadas con 20% de protena,
donde la infusin de rhIGF-I caus un incremento del 20% en el balance de nitrgeno comparado con el respectivo control
(3090 185 vs. 3781 284 mgN/kg/da).
No se observ diferencia significativa en
los grupos alimentados con 4 12% recibiendo rhIGF-I o vehculo (figura 2B).
Efecto del consumo variable de protena en la dieta y la administracin de
rhIGF-I sobre el tamao del bazo
El peso del bazo disminuy significativamente con relacin a la disminucin
del contenido de protena consumida en
la dieta. En ratas que recibieron infusin
de vehculo el peso del bazo disminuy

significativamente de 430 60 mg, en

las que fueron alimentadas con dieta 20%
de protena, a 220 20 mg en los animales alimentados con dieta 0% de protena. En las ratas que recibieron infusin
continua de rhIGF-I el peso del bazo disminuy de 760 100 mg a 320 50 mg
en las mismas condiciones dietarias. La
normalizacin del peso del bazo al peso
corporal mostr que en las ratas que recibieron infusin continua de rhIGF-I la
relacin fue significativamente mayor en
los cuatro grupos dietarios comparado
con su respectivo control que recibi
vehculo (figura 3).
Efecto del consumo variable de protena en la dieta y administracin de
rhIGF-I sobre los niveles circulantes de
IGF-I, GH e insulina

Figura 3
Efecto del contenido de protena ingerida en la dieta durante 12 das sobre el
peso del bazo en ratas que recibieron durante 7 das infusin continua de
rhIGF-I (barras negras) y ratas control que recibieron vehculo (barras
abiertas). Los pesos estn expresados como la relacin peso tejido (mg)/
peso corporal (g). Los valores estn expresados como la media sem para
n=6 ratas en cada grupo. a rhIGF-I vs. Control consumiendo la misma dieta
P < 0.01; b rhIGF-I consumiendo 20% vs. rhIGF-I consumiendo 12, 4, 0% P< 0.05;
c
vehculo consumiendo 20% vs. vehculo consumiendo 12, 4, 0% P< 0.05.

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Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

La restriccin proteica durante los primeros 5 das caus una reduccin aproximada del 55 y 70% en los niveles
circulantes de IGF-I en ratas alimentadas
con dietas 4 y 0% de contenido de protena comparado al grupo que recibi 20%
(550 60 ng/mL vs. 220 30 y 150 50
ng/mL) figura 4A. La infusin continua de
rhIGF-I durante 7 das subsiguientes restableci los niveles circulantes en ambos
grupos (489 139 y 600 112, para los
animales alimentados con 4 y 0% protena respectivamente); mientras que en los
grupos control que recibieron vehculo, los
niveles fueron an ms reducidos (179
18 y 118 17 ng/mL en los grupos 4 y
0%) figura 4B. En los grupos 12 y 20% que
recibieron vehculo los niveles circulantes
fueron incrementados significativamente,
850 60 ng/mL y 785 55 ng/mL respectivamente comparado a los niveles el
da 0 5. Los animales en estos dos grupos dietarios que recibieron infusin de
rhIGF-I, los niveles circulantes fueron
incrementados a 1986 67 y 3827 373
ng/mL respectivamente.

hasta 49 ng/mL, con un valor promedio

obtenido de 10.9 10 ng/mL. Cinco das
de consumo de dieta 0 4% protena
causaron una reduccin en los niveles
circulantes, 3.5 2.5 ng/mL y 7.1 3.4
ng/mL respectivamente; mientras que los
animales que consumieron 12 20% no
mostraron cambios significativos
respectos a los valores obtenidos al da
0. Al da 12, en los animales que recibieron vehculo y alimentados con dietas 0
y 4%, los niveles circulantes fueron 3.6
2.9 ng/mL y 2.4 1.5 ng/mL respectivamente. Aquellos que recibieron infusin
continua de rhIGF-I, los niveles fueron similares a sus respectivos controles. En
los grupos alimentados con dietas 12 y
20% y que recibieron vehculo, los valores se mantuvieron dentro de los rangos
normales: 8.7 8.3 ng/mL y 17.3 9.1
ng/mL respectivamente. La administracin de rhIGF-I caus una disminucin
significativa (P< 0.05) en ambos grupos
comparado a su respectivo control: 1.5
1.4 ng/mL y 3.9 4.0 ng/mL para 12 y
20% respectivamente (figura 4D).

