Principios de Microscopa.

Conocer los equipamientos para la observacin celular

Tamao celular
Las clulas son las unidades bsicas de los seres vivos. La mayora de ellas son de pequeo
tamao por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su
visualizacin. Por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 m), o sea la
menor distancia vista o resuelta por el ojo humano es de dos lneas separadas 1mm de distancia;
si hay dos lneas a 200 m de distancia, veremos una sola lnea. Los microscopios se utilizan para
mejorar la resolucin.
La invencin del microscopio en el siglo XVII posibilit la serie de descubrimientos posteriores de
las mismas. En 1665 Robert Hooke utilizando un microscopio ptico simple, examin un corte de
corteza, encontr que esta estaba compuesta por una masa de diminutas cmaras, que llam
clulas, en realidad slo vi las paredes celulares, ya que este tejido est muerto a la madurez y
las clulas ya no tienen contenido. Mas tarde, Hoock y algunos de sus contemporneos
observaron clulas vivas.
Existen dos tipos bsicos de microscopios: PTICOS y ELECTRNICOS.

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Microscopio ptico (MO)El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para
crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa
doble con una distancia focal corta.

Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15

veces. Por lo general se utilizan

microscopios

compuestos,

que

varias lentes con las que se

disponen de
consiguen

aumentos mayores. Algunos

microscopios

pticos

pueden

aumentar un objeto por

encima

de

las

2.000

veces.
El microscopio compuesto
consiste en dos sistemas de
el

objetivo

el

lentes,

ocular,

montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes
que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn
dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a
travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del
microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes.
El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazn con un soporte que sostiene el
material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la
muestra. Los especimenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y
se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio.
El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que
refleja la luz para que atraviese el espcimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz
elctrica que dirige la luz a travs de la muestra.
Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 m, unas mil veces la del ojo humano.
Existen distintas variantes de observacin en MO:
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Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con
colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra
manera
Clula de Pisum,
coloracin:
safranina-fast-green
Traqueidas del leo
de Pinus
Coloracin:
safranina
Microscopa de
campo brillante: el material se observa sin
coloracin. La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente coloreados.
El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco
concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca
del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del
espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando
aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar
elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal.

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Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las
partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para espcimenes delgados, o clulas
aisladas. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el
microscopio

en

campo

oscuro.

Sin

embargo en el microscopio de fase el

cono de luz es ms estrecho y entra en el
campo

de

visin

del

objetivo,

que

contiene un dispositivo en forma de anillo

que reduce la intensidad de la luz y
provoca un cambio de fase de un cuarto
de la longitud de onda. Este tipo de
iluminacin

provoca

variaciones

minsculas en el ndice de refraccin de

un espcimen transparente, hacindolo
visible. Este tipo de microscopio es muy
til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina
Phase contrast image of cultured epithelial cells using a 20X objective.
Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza dos rayos de luz
polarizada

las

imgenes

combinadas aparecen como si la

clula estuviera proyectando sombras
hacia un lado. Fue diseado para
observar relieves de especimenes
muy difciles de manejar, es muy
utilizado

en

los

tratamientos

de

fertilizacin in-vitro actuales. DIC se

usa cuando el espcimen es muy
grueso para usar contraste de fases
Clulas epiteliales 200X
www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/20x_dic.tif

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Microscopa de fluorescencia: una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente
aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida como
rayas luminosos: esto se conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de
onda se observa como si viniera directamente del colorante.
Clulas epiteliales , triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes), actina (rejo). 200X (izq.) y
1000X (der.).

www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/microscopy/images/100x_fluor.tif

Microscopa confocal.

Microscopa confocal y de fluorescencia http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/

Pgina de la casa Leica, sobre fundamentos de este microscopio y modelos
http://www.leica-microsystems.com/llt_index.html
Curiosas microfotografas con microscopa de barrido y posibilidad de manejar
virtualmente uno de estos microscopios http://www.denniskunkel.com/
Completa coleccin de tcnicas de tincin, con sus correspondientes protocolos
http://www.nottingham.ac.uk/pathology/default.html
Pgina de introduccin al funcionamiento del microscopio confocal, preparacin de
muestras y procesado de las imgenes http://www.cs.ubc.ca/spider/ladic/intro.html
Manual de tcnicas de preparacin de muestras y tincin
http://bris.ac.uk/pathandmicro/cpl/lablinks.html
Fundamentos de la microscopa de resonancia magntica y completa galera de
imgenes animadas http://wwwcivm.mc.duke.edu/civmGallery/L1Gallery.html
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Principios de Microscopa.
Una de las mejores pginas sobre microscopa, con amplios textos sobre los diversos
tipos de microscopios y su funcionamiento. Numerosos tutoriales en java sobre el
manejo de distintos microscopios. Se puede descargar un completo manual sobre
microscopa en formato Acrobat. http://micro.magnet.fsu.edu/primer/index.html
Descripcin y funcionamiento del microscopio electrnico de barrido y galera de
imgenes http://www.mos.org/sln/sem/
Fundamentos del microscopio electrnico de barrido, descripcin del funcionamiento
con numerosos esquemas. Galera de imgenes
http://www.mse.iastate.edu/microscopy/home.html
Completo tratado sobre microscopa electrnica: fundamentos, microscopios,
preparacin de muestras y procesado digital de las imgenes http://emoutreach.sdsc.edu/web-course/toc.html
Fundamentos tericos de microscopa ptica, fluorescencia y confocal
http://www.btrip.mednet.ucla.edu/bri/homepage.htm
Descripcin y fundamento de los microscopios electrnicos de transmisin y barrido
http://www.unl.edu/CMRAcfem/em.htm
Completo tutorial de digitalizacin de imgenes, donde se explican los trminos
bsicos http://www.library.cornell.edu/preservation/tutorial-spanish/contents.html
.
Ojeda sahn, Jos, Mtodos de microscopa electrnica de barrido en Biologa
Univ. de Cantabria. 1997.
Tomada de:
http://fai.unne.edu.ar/biologia/microscopia/microscopia1.htm

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