En microbiologa industrial hay que

pensar en mantener las colecciones

durante perodos de aos y no de meses,
por lo tanto se utilizan otras tcnicas que
nos ahorran trabajo y disminuyen los
riesgos.

Subcultivos
Consiste en la transferencia peridica del cultivo en

un medio nutritivo fresco (intrvalo de transferencia

vara con el organismo)
Inconvenientes
Posibilidad de que aumenten las mutaciones
Riesgo contaminacin
Alteracin del medio de cultivo (desecacin)

Mantenimiento bajo capa de aceite

Simple y efectiva
Consiste en cubrir el cultivo (medio slido) con una

capa de aceite mineral o vaselina.

Pueden conservarse por periodos de tiempo largos
(varios aos) a temperatura ambiente.
Pueden ocurrir mutaciones, luego de los 3 aos de
mantenimiento.

Desecacin
La eliminacin del agua (deshidratacin) es un

mtodo de conservacin que reduce drsticamente el

metabolismo.
No todos los microorganismos sobreviven a estos
mtodos de secado, por lo que se hace necesario
aadir agentes protectores (leche descremada,
glutamato sdico al 10%).
Es importante mantener el producto sellado (tapn de
rosca o ampolla) para evitar el contacto con el aire ya
que son higroscpicos.

Soportes, se suelen utilizar

arena
suelo

gel de slica
discos o tiras de papel
agar
discos de gelatina

Estos deben ser previamente secados y esterilizados por

calentamiento con aire caliente (no se recomienda utilizar
autoclave y s calor seco).

 Sobre estos soportes se aade la suspensin de los

microorganismos y se deja secar a temperatura

ambiente.
Estos mtodos de secado son particularmente tiles
para conservar microorganismos productores de
esporas (actinomicetos).

Congelacin
Al bajar la temperatura hasta el punto de congelacin o

por debajo de ste se reduce el metabolismo

drsticamente hasta el caso de prcticamente anularlo
con nitrgeno lquido (-196C).

La formacin de cristales de hielo (pueden

romper las clulas), para evitar esto se deben
utilizar:
suspensiones que contengan el mnimo de sales

posibles
agentes protectores como el glicerol (25%) o
dimetilsulfxido (DMSO al 10%) que neutralizan
el efecto de las sales.
Algunos recomiendan una bajada gradual de
temperatura (1C/min) hasta -20C para luego
enfriar rpidamente. La descongelacin debe ser
rpida.

La congelacion debe ser lenta a la par con una

descongelacin rpida
Condiciones
Un grado C por minuto hasta -20C y luego un rpido
descenso en la temperatura.
Temperatura de conservacin ms baja recomendada
es -70C (esto evita la recristalizacin intracelular)

-196C: nitrgeno lquido. Se utiliza para la conservacin

de bacterias, virus y lneas celulares. Existen varios
problemas prcticos: el nitrgeno se evapora continuamente
por lo que se debe rellenar regularmente; se deben utilizar
recipientes que resistan bien estas temperaturas y que estn
bien cerrados para evitar la entrada del nitrgeno.

-30C: congelador de frigorfico.

-70C: nieve carbnica (CO2 slido) o ultracongeladores

Es el mtodo ms utilizado en los laboratorios de microbiologa.

Ventajas
Se puede usar por periodos largos o cortos de

tiempo.
Se utiliza N2 lquido a -196C.
El microorganismo se cultiva hasta la fase
estacionaria (muestra ms resistencia a daos por
congelacin y descongelacin).
Se utiliza un crioprotector.

Glicerol 10%
Dimetilsulfxido
Glucosa
Dextranos
Sacarosa
Suero de conejo
Lactosa
Extracto de malta

Liofilizacin
Es el mtodo ms utilizado por las colecciones

internacionales de cultivos de microorganismos.

Consiste en congelar rpidamente una suspensin de
microorganismos y eliminar el agua como vapor de agua
directamente del hielo sin pasar por el estado lquido.
El sistema requiere tres componentes:
mecanismo de congelacin
bomba de vaco
una trampa de agua.

Los microorganismos lifilizados se conservan entre

0 y 5C durante muchos aos.
Para su recuperacin se resuspenden los organismos
en el medio de cultivo adecuado y se incuban a la
temperatura adecuada.

Debido a la gran variedad que presentan los

microorganismos no existe ningn mtodo ptimo
para todos.
En lneas generales podemos asumir lo siguiente:

En general:
La mayor parte de los cultivos se han mantenido

como subcultivos seriados a temperaturas entre 10 y

15C.
Para crecer estos cultivos se necesita luz, ya que son
fotosintticos.
Las algas no toleran bien la liofilizacin ni la
desecacin.
Con relacin a la congelacin los mejores resultados
se obtienen con nitrgeno lquido.

Prcticamente se han usado todos los mtodos

conocidos con buenos y malos resultados,
aunque en lneas generales el mejor mtodo es la
liofilizacin debido a su facilidad de transporte.

Se han utilizado todos los mtodos, pero

obteniendo en lneas generales baja
estabilidad.
Se recomienda para su conservacin durante
largos perodos de tiempo el nitrgeno
lquido.

 La

mayora de los hongos pueden

conservarse por desecacin en suelo.

Waites, M.J.; Morgan, N.L.; Rockey, J.S. & Higton G. (2001). Industrial
Microbiology, an Introduction. Blackwell Science. 288pp.