Durante los primeros 5 das de alimentacin, la restriccin de protena (4

0%) en la dieta disminuy significativamente los niveles de insulina en un
30% comparado a las ratas consumiendo 20% de protena. Al da 12, luego de
recibir por 7 das infusin de vehculo o
rhIGF-I, en los animales que consumieron dietas 0 y 4%, los niveles de insulina
fueron reducidos en un 75% comparado
con el grupo control alimentado con dieta 20% (figura 4C). La infusin de rhIGF-I
en animales con dietas 12 20% caus
una reduccin significativa aproximada
del 50% en los niveles circulantes de
insulina comparado con los respectivos
controles recibiendo vehculo.

Efecto del consumo variable de protena en la dieta y administracin continua de rhIGF-I sobre los niveles
circulantes de IGFBPs

Al da 0 de inicio del experimento, los

valores sricos de GH determinados en
48 animales variaron desde 0.5 ng/mL

60

El efecto de la infusin continua de

rhIGF-I sobre los niveles sricos de IGFBP3 en los cuatro grupos dietarios se observa en la figura 5; en todos los grupos, los
niveles fueron significativamente elevados
comparado a su respectivo grupo control
que recibi infusin de vehculo. La infusin de rhIGF-I increment en dos veces
los niveles en ratas alimentadas con dieta
libre de protena, comparado al grupo control alimentado con 20% de protena. Por
el contrario, los grupos control, los niveles fueron disminuidos progresivamente
con la disminucin del contenido de protena ingerida.

Lecturas sobre Nutricin N 45

Figura 4
Efecto del consumo variable de protena en la dieta sobre los niveles
circulantes de IGF-I durante 5 das (A) y administracin continua de rhIGF-I
durante 7 das (B), niveles circulantes de insulina (C) y niveles circulantes de
GH (D) en ratas normales con infusin de rhIGF-I (barras negras) o vehculo
(barras abiertas). Los valores estn expresados como la media sem para
n=6 ratas en cada grupo. a rhIGF-I vs. Control en la misma dieta P < 0.05;
b
Control alimentado 20% vs. Control alimentado 12, 4 0%. c rhIGF-I
alimentado dieta 20% vs. rhIGF-I alimentado dieta 12, 4 0% P < 0.05. Los
valores estn expresados como la media sem para n=6 ratas en cada
grupo. En figura D valores individuales para n=9-12 ratas en cada grupo;
animales recibiendo infusin continua de rhIGF-I (cuadrados abiertos) o
vehculo (rombos negros).

61

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

Figura 5
Efecto del consumo de protena variable (0 - 20%) durante 12 das en ratas
normales con infusin continua de rhIGF-I (barras negras) y de vehculo
(barras abiertas) sobre los niveles circulantes de IGFBP-3. Las protenas del
suero fueron separadas por electroforesis PAGE-SDS 4-20%, transferidas a
nitrocelulosa 0.22 m, incubadas con 125I-IGF-I y expuestas a pelcula MS
Kodak. La cuantificacin se hizo por exposicin de las membranas a
pelculas del PhosphoImager. Los valores estn expresados como la media
sem para n=6 ratas en cada grupo. a rhIGF-I vs. control alimentados con la
misma dieta P < 0.01; b Control alimentado 20% vs. Control alimentado dieta
12, 4 0% P < 0.01; c rhIGF-I alimentado 20% vs. rhIGF-I alimentado 12,
4 0%. P < 0.01.

