MANUAL

MANEJO DE
MICROPIPETAS
LABORATORIO DEL
CREA

Manual: Manejo de
Micropipetas Laboratorio
CREA
Versin 01
Pgina #: 1/8
Preparado por:
Oscar Eduardo Gmez
Fecha: 27/08/2015
Revisado por:
Carolina Ramirez
Fecha: /08/2015

UNIVERSIDAD DEL ROSARIO

CENTRO DE ESTUDIO DE
ENFERMEDADES
AUTOINMUNES

INTRODUCCION
El centro de estudio de enfermedades autoinmunes (CREA) cuenta con dos
laboratorios dotados con los equipos necesarios para el anlisis de muestras
biolgicas. Para la obtencin de resultados tiles a partir
de
los
procedimientos realizados en el laboratorio, adems de
la preparacin
terica de los experimentos, es necesario que las
mediciones se hagan de acuerdo a los clculos
previos
de la forma ms exacta y precisa posible. Para
el
manejo de fluidos, el laboratorio cuenta con
un
amplio repertorio de pipetas en cada una de
sus
reas.
Las pipetas son dispositivos que se
utilizan para medir de manera exacta y
reproducible y transferir volmenes
pequeos de lquido de un recipiente a
otro. Histricamente las pipetas se
inicialmente en vidrio, sin embargo, en
la actualidad existe una amplia gama de opciones
que se adaptan a las caractersticas de
cada experimento. Para el manejo de
volmenes iguales o menores a 1 mL
se utilizan dispositivos conocidos como
micropipetas,
entre
estas
se
encuentran las pipetas de volumen fijo
y las de volumen variable, las cuales
disponen de controles mecnicos que
permiten ajustar el volumen a
transferir.

fabricaron

Figura 1. Pipetas del rea de extraccin de ADN.

Laboratorio 1 del CREA.

1. OBJETIVO
Establecer las pautas para el uso adecuado de las pipetas durante las actividades
del laboratorio. En esta gua se describen los lineamientos para asegurar el uso
correcto de estos instrumentos de medicin y lograr su permanencia en condiciones

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ptimas de funcionamiento. Se recomienda el seguimiento de las pautas aqu

presentadas con el fin de mantener la consistencia y reproducibilidad de los
procedimientos de laboratorio que requieran el uso de pipetas.
2. ALCANCE
Este documento aplica para las actividades desarrolladas en el laboratorio del CREA
de la Quinta de Mutis-Universidad del Rosario que requieran la utilizacin de las
pipetas disponibles en las diferentes reas de trabajo, y ser de obligatorio
cumplimiento para todo el personal que durante el desarrollo de sus funciones tenga
acceso al laboratorio.
3. DESCRIPCIN DEL LABORATORIO
El centro de estudio de enfermedades autoinmunes CREA, es un grupo
interdisciplinario de investigacin en enfermedades autoinmunes, los laboratorios
est ubicados en la planta 1 de la Universidad del Rosario (Sede Quinta de Mutis),
con un espacio destinado a la realizacin de proyectos de investigacin.
El CREA cuenta con dos laboratorios distribuidos de la siguiente manera:
Laboratorio 1 con zona independiente para cultivo celular
Laboratorio 2
En dichos laboratorios se desarrollan actividades especficas como:
Elisa, Inmunofluorescencia, Cultivo celular, Separacin de sueros, Extraccin de
DNA, Extraccin de RNA, PCR, electroforesis, Citometra de flujo, entre otros.
4. REGLAMENTO DEL LABORATORIO
1. El personal que ingrese a los laboratorios del CREA debe cumplir las normas
de seguridad y bioseguridad descritas en el manual de bioseguridad del
laboratorio del CREA.
2. Est prohibido el ingreso al laboratorio de cualquier persona ajena, solo se
permitir cuando tenga una autorizacin del Coordinador del laboratorio.
3. Traer al laboratorio la vestimenta adecuada y los elementos de proteccin
personal.
4. Mantener los elementos de proteccin personal en ptimas condiciones de
aseo, en un lugar seguro y de fcil acceso.

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5. Comportarse de forma correcta, respetuosa y responsable; evitando gritar,

correr, hacer bromas, juegos y dems comportamientos que afecten la
seguridad.
6. Lavarse las manos antes y despus de cada procedimiento.
7. Abstenerse de comer, beber, masticar chicle o fumar en el laboratorio.
8. La limpieza y desinfeccin de las reas y el manejo de los residuos, debe
hacerse de acuerdo a lo establecido en el manual de limpieza y desinfeccin y
el plan Integral de gestin de residuos de la Universidad.
9. Cualquier accidente, por pequeo que sea, debe comunicarse al coordinador
del laboratorio.
10.Se debe cumplir con el procedimiento para entrar y salir del cuarto de cultivo
celular ubicado en el laboratorio 1 como se describe a continuacin: el cuarto
de cultivo posee doble puerta, al abrir una puerta hay que asegurarse que la
otra este cerrada. Entre las dos puertas est ubicado un espacio con perchero
para hacer el cambio de batas. La bata empleada en el cuarto de cultivo debe
ser desechable y diferente.
11.Al trabajar en la cabina de flujo laminar no hablar por celular y minimizar el
dilogo.
5. MANUAL DE USO DE PIPETAS
Las pipetas utilizadas en este laboratorio son de volumen variable tipo mecnicas o
de pistn, esto quiere decir que en su mecanismo cuentan con un mbolo unido a
un eje que transmite la fuerza ejercida por el operador a un pistn que se desplaza a
lo largo de un cilindro de longitud fija, forzando el volumen de lquido dentro de la
punta de la pipeta hacia el exterior.
A su vez las pipetas mecnicas, segn el mecanismo de expulsin, pueden ser
denominadas de desplazamiento positivo y de desplazamiento por aire. En las de
desplazamiento positivo, tambin conocidas como de desplazamiento directo, el
pistn se encuentra en contacto con el lquido. En las de desplazamiento por aire,
existe un volumen de aire entre la cabeza del pistn y el lquido del cilindro. En la
figura 2 se observan esquemticamente los tipos de pipetas mecnicas o de pistn.