Los niveles de IGFBP-1 fueron significativamente incrementados en respuesta

a la disminucin del contenido de protena
ingerida en la dieta. La infusin de rhIGF-I
increment significativamente los niveles de
la IGFBP-1 comparado a los controles en
los animales que consumieron dietas 12,
4 y 0% (datos no mostrados).
Efecto del consumo variable de protena y administracin continua de
rhIGF-I. sobre la distribucin de poblaciones linfocitarias en el bazo

62

El anlisis de citometra para determinar la distribucin celular de clulas B, T

CD4+ y T CD8+ en el bazo de ratas tratadas con vehculo o IGF-I y alimentadas
con varias dietas se muestran en la tabla
II. Entre las diferentes dietas, no se encontr diferencia entre las infusiones de
vehculo y de IGF-I en cuanto al porcentaje de clulas B, T CD4+ y T CD8+. El
porcentaje de clulas B se increment en
los animales tratados tanto con vehculo
como con IGF-I y como resultado de la
disminucin del contenido de protena en

Lecturas sobre Nutricin N 45

Tabla 2
Distribucin de linfocitos en el bazo de ratas normales
% protena
En dieta

% linfocitos T CD4+

% linfocitos B
Vehculo

rhIGF-I

*P
valor

Vehculo

rhIGF-I

38.4 1 NS 30.2 1.3 30.5 2

*P
valor

% linfocitos T CD8+
Vehculo

rhIGF-I

*P
valor

42.5 2

NS 17.5 1.1 19.4 1.6 NS

39.1 0.9 34.6 2 NS 29.5 1.3 30.8 1.9 NS 17.3 0.9 19.3 1.3 N S

12

34.3 3.6 29 1.7 NS 26.7 1.7 28.8 1.4 NS 15.7 0.8 15.8 1.3 NS

20

34.7 2.3 33.7 3 NS 28.5 1.4 27.5 2.3 NS 16.5 1.1 19.2 2

NS

Los datos estn expresados como la media sem para n= 6 ratas en cada grupo. NS: no significante.

la dieta. En contraste, el porcentaje de

clulas T CD4+ y T CD8+ no se modific
significativamente.
Efecto de la variacin del contenido
de protena en la dieta y administracin
continua de rhIGF-I. sobre la expresin
en bazo de las protenas de unin al IGF,
GHR, IGF-IR e IGF-I
La restriccin de protena en la dieta
caus una disminucin similar en la expresin de la IGFBP-2 (figura 6A) en los animales que recibieron rhIGF-I o vehculo.
Los niveles fueron significativamente ms
bajos en ambos grupos, rhIGF-I y vehculo, alimentados con dieta 4 y 0% de protena, comparado con los grupos
alimentados con 20%. Por el contrario la
expresin de la IGFBP-3, -4 y -6 se
increment con la reduccin del contenido de protena ingerida en la dieta tanto
en los animales con infusin de rhIGF-I
como de vehculo (figura 6B-D).
Aunque la expresin de la IGFBP-3
mostr una tendencia a ser mayor en los
grupos que recibieron rhIGF-I en las die-

tas 0 y 4%, sta no fue significativa (P =

0.09). La expresin de la IGFBP-4 fue mayor en los grupos control y rhIGF-I alimentados con dieta 0 y 4% de protena,
comparado con los grupos alimentados
con 20% de protena. La expresin de la
IGFBP-6 fue significativamente mayor en
el grupo control comparado con el que
recibi rhIGF-I en la dieta 0% protena.
Los niveles de mRNA para el GHR fueron incrementados significativamente (P <
0.05) por la restriccin de protena en la
dieta y por la infusin continua de rhIGF-I
(figura 7B). Los animales alimentados con
dieta 0 y 4% de protena que recibieron
infusin de rhIGF-I mostraron mayores niveles de expresin que los que recibieron
vehculo. Resultados similares se obtuvieron por citometra de flujo al determinar el
porcentaje de linfocitos B positivos para
el GHR (figura 7A). Los resultados
correlacionaron con los de la expresin del
mRNA del GHR, excepto para los grupos
dietarios del 0 y 4%, donde el porcentaje
de clulas B positivas para GHR fue mayor en los animales tratados con vehculo
que con IGF-I.

63

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

Figura 6
Efecto del contenido de protena ingerida en la dieta sobre la expresin de las
protenas de unin al IGF, IGFBP-2 (A) y IGFBP-3 (B), IGFBP-4 (C), IGFBP-6 (D)
en ratas normales con administracin continua de rhIGF-I (barras negras) o
vehculo (barras abiertas) durante 7 das. Los valores estn expresados como
la media sem para n=6 ratas en cada grupo a Vehculo vs. rhIGF-I con la
misma dieta, P < 0.01; b Vehculo alimentado 20% vs. Vehculo alimentado 12,
4 0% protena, P < 0.01; c rhIGF-I alimentado 20% vs. rhIGF-I alimentado 12,
4 0% protena, P < 0.001.

Los niveles de mRNA para el IGF-IR

fueron significativamente (P < 0.01) ms
elevados en animales alimentados con
dietas 0 y 4% de protena comparado a
los alimentados con dietas 12 20% de
protena; no hubo diferencias significativas
entre los que recibieron infusin de rhIGF-I
o los que recibieron vehculo (figura 8B).
Los anlisis de citometra de flujo demostraron un aumento significativo en el porcentaje de linfocitos B, T CD4+ y T CD8+
reactivos o positivos para el receptor de

64

IGF-I. La figura 8A muestra este fenmeno en linfocitos B. Similar al fenmeno

observado en linfocitos B, la expresin del
receptor de IGF-I es incrementada por la
restriccin proteica y la administracin de
rhIGF-I.
La expresin del IGF-I en el bazo de
las ratas con infusin continua de rhIGF-I
no present ningn cambio significativo
con la variacin del contenido de protena
ingerida en la dieta (datos no mostrados).

Lecturas sobre Nutricin N 45

Figura 7
Efecto del contenido de protena ingerida en la dieta sobre la expresin del
receptor para hormona de crecimiento (GHR) en bazo de ratas normales
con administracin continua de rhIGF-I (barras negras) o vehculo (barras
abiertas) durante 7 das. Porcentaje de linfocitos B GHR+ determinados por
citometra de flujo (A) y niveles de mRNA para el GHR determinados por
ensayo de proteccin de RNAsas(B). a Vehculo vs. rhIGF-I con la misma
dieta, P < 0.01; b Vehculo alimentado 20% vs. Vehculo alimentado 12, 4
0% protena, P < 0.01; c rhIGF-I alimentado 20% vs. rhIGF-I alimentado 12,
4 0% protena, P < 0.001.

Figura 8
Efecto del contenido de protena ingerida en la dieta sobre la expresin del
receptor para IGF-I (IGF-IR) en bazo de ratas normales con administracin
continua de rhIGF-I (barras negras) o vehculo (barras abiertas) durante 7
das. Porcentaje de linfocitos B GHR+ determinados por citometra de flujo
(A) y niveles de mRNA para el GHR determinados por ensayo de proteccin
de RNAsas (B). Los valores estn expresados como la media sem para
n=6 ratas en cada grupo. a Vehculo vs. rhIGF-I con la misma dieta, P < 0.01;
b
Vehculo alimentado 20% vs. Vehculo alimentado 12-, 4- 0% protena,
P < 0.01; c rhIGF-I alimentado 20% vs. rhIGF-I alimentado 12-, 4- o 0%
protena, P < 0.001.