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Figura 2. Tipos de pipetas mecnicas o de pistn. Tomado de OPS. Manual de Mantenimiento Para Equipos de
Laboratorio. 2005. p. 178.

Para asegurar las condiciones que aseguren la consistencia en las mediciones y

disminuir el riesgo de contaminacin, las pipetas mecnicas cuentan con puntas
desechables. Se recomienda utilizar siempre las puntas suministradas por el
fabricante, para garantizar el ajuste de las mismas al cuerpo de la pipeta.
Para facilitar el reconocimiento de las pipetas y su correspondiente volumen, los
fabricantes han adoptado un cdigo de color que facilita su identificacin. La tabla 1
muestra la convencin de color segn la presentacin del fabricante Gilson, donde
el color de identificacin se visualiza en la parte superior del mbolo o botn de
dosificacin, acompaado del error mximo permitido en la medicin segn el
estndar ISO 8655.

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Tabla 1. Cdigo de colores (Gilson) y error mximo de medicin segn el ISO 8655. Modificado de Gilson.
http://www.gilson.com/ecatalog/index.htm.

A continuacin se describen las actividades generales requeridas para utilizar una

pipeta mecnica por desplazamiento de aire. Los pasos aqu enumerados son
aplicables en general a las pipetas que utilicen este tipo de sistema mecnico, sin
embargo, el operador debe tener en cuenta adems las recomendaciones
especficas del fabricante.
1. Seleccionar la pipeta adecuada segn el rea de trabajo dentro del
laboratorio y el volumen que se desee transferir, y ajustar el medidor a dicho
valor. Nunca se debe tratar de ajustar el volumen por encima del lmite
mximo ni debajo del lmite inferior especificado por el fabricante, puesto que

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esto genera deterioro en el sistema mecnico de la pipeta y disminuye la

precisin y exactitud de la medicin.
2. Colocar una punta nueva, ajustada a las especificaciones de la pipeta, en el
portapuntas. Evitar tocar cualquier superficie o contaminar la punta con otras
sustancias. Verificar que la misma queda bien ajustada.
3. Presionar el mbolo suavemente hasta el primer tope. Hasta este momento la
punta de la pipeta no debe estar sumergida en el lquido.
4. Sumergir la punta de la pipeta en el lquido, de 2 a 4 mm, segn el volumen a
absorber. Confirmar que la pipeta se encuentra en posicin vertical. Este
proceso corresponde al mostrado en la posicin 1B de la figura 3.
5. Liberar el mbolo suavemente y de forma controlada para que la pipeta
absorba el lquido (Figura 3 - posicin 2A). Verificar que el mbolo se desplace
hasta la posicin del lmite superior. Esperar al menos dos segundos, antes de
retirar la punta de la pipeta del lquido.
6. Situar la punta de la pipeta contra la pared del recipiente en el cual ser
transferido el lquido. Verificar que el ngulo formado entre la punta de la
pipeta y la pared del envase receptor est entre 30 y los 45. Si el recipiente
receptor ya tiene algn nivel de lquido, evitar que la punta de la pipeta
quede sumergida en el mismo (Figura 3 - posicin 3A).
7. Dispensar el contenido de la pipeta presionando el mbolo de forma suave
pero firme, hasta el primer tope (Figura 3 - posicin 4B). Mantener en todo
momento el contacto entre la punta de la pipeta y la pared del recipiente
receptor. Verificar que no quede ninguna gota de lquido pegada a la punta de
la pipeta.
8. Presionar el mbolo suavemente hasta que alcance el segundo tope en la
carrera del pistn (Figura 3 - posicin 5C). Al alcanzar el segundo tope se
fuerza el aire de la cmara a travs del orificio de la punta de la pipeta y se
expulsa cualquier fraccin de lquido que persista en la punta.

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9. Mantener el mbolo presionado en el segundo tope mientras se retira la

pipeta del recipiente receptor. Una vez retirada la pipeta, liberar suavemente
el mbolo hasta la posicin lmite superior.
10.Accionar el botn del mecanismo de expulsin de la punta (Figura 3 F) y
desecharla en el sitio adecuado segn el tipo de desecho generado por la
solucin de trabajo y de acuerdo al protocolo de manejo de residuos del
laboratorio.
11.Al finalizar la sesin, limpiar y devolver el material de trabajo al sitio
correspondiente dentro del laboratorio. Desechar los residuos en el sitio
adecuado segn el y de acuerdo al protocolo de manejo de residuos del
laboratorio.

Figura 3. Secuencia de uso de una pipeta mecnica por desplazamiento de aire. Tomado de OPS. Manual de
Mantenimiento Para Equipos de Laboratorio. 2005. p. 178.

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BIBLIOGRAFA
Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de Mantenimiento Para Equipos de
Laboratorio. Washington; 2005 p. 177-188.
Gilson.com. Catalogue 2013 [Internet]. 2015 [cited 26 August 2015]. Available from:
http://www.gilson.com/ecatalog/index.htm