65

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

Discusin
La hormona de crecimiento (GH) y el
IGF-I estimulan el crecimiento somtico,
el desarrollo y regulan varias funciones
fisiolgicas. Se conocen acciones directas e indirectas de la GH en el crecimiento y el metabolismo. Los efectos directos
son mediados por el receptor de la GH
(GHR) y se cree que son independientes
del IGF-I. Las acciones indirectas de la
GH son mediadas por la sntesis de IGF-I
inducida por la GH, el cual es producido
principalmente en el hgado (75%) y muchos otros tejidos (7). El IGF-I y la GH tanto en circulacin como localmente,
podran estar regulando los efectos del
IGF-I sobre el crecimiento, desarrollo y
metabolismo. Algunos estudios de proliferacin y diferenciacin in vivo han mostrado que la GH y el IGF-I tienen efectos
sobre clulas del sistema inmune (8, 9).
Estudios in vitro igualmente han demostrado el efecto de estas hormonas sobre
la proliferacin y diferenciacin de clulas de origen linfoide, dando relevancia
al papel que desempea el eje local GH/
IGF-I (12, 13). Los estudios originales con
ratones knockout confirmaron que el
desarrollo de la gran mayora de los tejidos, sino todos, era regulado en alguna
medida por el sistema IGF- I (14).
En esta investigacin el concepto de
malnutricin protenica se refiere a la condicin nutricional cuando el animal consume dieta con contenido de protena del
4 0%. Esta condicin conlleva a una detencin o disminucin del crecimiento corporal, disminucin aguda en niveles
circulantes de IGF-I, insulina, y protena de
unin 3 al IGF-I.
Influencia de la cantidad de protena dietaria sobre los niveles circulantes
de GH e IGF-I
Se conoce que dos neuropptidos de
origen hipotalmico, la hormona libera-

66

dora de la GH (GHR) y su antagonista, la

somastotatina (SRIF) regulan la secrecin
de la GH de la pituitaria anterior. Esta secrecin ocurre de manera pulstil presentndose un dimorfismo sexual; en
machos se caracteriza por picos de alta
amplitud cada 3.3 h y por niveles muy bajos entre estos pulsos; mientras que en
las hembras se caracteriza por mantener niveles ms bajos y una pulsatilidad
reducida (15, 16). En ratas, la secrecin pulstil de GH es reducida por la malnutricin protenica, debido en parte a un
exceso de SRIF y una disminucin en la
secrecin de GHR (17). La infusin continua de rhIGF-I redujo significativamente
la secrecin de GH y prolactina en condiciones de adecuado consumo de protena en la dieta; por el contrario en
condiciones de malnutricin protenica
(0%, 4%) no se observaron cambios en
los grupos control o los que recibieron
infusin de rhIGF-I. Adicionalmente, se
conoce que la restriccin proteica, atena la respuesta al estmulo con GHR,
reduce el tamao de la pituitaria y el contenido de GH.
La malnutricin proteica disminuy
los niveles sricos de IGF-I en las ratas
control; mientras que en las que recibieron infusin de rhIGF-I y alimentadas con
dietas 4 y 0%, los niveles permanecieron normales. Esto demuestra que el
contenido de protena dietaria puede
regular los niveles de IGF-I circulante, no
slo el de origen heptico, sino tambin
el derivado de otros tejidos no hepticos (18-21). Uno de los tejidos extrahepticos que puede estar contribuyendo es
el msculo. Esto fue demostrado en ratas que fueron alimentadas con dieta 8%
de protena en las cuales los niveles del
mRNA para el IGF-I y los del pptido en
el msculo esqueltico fueron significativamente reducidos (75%) comparado con los animales que consumieron
una dieta con contenido de 20% de
protena (11).

Lecturas sobre Nutricin N 45

Contribucin de las IGFBPs circulantes a la regulacin nutricional sistmica

La cantidad de protena ingerida y el
balance de energa son los principales reguladores del IGF-I circulante. Se conoce
que un bajo consumo de protena est
asociado con cambios en las IGFBPs (22).
Un dficit de protena o de energa, o de
ambos a la vez, reduce los niveles de IGF-I
en proporciones que dependen del perodo y tipo de estrs nutricional. En este estudio se muestra que una dieta libre de
protena reduce los niveles sricos de IGF-I
en 65 y 80% despus de 5 y 12 das respectivamente. De forma similar los niveles
sricos de IGFBP-3 disminuyeron progresivamente en la medida que el consumo
de protena en la dieta disminuy. Por el
contrario los niveles circulantes de IGFBP-1
incrementaron con la disminucin del consumo de protena.
Se conoce que la IGFBP-1 es altamente sensible al estado nutricional del organismo (23). En ratas alimentadas con una
dieta libre de protena durante una semana, la transcripcin del gen heptico para
la IGFBP-1 fue incrementado en 3 veces;
se ha demostrado que este fenmeno es
debido en parte a la unin de al menos
dos factores que se unen al promotor. Varios estudios han mostrado que la expresin del gen para la IGFBP-1 es inhibida
por insulina tanto in vivo como in vitro. A
bajos niveles de protena, factores como
la deprivacin de aminocidos se ha demostrado que causan el incremento en los
niveles de IGFBP-1 en hgado de rata (24).
Por el contrario, la GH se conoce que tiene efecto inhibitorio sobre la expresin del
IGFBP-1 (25).
Influencia de la cantidad de protena ingerida sobre el eje local GH/IGF-I
(GHR, IGF-IR, IGF-I y IGFBP-1 a -6). Papel de la nutricin en la disponibilidad
de IGF-I a nivel de tejido

Uno de los objetivos de esta investigacin fue estudiar los efectos de los niveles circulantes de IGF-I y GH sobre el
bazo durante la malnutricin proteica. En
las ratas que recibieron infusin continua
de rhIGF-I, el bazo aument de tamao
consistentemente en los cuatro grupos
dietarios. Este hecho sugiere que el IGF-I
circulante y la protena dietaria son factores importantes para este efecto. En la
medida que los niveles sricos de IGF-I
disminuyeron con la reduccin en el contenido de protena dietaria, el peso de este
tejido tambin disminuy; lo cual es una
evidencia adicional del efecto directo del
IGF-I circulante sobre el tamao del bazo.
La distribucin relativa de linfocitos en
el bazo fue afectada por la restriccin de
protena. En la rata la restriccin de protena durante 12 das aument el porcentaje de linfocitos B; la infusin
continua de rhIGF-I durante 7 das no
mostr un efecto significativo sobre estos valores. El hecho de no haber encontrado cambios en la poblacin relativa de
linfocitos en animales alimentados con
dietas de 4, 12 y 20% de protena sugiere que un nivel de 4% de protena es la
concentracin crtica para mantener el
equilibrio en un organismo. Podra considerarse que los cambios observados en
los animales con dieta 0% corresponden
a mecanismos regulatorios para mantener el equilibrio homeosttico del organismo en condiciones de restriccin de
protena dietaria; lo que estara de acuerdo con la hiptesis planteada recientemente por Dorshkind y Horseman (26) para
explicar el mecanismo modulador de estas hormonas en el sistema inmune.
Estos fenmenos pueden estar asociados con cambios en algunos elementos
del eje GH/IGF-I tanto a nivel de circulacin como locales. Para indagar este mecanismo se analiz la expresin de genes
tales como el GHR, IGF-IR, IGF-I, e
IGFBPs en el bazo. En las ratas alimenta-

67

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

68

das con los cuatro niveles de protena no

se observ ningn cambio en los niveles
de expresin del mRNA esplnico para el
IGF-I. Por el contrario, los niveles de mRNA
del IGF-IR se incrementaron con la restriccin de protena en la dieta; lo anterior
sugiere que este incremento puede ser
una respuesta secundaria a los bajos niveles circulantes de IGF-I. La restriccin
de protena en la dieta increment la expresin del mRNA para el GHR. Este incremento correlacion con la elevada
capacidad de unin observada en
linfocitos B y T. No hay claridad respecto a
la influencia que tenga los niveles circulantes de GH. En ratones los niveles de
GH en condiciones de malnutricin
proteica son elevados (20), mientras que en
ratas son reducidos; por tanto, no se puede generalizar que el incremento en la expresin del GHR sea una respuesta
secundaria a niveles circulantes de la GH.
Interesante, es el hallazgo del incremento
en la expresin del GHR estimulada en
animales que recibieron la infusin de
rhIGF-I; pero este aumento no se observ
en la capacidad de unin de los linfocitos
esplnicos, lo cual sugiere algn efecto
postranscripcional.

tras que en circulacin la IGFBP-3 disminuy y la IGFBP-4 no present algn

cambio.

El eje GH/IGF-I en el bazo muestra ser

activo y a la vez regulador del metabolismo. La expresin de los receptores para
GH e IGF-I tanto en linfocitos B como T y
la expresin confirmada de cuatro de las
seis protenas de unin al IGF son hechos
que demuestran este fenmeno. La presente investigacin mostr que el mRNA
para el IGF-I en el bazo no es regulado
por la cantidad de protena ingerida en la
dieta; mientras que los blancos de unin
del IGF-I s lo son: el IGF-IR y las protenas
de unin a travs de los cuales el IGF-I ejerce su funcin biolgica. Lo anterior indica
que la captacin de IGF-I por el bazo es
un evento importante en el metabolismo
de este rgano. La restriccin de protena
en la dieta caus un incremento en la expresin del IGF-IR, la IGFBP-3, -4 y 6; mien-

Los altos niveles circulantes de IGFBP1 e IGFBP-3 incrementan la vida media del IGF-I.

La administracin exgena de rhIGF-I

increment los niveles de la IGFBP-1 y -3
en circulacin en ratas alimentadas con
dietas 0 y 4%, mientras que no se observ
efecto en la IGFBP-4. En condiciones de
buena nutricin, solamente los niveles de
IGFBP-3 son incrementados. La hiptesis
de trabajo de esta investigacin segn la
cual, en condiciones de estrs nutricional,
el eje local GH/GF-I puede estar modulando los cambios inducidos por la deficiencia de protena para preservar la
homeostasis del tejido encuentra soporte
en los hallazgos de este estudio. El bazo
estara produciendo activamente IGFBP-3,
4 y 6 para capturar el IGF-I de la circulacin; por tanto, el efecto anablico observado de incremento en el tamao del bazo
puede ser explicado por el incremento en
la captura de IGF-I de la circulacin.
La respuesta fisiolgica al IGF-I
exgeno bajo condiciones de estrs nutricional puede ser un efecto combinado
de varios factores:

El mecanismo local paracrino/

autocrino, puede ser activado por el
aumento en la expresin ya descrita
anteriormente de los elementos responsables de la captacin del IGF-I.
Esto puede resultar en un incremento
del porcentaje de clulas B y T expresando ambos receptores, as como
tambin en un incremento en el nmero de receptores por clula. Es conocido que las IGFBPs unen el IGF-I con
afinidades mayores que las del receptor de IGF-I; puede ocurrir que el incremento observado en la actividad
esplnica est captando la mayor par-

Lecturas sobre Nutricin N 45

te del IGF-I del medio y del receptor,

modulando as la accin biolgica,
aumentando su vida media y distribucin en el bazo.

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La elevada capacidad de unin a IGFI (IGF-IR), junto con el incremento en

la expresin de las protenas IGFBP-3,
4 y 6, en condiciones en las que el IGFI circulante es reducido, pueden ser el
reflejo de una mayor captacin local
de IGF-I, lo que puede estar dando
cuenta de las acciones anablicas del
pptido en el rgano linfoide.

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En conclusin, en esta investigacin

se ha demostrado que la restriccin
proteica tiene efectos profundos en el eje
local linfoide GH/IGF-I. Se ha podido demostrar que el rhIGF-I estimula el
anabolismo en el bazo a expensas del
catabolismo inducido por la restriccin de
protena en la dieta. Los datos obtenidos
sugieren que el incremento en la expresin de varios de los elementos del eje:
IGF-IR, IGFBP-3, -4 y -6 durante la malnutricin proteica pueden estar capturando
el IGF-I circulante o el producido localmente como una manera de compensar los
bajos niveles causados por la deficiencia
de protena en la dieta. Este incremento
puede tambin afectar la homeostasis de
la poblacin linfocitaria y prevenir que la
restriccin proteica ejerza mayores efectos sobre la funcin inmune.

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Dentro de los posibles mecanismos

que pueden estar involucrados en el mantenimiento de la homeostasis durante el
estrs nutricional inducido por una baja o
completa restriccin proteica, se pueden
mencionar los siguientes:
El incremento en la capacidad de
unin de los linfocitos a la GH para
compensar los efectos deletreos del
dficit de nutrientes sobre la funcin
inmune.

69

Acciones anablicas e inmunomoduladoras del factor de crecimiento similar a la insulina

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